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UNIVERSIDADE REGIONAL DO CARIRI - URCA CENTRO DE CINCIAS BIOLGICAS E DA SADE - CCBS DEPARTAMENTO DE CINCIAS BIOLGICAS DCB CURSO DE CINCIAS BIOLGICAS TCNICAS E IDENTIFICAO DE MICRORGANISMOS Prof: Maria Flaviana Moraes Braga

MICROSCOPIA DE MICRORGANISMOS
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Fernanda Gomes Leite Herivelto Faustino de Oliveira Crato CE 05/2012

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Os microrganismos constituem um grupo de seres vivos de dimenses reduzidas e bastante variveis de acordo com o grupo a que pertence.
Procariotos(bactrias e arqueas): variam entre 300nm e 1m Eucariotos(fungos, algas e protozorios): variam de 10m a 100m Virus:(variam de 27nm(bacterifago X 174) at 300 nm (por virus) de dimetro

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Microscpio ptico ou de Luz

Microscpio Eletrnico

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Microscpio ptico ou de Luz

A resoluo a capacidade que um sistema ptico tem de distinguir objetos separados por pequenas distncias.

Limite de Resoluo Limite de Resoluo

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Microscopia de contraste de fase

Foi desenvolvida a partir da observao de que o material biolgico era capaz de alterar a luz incidente sobre ele provocando difrao.

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Difrao e material biolgico

Alguns materiais que retardam a onda de luz incidente em meio comprimento de onda podem ser observados no microscpio ptico. Excelente contraste no meio que os envolve.

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Discos de contraste

Para produzir o contraste preciso dois discos de contraste. 1 colocado anterior ao condensador > anulus 2 plano focal posterior a objetiva > disco de fase

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Utilizao

Lentes da objetiva > N Ph1, Ph2 e Ph3 Anel tem de estar com n correspondente a n da objetiva

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Contraste Interferencial Direcional (CID)

Difrao material biolgico + polarizao da luz. Gera imagem aparentemente tridimensional com excelente contraste.

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Obteno de imagem em DIC

Plano de vibrao de luz > Polarizador (colocado antes do condensador). Prisma usado para regular contraste.

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Vantagens em relao ao contraste de fase

Pode ser usado em material espesso Melhor anlise das extremidades Observao em diferentes planos de foco

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Microscopia de fluorescncia

Visualizao de microrganismos Baseia-se na utilizao de corantes fluorescentes.

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Os corantes so capazes de absorver luz de um determinado comprimento de onda, emitindo luz em comprimento maior. Baseia-se no efeito Tyndal

Explica como vemos partculas de poeira ao sol. O que vemos o reflexo da poeira

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O sist. Fluorescncia adaptado a um microscpio ptico de contraste de fase Imunofluorescncia Marcao da molcula feita com uso de anticorpos e fluorocromos.

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Microscopia confocal

Vantagens : elimina a fluorescncia das regies fora de foco Pode-se aplicar a amostras vivas ou fixadas, e marcadas com mais de um corante

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Microscopia eletrnica

microscpio eletrnico apareceu em 1932 e vem sendo rapidamente aperfeioado. As mquinas mais atuais permitem aumentos de 5 mil a 500 mil vezes, sem muita dificuldade
A grande diferena desse microscpio para o ptico q esse utiliza feixes de eltrons em vez de luz.

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Microscopia eletrnica de transmisso (MET)

Os eltrons, assim como a luz no microscpio ptico, necessitam atravessar a amostra para gerar uma imagem visvel

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Consideraes

No analisa material vivo A imagem formada pela interao dos eltrons com as diferentes regies da amostra A passagem dos eltrons pela amostra gera alteraes devido ao aquecimento

Para analisar a amostra

Amostra tem que ser fixada, desidratada e includa em resina plstica

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Microscopia eletrnica de varredura (MEV)

A imagem formada pela interao dos eltrons com a superfcie da amostra > gerando imagem tridimensional.

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Amostra

Amostra deve ser fixada e desidratada, e recebe uma camada de ouro (20nm de espessura)

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Os eltrons excitam um cintilador que gera ftons, os quais so ento conduzidos por fibra ptica at a tela da TV.