Jurnal Kimia Indonesia

Vol. 2 (1), 2007, h. 1-6 Artikel Review

Modifikasi Asetilkolinesterase dengan Mutasi Kombinasi Secara In Silico Untuk Biosensor Organofosfat
Sudarko, Devit Suwardiyanto dan A.A Istri Ratnadewi Jurusan Kimia, FMIPA, Universitas Jember Jln. Kalimantan 37, Jember 68121
Email: darko@unej.ac.id Abstrak. Pengawasan lingkungan dari insektisida yang mempengaruhi kesehatan manusia dan ekosistem, telah menjadi pusat perhatian karena penggunaan insektisida di dunia. Deteksi insektisida di lingkungan dapat dilakukan dengan biosensor yang menggunakan asetilkolinesterase. Dalam penelitian ini telah dilakukan modifikasi asetilkolinesterase Torpedo californica secara in silico (simulasi komputer). Modifikasi ini bertujuan untuk meningkatkan sensitifitas dan kespesifikan terhadap organofosfat. Modifikasi asetilkolinesterase dilakukan secara in silico dengan program Modeller 6.2 dan untuk mengetahui efek modifikasi terhadap sensitifitas dan kespesifikannya digunakan program AutoDock 3.0. Strategi yang digunakan untuk memperoleh mutan yaitu dengan kombinasi mutan tunggal yang diharapkan dapat meningkatkan sensitifitas enzim terhadap organofosfat. Dalam penelitian ini tidak dapat diperoleh asetilkolinesterase yang lebih sensitif dan spesifik terhadap organofosfat. Kesulitan prediksi efek mutasi terhadap inhibisi organofosfat terjadi karena adanya dua model pengikatan organofosfat yang dipengaruhi oleh konsentrasi. Namun dengan strategi ini diperoleh mutan yang lebih sensitif dan spesifik terhadap karbamat. Hasil terbaik untuk peningkatan sensitifitas dan kespesifikan karbamat terjadi pada mutan F330A dengan peningkatan ki sebesar 0,42 untuk karbaril dan 0,31 untuk karbofuran. Kata kunci: asetilkolinesterase, biosensor, insektisida, pemodelan homologi, docking.

Pendahuluan Pengawasan lingkungan dari insektisida yang mempengaruhi manusia dan ekosistem, telah menjadi pusat perhatian. Organofosfat dan karbamat merupakan insektisida yang banyak digunakan dan memiliki kemampuan untuk menggantikan organoklorin seperti DDT, aldrin, lindane, dan lain-lain. Insektisida ini memiliki persistansi lingkungan yang rendah dibanding organoklorin, tetapi memiliki tingkat keracunan yang lebih tinggi.1 Biosensor berdasar inhibisi pada aktifitas beberapa enzim telah digunakan untuk pengukuran polutan dalam lingkungan.2 Hal ini, karena sistem sensor tersebut telah mampu memberikan cara analisis suatu polutan secara cepat, mudah dan handal pada jumlah renik. Dalam pengembangan biosensor, penggunaan enzim sangat bermanfaat dan menjanjikan.3,4 Dari penelitian yang telah dilakukan Kovarik et al5 dapat diketahui bahwa subtitusi residu F338A dan Y337A (penomoran berdasarkan asetilkolinesterase tikus), menghasilkan peningkatan konstanta inhibisi organofosfat

sebesar dua kali lipat. Mutasi yang sama dapat dilakukan pada asetilkolinesterase Torpedo c., yaitu pada F331 dan Y334 (Barril et.al, 2001).6(??) Modifikasi asetilkolinesterase Drosophila m. untuk deteksi insektisida yang dilakukan oleh Boublik et al7, menunjukkan bahwa mutasi F330L, Y370A, dan F371I dapat meningkatkan sensitifitas enzim terhadap organofosfat. Subtitusi residu F371I menghasilkan sensitifitas yang lebih tinggi dibanding subtitusi residu F371A. Mutasi yang sama dapat dilakukan pada asetilkolinesterase Torpedo c., yaitu pada residu F290, Y330, dan F331. Salah satu strategi untuk meningkatkan kinerja asetilkolinesterase untuk biosensor organofosfat adalah dengan meningkatkan kespesifikan dan sensitifitas enzim terhadap organofosfat. Pada penelitian ini dilakukan modifikasi sisi aktif asetilkolinesterase secara in silico (simulasi komputer), selanjutnya untuk mengetahui kespesifikan dan sensitifitas enzim hasil modifikasi tersebut dilakukan uji interaksi antara enzim hasil modifikasi dengan substrat maupun beberapa jenis inhibitor (heptenofos, diklorfos, karbofuran, karbaril).

Dapat dibaca di www.kimiawan.org/journal/jki

yang meliputi F288L. dan Y334A dilakukan dengan program MODELLER. komputer Intel Xeon 2. Struktur X-ray tunggal digunakan sebagai template untuk pemodelan homologi. orientasi. AutoDock 3. Data struktur dimanipulasi menggunakan MODELLER 6. Struktur mutan dan wild type Torpedo c. dan konformasi baru yang diperoleh dievaluasi dengan fungsi energi. Kemudian. MODELLER mengimplementasikan pendekatan pemodelan menggunakan perbandingan struktur protein. maka algoritma akan mengambil langkah yang berlawanan. dimana langkahlangkahnya ditentukan. AutoDock merupakan program yang dikembangkan untuk memprediksi interaksi ligand dengan target biomakromolekul.12 Hasil dan Pembahasan Proses Mutasi in Silico.Sudarko. Titik grid yang digunakan dalam penelitian ini sebesar 80x80 dengan spasi grid 3. Analisis ini berdasar pada database penataan 105 famili yang termasuk 416 protein yang telah diketahui strukrur tiga dimensinya. setiap variabel sesuai dengan genotip dan koordinat atom sesuai dengan fenotip.9 Dengan penelusuran database. Pemodelan Homologi. F290L.26 MHz dengan memori 128 MB dan sistem operasi Microsoft Windows XP Pro. serta komputer Intel Pentium 4 2. 2 Jurnal Kimia Indonesia Vol. Selanjutnya. maka diterima dan sebalikknya jika tidak. Pertama. atau sudut dihedral dari dua protein yang berhubungan. Kemudian program AutoDock menghitung energi interaksi antara konformasi ligand fleksibel dan setiap titik grid melalui kombinasi algoritma pencarian. Ligand dibuat menggunakan ChemOffice 2000. seperti korelasi antara jarak ekivalen Cα . batasan hubungan dan term energi CHARM memperkirakan stereokimia yang cocok. Setelah itu dilakukan penghitungan batasan pada sequence target yang dihitung dari penataannya dengan struktur tiga dimensi template. AutoDock 3.11 Program AUTOTORS menentukan ikatan yang mungkin berotasi pada molekul ligand.4 MHz dual prosessor dengan memori 512 MB dan system operasi Linux Debian Sarge Testing yang dilengkapi dengan program aplikasi AutoDockTools. Batasan tersebut diperoleh dari analisis statistik hubungan pasangan-pasangan protein homolog. Tahap translasi yang digunakan sebesar 0. Devit Suwardiyanto dan A. fenotip ligand dapat dihitung energinya berdasar fungsi energi bebas. Terakhir.0 dapat menggunakan algoritma genetik (AG) Lamarckian sebagai fungsi pencarian untuk simulasi docking. Pymol dan ChemOffice 2000 Preparasi Ligand dan Protein. 2007 . Konsep AG berdasar pada evolusi biologis.05. Dalam simulasi docking. kemudian melakukan translasi.05 dan TRITON 3. Dalam AutoDock.2 Å dan tahap rotasi 5°. F330A.0. orientasi. dan mengombinasikannya ke dalam fungsi objektif. penataan ligand didefinisikan dengan sebuah set variabel keadaan yang mendefinisikan translasi.75 Å yang dipusatkan pada sisi aktif serin. Alat yang digunakan dalam penelitian ini antara lain. Universitas Jember.8 Pemodelan dimulai dengan penataan sequence yang akan dimodelkan (target) dengan struktur protein tiga dimensi yang telah diketahui (cetakan). Dari gen tersebut. model diperoleh dengan mengoptimasi fungsi objektif dalam ruang kartesian. akan diperoleh tabel mengenai berbagai korelasi.10 Docking..2 yang terdapat pada TRITON 3. Struktur X-ray diperoleh dari protein data bank (E105). dan konformasi ligand. 1993). AutoDock menggunakan AG sebagai metode pencarian global dan sebuah pencarian lokal (PL) adaptive.A Istri Ratnadewi Metode Penelitian Penelitian ini dilaksanakan pada bulan Mei 2005 sampai Juni 2005 di Jurusan kimia. Pencarian lokal diturunkan dari sebuah algoritma oleh Solis dan Wets.0. Proses tersebut membutuhkan waktu kurang lebih 40 menit untuk tiap mutan. Linux Debian Sarge Testing yang dilengkapi dengan program aplikasi AutoDockTools. Jika perubahannya lebih disukai. Autodock 3. F331I. struktur 3D diminimalisasi energinya dengan teori PM3 dalam MOPAC 7 (modul ChemOffice 2000). Energi potensial setiap titik grid dihitung menggunakan program AUTOGRID. struktur 2D ligand digambar dengan ChemDraw Ultra (modul ChemOffice 2000). Posisi awal dan sudut dihedral dipilih secara acak dan terakhir simulasi 150 docking dijalankan untuk memperoleh struktur kompleks dari ligand yang secara statistik diterima. Mutasi kombinasi mutan tunggal pada asetilkolinesterase. dibuat dengan mutasi virtual dari pemodelan homologi. struktur 2D diekspor ke struktur 3D dengan Chem3D. Perubahan energi antara dua konformasi dihitung seperti pada algoritma Monte Carlo. 2(1). ligand pada awalnya diacak diluar protein. dan konformasi sampai sisi ideal ditemukan. Fakultas Matematika dan Ilmu Pengetahuan Alam. (Sali et al.Cα. Dalam AG. Kombinasi kelima macam mutan tunggal tersebut menghasilkan tiga puluh dua macam mutan termasuk asetilkolinesterase asli (wild type) hasil optimasi MODELLER.

Dari hasil docking. Dari hasil docking diketahui bahwa mutan tunggal dan kombinasinya meningkatkan k1 substrat (data hasil docking pada semua mutan tidak ditampilkan pada artikel ini).00 16. Dari Gambar 3 dapat diketahui bahwa mutan F290L/F330A memilki ki yang lebih tinggi dari wild type. Ikatan asetilkolin seperti pada Gambar 1.00 2. Gugus asetil asetilkolin terikat pada kantung oksi anion melalui ikatan hidrogen antara gugus karbonil asetilkolin dengan gugus NH peptida.00 14. Bertambahnya ukuran ruang menyebabkan energi internal ligand berkurang dan substrat lebih mudah ke sisi aktif.800 0. Gugus ekor kuarterner trimetilamonium terikat pada sisi anionik yang terdiri dari residu W84.00 Ty p F2 e 88 F3 L 30 A F2 F 88 33 L/ 1I F2 F 88 290 L F2 / F3 L 88 30 F2 L/ Y A 90 33 L 4A F2 / F3 90 30 F2 L/ F A 90 33 F3 L/ Y 1I 30 33 A 4A F2 F /Y 88 33 33 L/ 1I 4A F2 F3 / Y3 88 30 34 F2 L/ F A/Y A 90 33 33 4 1 L F2 / F3 I/Y3 A 3 90 30 L/ A/ 4A F3 Y3 31 3 4 I/Y A 33 4A ki (10 ) -5 W ild Mutan Gambar 2.00 12. Proses perhitungan docking membutuhkan waktu rata-rata delapan jam tiap perhitungan.00 0. Grafik k1 Substrat dengan Probabilitas Lebih Besar dari 50% 1.400 0. seperti pada Gambar 4.00 18. yaitu sebesar 4. Pada beberapa mutan. Grafik k1 Substrat dengan Probabilitas Lebih Besar dari 50% Dari data probabilitas orientasi substrat dapat dikelompokkan substrat yang memiliki jumlah probabilitas orientasi substrat ke sisi aktif serin dengan nilai lebih besar dari 50% disajikan pada Gambar 2. Model Pengikatan Substrat pada Sisi Aktif Serin Gambar 3.200 1.00 6.00 4. W84 dan Y130 berikatan dengan bagian kation melalui interaksi kation-π dan interaksi hidrofobik. Ki heptenofos pada mutan F290L/F330A mengalami peningkatan ki sebesar 0. G119.200 0. Y130 dan E199. Akan tetapi mutan tersebut tidak dapat digunakan karena terjadi peningkatan k1 substrat yang cukup besar. dan A201. beberapa mutan memilki probabilitas pengikatan substrat pada sisi periperal. Heptenofos membentuk ikatan hidrogen dengan residu S122 dan terjadi interaksi dipol-dipol induksi antara gugus C=O residu N85 dan Y70 dengan gugus –CH3 organofosfat.000 Ty F2 pe 8 F3 8L 30 F2 A 8 F3 F2 8L/ F 31I 88 29 F2 L/ F 0 L 8 3 F2 8L/ Y 30 A 90 33 F2 L/ F 4 A 9 33 F2 0L 0 A 9 /F F3 0L/ 331 30 Y3 I F2 A 34 88 F3 /Y3 A L/ 31 34 F2 F I/ 8 33 Y A F2 8L/ 0 A 334 90 F3 /Y A 3 3 F2 L/ F 1 I/ 3 4 90 33 Y3 A L/ 0 A 3 4 F3 /Y A 31 33 I/Y 4A 33 4A W i ld Mutan Gambar 1. Kombinasi mutan tunggal yang dilakukan dalam penelitian ini menyebabkan bertambah besarnya ruang gorge asetilkolinesterase. sehingga k1 substrat meningkat.Modifikasi Asetilkolinesterase dengan Mutasi Kombinasi secara In Silico untuk Biosensor Organofosfat Efek Mutasi Asetilkolinesterase pada Substrat Asetilkolin sebagai substrat didocking ke semua mutan dan dibandingkan hasilnya dengan asetilkolinesterase wild type. 20. Efek Mutasi Asetilkolinesterase pada Inhibisi Organofosfat Data hasil perhitungan docking heptenofos dapat dibuat grafik seperti pada Gambar 3 (grafik hanya menampilkan mutan yang orientasi substratnya ke sisi aktif serin).600 0.00 8. Ikatan Heptenofos pada Mutan F290L/ F330A 3 . distabilkan oleh kantung oksi anion yang terdiri dari residu G118.44x10-5. Gambar 4.00 10. sedangkan E199 melalui interaksi elektrostatik. Mutan F290L/F330A memiliki orientasi pengikatan heptenofos pada sisi periperal.000 ki (10 ) -5 0.105x10-5 terhadap ki wild type. perbesaran ruang gorge menyebabkan perubahan orientasi substrat.

Konstanta kecepatan k+1 dan k-1 menjelaskan ikatan reversibel AB ke sisi periperal. ki’ menunjukkan perubahan ki sebagai hasil adanya ikatan pada sisi periperal. Pada asetilkolinesterase wild type yang diinhibisi diklorfos. dan dua titik sebelah kiri asetilkolinesterase menunjukkan ikatan reversibel AB ke sisi periperal. Ada dua macam model inhibisi organofosfat. 2(1).A Istri Ratnadewi Data hasil perhitungan docking diklorfos dapat dibuat grafik seperti pada Gambar 5. Konstanta inhibisi diklorfos mutan F290L/F330A/Y334A mengalami peningkatan sebesar 4. 2007 . AutoDock memiliki keterbatasan tidak dapat memprediksi model inhibisi yang dipengaruhi oleh konsentrasi. Organofosfat kedua memiliki probabilitas 100% masuk ke sisi aktif asetilkolinesterase dengan nilai ki sebesar 1. AutoDock hanya dapat memprediksi probabilitas terbesar keadaan akhir model pengikatan suatu ligand pada makromolekul. Grafik Konstanta Inhibisi Diklorfos Gambar 6. Dari Gambar tersebut dapat diketahui bahwa mutan F290L/F330A/Y334A memiliki ki yang lebih tinggi dari wild type.13 Pengikatan organofosfat pada asetilkolinesterase juga dipengaruhi oleh konsentrasi organofosfat.14 Dengan mendocking ulang kompleks ligand yang telah terikat pada sisi periperal asestilkolinesterase akan diperoleh kompleks organofosfat yang terikat di sisi periperal dan sisi aktif sekaligus.Sudarko.2x10-5 terhadap ki wild type. 45 40 35 30 25 20 15 10 5 0 Ty p F2 e 88 F3 L 30 A F2 88 F3 3 L/ 1I F2 F 88 29 F2 L/ F 0 L 88 33 F2 L/ Y 0 A 90 33 L 4 F2 / F3 A 3 9 F2 0L/ 0 A 90 F3 L/ 31 F3 Y I 30 33 A/ 4 A F2 88 F3 3 Y3 L/ 1I 34 F2 F3 / Y A 3 33 8 F2 8L/ 0 A/ 4A 90 F3 Y3 L/ 31 3 4 F2 F3 I/Y A 90 30 33 L/ A/ 4A F3 Y 31 33 I/Y 4A 33 4A Mutan Gambar 5. Pada konsentrasi rendah organofosfat menyerang sisi periperal. Sedangkan yang mengunakan inhibitor heptenofos diperoleh dua belas run dari 150 run. Ikatan F290L/F330A/Y334A diklorfos pada mutan Dari hasil docking diperoleh probabilitas terbesar pengikatan organofosfat terjadi pada sisi periperal dan hanya beberapa run (ulangan) yang menghasilkan orientasi organofosfat ke sisi aktif. Kinetika Inhibisi Organofosfat pada Asetilkolinesterase.31x10-5 untuk heptenofos dan 4. Sedangkan k3 menunjukkan reaktifasi enzim. yaitu fosforilasi irreversibel pada sisi aktif dan interaksi reversibel pada sisi peripheral. Secara keseluruhan. Probabilitas pada mutan lainnya juga menunjukkan kecenderungan pengikatan ke sisi periperal. AB + AChE k-1 k+1 ki' ki AChE-A + B k3 AChE + A ki (10 ) -5 W i ld k2 AB AChE AB AChE-A + B Gambar 7.14 Model kinetika inhibisi organofosfat pada sisi periperal asetilkolinesterase dapat diilustrasikan pada Gambar 7. Hal tersebut sesuai dengan asumsi Kardos and Sulfatos14 bahwa organofosfat dapat membentuk kompleks AB--AChE-A.75 x 10-5.14x10-5 untuk diklorfos. yaitu 65. Akan tetapi pada mutan tersebut juga terjadi peningkatan k1 substrat yang cukup besar. diperoleh tiga belas run dari 150 run yang menunjukkan orientasi ligan ke sisi aktif. organofosfat akan menyerang sisi aktif serin. Ketika sisi periperal telah jenuh.14 AB + AB AChE 4 Jurnal Kimia Indonesia Vol. Model pengikatan diklorfos pada mutan F290L/F330A/Y334A seperti pada Gambar 6. pemodelan inhibisi organofosfat pada asetilkolinesterase dengan AutoDock tidak dapat memprediksi pengaruh mutasi. Devit Suwardiyanto dan A. Hal tersebut disebabkan inhibisi organofosfat memiliki lebih dari satu tahap inhibisi dan dipengaruhi oleh konsentrasi. Hal tersebut menunjukkan bahwa organofosfat juga dapat langsung memfosforilasi sisi katalitik tanpa berikatan dengan sisi periperal terlebih dahulu walaupun dengan probabilitas yang kecil.

Perubahan tersebut disebabkan perbesaran ruang kantung asil dan perubahan kepolaran residu 331. Grafik Perbandingan Konstanta Inhibisi Karbaril dengan Karbofuran Gambar 11. Gugus benzil karbaril dan karbofuran mengarah pada sisi anionik.45x10-5. Mutan yang memiliki peningkatan konstanta inhibisi yang hampir sama bersifat spesifik untuk karbamat.02x10-5 ke 1. Subtitusi F330A tidak mempengaruhi ruang kantung asil. Peningkatan k1 ini sesuai dengan eksperimen secara in vitro yang dilakukan oleh Boublik et al7 pada Drosophila m. seperti ditunjukkan pada Gambar 10.Modifikasi Asetilkolinesterase dengan Mutasi Kombinasi secara In Silico untuk Biosensor Organofosfat Efek Mutasi Asetilkolinesterase pada Inhibisi Karbamat. orientasi karbamat tetap pada sisi aktif serin dan tidak menyebabkan perubahan yang besar pada aktifitas asetilkolinesterase terhadap substrat. Konstanta inhibisi karbaril meningkat dari 1.02x10-5 ke 1. 3 2.5 0 Ty p F2 e 88 F3 L 30 A F2 88 F33 F2 L/F 1I 88 29 0 F2 L/F L 88 33 0 F2 L/Y A 90 33 L 4 F2 /F 3 A 90 30 F2 L/F A 90 33 F3 L/Y 1I 30 33 A/ 4A F2 88 F33 Y3 L/ 1 34 F2 F 3 I /Y A 88 30 33 F2 L/F A/Y 4A 90 33 33 L 4 1 F2 /F 3 I/Y A 90 30 33 L/ A/ 4A F 3 Y3 31 34 I/Y A 33 4A Karbaril Karbofuran W ild Mutan Gambar 8. Untuk memperoleh mutan yang spesifik untuk karbamat. Subtitusi residu F330A menghasilkan k1 yang hampir sama dengan mutan F331I. Atom oksigen karbonil karbaril berikatan hidrogen dengan residu S200 dan gugus benzil mengarah pada sisi anionik.5 2 Gambar 9. perlu dibandingkan konstanta inhibisi karbaril dengan karbofuran.42x10-5 ke 1. Model pengikatan karbaril pada mutan F331I ditunjukkan pada Gambar 9.78 x10-5 dan k1 karbofuran meningkat dari 1. Gugus CH3 karbofuran berinteraksi dengan gugus A330 melalui interaksi hidrofobik.42x10-5 ke 1.5 1 0.33x10-5. Orientasi ligan berubah dari sisi esterase ke sisi periperal. Dari hasil docking karbaril dan karbofuran pada semua asetilkolinesterase mutan dan wild type dapat dibuat grafik seperti pada Gambar 8. Jika dibandingkan dengan k1 substrat maka mutan yang paling bagus adalah F330A dan F331I. Inhibisi Karbofuran pada Mutan F331I Seperti pada Gambar 11 dan 12. Mutan F330A bersifat lebih spesifik untuk karbamat dibandingkan dengan mutan F331I. ki (10 ) -5 1. Inhibisi Karbaril pada Mutan F330A 5 . Pada mutan F331I k1 karbaril meningkat dari 1. Subtitusi F331I menyebabkan berkurangnya kepolaran residu tersebut.84x10-5 dan konstanta inhibisi karbofuran meningkat dari 1. Inhibisi Karbaril pada Mutan F331I Gambar 10. Inhibisi karbofuran mengalami perubahan orientasi ligan.

0.. Morris..J. Taylor. Webb.. Anal.. Inhibisi Karbofuran pada Mutan F330A Kesimpulan Pengaruh modifikasi asetilkolinesterase terhadap inhibisi organofosfat tidak dapat diprediksi menggunakan AutoDock 3.A. Shen. 2007 . Mutan yang spesifik untuk karbamat yaitu mutan F330A. A. F. Alber. 1990. 373. Goudou.. R. Berman.. A Simple Optical Flow Injection Ammonia sensors. R. 2(1). 1998. N. R...Lett. Interactions of the Organophosphates Paraoxon and Methyl Paraoxon with Mouse Brain Acetylcholinesterase.. 1993. 1639-1662. A. B. Constustion of an Acethylcholinesterase-Choline oxidase biosensor for aldicarb detection. Eswar.. Sali.. M. J. 914-920. P. Radic. 6. Flourescence Optical Urea Biosensor with an Ammonium Optrode as Transducer. 15. 11. Overington. R.. G. Sanchez. S. Derivation of rules for comparative protein modeling from a database of protein structure alignments. F.A Istri Ratnadewi 4.. 1582-1596. Acetylcholinesterase engineering for detection of insecticide residues. R. 11-20. Kardos. Feyfant. 8. Wolfbies. Devit Suwardiyanto dan A.. Hart. Oleh sebab itu perlu dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mempelajari mekanisme inhibisi organofosfat. E. M. L. Belew. F. S. Rieger. yaitu pengikatan ligand pada sisi periperal dan sisi aktif serin. Li. Biosensors&Bioelectronics. E.0 karena organofosfat memiliki dua model pengikatan. J. 531-539 2.M.. Halliday. Friboulet.. Boublik. Badretdinov. M. 17. Fiser. G. Taylor. Protein Sci. F. W. D. 29. Biochem. Simeonrudolf. Hart.. 6 Jurnal Kimia Indonesia Vol. K. 2002. 43-50. O.Y.. A. B... Belew.. Interaction of an organophosphate with peripheral site on acetylcholinesterase. Overington. Sali. A. A.. Barril. 31. 14. Acetylcholinesterase Active Center and Gorge Conformation Analised by Combinatorial mutations and Enantiomeric Phosphonates. Fournier. S. Huey. 1. 395-410. J. S. 118-126. Orozco. User’s Guide : AutoDock Version 3. Olson. Mascini.. P. yaiutu dengan subtitusi residu F330A. 12. Release 7v7.. Enzyme Inhibition Based Biosensor for Environmental Monitoring. 3. Toxicological Sciences. S. M... G. Sultatos. B. Melo. P. 2002. Z.S. 33-40. Goodsell. Manual : MODELLER (A Program for Protein Structure Modeling). S. M. G. 7.S. 2003. 3.. 161-166. 27-36. 9. Dari hasil penelitian ini perlu dilakukan eksperimen lebih lanjut untuk memperoleh asetilkolinesterase yang lebih spesifik dan sensitif untuk karbamat. M. V.. M. Kuswandi. F. Narayanaswamy. Reiner. S.. F.. E. H. A... R. W. Protein Eng.5. Mondacca. Bozoglu. H.A. Amitai. 2002.. R. Huey.G. X..A. Olson. Current Enzyme Inhibition. J.. D. D. Kuswandi. Biosensors and Bioelectronics.. Kovarik. E. D. 58..Sudarko. Gambar 12. 1998. A. 19. Kalko. J. 2001.. 2000. Villatte. Aguet. 2004. Lougarre. Pustaka 1.P. Arnaud.. Luque... 5. Halliday. M...... Mini Rev Med Chem. S. 1994. Rational Design of Reversible Acetylcholinesterase Inhibitors. B. 8. Comp.. Automated Docking Using a Lamarkian Genetic Algorithm and an Empirical Binding Free Energy Function. Yerkovich. A. 13. Z. F.. Hasirci. Madhusudhan. P. E.. Oliva.. Mutan F330A memiliki konstanta inhibisi satu setengah kali lebih besar dibanding dengan asetilkolinesterase wild type. J.. V.. Kok.. 2005. Biochemistry. 2(1). B. 10.N. Chem. Goodsell.. Morris. Renom. Y.

Sign up to vote on this title
UsefulNot useful