MATERIALS AND METHODS Rancangan uji untuk menentukan Farmakokinetik, bioavailabilitas dan bioekivalensi dari ciprofloxacin yaitu digunakan

rancangan crossover dengan menggunakan dosis tunggal. Design konvensional crossover tanpa replikasi, dua formula, dua periode, dan dua urutan yang digunakan. Subjek uji yaitu 28 pria muda sehat yang sudah memenuhi syarat dan secara acak dibagi menjadi 2 kelompok sehingga setiap kelompok terdiri dari 14 orang dengan 7 hari periode washout. Penelitian dilakukan sesuai dengan pedoman praktek klinis yang baik. Para relawan muda laki-laki sehat mengikuti penelitian ini diharapkan mengisi kuesioner yang mencakup rincian sejarah mereka. Sejarah ini termasuk alamat lengkap, informasi demografis, merokok, donor darah, makanan, obat, alergi, operasi jika ada dan status penyakit. Umur lebih dari 19 tahun, hanya subjek uji sehat non-perokok, usia homogen dan berat badan yang terdaftar untuk penelitian. Setiap relawan sukarela menandatangani "Formulir Informed Consent" pada saat pendaftaran dan bosan disetujui oleh Komite Etika Kelembagaan dibentuk oleh kepala pusat (ke-59 Majelis Umum WMA, Seoul, Oktober 2008). Subjek dirawat di Pusat Studi dan diberi penjelasan singkat tentang protokol penelitian oleh Ahli Medis pada hari sebelum pemberian obat (Harian 0). Subjek berpuasa semalam setidaknya 10 jam sebelum pemberian dosis pagi dan diberi dosis tambahan setelah 2 jam. Dosis yang digunakan dosis tunggal yaitu satu tablet 500 mg atau tablet Ciprofloxacin standar tes dengan 240 ml air. Sampel di analisis dengan dua metode yang divalidasi yaitu kromatografi cair kinerja tinggi dan mikrobiologi Assay. Tablet Ciprofloxacin sebagai obat uji dan referensi standar Ciprofloxacin pencitraan yaitu pasar yang digunakan untuk penelitian. Informasi label tablet digunakan diberikan di bawah ini. 1. Obat uji Ciprofloxacin 500 mg tablet B. Nomor Test (siap untuk pemasaran) 01-2002 Mfg Exp.12-2005 Waktu disintegrasi = 7-10 menit Kekerasan = 9-12 U kerapuhan = 0,01% 2. Obat referensi Ciprofloxacin 500 mg tablet Batch No 132 - B Mfg Tanggal 05-2001 Exp. Tanggal 04-2006 Waktu disintegrasi = 3-4 menit Kekerasan = 35-42 N kerapuhan = 0,01%

Tata Cara Pengujian

1. Pengambilan sampel dan penanganan Sebelum pemberian obat, sampel darah sekitar 5 mL dikumpulkan dari setiap sukarelawan melalui branula vena dengan stopper 18 G secara aseptic yang dimasukkan dalam pembuluh darah lengan kiri. Sampel darah ini digunakan sebagai kontrol. Setelah pemberian obat, sampel darah diambil pada seri jam ke 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 8,0 dan 12 dan dimasukan ke dalam tube berisi heparin. Sampel darah kemudian disentrifugasi dan plasma dipisahkan dan disimpan pada 20oC sampai hari analisis. 2. Analisis metode Dua jenis metode analisis yang digunakan untuk mengukur konsentrasi kuinolon (Ciprofloxacin) dalam plasma.

a. Metode Tekanan tinggi kromatografi cair (KCKT) Alat dan bahan Pemisahan KCKT dilakukan dengan menggunakan LC-10As, Liquid Pump single plunger pump, CDQR sistem dengan rentang laju aliran 0,01-5 ml / menit (0400 kgf/cm2) dan 5,01-99,9 ml / menit (10-200 kgf/cm2 ) dengan program kontrol waktu untuk laju aliran. Detector spektrofotometri SPD-10 V-UV-VIS dengan panjang gelombang 190-900nm dan dengan kisaran 0,0001-2,56 AUFS Auto-sampler SIL-10A Auto injektor untuk 220 v dengan rak sampel dan 1,5 ml sampel vial/cap. DATA prosesor, C-R7A, chromatopac, dengan 40MB hard disk drive, kertas grafik termal. NNDimethylformamide (6% v / v), Sodium dihidrogen fosfat monobasa (NaH2PO4) (0,01 M) Merck, asetonitril (15% v / v) HPLC kelas Merck, Fosfat Asam (Fluka) dan air suling. (6:79:15) pH = 3,0 digunakan sebagai fase gerak. Validasi KCKT yang digunakan sudah di validasi untuk dilakukannya suatu pengukuran sampel darah. Elusi mengunakan system isokratik yang terpisah dan terukur dalam total waktu 10 menit. Pengukuran presisi pada 5 konsentrasi dan didapat SD<2,0% Limit deteksi (LOD) : 0,02 g / ml Batas kuantisasi (LOQ) : 0.200 g/ml Koefisien regresi r : 0,9995. Kromatogram normal ciprofloksasin memiliki waktu retensi rata-rata 6,35 menit

Perlakuan Sampel darah yang sudah diberi heparin tersebut disentrifugasi dan diambil plasma untuk kemudian disimpan pada suhu 20oC sampai hari analisis. Plasma beku dibiarkan mencair pada suhu kamar dan diekstraksi. Satu ml sampel plasma dipindahkan ke dalam tabung reaksi, kemudian ditambahkan 0,5 ml standar ciprofloksasin dari berbagai konsentrasi dan ditambahkan 1 ml asetonitril kemudian campuran divortex selama 5 menit, kemudian sampel disentrifugasi dan supernatan dipindahkan ke dalam botol HPLC untuk analisis kromatografi. Aliquot (20l) dari standar reference ciprofloksasin dan spiked plasma sampel, disuntikkan ke dalam kolom C18 dengan suhu konstan 50C dan flow rate telah disesuaikan pada 1 ml / menit. Komposisi fase gerak asetonitril: NN Dimetil formamida: 0,01 M Sodium dihidrogen fosfat dihidrat (15:6:79) dan pH3.0 telah disesuaikan dengan menambahkan asam fosfat (85%).

b. Uji mikrobiologi dengan Metode Agar difusi Konsentrasi ciprofloksasin dalam sample plasma dapat juga diukur dengan uji mikrobiologi. Metode ini reproduksible dan akurat untuk plasma. Pengujian ciprofloksasin dengan metode difusi agar disk yang sudah terstandarisasi dan tervalidasi untuk akurasi dan presisi dengan uji mikroorganisme Streptococcus faecalis. Konsentrasi ciprofloksasin dalam plasma ditentukan sedikitnya dengan duplo. Zona hambat diperkirakan dengan bantuan Zona Reader dan konsentrasi siprofloksasin dalam sampel plasma dihitung dengan persamaan kurva formula standar sedikitnya dilakukan analisis duplikat siprofloksasin standar. Standar dijalankan dengan analisis masing-masing. Konsentrasi standar siprofloksasin dalam plasma dan ukuran zona minimum dan maksimum yang tercatat selama studi adalah LOQ 0.5ug/ml dan LOD 0.1ug/ml.The persamaan regresi dan koefisien regresi (R2) sebesar 0,9918.