BAHAN DAN METODE Kimia-PAH Dalam penelitian ini, PAH seperti naftalena, fluoren antrasena dan fenantrena adalah

dibeli dari Sigma-Aldrich, Amerika Serikat (kemurnian 99%). Antrasena dibeli dari Merck, India (kemurnian 98%). Pengambilan sampel Konsorsium bakteri diisolasi dari campuran dari tujuh lokasi sampling yang berbeda yang termasuk minyak bumi dan lokasi yang terkontaminasi batubara, panci garam dan laut-port dari Chennai, India. Garam mineral menengah Mineral karbon bebas garam menengah (MKM) terkandung NH4Cl-2.5G, KH2PO4-5.46 g, Na2HPO4 4,76g, MgSO4-0.20 g, NaCl-30.0 g dan Air suling-1L pada pH 7,4 0,2-. PH akhir dari media telah disesuaikan sampai 7,4 dengan 0,1 N NaOH, dan menengah itu diautoklaf (121 C selama 15 menit) sebelum penambahan PAH. Saham solusi dari masing-masing PAH (300 mg / L) disusun etil asetat dan disimpan. Pengayaan konsorsium bakteri PAH dilarutkan dalam etil asetat ditambahkan ke 250 mL kerucut tabung dan setelah penguapan etil asetat, media mineral (100 ml) ditambahkan. Itu bakteri konsorsium yang mengandung 5 mL 104-105 cfu / mL ditambahkan ke dalam media yang mengandung mineral PAH (fenantrena) sebagai sumber karbon tunggal. Itu labu berbentuk kerucut itu disimpan dalam shaker pada 150 rpm dengan 37 C karena suhu inkubasi. Setelah pertumbuhan adalah divisualisasikan di bawah mikroskop, 5 mL pengayaan budaya dipindahkan ke media segar dan diinkubasi pada kondisi yang sama. Berikut Transfer identik budaya dilakukan di masing PAH berisi medium untuk memperkaya bakteri konsorsium. Studi tentang degradasi PAH oleh konsorsium bakteri Para PAH yang ditambahkan dalam medium pada konsentrasi 3 mg / L. Konsorsium bakteri terisolasi dari lingkungan laut ditumbuhkan dan jumlah bakteri diperiksa sehari-hari. Your morfologi dan motilitas eksponensial budaya cair tumbuh diamati pada baru disiapkan gunung basah dengan mikroskop cahaya. Pelat penghitungan dilakukan pada media nutrien. Itu konsorsium dipelajari untuk pertumbuhan pada PAH dengan

fenantrena / fluoren sebagai sumber karbon tunggal. Sebuah uji kualitatif dengan metode spray-piring digunakan untuk memeriksa degradasi PAH oleh bakteri konsorsium. Zona kliring terlihat di sekitar koloni menunjukkan pemanfaatan PAH disemprotkan pada media (Kiyohara et al., 1982). Untuk degradasi penelitian, konsorsium bakteri diinokulasikan pada medium mineral yang mengandung PAH. Berbeda komposisi digunakan dalam degradasi PAH were1) edium + + PAH konsorsium bakteri, 2) media + PAH dan 3) media + konsorsium bakteri mana 2) dan 3) menjabat sebagai kontrol. Konsorsium bakteri ditambahkan pada konsentrasi dari 104-105 / mL cfu dalam medium. Budaya disusun duplikat diinkubasi pada suhu 37 C dalam shaker pada 150 rpm dan diekstraksi pada setiap kali jam 24 interval untuk 5 hari. Sampel diekstraksi budaya dua kali dengan etil asetat (v / v) setelah pengasaman hingga pH 2,5 dengan 1 N HCl. Ekstrak disaring melalui natrium sulfat anhidrat dan kental untuk 1mL menggunakan rotavapour unit (Buchi, Jerman) dan dianalisis dalam tinggi per cair kinerja chromatography (HPLC). Ini kental sampel digunakan dalam KLT (kromatografi lapis tipis) dan kromatografi gas-spektrometri massa (GC-MS) untuk menganalisis metabolit yang terbentuk selama PAH degradasi. HPLC analisis pemanfaatan PAH Sampel kental disaring melalui 0,2 mm jarum suntik filter dan dianalisis dalam kinerja tinggi cair kromatografi. HPLC analisis adalah dilakukan dengan unit Knauer, (Jerman) dilengkapi dengan PAH kolom tertentu (Ultrasep ES, B590/02, 250 4 mm, Knauer, Jerman) dengan detektor UV-VIS terhubung ke WINCHROME perangkat lunak, yang digunakan untuk memproses data. Fase gerak adalah asetonitril. Standar solusi dari PAH berbeda digunakan sebagai referensi. Laju aliran dari ponsel fase dipertahankan pada 1 mL / menit. Sampel penelitian adalah disuntikkan satu per satu dan tingkat pemanfaatan PAH dihitung berdasarkan persen daerah puncak dan retensi waktu. Respirasi tes Penelitian ini dilakukan dengan menggunakan garam mineral menengah dengan kedua PAH dan konsorsium bakteri; PAH + MSM dan LSL + konsorsium bakteri masing-masing menjabat sebagai kontrol. Tes itu dilakukan dalam ulangan. PAH (fenantrena-3 mg /

L) dilarutkan dalam etil asetat ditambahkan di steril garam botol (100 mL). Setelah penguapan pelarut, 25 mL medium garam mineral yang ditambahkan ke botol. Botol-botol disegel sepenuhnya (udara ketat) dengan stopper aluminium. Budaya itu disimpan dalam shaker pada 150 rpm pada suhu 37 C. Sampel dikumpulkan pada interval waktu 24 jam dan dianalisis untuk evolusi CO2 dalam Kromatografi Gas. Karbon dioksida adalah isi diukur dengan detektor konduktivitas termal menggunakan Porapak Q kolom (80/100 mesh, 2m) dengan eksternal standar. Gas pembawa adalah helium dan kolom suhu adalah 50 C. Suhu injektor dan detektor adalah 100 C. Sampel (250 uL) dari gas ruang atas dari labu budaya adalah ditarik dengan jarum suntik gas ketat dan disuntikkan ke dengan kromatografi gas untuk penentuan CO2. Itu sampel dalam botol garam yang diekstraksi dan dianalisis dalam kolom PAH khusus dengan HPLC untuk degradasi PAH dalam medium. Metabolit pembentukan-KLT dan GC-MS Selama studi degradasi, berbagai jenis metabolit yang terbentuk diidentifikasi dengan menggunakan lapisan tipis kromatografi. Sampel kental adalah dimuat pada pelat KLT menggunakan tabung kapiler 10 uL. Kromatogram dijalankan dalam pelarut yang berbeda untuk migrasi dari senyawa PAH. Berbeda campuran pelarut seperti: benzena / heksana (50:50), benzena / aseton (50:50) dan benzene / aseton / asetat asam (80:10:10) digunakan untuk mengidentifikasi metabolit. Setelah mengeluarkan piring dari pelarut 2% Gibbs reagen disemprotkan di piring dan melihat di bawah sinar UV pada 265 nm. Sebuah Hewlett-Packard 6890 kromatografi gas yang dilengkapi dengan 5973 massa spektrometer dengan HP-5ms (30 mx 0,25 mm I.D 0,25 pM) sekering-kolom kapiler silika digunakan untuk analisis. Program suhu kolom ditetapkan pada 100 C selama 1 menit, 15 C / menit sampai 160 C dan 5 C / menit sampai 300 C tahan selama 7 menit. Injektor GC adalah diselenggarakan isotermal pada 280 C dengan masa pisah dari 3 menit. Helium digunakan sebagai gas pembawa, pada aliran tingkat 1 / min ml dengan menggunakan kontrol tekanan elektronik. Suhu antarmuka GC-MS dipertahankan pada 280 C. MS dioperasikan dalam dampak elektron (EI) ionisasi modus dengan energi elektron dari 70 eV dan scan untuk menentukan massa sesuai untuk pemantauan ion dipilih berkisar dari 50 hingga 500 Amu (Atom ke satuan massa). Standar dari Sigma Aldrich digunakan untuk PAH (fenantrena / fluoren) dan metabolitnya. GC-MS perpustakaan pencarian digunakan untuk

mengkonfirmasi metabolit tanpa standar. Ekstraksi dan amplifikasi DNA bakteri DNA dari sel bakteri yang diambil menggunakan Qiagen (QIAamp DNA tinja Mini kit Cat No.51504) DNA isolasi kit. Menggunakan protokol dari DNA produsen dielusi dalam 200 uL AE penyangga dan disimpan pada suhu 4 C untuk digunakan lebih lanjut. Untuk mengidentifikasi strain bakteri, DNA hasil isolasi diamplifikasi menggunakan polymerase chain reaction (PCR). Para terkonsentrasi Sampel DNA dari strain bakteri diamplifikasi oleh reaksi berantai polimerase menggunakan pengendara sepeda termal (Mastercycler pribadi, Eppendorf AG, Jerman). Amplifikasi dilakukan dengan menggunakan 25 pmol dari maju primer (5'-TTTGATCCTGGCTCAG-3 ') dan sebaliknya primer (5'-AAGGAGG TGATCCAGCCGCA-3 ') dengan volume total 50 pmol. PCR supermix (Invitrogen Cat. No 10572-014, USA) terdiri dari 22 mM tris-HCl (pH 8.4), 55 mM KCl, 1,65 mM MgCl2, 220 dGTP pM, 220 pM dATP, 220 pM dTTP, 220 M dCTP dan 22 U Taq DNA polimerase rekombinan / mL. Itu PCR supermix (40 uL) dicampur dengan primer (5 uL) dan DNA (5 uL) untuk total volume 50 uL dalam 0,2 mL PCR tabung dan dimuat di pengendara sepeda termal. PCR reaksi terjadi melalui denaturasi awal pada 94 C selama 3 menit, diikuti dengan 30 siklus denaturasi pada 94 C selama 1 menit, annealing primer pada 60 C selama 0,45 menit dan primer ekstensi pada 72 C selama 2 menit. Di final langkah, sampel diinkubasi pada 72 C selama 10 menit. Amplifikasi PCR telah diverifikasi dengan elektroforesis, dilakukan aparat kapal selam horizontal dengan 1% gel agarosa. TAE buffer digunakan sebagai buffer tangki. Elektroforesis dilakukan selama 2 jam pada 50V. Gel itu divisualisasikan dalam iluminator UV. PCR diamplifikasi DNA dianalisis untuk urutan nukleotida dengan menggunakan 16S rRNA analisis sekuensial. Gel denaturing gradien elektroforesis (DGGE) DGGE analisis yang digunakan untuk mengisolasi dan mengidentifikasi jumlah strain hadir dalam bakteri konsorsium tium. Setelah mengisolasi strain s, polymerase chain reaction digunakan untuk memperkuat DNA dan selanjutnya diidentifikasi strain bakteri menggunakan urutan nukleotida. Polymerase chain reaction (PCR) untuk amplifikasi DGGE dilakukan dengan GC331F (CGCCCGCCGCGCGCGGCGGGCGGGGC GG GG GCG CG GGG GG T C C TA CG GG AGGCAGCAGT) dan 797R (GGACTACCA GGGTATCT AATCCTGTT). Dalam primer ke depan (GC331F) sebuah 40 bp GC clamp termasuk sebagai

menjorok urutan. Reaksi PCR terjadi melalui denaturasi awal pada 94 C selama 10 menit, diikuti oleh 30 siklus denaturasi pada 95 C selama 15 s, primer annealing pada 60 C selama 1 menit dan primer ekstensi pada 72 C selama 1 menit. Pada langkah akhir, sampel diinkubasi pada 72 C selama 10 menit. DGGE dilakukan dengan gradien terus menerus dari 40-70% urea agen denaturing dan formamida. Gel terdapat 40% dari poliakrilamida. Setiap sumur terkandung DNA mg 1-3 dan volume yang sama gel 2x pemuatan pewarna ditambahkan ke setiap sampel. Itu tangki elektroforesis diisi dengan 7 L 1x TrisAsetat-etilendiamin tetraaceticacid (TAE) berjalan buffer. DGGE dijalankan pada 60 C di DCode sebuah Mutasi Universal Detection System (Bio-Rad, Hercules, Ca, USA) pada 130 V tegangan konstan selama 8 h. Gel diwarnai dengan 250 mL berjalan penyangga dan 25 uL 10 mg / ml etidium bromida selama 5-15 min. Setelah pewarnaan, gel dipindahkan ke dalam cawan berisi 250 mL 1x penyangga berjalan dan destain untuk 5-20 min. Gel dipindai dalam GelDoc sistem (Bio-Rad). Biokimia analisis Strain bakteri hadir dalam konsorsium diisolasi dan dianalisis untuk karakter fenotipik menggunakan KB003: Hi24 "Enterobacteriaceae identifikasi kit ", (Himedia, India). 16S rRNA analisis berurutan PAH merendahkan bakteri konsorsium Reaksi sekuensing siklik dilakukan BigDye menggunakan terminator V3.1 siklus sequencing kit Ampli Tac mengandung DNA polimerase (Terapan Biosystems, P / N: 4337457). Reaksi sequencing campuran dibuat dengan menambahkan 1 uL BigDyeV3.1, 2 uL dari 5 penyangga x sequencing dan 1 uL DMSO 50%. Untuk 4 uL reaksi sekuensing mencampur mol Pico 4 dari primer (2 uL) dan jumlah yang cukup dimurnikan PCR produk ditambahkan. Reaksi dibentuk adalah didenaturasi pada 95 C selama 5 menit. Bersepeda dimulai dengan denaturing pada 95 C selama 30 detik, annealing pada 52 C selama 30-an dan perpanjangan selama 4 menit pada 60 C dan siklus diulang dengan total 30 kali dalam MWG thermocycler (MWG Biotech, Jerman). Itu reaksi kemudian dimurnikan sephadex piring (Ujung Biosystems) dengan sentrifugasi untuk menghapus terikat berlabel dan tidak berlabel nukleotida dan garam. Itu reaksi dimurnikan dimuat ke 96 kapiler ABI 3700 analisa DNA otomatis dan

elektroforesis dilakukan selama 4 jam. Itu urutan nukleotida terdaftar di komputer terpasang dengan analisa DNA ABI 3700. Itu urutan nukleotida yang diperoleh dari DNA ABI analisa diidentifikasi menggunakan BLAST (Basic Lokal Alignment Search Tool) perangkat lunak yang tersedia di NCBI (Nasional Pusat Informasi Bioteknologi) website (www.ncbi.nlm.nih.gov). Setelah mengedit urutan, dianalisis dengan perangkat lunak BLAST untuk mengidentifikasi jenis spesifik bakteri yang sesuai dengan urutan nukleotida. HASIL DAN PEMBAHASAN Biodegradasi PAH oleh konsorsium bakteri pada 30 g / L konsentrasi NaCl Berat badan rendah PAH molekul senyawa dengan kurang dari tiga cincin benzena dan memiliki berat molekul di kisaran 128-178 g / mol (misalnya: naftalena, fluoren fenantrena dan antrasena). Para bakteri konsorsium dimanfaatkan naftalena (3 mg / L) sebagai karbon tunggal sumber. Jumlah sel konsorsium meningkat dari 5 104 mL cfu / ke 6 109 cfu / mL dalam 4 hari. Naftalena adalah mudah terdegradasi oleh konsorsium dan hampir 98% dari senyawa tersebut adalah terdegradasi dalam 4 hari (Gambar 1). Fluoren terdiri dari dua cincin benzena ditambah dengan sebuah cincin pentagonal (cincin cyclopentane) dan terdaftar sebagai polutan prioritas oleh Lingkungan Protection Agency (EPA) (Gomes dkk., 2006). Dalam Gambar. 1: Degradasi naftalena (3 mg / L) oleh konsorsium bakteri bakteri halotoleran di 30g / L konsentrasi NaCl Gambar. 2: Degradasi fluoren (3 mg / L) oleh konsorsium bakteri bakteri halotoleran pada 30 g / L konsentrasi NaCl Gbr.3: Degradasi fenantrena (3 mg / L) oleh konsorsium bakteri bakteri halotoleran di 30g / L konsentrasi NaCl Gambar. 4: Degradasi antrasena (3 mg / L) oleh konsorsium bakteri bakteri halotoleran di 30g / L konsentrasi NaCl penelitian, konsorsium dimanfaatkan fluoren (3 mg / L) sebagai sumber karbon tunggal dan menunjukkan degradasi maksimum dari 99%. Jumlah sel konsorsium meningkat dari 6 104-2 1010 cfu / mL dalam 4 hari (Gambar 2). Itu konsorsium bakteri awalnya diaklimatisasi di fenantrena (3 mg / L) pada 30 g / L konsentrasi NaCl. Jumlah sel konsorsium meningkat dari 5 104 sampai 7 1010 cfu / mL dalam 4 hari. Hampir 50% dari fenantrena adalah terdegradasi dalam 2 hari dan degradasi 100% adalah dicatat dalam 4 hari. Degradasi fenantrena adalah 80% pada hari ke-3 (Gambar 3). Para bakteri konsorsium menunjukkan degradasi 99% pada fluoren dan phenathrene pada 30 g / L konsentrasi NaCl dalam 4 hari. Konsorsium tersebut dimanfaatkan antrasena (3 mg / L) pada garam

konsentrasi 30 g / L. Jumlah sel dari konsorsium meningkat dari 5 104 cfu / mL sampai 7 1010 cfu / mL dalam 4 hari. Konsorsium potently terdegradasi antrasena 49% dalam 2 hari dan 95% dalam 4 hari (Gambar 4). Hasilnya dianalisis untuk reproduksibilitas dengan PAH degradasi oleh konsorsium bakteri menggunakan fenantrena dan fluor tidak menunjukkan besar berubah dalam degradasi persen (97-98%) adalah diamati. Konsorsium bakteri yang diisolasi dari laut lingkungan dianalisis untuk pertumbuhan pada PAH. Awal studi menggunakan PAH zona kliring oleh bakteri konsorsium dalam medium garam mineral dikonfirmasi pemanfaatan PAH. Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsorsium potently terdegradasi PAH hampir sepenuhnya (> 95%) dalam 4 hari pada 30 g / L konsentrasi NaCl. Identifikasi metabolit yang terbentuk selama biodegradasi PAH (fenantrena dan fluoren) Pembentukan metabolit selama mineralisasi fenantrena diidentifikasi oleh tipis kromatografi lapis dan kemudian oleh gas kromatografi-massa spektral analisis. Itu analisis menunjukkan adanya empat metabolit yaitu 1-hidroksi-2-naphthoic acid (m / z, 202), fenantrena-dihydrodiol (m / z, 356), dihidroksi fenantrena (m / z, 354) dan asam ftalat (m / z, 310) selama degradasi fenantrena. Selama fluoren degradasi oleh konsorsium bakteri, analisis menunjukkan enam puncak di mana dua puncak dikonfirmasi monohydroxy fluoren (m / z, 254) dan asam ftalat (m / z, 310). Monohydroxy fluoren dan asam ftalat terbentuk selama fluoren degradasi oleh konsorsium bakteri. Itu metabolit asam ftalat terbentuk selama fenantrena degradasi juga hadir dalam degradasi fluoren menegaskan degradasi lengkap (Tabel 1). Mineralisasi dari fenantrena Dalam penelitian ini, tingkat PAH (fenantrena) degradasi dihitung sebagai rasio dari jumlah substrat terdegradasi dalam botol tes, ke jumlah substrat pulih dalam botol kontrol. Produksi CO2 total perbedaan antara final jumlah CO2 dalam botol percobaan dan pada botol gratis hidrokarbon (botol kontrol). Itu hasil mineralisasi adalah grafis yang diplot sebagai rasio karbon CO2 yang dihasilkan bersih (ppmv) ke persen dari PAH dikonsumsi. Hasil penelitian menunjukkan bahwa konsorsium bakteri dengan fenantrena sebagai satu-satunya sumber karbon yang dihasilkan lebih tinggi tingkat CO2 (1338

ppmv) dibandingkan dengan kontrol (181 ppmv) di MSM dalam 4 hari. Setelah empat hari, karbon dioksida evolusi tidak hadir. Seiring dengan evolusi CO2, sisa fenantrena hadir dalam medium dianalisis untuk mengkorelasikan degradasi persen dengan CO2 evolusi. Dalam labu kontrol selama analisis HPLC, sekitar 2,8 mg / L fenantrena tetap yang tidak digunakan. Labu dengan konsorsium bakteri menunjukkan degradasi fenantrena 99% dalam 4 hari. Konsorsium bakteri menunjukkan CO2 yang signifikan evolusi (1066 ppmv) dan fenantrena degradasi (49%) diperoleh dalam 2 hari (Gambar 5). Kemudian, itu menegaskan bahwa fenantrena hampir benar-benar terdegradasi oleh konsorsium bakteri. Biodegradasi PAH menggunakan konsorsium bakteri pada 60 g / LNaCl konsentrasi Selanjutnya konsorsium bakteri diperiksa untuk pertumbuhan pada PAH pada 60 g / L NaCl konsentrasi. Degradasi menurun karena peningkatan konsentrasi garam dan konsorsium mampu menurunkan hanya 45 dan 43% dari fenantrena dan fluoren, masing-masing pada 60 g / L NaCl konsentrasi dalam 4 hari. Dengan antrasena dan naftalena sebagai sumber karbon tunggal, pada 60 g / L NaCl konsentrasi, konsorsium bakteri mampu menurunkan 39% dan 42% dalam 4 hari. Pengaruh substrat tambahan dalam PAH degradasi (Yeast ekstrak 0,2 g / L pada 60 g / L NaCl konsentrasi) Dalam studi ini, pengaruh ekstrak ragi (0,2 g / L) sebagai substrat tambahan diperiksa di degradasi PAH oleh konsorsium bakteri. Ekstrak ragi adalah bagian larut air dari autolyzed ragi yang mengandung vitamin, nitrogen, asam amino dan karbon untuk pertumbuhan bakteri. Kontrol yang digunakan dalam studi di 60 g / L konsentrasi NaCl dengan ragi ekstrak adalah i) media + konsorsium bakteri ragi + ekstrak dan ii) media + PAH. Ekstrak ragi secara signifikan meningkatkan pertumbuhan bakteri konsorsium pada PAH pada 60 g / L NaCl. Penambahan ekstrak ragi potently meningkatkan pertumbuhan dan degradasi PAH. Dengan naftalena dalam Kehadiran ekstrak ragi, konsorsium bakteri menunjukkan degradasi 78%. Hitungan layak sel meningkat dari 7 104-2 109 cfu / mL dalam 4 hari (Gambar 6). Konsorsium bakteri yang rusak 85% dari fluoren dengan peningkatan yang sesuai dalam sel bakteri dari 8 104-2 109 cfu / mL dalam 4 hari (Gbr. 7). Fenantrena, bila digunakan sebagai karbon tunggal sumber mengalami penurunan sampai 87% dengan

jumlah sel bakteri meningkat dari 7 104-3 109 cfu / mL dalam 4 hari (Gbr. 8). Konsorsium bakteri mampu mendegradasi 74 % Dari antrasena dalam 4 hari. Selama antrasena degradasi jumlah sel bakteri meningkat dari 6 104-2 109 cfu / mL (Gambar 9). Dalam kontrol, konsorsium tumbuh dengan ekstrak ragi yang tersedia, diamati sebagai peningkatan pertumbuhan hingga 3 hari dan mencapai fase penurunan pada hari ke-4. Dalam konsorsium dengan ekstrak ragi dan PAH, peningkatan pertumbuhan diamati di siang hari 4. Penambahan ragi ekstrak meningkatkan biodegradasi PAH pada 60 g / L konsentrasi NaCl. Biodegradasi PAH (fluoren dan fenantrena) pada konsentrasi yang berbeda Para memperpanjang dari PAH degradasi oleh bakteri konsorsium dipelajari menggunakan fenantrena dan fluoren sebagai senyawa perwakilan di 5, 10, 20, 50 dan 100 ppm konsentrasi. Fenantrena pada 5, 10, 20 ppm hampir benar-benar terdegradasi (> 95%) oleh konsorsium bakteri dalam 4 hari. Ketika konsentrasi fenantrena meningkat menjadi 50 ppm, degradasi persen turun menjadi 89% dan pada 100 degradasi ppm adalah 74% dalam 4 hari. Dalam hal dari fluoren hasil yang sama diperoleh seperti yang untuk fenantrena pada konsentrasi 5, 10, 20 ppm. Pada konsentrasi tinggi (50 dan 100 ppm) phenantherene dan fluoren memiliki degradasi yang sama (Data tidak ditunjukkan). Konsorsium tersebut mampu menurunkan fenantrena dan fluoren pada 30 g / Lof NaCl konsentrasi tanpa sumber karbon tambahan. Gambar. 5: evolusi CO2 selama degradasi fenantrena (3 mg / L) oleh konsorsium bakteri Gambar. 6. Degradasi naftalena (3 mg / L) oleh konsorsium bakteri bakteri halotoleran pada 60 g / L konsentrasi NaCl dengan adanya ekstrak ragi (0,2 g / L) Gbr.7: Degradasi fluoren (3 mg / L) oleh konsorsium bakteri bakteri halotoleran pada 60 g / L konsentrasi NaCl dengan adanya ekstrak ragi (0,2 g / L) Gambar. 8: Degradasi fenantrena (3 mg / L) oleh konsorsium bakteri bakteri halotoleran pada 60 g / L NaCl konsentrasi di hadapan ekstrak ragi (0,2 g / L) Identifikasi strain dalam konsorsium bakteri Melalui analisis DGGE, itu menegaskan bahwa konsorsium PAH merendahkan terdiri dari tiga bakteri strain yaitu VA1, VA2 dan VA3. Itu

strain bakteri yang ada dalam konsorsium adalah diisolasi dan diidentifikasi dengan menggunakan fenotipik dan analisis filogenetik. Deskripsi VA1 strain (Ochrobactrum sp.) Analisis filogenetik berdasarkan nukleotida urutan dari VA1 galur menunjukkan maksimum 98 % Terhadap identitas Ochrobactrum sp. Regangan adalah gram negatif, berbentuk batang, aerobik dan oksidase positif. Jenis ini tumbuh baik pada suhu 37 C dan pH 7,8. Ketika strain dianalisis untuk karakter fisiologis, strain menunjukkan negatif terhadap hasil fenilena nitro Ortho galactopyranoside, fenilalanin deaminasi, metil merah, Voges Proskauer dan reaksi indol. Jenis ini digunakan 9 dari 13 sumber karbon (serial number.13 sampai 25). Arabinosa, adonitol, trehalosa dan laktosa merupakan sumber karbon yang tidak dimanfaatkan oleh jenis (Tabel 2). Deskripsi VA2 strain (Enterobacter cloacae) Isolat bakteri VA2 menunjukkan identitas 99% terhadap Enterobacter cloacae. Jenis ini tumbuh baik pada suhu 37 C dan pH 7,8. Regangan adalah gram negatif berbentuk batang, aerobik dan oksidase positif. Para fenotipik karakter dari strain VA2 menunjukkan negatif untuk dekarboksilase lisin, Fenilalanin deaminasi, H2S Produksi, Metil merah, Indole tes. Jenis ini digunakan 12 dari 13 sumber karbon. Adonitol adalah sumber karbon hanya yang tidak dimanfaatkan oleh jenis (Tabel 2). Deskripsi VA3 strain (Stenotrophomonas maltophilia) Isolat yang VA3 dari konsorsium bakteri menunjukkan identitas 98% terhadap Stenotrophomonas maltophilia. Isolat VA3 juga gram negatif, aerobik dan oksidase positif. Jenis ini tumbuh baik pada 37 C dan pH 7,8. Tes fenotipik menunjukkan: Ortho fenilena nitro-galactopyranoside, Urease, Fenilalanin deaminasi, Metil merah, Voges Proskaures, Indole - negatif. Jenis ini digunakan 10 dari 13 sumber karbon. Adonitol, rafinosa dan glukosa yang tidak digunakan oleh strain VA3 (Tabel 2). Dengan demikian, hasil dari filogenetik dan fenotipik analisis menunjukkan bahwa isolat VA3 milik Stenotrophomonas maltophili.The nukleotida urutan dari tiga strain bakteri adalah disampaikan kepada Bank Gen dan masing-masing nomor aksesi yang VA1 (EU722312), VA2

(EU722313) dan VA3 (EU722314). Dalam penelitian ini, konsorsium bakteri halotoleran potently terdegradasi naftalena (98%), fluoren (99 %), Fenantrena (99%) dan antrasena (95%), masing pada 30 g / L konsentrasi NaCl dalam 4 hari. The biodegradasi PAH oleh bakteri konsorsium menunjukkan degradasi> 95% dari rendah berat molekul PAH. Tam et al. (2002) mempelajari fenantrena degradasi oleh konsorsium bakteri diisolasi dari sedimen mangrove. Para bakteri konsorsium terdegradasi fenantrena sampai 47% pada 20 g / Lof salinitas, namun pertumbuhan dan tingkat fenantrena degradasi dipengaruhi oleh salinitas. Pada salinitas tinggi (35 g / L), pertumbuhan dan biodegradasi oleh konsorsium bakteri adalah terhambat. Penambahan glukosa sebagai karbon tambahan sumber di 35 g / L NaCl meningkat degradasi 35,6-45%. Salinitas memainkan peran penting dalam PAH degradasi. Diaz dkk. (2000) mengisolasi dua novel dan konsorsium bakteri serbaguna untuk biodegradasi hidrokarbon. Bakteri konsorsium yang diisolasi dari akar mangrove adalah efisien dalam fenantrena merendahkan (50%) dan naftalena (80%) dibandingkan dengan konsorsium dari minyak dandang lapangan di Laut Utara. Konsorsium tersebut adalah dapat mendegradasi baik alifatik dan aromatik hidrokarbon dalam minyak mentah di air laut (35 g / LNaCl) garam konsentrasi. Salinitas lebih dari dua kali dari itu air laut yang normal menurun biodegradasi tarif. Konsentrasi optimum garam untuk degradasi hidrokarbon adalah 20 g / Tanah 40 g / L Dalam penelitian ini, degradasi PAH adalah dikonfirmasi dengan menganalisis metabolit terbentuk dan karbon dioksida berevolusi selama degradasi PAH. Dur ing fenantrena degradasi, fenantrena-dihydrodiol, dihidroksi fenantrena, 1-hidroksi-2-naphthoic asam dan ftalat asam terbentuk. Similar metabolit seperti cisphenanthrene1,2-dihydrodiol, 1-Hydroxy-2naphthoic asam dan asam ftalat terbentuk selama fenantrena degradasi dilaporkan oleh Seo et al. (2007). Demikian pula, degradasi fenantrena oleh Gambar. 9. Degradasi antrasena (3 mg / L) oleh konsorsium bakteri bakteri halotoleran di 60g / L konsentrasi NaCl dalam kehadiran ekstrak ragi (0,2 g / L)

bakteri dan metabolit yang terbentuk selama degradasi repor ted oleh pekerja lain

(Pinyakong et al, 2000;.. Moody et al, 2001; Kang et al, 2003;. Kim et al, 2005).. Wang et al. (2008) melaporkan fenantrena degradasi oleh konsorsium mikroba pada kondisi garam dengan asam ftalat sebagai metabolit. Selama mineralisasi dari PAH, yang jumlah CO2 Evolved menunjukkan tingkat degradasi (Solano-Serena et al, 1999.). Bouchez et al. (1996) melaporkan bahwa degradasi lengkap PAH hasil dalam evolusi CO2, pembentukan biomassa dan air metabolit larut. Karena sebagian besar hidrokarbon aromatik merupakan senyawa beracun, lengkap degradasi tergantung pada versality dari organisme, akan menghasilkan produk berbahaya seperti CO2 dan air sebagai produk akhir. Para bakteri konsorsium yang digunakan dalam studi-benar mineralisasi fenantrena (3 ppm) dengan jumlah yang sama karbondioksida (1338 ppmv) dirilis, sisa fenantrena menunjukkan 99% dari phenathrene degradasi. Rasio antara jumlah karbon dioksida dihasilkan dan hidrokarbon sisa, memberikan lengkap gambar dari degradasi hidrokarbon (Penet et al., 2004). Salinitas memainkan peran penting dalam pengetahuan tentang biodegradasi PAH. Dalam penelitian ini, ketika salinitas medium garam mineral meningkat menjadi 60 g / L konsentrasi NaCl, penurunan persen degradasi PAH diamati. Konsorsium tersebut mampu mendegradasi 39-45% dari PAH pada 60 g / L NaCl konsentrasi. Beberapa peneliti telah mempelajari peran pada salinitas pada degradasi PAH dan pentingnya substrat tambahan. Atlas (1981) melaporkan bahwa biodegradasi fenantrena adalah dipengaruhi oleh sejumlah faktor lingkungan seperti sebagai salinitas dan penambahan karbon dan nutrisi. Yuan et al. (2000) melaporkan bahwa peningkatan salinitas dan deplesi nutrisi menghambat pertumbuhan bakteri sel. Untuk mendukung pertumbuhan sel bakteri, nutrisi seperti ekstrak glukosa, ragi dan asetat ditambahkan. Tehrani dkk. (2009) melaporkan bahwa dampak dari salinitas terhadap biodegradasi PAH minyak mentah berat minyak. Kepala dkk. (2006) menggambarkan pentingnya tambahan nutrisi dalam bioremediasi minyak bumi hidrokarbon. Kumar et al, (2007). Terisolasi basil yang regangan, mampu mempertahankan di 0-100 g / Lof NaCl dan 30-45 C. Produksi biosurfaktan oleh organisme diemulsikan berbagai hidrokarbon dengan heksadekana sebagai substrat terbaik dan toluena sebagai termiskin. Campuran PAH (0,02%) + solar, gas minyak, alkana, minyak mentah dan minyak tanah (0,2%) digunakan dalam eksperimen bersama dengan media garam basal (ekstrak-Ragi 2,5 g / L + jejak unsur solusi + minyak mentah 2% b / v).

Jenis ini mampu memanfaatkan pyrene (64%), fenantrena (69%) dan dibenzothiophen (72%) sebagai substrat tunggal pada 100 g / L NaCl dalam 2 minggu. Kumar et al. (2007) juga rinci pentingnya tambahan substrat selama degradasi PAH dan biosurfaktan produksi di bawah kondisi garam tinggi. Nicolson dan Fathepure (2004) melaporkan penambahan ekstrak ragi untuk bakteri halofilik dan bakteri halotoleran meningkatkan biodegradasi benzena, toluena, etilbenzena dan xilena (BTEX) compounds.In penelitian ini, dengan ekstrak ragi pada 60 g / L NaCl, 87% dan 85% dari fenantrena dan fluoren adalah terdegradasi dalam 4 hari oleh konsorsium bakteri. Naftalena dan degradasi antrasena adalah 78% dan 74%, masing-masing dalam 4 hari. Konsorsium tersebut secara signifikan terdegradasi PAH (> 74 %) Dalam jangka waktu 4 hari pada 60 g / L NaCl konsentrasi ekstrak ragi sebagai nutrisi tambahan. Jadi, dari penelitian ini, disimpulkan bahwa pertumbuhan bakteri mendegradasi hidrokarbon dan hidrokarbon degradasi dapat sangat ditingkatkan dengan penambahan nutrisi (ekstrak ragi). Penambahan nitrogen dan fosfat telah terbukti menjadi efektif bioremediasi pengobatan pada garis pantai beberapa (Swannell et al 1996;. Venosa et al 1996;. Swannell et al, 1999.). Penelitian ini menunjukkan degradasi PAH oleh konsorsium bakteri di dua garam yang berbeda konsentrasi (30 g / L dan 60 g / L). Pertumbuhan dan degradasi pada 30 g / L pada PAH (> 95%) adalah relatif lebih tinggi daripada di 60 g / L NaCl konsentrasi (39 sampai 45%). Konsorsium tersebut juga dapat mendegradasi PAH (fluoren dan fenantrena) di konsentrasi yang berbeda (5, 10, 20, 50 dan 100 ppm). Selanjutnya studi di mana dilakukan pada berbagai konsentrasi (5, 10, 20, 50 dan 100 ppm) dari PAH (Fluoren dan fenantrena) pada 30 g / L NaCl konsentrasi. Menariknya, konsorsium bakteri mampu tumbuh dan mendegradasi PAH upto 100 ppm pada 30 g / L konsentrasi NaCl tanpa tambahan nutrisi (data tidak ditunjukkan). Pada 60 g / L NaCl konsentrasi ekstrak ragi dengan konsorsium itu ditemukan potently menurunkan PAH. Dengan demikian, konsorsium dengan Ochrobactrum sp. (EU722312), Enterobacter cloacae (EU722313) dan Stenotrophomonas maltophilia (EU722314) bisa dipekerjakan dalam degradasi PAH terkontaminasi lingkungan laut. KESIMPULAN Konsorsium bakteri yang diperkaya dari laut lingkungan mampu PAH merendahkan pada 30 g / L

dan 60 g / L konsentrasi NaCl. Dengan ekstrak ragi sebagai nutrisi tambahan pada 60 g / L konsentrasi NaCl konsorsium bakteri mampu mendegradasi PAH. Studi ini membuktikan bahwa penambahan nutrisi di bawah kondisi garam juga memainkan peran penting dalam PAH degradasi. Dengan demikian, penelitian ini memberikan terkemuka ide tentang bakteri halotoleran PAH menjanjikan merendahkan bakteri konsorsium dalam kondisi garam. UCAPAN TERIMA KASIH Para penulis mengucapkan terima kasih bantuan diberikan oleh Mr Thirunavukkarasu, Laboratorium Asisten Pusat Studi Lingkungan, Anna University, Chennai, India selama penelitian. REFERENSI Agbozu, I. E.; Opuene, K., (2009). Kejadian dan diagenesis Evolusi perylene dalam Sedimen dari Oginigba Creek

ABSTRAK: biodegradabilitas dari hidrokarbon aromatik polisiklik seperti naftalena, fluoren antrasena dan fenantrena oleh konsorsium bakteri bakteri halotoleran terisolasi dari lingkungan laut diteliti. Itu hidrokarbon aromatik polisiklik konsorsium bakteri pendegradasi diperkaya dari sampel air campuran garam dikumpulkan dari Chennai (Pelabuhan Chennai, garam pan), India. Konsorsium potently terdegradasi polisiklik aromatik hidrokarbon (> 95%) di 30g / L konsentrasi natrium klorida dalam 4 hari. Konsorsium tersebut mampu menurunkan 39 untuk 45% dari hidrokarbon polisiklik yang berbeda pada 60 g / L konsentrasi NaCl. Karena meningkatnya salinitas, persen degradasi menurun. Untuk meningkatkan degradasi hidrokarbon aromatik polisiklik, ekstrak ragi ditambahkan sebagai tambahan substrat pada 60g / L konsentrasi NaCl. Setelah penambahan ekstrak ragi, konsorsium terdegradasi> 74% dari hidrokarbon aromatik polisiklik pada 60 g / L konsentrasi NaCl dalam 4 hari. Konsorsium tersebut juga mampu menurunkan PAH pada konsentrasi yang berbeda (5, 10, 20, 50 dan 100 ppm) dengan 30 g / L konsentrasi NaCl. Para polisiklik aromatik hidrokarbon konsorsium bakteri pendegradasi bakteri halotoleran terdiri dari tiga jenis bakteri, yaitu Ochrobactrum sp., Enterobacter cloacae dan Stenotrophomonas maltophilia. Baru! Klik kata di atas untuk melihat terjemahan alternatif. Tutup Google Terjemahan untuk Bisnis:Perangkat PenerjemahPenerjemah Situs WebPeluang Pasar Global Matikan terjemahan instanTentang Google TerjemahanSelulerPrivasiBantuanKirimkan masukan