Judul: Extract Kaya Mineral dari Alga Laut Merah Lithothamnion calcareum untuk Melindungi Struktur dan Fungsi

Tulang Mencit Betina pada Diet Gaya Barat Abstrak: Tujuan dari penelitian ini adalah untuk menentukan apakah suatu ekstrak yang kaya mineral yang berasal dari ganggang laut Lithothamnion calcareum merah dapat digunakan sebagai suplemen diet untuk pencegahan kehilangan mineral tulang. Enam puluh C57BL/6 tikus dibagi menjadi tiga kelompok berdasarkan diet: kelompok pertama menerima tinggi lemak diet gaya Barat (HFWD), kelompok kedua diberi makan sama HFWD bersama dengan ekstrak kaya mineral dimasukkan sebagai suplemen makanan, dan kelompok ketiga digunakan sebagai kontrol dan diberi makan rendah lemak hewan pengerat chow diet (AIN76A). Mencit dipelihara pada diet masing-masing selama 15 bulan. Kemudian, tulang panjang (femora dan tibiae) dari pria dan wanita dianalisis dengan tiga dimensi mikrocomputed tomography (mikro-CT) dan (tulang dari tikus betina) bersamaan dinilai dalam studi kekuatan tulang. Tartrat tahan asam fosfatase (TRAP), osteokalsin, dan N-terminal peptide prokolagen tipe I (PINP) dinilai dalam sampel plasma yang diperoleh dari tikus betina pada saat pengorbanan. Untuk meringkas, tikus betina pada HFWD telah berkurang mineralisasi tulang dan kekuatan tulang berkurang relatif terhadap tikus betina dengan diet chow rendah lemak. Cacat tulang pada tikus betina pada HFWD itu diatasi dengan adanya suplemen yang kaya mineral. Bahkan, tikus betina yang menerima suplemen yang kaya mineral di HFWD memiliki struktur tulang yang lebih baik/fungsi dari tikus betina melakukannya dengan diet chow rendah lemak. Tikus betina pada HFWD mineral ditambah memiliki tingkat plasma lebih tinggi dibanding tikus PERANGKAP dari kelompok lain. Tidak ada perbedaan dalam dua penanda lainnya. Mencit jantan menunjukkan sedikit perbedaan diet khusus oleh mikro-CT. Kata kunci: Bone mineralisasi, kekuatan tulang, mineral yang kaya ekstrak ganggang merah, Aquamin, tinggi lemak diet gaya Barat, Osteoporosis. Pendahuluan: Osteoporosis adalah kondisi yang ditandai oleh massa tulang yang rendah, kandungan mineral tulang yang rendah, dan penurunan microarchitectural, yang menyebabkan kerapuhan tulang ditingkatkan dan peningkatan konsekuensi dalam risiko patah tulang [1].

30% pria dari populasi Kaukasia di Eropa Barat dan Amerika Utara berpotensi mengalami patah tulang pinggul akibat osteoporosis, osteoporosis juga rentan terjadi pada wanita menopause. Osteoporosis dipengaruhi oleh faktor genetik, tetapi variabel lingkungan (misalnya, pemakaian tembakau, alkohol dan konsumsi kafein berlebihan, kurangnya aktivitas fisik, dll) [4] juga telah diidentifikasi memiliki dampak. Faktor makanan juga penting. Secara khusus, diet yang berisi sejumlah besar lemak, terutama lemak jenuh [5-9], telah diidentifikasi sebagai faktor risiko untuk osteoporosis. Demikian pula, diet kurang pasokan yang cukup dari mineral anorganik esensial, terutama kalsium (Ca2 +), mempromosikan osteoporosis [10-12]. Sementara Ca2 + adalah mineral kationik yang paling penting dalam tulang, mineral kationik lainnya yang ikut berperan dalam kesehatan tulang termasuk magnesium (Mg2 +) [13-15] serta mangan, tembaga, seng, dan selenium [16-23]. Diet dikonsumsi oleh banyak orang di Eropa dan Amerika Utara adalah tinggi lemak jenuh [24, 25]. Diet Barat yang tinggi lemak jenuh juga cenderung rendah akan mineral penting [, 24 25]. Mineral potensial penting Banyak rendah dalam makanan yang tinggi lemak jenuh [26]. Selain itu, tingginya kandungan lemak jenuh dalam makanan dapat mengganggu ketersediaan hayati mineral melalui beberapa mekanisme [27].

Sementara prevalensi osteoporosis pada masyarakat Barat yang dianggap mencerminkan, setidaknya sebagian, pengaruh makanan, mekanisme yang tepat melalui diet yang mempengaruhi kesehatan tulang tidak sepenuhnya dipahami. Selanjutnya, sementara pasokan yang cukup dari mineral anorganik diperlukan untuk kesehatan tulang, apakah mineral suplemen diet dapat mengurangi konsekuensi dari faktor-faktor nutrisi atau lingkungan yang tidak sehat tidak diketahui. Dengan pemikiran ini, kami mempertahankan kelompok tikus (wanita dan pria) pada formulasi makanan dirancang untuk meniru tinggi lemak khas gaya Barat diet (HFWD) [28-30] dan secara bersamaan ditambah pola makan beberapa hewan dengan produk multi-kaya mineral alam. HFWD ini awalnya dirancang untuk digunakan dalam polip usus besar studi [28-30] tetapi kemudian terbukti meningkatkan berat mineral tulang dan mengurangi kekuatan tulang pada tikus [31, 32]. Suplemen mineral yang digunakan di sini diperoleh dari ganggang laut merah Lithothamniom calcareum [33]. Merah ganggang laut, terutama mereka dari keluarga berkapur, ekstrak mineral dari air garam dan berkonsentrasi mineral sebagai garam karbonat dalam daun mereka. Para daun dari alga merah menjadi begitu sangat mineralisasi bahwa mereka pada dasarnya tidak memiliki zat (phytols, agar, alginat, karagenan, dll) umum untuk ganggang banyak. Mineral kaya daun telah digunakan sebagai sumber unsur jejak beberapa di bidang pertanian untuk tahun [34,

35]. Suplemen yang kaya mineral yang digunakan dalam penelitian ini saat ini termasuk dalam beberapa produk yang dirancang untuk konsumsi manusia (Marigot, Cork, Irlandia). Baru-baru ini, suplemen yang kaya mineral yang sama ditunjukkan dalam studi jangka pendek klinis untuk mengurangi rasa sakit selama latihan (berjalan) pada pasien dengan osteoarthritis [, 36 37]. Berdasarkan persyaratan dikenal karena pasokan yang cukup mineral untuk kesehatan tulang dan studi-studi terakhir, kami hipotesis bahwa suplemen multimineral yang kaya dari ganggang laut merah akan, pada kenyataannya, mengurangi efek merusak pada struktur tulang dan fungsi yang dihasilkan dari konsumsi HFWD a. Laporan ini menggambarkan upaya kita untuk menguji hipotesis ini. Material dan Metode: Mineral Kaya Ekstrak Ekstrak kaya mineral yang digunakan dalam penelitian ini adalah produk alami yang diperoleh dari sisa-sisa kerangka merah ganggang laut L. calcareum (Pallas), juga dikenal sebagai Phymatolithon calcareum (Pallas) [33]. Ganggang berkembang di perairan Atlantik dingin di lepas pantai barat daya Irlandia dan pantai barat laut dari Islandia. Mineral dari air laut diakumulasikan di daun ganggang selama masa hidup organisme. Akhirnya, kaya mineral daun putus dari organisme hidup dan jatuh ke dasar laut, dari mana mereka dipanen. Para daun mineral dipisahkan dari bahan asing, disterilkan, dikeringkan, dan digiling ISO dan HACCP sertifikasi. Ekstrak mineral mengandung kalsium 12%, magnesium 1%, dan tingkat terukur dari 72 trace mineral lainnya. Ekstrak dijual sebagai suplemen makanan dengan nama Aquamin (GRAS 000.028) dan digunakan dalam berbagai produk untuk konsumsi manusia di Eropa, Asia, Australia, dan Amerika Utara (Marigot). Komposisi mineral dari suplemen ganggang laut dapat dilihat pada table 1 Table 1 Komposisi ekstrak kaya mineral Element Aluminum Antimony Arsenic Barium g/g 291 6.74 <0.2 64.2 Element Hafnium Holmium Indium Iodine g/g Element g/g

<0.03 Rubidium 1.95 <0.05 Ruthenium 0.088 0.052 32.8 Samarium 0.529 Scandium 0.041

Element Beryllium Bismuth Boron Bromine Cadmium Calcium Carbon Cerium Cesium Chloride Chromium Cobalt Copper

g/g 0.306 0.081 39.5 10.1 0.070

Element Iridium Iron Lanthanum Lead Lithium

g/g

Element

g/g 0.672 504 0.250 4,150

<0.05 Selenium 915 0.372 0.158 2.77 0.065 Silicon Silver Sodium

Strontium 1,810 Sulfur 5,700 0.060

351,500 Lutetium 122,000 Magnesium 2.17 0.096 910 0.820 0.082 4.89 Manganese Mercury Molybdenum Neodymium Nickel Niobium Osmium Palladium Phosphorus Platinum Potassium

25,800 Tantalum 57.5 0.008 0.052 0.034 1.48 0.142

Tellurium 0.048 Terbium Thallium Thorium Thulium Tin 0.030 0.088 <0.02 0.061 0.197 27.8 0.188

Dysprosium 0.078 Erbium Europium Fluoride 4.27 0.051 7.28

<0.05 Titanium <0.01 Tungsten 310

Vanadium 37.5

<0.01 Ytterbium 0.096 5,176 Yttrium Zinc 1.22 15.8

Gadolinium 0.109 Gallium 2.48

Praseodymium 0.228 Rhenium Rhodium

Germanium 0.207 Gold <0.01

<0.05 Zirconium 0.339 <0.01

Source: 2008 Test Certificate for Aquamin, by Advanced Laboratories (Salt Lake City, UT), for client Marigot (Ireland)

Diet Tiga pakan yang digunakan dalam penelitian ini: (1) binatang pengerat AIN76A chow diet,

(2) HFWD, dan (3) yang HFWD yang sama ditambah dengan ekstrak ganggang yang kaya mineral. AIN76A adalah, secara rutin digunakan rendah lemak hewan pengerat chow. Ini berisi lemak 5% dari minyak jagung. Para HFWD, yang berasal dari AIN76A, secara khusus disiapkan sesuai dengan perumusan Newmark dkk. [28] dan dirancang untuk meniru diet yang dikonsumsi oleh banyak orang di masyarakat Barat. Ini berisi lemak 20% dari minyak jagung. Secara berat per, persentase kalori dari lemak dalam makanan ini adalah 37,8% dibandingkan 11,5% pada AIN76A chow diet. Meskipun sukrosa berkurang dalam relatif HFWD dengan pakan kontrol AIN76A, keseluruhan kalori diberikan dalam HFWD adalah 4.767 kkal% vs 3.902% kkal dalam hewan pengerat chow. Selain konten tinggi lemak, HFWD memiliki modifikasi lainnya. Metionin diganti dengan sistein, jumlah serat, asam folat, dan kolin berkurang, dan, yang paling penting, Ca2 + yang tingkat dikurangi menjadi sekitar 8% dari tingkat di chow mouse biasa. Para HFWD dilengkapi dengan ekstrak ganggang laut mineralrich mirip dengan diberi suplemen HFWD kecuali bahwa ekstrak ganggang termasuk dalam susunan (62 g%) untuk memberikan Ca2 + tingkat sebanding dengan jumlah yang diberikan dalam AIN76A. Diet dirumuskan dan disediakan oleh Diet Penelitian (New Brunswick, NJ). Komposisi tiga diet disajikan pada Tabel 2. Table 2 Komposisi Diet AIN76A HFWD HFWD supplement +

g% Protein Carbohydrate Fat Total kcal/g Ingredients Casein (80 mesh) 20.3 66 5 91.3 3.9 g 200

kcal% g% 20.8 67.7 11.5 100 24.4 48.5 20 92.9 4.76 kcal 800 g 240

kcal% 20.5 41.8 37.8 100

g% 22.9 45.7 18.8 87.5 4.49

kcal% 20.5 41.8 37.8 100

kcal 960

g 240

kcal 960

AIN76A

HFWD

HFWD supplement

g% dl-Methionine l-Cystine Corn starch Maltodextrin 10 Sucrose Cellulose (BW200) Corn oil Ethoxyquin Mineral mix S10001a Mineral mix S10001Ab Monosodium phosphate Monopotassium phosphate Calcium carbonate Red algae extract (12% 3 0 150 0 500 50 50 0.01 35 0 0 0 0 0 10 0 2 0 0

kcal% g% 12 0 600 0 2,000 0 450 0 0 0 0 0 0 0 40 0 0 0 0 0 3.6 100 75

kcal% 0 14 400 300

g% 0 3.6 100 75 310.418 20 200 0.01 0 21 7.98 7.91 0.88 62 0 12 1.2 0.00023 0.0012

kcal% 0 14 400 300 1,242 0 1,800 0 0 0 0 0 0 0 0 48 0 0 0 4,764.07

310.418 1,242 20 200 0.01 0 21 7.98 7.91 0.88 0 0 12 1.2 0 1,800 0 0 0 0 0 0 0 0 48 0

calcium) Vitamin mix V10001 Vitamin mix V13202 Choline bitartrate Folic acid Vitamin D3 (100,000 IU/g) Total

0.00023 0 0.0012 0

1,000.01 3,902

1,000.05 4,764.07 1,062.05

Mineral untuk campuran pakan kontrol (per kg campuran mineral): kalsium fosfat dibasic 500 g, 24 g magnesium oksida, kalium sitrat 220 g, kalium sulfat 52 g, natrium klorida 74 g, kromium sulfat 0,55 g kalium,

tembaga karbonat 0,30 g, kalium iodat 0,01 g, besi sitrat 6 g, 3,50 g manganous karbonat, natrium Selenite 0,01 g, seng karbonat 1,60 g, 118,03 g sukrosa. Mineral untuk campuran gaya Barat diet (per 0,5 kg campuran mineral): magnesium oksida 24 g, kalium sitrat 220 g, 52 g kalium sulfat, natrium klorida 74 g, kromium sulfat 0,55 g kalium, tembaga karbonat 0,30 g, kalium iodat 0,01 g , besi sitrat 6 g, 3,50 g manganous karbonat, natrium Selenite 0,01 g, seng karbonat 1,60 g, 118,03 g sukrosa

Pengobatan Protokol Enam puluh C57BL / 6 tikus (30 pria dan 30 wanita) dibagi menjadi tiga kelompok dan dipelihara selama 15 bulan pada tiga diet. Makanan diberikan secara ad libitum. Hewan dipantau secara mingguan selama tahap pemeliharaan dan ditimbang bulanan. Hewan yang bertahan selama periode 15-bulan (dan juga empat hewan yang mati selama bulan 14) termasuk dalam penelitian. Penelitian ini ditinjau dan disetujui oleh Komite Universitas Penggunaan dan Perawatan Hewan (UCUCA) di University of Michigan. Hewan yang mati prematur yang diotopsi, tapi tulang panjang mereka tidak dianalisis. Sebagian besar hewan tersebut tewas (sesuai dengan pedoman UCUCA) ketika mereka mengembangkan dermatitis ulseratif yang tidak responsif terhadap pengobatan antibiotik topikal. Selain itu, satu hewan mengembangkan gejala neurologis dan tewas, satu binatang menderita tumor hati, dan penyebab kematian tidak jelas untuk dua orang. Dari hewan yang termasuk dalam analisis tulang, ada sembilan laki-laki dan delapan perempuan dari kelompok AIN76A, tujuh pria dan empat perempuan dari kelompok HFWD, dan lima laki-laki dan 10 perempuan dari kelompok mineral ditambah HFWD.

Persiapan Jaringan rangka dan Micro-Computer-Assisted Tomografi Para femora kiri dan tibiae kiri dengan hati-hati membedah bebas dari jaringan ikat yang terkait pada saat kematian. Tulang-tulang itu segera ditempatkan dalam wadah tertutup dengan Ringer Laktat dan dibekukan pada -20 C sampai digunakan. Para femora dan tibiae yang kemudian 3D-dicitrakan menggunakan tomografi komputer mikro yang dibantu (mikroCT) sistem (menjelajahi Locus SP; GE Healthcare Pra-Klinis Imaging, London, Kanada) sebagaimana telah dijelaskan sebelumnya dan divalidasi [38, 39]. Pengukuran dilakukan pada tegangan operasi 80 kV dan 80 mA saat ini, dengan waktu bukaan 1.600 ms menggunakan teknik Parker scan, yang berputar sampel ditambah 180 derajat sudut kipas dari 20 derajat. Ukuran voxel yang efektif dari citra rekonstruksi adalah 18 18 18 m3. Foto itu global

thresholding dan digunakan untuk mengukur panjang dari kedua tulang panjang serta untuk mengukur parameter kepadatan tulang, geometri, dan morfologi. Daerah korteks bunga (ROI) dipilih dalam diaphysis pertengahan kedua femur dan tibia. Secara khusus, ROI femoralis dipilih dengan menempatkan titik tengah antara trokanter mayor dan lempeng pertumbuhan distal. Sebuah ROI silinder kemudian dipusatkan di sekitar titik tersebut, meliputi penampang seluruh korteks, dengan kedalaman ROI menjadi standar untuk persentase dari panjang tulang paha secara keseluruhan (18%). ROI kortikal tibialis dipilih dengan menempatkan persimpangan tibiofibular. Sebuah ROI silinder kemudian dihasilkan hanya proksimal ke persimpangan itu, meliputi penampang seluruh korteks, dengan kedalaman ROI menjadi standar untuk persentase dari keseluruhan panjang tibia (10%). ROI trabecular femoralis dipilih dengan menggunakan fungsi spline untuk secara manual memilih daerah 2D (kontur frame kunci) meliputi hanya tulang trabekula dalam metafisis distal. Sebuah kontur bingkai kunci dipilih pada setiap 10 frame mulai dari lempeng pertumbuhan distal dan proksimal terus sampai kedalaman ROI tercapai. Kedalaman ROI adalah standar untuk persentase dari panjang tulang paha secara keseluruhan (10%). Setelah selesai dari pilihan kontur frame kunci, kontur tambahan yang dihasilkan oleh interpolasi kontur antara frame kunci. Sebuah ROI 3D kemudian dihasilkan dari semua kontur. ROI trabecular tibialis dipilih dengan menggunakan fungsi spline untuk secara manual memilih daerah 2D (kontur frame kunci) meliputi hanya tulang trabekula dalam metaphysis proksimal. Sebuah kontur bingkai kunci dipilih pada setiap 10 frame mulai dari lempeng pertumbuhan proksimal dan distal terus sampai kedalaman ROI tercapai. Kedalaman ROI adalah standar untuk persentase dari panjang keseluruhan tibialis (5%). Setelah selesai dari pilihan kontur frame kunci, kontur tambahan yang dihasilkan oleh interpolasi kontur antara frame kunci. Sebuah ROI 3D kemudian dihasilkan dari semua kontur. Para ROI kortikal dinilai baik densitometrically (mineral konten tulang dan kepadatan jaringan mineral) dan geometris (rata-rata ketebalan dan luas penampang, momen lentur inersia, dan perimeter endosteal dan periosteal). Para ROI trabecular dinilai baik densitometrically (mineral konten tulang dan kepadatan jaringan mineral) dan morfologi (fraksi volume tulang, permukaan-ke-volume rasio, dan ketebalan trabekula, nomor, dan spasi). Biomekanik Pengujian

Seluruh tulang-sifat mekanik ditentukan dengan memuat femora kiri untuk kegagalan dalam empat poin membungkuk, menggunakan mesin uji servohydraulic (858 Mini Bionix II; MTS Sistem, Eden Prairie, MN) dengan perlengkapan pengujian disesuaikan dengan laju perpindahan konstan 0,5 mm / s [40]. Femora dimuat dalam arah anterior-posterior sehingga sisi posterior tulang itu dalam ketegangan dan sisi anterior berada di kompresi. Bebanperpindahan kurva dianalisis menggunakan MATLAB perangkat lunak (versi R2008b; Mathworks, Boston, MA) untuk menentukan beban hasil, beban kegagalan, kekakuan, energi untuk kegagalan, dan rasio perpindahan. Beban hasil didefinisikan sebagai batas elastis sebelum deformasi permanen yang terjadi yang diukur dengan metode garis potong (kekakuan sekan berbeda sebesar 10% dari kekakuan tangensial awal). Kegagalan adalah beban beban di mana tulang serempak gagal. Kekakuan didefinisikan sebagai kemiringan daerah linier dari kurva beban-perpindahan preyield. Energi kegagalan ditentukan dengan integrasi numerik sebagai daerah di bawah kurva beban-perpindahan hingga titik di mana tulang gagal. Sebuah rasio perpindahan dihitung sebagai rasio perpindahan utama untuk menghasilkan perpindahan untuk menggambarkan ukuran relatif deformasi elastis dan plastik. Tartrat Tahan Fosfatase Asam, Osteocalcin, dan N-Terminal Peptida Tipe I prokolagen Tartrat tahan asam fosfatase (TRAP), osteokalsin, dan N-terminal peptide prokolagen tipe I (PINP) dinilai dalam sampel plasma yang tersedia secara komersial menggunakan enzymelinked tes immunosorbant (ELISA). Immunodiagnostic Systems (Fountain Hills, AZ) adalah sumber dari kit uji untuk TRAP dan PINP. Teknologi Biomedis (Stoughton, MA) adalah sumber untuk kit osteocalcin. TRAP diproduksi oleh osteoklas dan makrofag dalam jumlah besar dan terakumulasi dalam darah. Prosedur uji menilai 5b TRAP, yang merupakan bentuk khusus untuk osteoklas [41]. Penelitian terbaru menunjukkan bahwa 5b TRAP adalah ukuran dari jumlah osteoklas daripada aktivitas per se [42]. Osteocalcin dan PINP adalah ukuran fungsi osteoblas. Osteocalcin, protein tulang utama noncollagenous, adalah ukuran dari pergantian tulang [43]. Ketik kolagen I adalah protein kolagen utama pada tulang [44].

Statistik Evaluasi Micro-CT analisis, data pengujian biomekanis, dan data dari penilaian biokimia dilaporkan sebagai sarana kelompok dan standar deviasi. Perbedaan antara kelompok diet untuk kedua wanita dan pria dievaluasi secara statistik dengan ANOVA (enam kelompok untuk mikro-CT

dan wanita hanya untuk penilaian biomekanik dan biokimia), diikuti oleh perbandingan kelompok pasangan. Perbedaan dianggap signifikan pada tingkat <P 0,05. HASIL Micro-CT Analisis Femora dan Tibiae dari Tikus Perempuan pada HFWD dengan

atau Tanpa Ekstrak Kaya Mineral Normal C57B / 6 tikus tersebut bertahan selama 15 bulan pada makanan rendah lemak hewan pengerat diet atau pada HFWD dengan atau tanpa ekstrak kaya mineral sebagai suplemen. Pada inisiasi penelitian, semua binatang itu 3-4 minggu usia dan memiliki berat badan rata-rata 16 1 g. Selama periode 15-bulan,

hewanbertambah berat badan pada ketiga diet. Pada akhir periode 15-bulan, tikus dengan diet (hewan pengerat chow) AIN76A memiliki berat rata-rata 40

4 g. Berat mencit pada HFWD diberi suplemen dan ditambah adalah 50 6 dan 48 7 g, masing-masing (baiksecara statistik berbeda dari bobot diet chow pada P <0,01 tetapi secara statistik tidak berbeda satu sama lain). Meskipun tikus jantan adalah lebih berat

daripada tikus betina dalam ketigakelompok, perbedaan relatif terlihat dengan kedua pria dan wanita. Binatang yang masih hidup terbunuh di bulan 15, dan femora dantibiae dianalisis oleh mikroCT. Hasil kuantitatif dari tikus betinadalam penelitian ini disajikan pada Tabel Tables33 dan and4.4. Gambar 1 menyajikan 3D mikro-CT gambar paha dari mouse perempuan dalam dari kortikal setiapkelompok dantrabekular diet. Untuk

daerah dari tulang

meringkas, pada akhir studi 15-bulan, tikus betina pada HFWD telah kehilangan sejumlah besar mineral tulangdibandingkan dengan tikus betina pada diet rendah-lemak mineral tulang, penampang. Hal

(AIN76A) chow. Dalam jaringan kepadatan ini diamati di

analisis kortikal ada penurunan kandungan korteks, korteks dan luas

mineral, berarti ketebalan

keduafemora dan tibiae. Dalam yang lebih

analisis trabekula, tikus rendah kandungan penurunan baik mineral, dalam

betina padaHFWD memiliki tulang kepadatan jaringan mineral,

dan tulang fraksi

volume, karena

jumlah dan ketebalan trabekula. Tabel 3

Setiap tulang menjadi

sasaran mikro-CT di

dua daerah-kortikal

dantrabekula. Dengan tulang masing-masing, delapan parameterkortikal dan tujuh parameter trabecular dinilai. Nilai untuk deviasi standar. Signifikansi dilanjutkan setiap parameter adalah sarana dan ANOVA

statistikdari setiap

parameter dinilai dengan

denganperbandingan kelompok dipasangkan (P

<0,05). Tanda

bintangditempatkan dengan kelompok suplemen + HFWD: Tabel 4

Setiap tulang menjadi

sasaran mikro-CT di

dua daerah-kortikal

dantrabekula. Dengan tulang masing-masing, delapan parameterkortikal dan tujuh parameter trabecular dinilai. Nilai untuk deviasi standar. Signifikansi dilanjutkan setiap parameter adalah sarana dan ANOVA

statistikdari setiap

parameter dinilai dengan

denganperbandingan kelompok dipasangkan (P

<0,05). Tanda

bintangditempatkan dengan kelompok suplemen + HFWD: Fig 1

Micro-CT gambar

penampang melalui kortikal (pertengahandiaphysis) betina pada tiga diet yang ketebalan, dan

dan trabekula (metafisis distal) ROI dari femora daritikus berbeda. Perbedaan ketebalankortikal ruang yang jelas dan dalam

jumlah trabekula,

Tikus betina yang menerima ekstrak kaya mineral sebagai suplemen dalam HFWD tidak menunjukkan kehilangan mineral tulang. Perbedaan statistik yang signifikan antara HFWD dan HFWD dengan suplemen mineral yang terlihat dengan beberapa parameter baik di kortikal , dan trabecularregions kedua tibiae dan femora (Tabel (Tables3, 3, 4,4,

Gambar. 1). Mungkin yang paling mengejutkan adalah bahwa perempuan hewan di HFWD dengan kaya mineral ekstrak sebaiknya sifat struktural tulang daripada perempuan pada diet rendahlemak (AIN76A), meskipun binatang AIN76A harus sebanding Ca2 + tingkat. Efek paling dramatis terlihat di wilayah trabecular, di mana ada peningkatan besar dalam jumlah dan ketebalan trabekula dan pengurangan bersamaan di ruang trabekula dalam mineral ditambah hewan HFWD relatif terhadap kedua kelompok lainnya. Perubahan serupa diamati di kedua femora , Kekuatan tulang Pengukuran (Tikus dan tibiae (Tabel (Tables3, 3, 44). Wanita)

Tulang pengukuran kekuatan diperoleh dengan menguji femora kegagalan di empat titik lentur. Hasil dari pengukuran ini pada tikus betina disajikan pada Gambar. 2, di mana dapat dilihat bahwa hasil beban, beban kegagalan, dan kekakuan semua lebih tinggi

pada hewan yang diberi diet tinggi lemak dengan suplemen kaya mineral dari pada hewan yang diberi diet tinggi lemak yang sama tanpa suplemen. Ada sedikit perbedaan dalam beban produksi dan beban kegagalan antara tikus betina dengan diet chow rendah lemak dan hewan pada HFWD tanpa ekstrak kaya mineral. Dengan demikian, perbedaan utama adalah antara hewan di HFWD dengan suplemen dan hewan dalam dua kelompok lain. Selain perbedaanperbedaan, ada perbedaan dalam kekakuan. Dalam kaitan dengan kekakuan tulang, tikus betina pada AIN76A itu perantara antara tikus betina pada dua diet lainnya. Secara keseluruhan, data ini menunjukkan bahwa ekstrak kaya mineral tidak hanya mengatasi konsekuensi dari HFWD pada tikus betina namun diawetkan kekuatan tulang untuk yang lebih besar daripada diet rendah lemak chow. Fig 2

Kekuatan

tulang pengukuran

dari tikus

betina dalam

tiga setiap

kelompokdiet. Femora diuji kegagalan di empat

titik lentur. Nilai untuk

parameter adalah sarana dan standar deviasi untuk wanita.Signifikansi statistik dari setiap parameter dinilai dengan ANOVA dilanjutkan bintang ditempatkan pada statistik statistik didasarkan signifikan relatif signifikan relatif pada delapan tikus

dengan perbandingan kelompok pasangan. Tanda kelompok suplemen + HFWD: terhadap kelompok AIN76A, *peningkatan ** peningkatan <0,05). Data

terhadap kedua AIN76Adan HFWD (P

dalamkelompok diet AIN76A, empat tikus dalam kelompok HFWD, dan 10 tikus dalam kelompok + suplemen HFWD Akhirnya, energi untuk rasio kegagalan dan perpindahan juga ditemukan lebih besar pada hewan yang diberi diet tinggi lemakdengan suplemen kaya mineral dari pada hewan pada diet rendah lemak atau hewan pada diet tinggi lemak tanpa suplemen. Yang menarik, bagaimanapun, kedua kelompok hewan pada diet tinggilemak (misalnya, dengan

atau tanpa ekstrak kaya mineral) yang dibutuhkan lebih banyak energi terhadap kegagalan dari hewanpada diet rendah lemak. Hasil ini terakhir menunjukkan bahwa diettinggi lemak meningkatkan ketangguhan tulang (dengan atau tanpasuplemen kaya mineral). Namun, tanpa suplemen mineral,peningkatan ketangguhan datang pada kekuatan harga berkurangsignifikan menjadirasio matriks (lihat [45] tulang vs ketangguhan). dan kekakuan, untuk analisis mencerminkan mineral menurun mendalam dari kekuatan

TRAP, Osteocalcin,

dan PINP (Tikus Wanita)

TRAP, osteokalsin, dan PINP dinilai dalam sampel plasmamenggunakan ELISA tersedia secara komersial. Denganosteocalcin dan PINP, tidak ada perbedaan signifikan antara tikus betina dari lebih tinggi kelompok diet pada tikus (Gbr. 3). Dalam tingkat kontras TRAP, denganekstrak kaya

betina pada HFWD dilengkapi

mineral dibandingkan pada tikus betina dari dua kelompok lain diet (Gbr. 3). Fig 3

Osteocalcin, PINP,

dan TRAP tingkat

dalam plasma

dari tikus

betina dalam

tiga

kelompok diet. Plasma tingkat osteocalcin, PINP, dan 5b TRAP dinilai dengan ELISA dari hewan yang dibunuh pada akhir studi 15-bulan. Signifikansi ANOVA statistik dari setiap dilanjutkan statistik ** signifikan perbedaan didasarkan pada delapan tikus

parameterdinilai dengan

dengan perbandingan kelompokpasangan. Secara relatif baikAIN76A dan HFWD (P <0,05). Data

dalam kelompok diet AIN76A, empat tikus dalam kelompok HFWD, dan 10 tikus dalam kelompok + suplemen HFWD Micro-CT Analisis Femora dan Tibiae dari Tikus Pria pada HFWDDengan atau Tanpa Ekstrak Mineral Kaya Femora dan tibiae dari mencit jantan dianalisis oleh mikro-CTdengan cara yang sama seperti yang dilakukan dengan tulang daritikus betina. Hasil kuantitatif dari mencit

jantan disajikan pada and6.6. Untuk tikus pada betina pada meringkas, kelompok data tulang kortikal ketika

Tabel Tables55 dan dari laki-laki kortikal dari tikus

kontrol AIN76A dibandingkan data tulang yang sama, ada sedikit

kelompok diet

perbedaan baik femora atau

tibia. Sebaliknya, ada perbedaan antara tikus jantan dan tikus betina di wilayah trabeculardari kedua tulang. Secara khusus, ada peningkatan besar dalamjumlah trabekula pada betina,

tikus jantan dibandingkan

dengan tikus

tanpa perubahan ketebalan trabekula. Peningkatan jumlahtrabekula tanpa perubahan ketebala n tercermin dalam perbedaanruang trabekula. Ini secara nyata turun di

kedua femora dan tibiaemencit jantan relatif terhadap apa yang diamati di tulang yang sama dari tikus betina (P <0,01 antara tikus jantan dan betina pada dietchow AIN76A untuk kedua parameter; membandingkan TabelTables33 dan and44 dengan Tabel Tables55 dan and66). Tabel 5

Setiap tulang menjadi

sasaran mikro-CT di

dua daerah-kortikal

dantrabekula. Dengan tulang masing-masing, delapan parameterkortikal dan tujuh parameter trabecular dinilai. Nilai untuk deviasi standar. Signifikansi dilanjutkan setiap parameter adalah sarana dan ANOVA

statistikdari setiap

parameter dinilai dengan

denganperbandingan kelompok dipasangkan (P

<0,05). Tanda

bintangditempatkan dengan kelompok suplemen + HFWD: Tabel 6

Setiap tulang menjadi

sasaran mikro-CT di

dua daerah-kortikal

dantrabekula. Dengan tulang masing-masing, delapan parameterkortikal dan tujuh parameter trabecular dinilai. Nilai untuk deviasi standar. Signifikansi dilanjutkan setiap parameter adalah sarana dan ANOVA didasarkan

statistikdari setiap

parameter dinilai dengan <0,05). Data

denganperbandingan kelompok dipasangkan (P

pada sembilan tikus dalam kelompok diet AIN76A, tujuh tikus dalam kelompok HFWD, dan lima tikus dalam kelompok +suplemen HFWD Ketika tikus jantan dalam kelompok diet yang yang berbeda dibandingkansatu sama 5,

lain, minimal diet khusus perbedaan , perubahan 6) .6). Secara dalam ketebalan trabekula,

diamati (Tabel(Tables5, khusus,

diet khusus tikus

nomor, dan

ruang yangmenonjol pada

betina tidak diamati pada rekan-rekan pria mereka. DISKUSI

Laporan ini menggambarkan sebuah studi di mana C57BL / 6 tikus tersebut bertahan selama 15 bulan pada lemak jenuh tinggi, rendah Ca2 + diet dengan dan tanpa suplemen makanan yang terdiri dari ekstrak ganggang multi-kaya mineral laut. Diet tinggi lemak dirumuskan untuk meniru diet yang dikonsumsi oleh banyak orang di negara Barat [24, 25]. HFWD ini awalnya digunakan dalam studi yang terkait dengan pembentukan polip usus besar [28-30], tetapi bekerja selanjutnya menunjukkan bahwa tulang kehilangan mineral terjadi pada tikus dipelihara pada rejimen diet yang sama [31, 32].Konsisten dengan temuan ini terakhir, penelitian kami menunjukkan bahwa tikus betina dipelihara pada hilangnya mineral tulang HFWD berpengalaman dan penurunan kekuatan tulang dibandingkan dengan tikus dipelihara selama periode waktu yang sama pada diet rendah lemak hewan pengerat chow (AIN76A). Ini konsekuensi buruk-benar dikurangi pada tikus betina yang menerima suplemen yang kaya mineral di HFWD tersebut. Bahkan, tikus pada HFWD dengan suplemen kaya mineral meningkat kandungan mineral dan kekuatan tulang yang meningkat dibandingkan dengan kontrol tikus pada, standar diet rendah lemak hewan pengerat chow. Ini meskipun fakta bahwa diet rendah lemak dan mineral ditambah HFWD harus sebanding Ca2 + tingkat. Implikasi dari temuan ini adalah bahwa sementara Ca2 + mungkin mineral kationik yang paling penting, unsur-unsur lain dari suplemen multimineral juga tampaknya memainkan peran penting dalam mengatasi efek buruk dari HFWD pada struktur tulang dan fungsi. Dalam studi ini, kohort terpisah tikus jantan dan betina termasuk dalam setiap kelompok diet. Ketika parameter tulang kortikal dan trabekula dibandingkan pada tikus jantan vs betina pada kontrol hewan pengerat diet chow (AIN76A), ada sedikit perbedaan jender dalam parameter kortikal. Ada perbedaan, namun, dalam parameter trabecular. Secara khusus, tikus jantan memiliki nilai rata-rata lebih tinggi untuk jumlah trabekula daripada tikus betina dan, dengan demikian, nilai yang lebih kecil untuk ruang trabekula.Dalam satu pun dari kedua parameter, bukan juga di hampir semua parameter kortikal atau trabecular lainnya dinilai, apakah ada perbedaan signifikan dietspecific pada pria. Ini sangat berbeda dengan tikus betina. Seperti disebutkan di atas, efek merugikan dari HFWD yang diamati pada beberapa parameter di kedua daerah tulang. Bersamaan, efek perlindungan dari suplemen yang kaya mineral terlihat pada tikus betina. Dasar untuk ini, mencolok spesifik gender perbedaan tidak dipahami. Dalam populasi Kaukasia, laki-laki account untuk 20-30% dari patah tulang osteoporosis [3, 46], tetapi tulang kehilangan mineral dan patah tulang cenderung terjadi pada usia yang lebih maju. Pengecualian untuk ini adalah pada pasien kanker prostat, dimana kehilangan tulang adalah konsekuensi dari hormon terapi ablasi. Sebuah hipotesis yang

masuk akal adalah bahwa hilangnya terjal estrogen pada wanita menopause dan penurunan testosteron dengan usia lanjut pada pria sebagian besar bertanggung jawab (atau, setidaknya, memberikan kontribusi pada) tergantung waktu perbedaan dalam onset kehilangan tulang dan sensitivitas untuk patah tulang osteoporosis. Pada tikus jantan, kadar testosteron mungkin tetap tinggi melalui 20-24 bulan pada hewan individu, sementara estrogen pada dasarnya pergi dari tikus betina dengan 16 bulan [47]. Studi kami (15 bulan) hanya mungkin tidak berlangsung cukup lama untuk melihat perubahan yang berkaitan dengan usia tulang pada kelompok laki-laki. Fakta bahwa ada kecenderungan tertentu dari parameter (terutama jaringan kepadatan mineral) di antara tikus jantan adalah mendukung usulan ini. Tambahan, jangka panjang studi akan diperlukan untuk mengatasi masalah ini secara definitif. Pada titik ini, kita tidak tahu yang mana dari mineral beberapa hadir dalam suplemen berkontribusi pada efek dicatat atau mekanisme yang mereka bertindak untuk mempertahankan struktur tulang dan fungsi pada tikus betina. Tambahan percobaan akan diperlukan untuk mengatasi kedua masalah. Pada titik ini, tampaknya bijaksana untuk tidak berspekulasi di luar mencatat bahwa banyak komponen individu dalam produk multi-mineral yang kaya diet cenderung berdampak langsung terhadap struktur tulang dan fungsi [1, 10]. Atau, efek menguntungkan pada tulang mungkin sekunder lainnya, efek yang lebih global dari suplemen yang kaya mineral. Sebuah hipotesis (alternatif) menarik melibatkan peran suplemen kaya mineral mengendalikan peradangan sistemik.Peradangan sistemik kronis diterima dengan baik sebagai faktor risiko hilangnya mineral tulang [48-50]. Kami berhipotesis bahwa dalam tinggi lemak, diet rendah Ca2 +, diferensiasi epitel pada saluran pencernaan terganggu, menyebabkan penghalang "bocor" cacat atau, dengan tingkat yang lebih tinggi dari gugus proinflamasi (bakteri, racun bakteri, alergen makanan, dll .) terusmenerus "pencucian" ke dalam jaringan [51]. Ekstrak kaya mineral dapat menghambat peradangan dengan mendukung diferensiasi epitel di saluran pencernaan. Yang relevan dengan ini, kami baru-baru ini menunjukkan bahwa ganggang yang kaya mineral ekstrak dipromosikan diferensiasi sel epitel kolon secara in vitro [52].Dalam penelitian kami, sel epitel yang resisten terhadap Ca2 +-dimediasi diferensiasi, serta sel-sel yang sepenuhnya sensitif terhadap pertumbuhan dan diferensiasi yang mengatur efek dari Ca2 +, digunakan. Ekstrak mineral efektif dalam menekan pertumbuhan dan diferensiasi merangsang pada kedua populasi.

Mekanisme samping, penting untuk menanyakan apakah kaya mineral laut ekstrak ganggang dapat digunakan secara rutin pada manusia sebagai suplemen makanan dalam kondisi yang diperlukan untuk pemeliharaan struktur tulang / fungsi. Berdasarkan hasil positif yang

dihasilkan dalam penelitian ini, akan terlihat berharga untuk melakukan studi prospektif jangka panjang yang komprehensif pada sukarelawan manusia. Akhirnya, hanya studi tersebut dapat menentukan apakah atau tidak campuran mineral akan memiliki khasiat yang cukup tanpa toksisitas pada pengembangan waran. Ekstrak alga sudah tersedia sebagai suplemen makanan di bawah Aquamin nama (GRAS 000.028) dan saat ini digunakan dalam berbagai produk untuk konsumsi manusia di Eropa, Asia, Australia, dan Amerika Utara. Suplemen kaya mineral baru-baru ini diteliti dalam studi, kecil jangka pendek klinis [36, 37]. Tidak ada alasan mengapa pengembangan lebih lanjut dari bahan ini untuk
kesehatan tulang tidak harus dipertimbangkan.