Universidad de La Serena Facultad de Ciencias Departamento de Biologa

Nombres: Karina Cortes Maldonado Asignatura: Molculas Biolgicas Profesor: Jaime Molina Fecha:

Resumen tcnico Introduccin. Objetivos.

Objetivo general Objetivos especficos

Revisin bibliogrfica
Espectro fotometra: es un mtodo analtico que utiliza los efectos de la interaccin de las radiaciones electromagnticas con la materia (tomos y molculas) para medir la absorcin o la transmisin de luz por las sustancias. Longitud de onda: es la distancia entre dos mximos de un ciclo completo del movimiento ondulatorio. Se expresa, segn el S.I. en nanmetros (nm) y sus equivalencias son: 1nm = 1mm =10 A0 = 10-9 m. Espectro de absorcin: representacin grfica de la absorbancia de un analito (o de otra magnitud equivalente) en funcin de la longitud de onda de la radiacin, l, (o de otro parmetro relacionado con la energa de la radiacin utilizada). Curva de calibracin: es un mtodo de qumica analtica empleado para medir la concentracin de una sustancia en una muestra por comparacin con una serie de elementos de concentracin conocida. Barrido espectral: es la variacin de la longitud de onda., necesario para la bsqueda de una mxima donde el analito absorbe ms luz. Hidrolisis acida: Se basa en la ebullicin prolongada de la protena con soluciones cida fuertes (HCl y H2SO4). Este mtodo destruye completamente el triptfano y parte de la serina y la treonina. Test Somogy-Nelson: es uno de los mtodos clsicos y ampliamente utilizados para la determinacin cuantitativa de azcares reductores. Este basa en que Los azcares reductores cuando se calienta con tartrato de cobre alcalino reducir el cobre

de la cprico a estado cuproso y por lo tanto el xido cuproso se forma. Cuando el xido cuproso se trata con cido molbdico arseno, la reduccin de cido molbdico con azul de molibdeno se lleva a cabo. El color azul desarrollado se compara con un conjunto de normas en un colormetro a 620 nm Solucin salina de Krebs o solucin salina fisiolgica: Se entiende por solucin salina fisiolgica (SSF), aquella diseada para mantener la viabilidad del rgano aislado. Diferentes preparados exigen distintas SSF de acuerdo a las caractersticas de cada uno. El principio que determina la composicin de la SSF es la aproximacin artificial a las

condiciones fisiolgicas del entorno en que se encuentra dicho rgano o tejido cuando forma parte del organismo.

Material y mtodos Sesin n1: cuantificacin de protenas por fotometra, mtodo de Biuret. I.
Determinacin de espectro de absorcin de una solucin de protenas con reactivo de Biuret. Materiales
Tubos de ensayos Pipetas graduadas Bao trmico de 37C Cronometro Espectrofotmetro simple Celdas fotomtricas Solucin albumina

Reactivos
Reactivo Biuret

Procedimientos II. Determinacin de una curva patrn de albumina por el mtodo colorimtrico de Biuret. Materiales
Calculadora Programa Excel

Procedimientos

Sesin n 2: Metabolismo biolgico.

1. Hidrlisis cida de glicgeno Materiales
Tubo de ensayos Pipetas graduadas Bao de agua a ebullicin

Cronometro

Reactivos
Glicgeno HCl 1 N NaOH 0,6 N Reactivo Somogyi Reactivo Nelson

Procedimientos 2. Hidrlisis enzimtica del glicgeno con amilasa salival Materiales

Tubo de ensayos Pipetas graduadas Bao de agua a ebullicin Cronometro

Reactivos
Glicgeno Reactivo Somogyi Reactivo Nelson Amilasa salival

Procedimientos

Sesin n 3: estudio de glicogenolisis en cortes de hgado.

I.

Preparacin de los cortes Materiales

Cmaras de hielo Corchos Trozos de hgado Bistur Pesa Placa petri

Reactivos Suero fisiolgico

Procedimiento II.

Medicin de la glicogenolisis en corte de hgado Materiales

Tubos de ensayo Pipetas graduadas Bao trmico de 37C Cronometro Trozos de hgado masados

Reactivos Solucin de Krebs

Procedimiento III. Determinacin cuantitativa del glicgeno Materiales

Mortero Tubos de ensayo Embudo Papel filtro Pipetas graduadas

Reactivos TCA al 5% Solucin de glicgeno Solucin de yodo

Procedimiento IV.

Medicin de la glucosa entregada al medio por el hgado Materiales

Tubos de ensayo Pipetas graduadas Embudo Papel filtro

Reactivos Solucin de Ba(OH)2 0,3 N

Solucin de ZnSO4 al 5% Solucin Somogyi Solucin Nelson

Procedimiento

Resultados y discusiones Sesin n1: cuantificacin de protenas por fotometra, mtodo de Biuret.
I. Determinacin de espectro de absorcin de una solucin de protenas con reactivo de Biuret.
Tabla n1 Datos para graficar la longitud ptima para el mtodo.
400 412 421 427 445 454 463 472 481 490 508 532 544 574 595 610 634 655 670 691 Absorbancia 0,171 0,125 0,102 0,092 0,082 0,09 0,105 0,124 0,147 0,173 0,226 0,272 0,279 0,252 0,209 0,17 0,103 0,052 0,025 0

Grafico n 1 absorcin versus longitud de onda 0.3 544, 0.279 0.25 Absobancia 0.2 0.15 0.1 0.05 0 400 500 600 700 Longitud de onda (nm) 800

Este grfico nos indica que la longitud de onda ptima para la realizacin de este mtodo es de 544 nm. Ya que es la mxima absorbancia que puede alcanzar las protenas de la albumina.

II.

Determinacin de una curva patrn de albumina por el mtodo colorimtrico de Biuret.

Tabla n 2 formulacin de curva de calibracin N tubos Volumen de albumina patrn (ml) 1 2 3 4 5 6 7 Mp 0 0,3 0,6 0,9 1,2 1,5 1,8 3 3 2,7 2,4 2,1 1,8 1,5 1,2 Volumen de disolvente (ml) Volumen de reactivo de Biuret (ml) 3 3 3 3 3 3 3 3

Clculos de concentracin de albumina C1 * V1 = C2 * V2 5 * 0,3 = X * 3 X = 5 * 0,3 3 X concentracin tubo 2= 0,5 mg /ml 5 * 0,6 = X * 3 X = 5 * 0,6 3 X concentracin tubo 3 = 1 mg/ml 5 * 0,9 = X * 3 X = 5 * 0,9 3 X concentracin tubo 4 = 1,5 mg/ml 5 * 1,5 = X * 3 X = 5 * 1,5 3 X concentracin tubo 6 = 2,5 mg/ml 5 * 1,2 = X * 3 X = 5 * 1,2 3 X concentracin tubo 5 = 2 mg/ml 5 * 1,8 = X * 3 X = 5 * 1,8 3 X concentracin tubo 7 = 3 mg/ml

5*3=X*3 X=5*3 3 X concentracin tubo muestra problema= 5 mg/ml

Tabla n2 absorbancia y concentracin de albumina terico

tubos 1 2 3 4 5 6 7 Mp absorbancia terica concentracion de albumina 0 0,054 0,147 0,222 0,279 0,326 0,384 0,11 0 0,5 1 1,5 2 2,5 3 5

Sesin n 2: Metabolismo biolgico.

1. Hidrlisis cida de glicgeno 2. Hidrlisis enzimtica del glicgeno con amilasa salival

Sesin n 3: estudio de glicogenolisis en cortes de hgado.

I. II. III. IV. Preparacin de los cortes Medicin de la glicogenolisis en corte de hgado Determinacin cuantitativa del glicgeno Medicin de la glucosa entregada al medio por el hgado

Conclusin Bibliografa
http://es.scribd.com/doc/8553130/Espectrofotometria http://perso.wanadoo.es/sergioram1/espectrofotometria.htm http://www2.uca.es/grup-invest/corrosion/integrado/P2.pdf http://es.wikipedia.org/wiki/Espectro_de_absorci%C3%B3n

http://es.wikipedia.org/wiki/Curva_de_calibrado http://www.mundodescargas.com/apuntes-trabajos/quimica_t/decargar_barridoespectral.pdf http://www.monografias.com/trabajos13/prote/prote.shtml http://www.newagepublishers.com/samplechapter/000091.pdf http://personal.us.es/calarcon/practica/farma_1/cuadernillo_ileon.pdf