Anca Mrculescu

Medicamentul veterinar / Veterinary drug Year 2, o. 1. June 2008

MECANISME DE ACTIUNE ALE ANTIBIOTICELOR ANTIBIOTICS: MECHANISMS OF ACTION

S.L. dr. Anca Mrculescu Universitatea de tiine Agricole i Medicin Veterinar Cluj-Napoca Cuvinte cheie: Key words: antibiotice, mecanisme de aciune antibiotics, mechanisms of action

Abstract
The antibiotics are a very important class of chemotherapeutic agents that are capable to stop or even selectively destroy pathogens in man and animal. Antimicrobial agents affect susceptible organisms in various ways. The major mechanisms of action of antibiotics are: inhibition of cell wall synthesis, impairment of cell membrane function, inhibition of protein synthesis, inhibition of nucleic acids synthesis. Rezumat Antibioticele reprezint o clas foarte important de compui utilizai n terapie, capabili s opreasc sau chiar s distrug selectiv unele microorganisme patogene pentru om i animale. Agenii antimicrobieni acioneaz asupra microorganismelor susceptibile n diverse moduri. Mecanismele majore prin care antibioticele i exercit aciunea sunt: inhibarea sintezei peretelui celular, deterioarea funciei membranei celulare, inhibarea sintezei proteice, inhibarea sintezei acizilor nucleici.

Antibioticele reprezint o clas foarte important de compui utilizai n terapie, care s-a dezvoltat n ultima jumtate de secol, o perioad caracterizat de progrese fr precedent n domeniul produciei de medicamente (Boothe D., 2003). n conceperea noilor ageni antimicrobieni, progresele realizate nu ar fi fost posibile fr identificarea unor inte poteniale (enzime, membrane, acizi nucleici) implicate n metabolismul microbian, prin a cror inhibare sau afectare s apar efectul germicid dorit (Mrculescu Anca, 2007). n funcie de provenien, se poate face distincia dintre antibiotice (substane antimicrobiene extrase, n general, din culturi de mucegaiuri) i chimioterapice (substane antimicrobiene obinute prin sintez chimic) (Levy B. Stuart, 2002). n prezent, o delimitare net ntre cele dou categorii de substane antimicrobiene nu mai este nici posibil, nici justificat. ntr-adevr, n urma cunoaterii structurii chimice a extractului biologic, multe dintre antibioticele care iniial au fost obinute din microorganisme prin biosintez, n momentul de fa sunt preparate industrial prin sintez sau semisintez chimic.

Producerea unui antibiotic pe cale biologic (extracie) sau pe cale chimic (sintez) este decis astzi mai mult pe considerente de rentabilitate (Angelescu M., 1998; Coman Mioara i col., 2003). Din aceste motive, exist tendina de a reuni sub termenul generic de antibiotice substanele cu aciune antimicrobian care prezint mecanisme de aciune similare, se supun principiului toxicitii selective, n doze terapeutice nu lezeaz celulele organismului-gazd, iar rezistena bacteriilor la aciunea lor se instaleaz prin mecanisme identice (O'Grady i col., 1997). Utilizarea acestor substane antimicrobiene n terapeutic constituie antibioterapia. Termenul de antibioterapie, prin urmare, reprezint tratamentul n cursul cruia sunt folosite substanele antibiotice (Cristina R.T., 2007). Antibioticele antibacteriene acioneaz prin diverse mecanisme, cele mai importante fiind bazate pe inhibiia biosintezei unor componente ale peretelui celular (peptidoglicanul), a unor etape din biosinteza unor macromolecule: ADN, ARN, proteine sau enzime (figura 1.).

15

Anca Mrculescu

Medicamentul veterinar / Veterinary drug Year 2, o. 1. June 2008

Inhibitori ai ADN-girazei Quinolonele

Inhibitori ai sintezei ARN Rifamicinele

Compui care acioneaz pe membran Polimixinele

ADN - giraza ARN

Inhibitori ai sintezei proteice Inhibitori 30S Tetraciclinele Aminoglicozidele Inhibitori 50S Macrolidele Fenicolii Lincosamidele Streptograminele

ADHF

ATHF 30S 50S

Inhibitori ai biosintezei ATHF Sulfamidele

Ribozomi

Inhibitori ai sintezei peretelui celular Peniciline Bacitracina Cefalosporine Vancomicina Monobactami Carbapeneme Carbacefeme

ADHF acid dihidrofolic ATHF acid tetrahidrofolic

Fig. 1. Mecanisme de aciune ale antibioticelor antibacteriene (dup ONIGA i TIPERCIUC, 2003, modificat Mrculescu, 2007)

Clasificarea mecanismelor majore de aciune ale agenilor antimicrobieni se poate face n felul urmtor (Montoya Echeverri A. F., 2002; Merck Manual, 2005): A. Inhibarea sintezei peretelui celular: peniciline, cefalosporine, cefamicine (cefoxitina, cefotetan), vancomicina, bacitracina B. Deterioarea funciei membranei celulare: polimixina B, colistina, nistatina C. Inhibarea sintezei proteice: aminoglicozide, macrolide, tetracicline, fenicoli, lincosamide D. Inhibarea sintezei acizilor nucleici prin: - Inhibarea sintezei ADN i a replicrii: quinolone, novobiocina, metronidazol, griseofulvina Inhibarea ARN-polimerazei ADNdependent: rifamicine - Inhibarea sintezei acidului folic i consecutiv a sintezei ADN: trimetoprim, sulfamide

1. Inhibitori ai biosintezei peretelui celular bacterian Peretele bacterian are o structur complex. Att la bacteriile gram-pozitive, ct i cele gram-negative apare ca i component comun peptidoglicanul (mureina). Toate betalactaminele mpiedic biosinteza mureinei, componenta principal a peretelui celular bacterian (80-95 % la bacteriile gram-pozitive, 10-12 % la cele gram-negative), prin inhibarea unor sisteme enzimatice prezente n interiorul bacteriei (Oniga i Tiperciuc, 2003). Tina de aciune a betalactaminelor este reprezentat de PBP (penicillin binding proteins), proteine inserate pe faa extern a membranei celulare. Numrul i natura diferit a acestor polipeptide este n funcie de specia bacterian, ceea ce permite nelegerea diferenelor n aciunea acestor antibiotice asupra diverselor populaii

16

Anca Mrculescu

Medicamentul veterinar / Veterinary drug Year 2, o. 1. June 2008

bacteriene. Funcia acestor PBP a fost determinat: ele sunt transpeptidaze i carboxipeptidaze, cu rol n meninerea formei celulei bacteriene i chiar n diviziunea celular. Pentru ca betalactaminele s-i exercite aciunea antibacterian este necesar ca aceste antibiotice s ajung la inta lor de aciune (PBP) i s se lege de aceasta. Accesul ctre PBP este mai greu sau mai uor n funcie de tipul de bacterie, datorit diferenelor n structura peretelui celular: n cazul bacteriilor gram-pozitive penetrarea este mai uoar, dect n cazul bacteriilor gram-negative la care, ptrunderea antibioticului este limitat de membrana extern care face parte din structura peretelui celular, membran care lipsete la bacteriile gram-pozitive. Traversarea membranei externe de ctre betalactamine se face pe la nivelul porinelor, canale de natur proteic prezente la acest nivel (O'Grady i col., 1997). Betalactaminele sunt active mai ales asupra celulelor care i sintetizeaz activ peptidoglicanul (se afl n faz activ de multiplicare), etapele care conduc la liza bacterian desfurndu-se n felul urmtor: dup ce traverseaz peptidoglicanul, antibioticele se fixeaz pe anumite PBP-uri i inhib sinteza peptidoglicanului care va duce la oprirea creterii bacteriene, ceea ce reprezint efectul bacteriostatic al antibioticului; n continuare, aceast inhibiie va determina eliberarea sistemului enzimatic autolitic al mureinhidrolazei care va permite distrugerea celular prin hidroliza mureinei, distrugnd punile dizaharidului terminal i restul pentapeptidului din peptidoglican. Bacitracina, care face parte din grupa peptidelor ciclice, inhib, de asemenea, sinteza peptidoglicanului, prin combinarea cu bactoprenolul, lipidul transportor al nucleotidelor precursoare, pe care l inhib. Alte antibiotice, cum sunt glicopeptidele (vancomicina) inhib de asemenea sinteza peptidoglicanilor, acionnd n etapele finale ale acestei sinteze. inta de aciune a vancomicinei este transglicozilaza, enzim care transfer dizaharidele peptidoglicanului precursor pe peptidoglicanul n formare, inhibnd creterea peretelui celular (Matinca Doina, 2002).

2. Compui activi pe membrane Aceste antibiotice dezorganizeaz structura sau inhib funcionarea membranelor bacteriene. Integritatea membranei citoplasmatice i a membranei externe este vital bacteriilor, iar compuii care dezorganizeaz membranele determin rapid distrugerea celulelor (Todar K., 2002). Polimixinele (antibiotice polipeptidice) se leag de fosfolipidele din membrana citoplasmatic i astfel interfereaz cu funcia membranei, determinnd tulburri de permeabilitate. Totui, datorit similaritii fosfolipidelor membranelor eubacteriene i eucariote, aceast aciune este rareori suficient pentru a permite acestor compui s fie utilizai sistemic (Mrculescu Anca, 2007). 3. Inhibitori ai sintezei proteice Ribozomii bacterieni au o serie de caracteristici care i difereniaz de cei ai mamiferelor. Astfel, ribozomii bacterieni au un coeficient de sedimentare 70 (ribozomi 70S, cu subunitile 50S i 30S), n timp ce ribozomii din celulele umane au un coeficient de sedimentare 80 (ribozomi 80S, cu subunitile 60S i 40S) (Matinca Doina, 2002). Majoritatea antibioticelor antibacteriene au specificitate de aciune la nivelul ribozomilor 70S. Inhibiia selectiv a sintezei proteice bacteriene este explicat prin sistemul de transport activ prezent la bacterii, dependent de energie, absent n celulele mamiferelor. Acest sistem de transport specific permite intrarea antibioticului numai n celula bacteriilor (Todar K., 2002). Sinteza proteinelor bacteriene este realizat pe ribozomii 70S. n esen, un aminoacid activat i ataat la ARNt (ARN de transfer), se leag de locul acceptor al ribozomului. Peptida format la nivel ribozomal este apoi transferat, sub aciunea peptidil-transferazei, de la locul donator la un alt aminoacid de pe o poziie acceptor. Ulterior, transferul peptidei de la poziia acceptor la poziia donator are loc cu desprinderea ARNt, care i continu rolul de transfer al noilor aminoacizi la locul sintezei proteice (Oniga O. i col., 2003). Multe antibiotice utile terapeutic i

17

Anca Mrculescu

Medicamentul veterinar / Veterinary drug Year 2, o. 1. June 2008

datoreaz aciunea inhibrii n diferite etape ale procesului complex de sintez proteic. Atacul lor este, ntotdeauna, la nivelul unui eveniment care apare pe ribozom i niciodat n stadiul activrii aminoacizilor sau atarii la un anumit ARNt. Cele mai multe substane antimicrobiene au afinitate sau specificitate pentru ribozomii 70S i i dobndesc toxicitatea selectiv n acast manier. Cele mai importante antibiotice cu acest mod de aciune sunt tetraciclinele, fenicolii, macrolidele i aminoglicozidele (Todar K., 2002). Tetraciclinele se leag de subunitatea 30S i inhib sinteza proteic, blocnd introducerea de noi aminoacizi n lanul polipeptidic, intervenind astfel n faza de elongare. Dup penetrarea prin membrana citoplasmatic prin transport activ care necesit energie, tetraciclina se acumuleaz n celula bacterian, realiznd concentraii foarte ridicate. Aceste antibiotice pot strbate i membrana celulei eucariote, ceea ce le permite s exercite aciunea antibacterian i asupra bacteriilor care se multiplic intracelular (ricketsii, chlamidii, micoplasme) (Matinca Doina, 2002). Fenicolii inhib sinteza proteic n celula bacterian avnd drept int de aciune subunitatea ribozomal 50S. Antibioticele se leag de aceast subunitate i inhib peptidil-transferaza, enzim important pentru alungirea lanului polipeptidic. Macrolidele se fixeaz la nivelul subunitii 50S, pentru a mpiedica alungirea lanului polipeptidic n timpul sintezei proteice. Lincomicina i clindamicina fac parte dintr-o grup de antibiotice care sunt de asemenea inhibitori ai sintezei proteince cu activitate similar macrolidelor. Aminoglicozidele au ca int de aciune att subunitatea 30S ct i 50S, legarea antibioticelor totui realizndu-se la prima dintre acestea, astfel antrennd inhibarea sintezei proteice prin mpiedicarea fixrii factorilor de iniiere, erori n citirea ARN mesager, care dau natere proteinelor anormale sau/i o anomalie a translocrii care se traduce prin eliberarea prematur a peptidil-transferazei (Mayer, 2003). 4. Inhibitori ai sintezei acizilor nucleici Unele antibitiotice i ageni chemoterapeutici afecteaz sinteza ADN

sau ARN, sau se pot lega la ADN sau ARN astfel nct mesajul acestora nu poate fi citit. n ambele cazuri blocheaz creterea celulelor. Majoritatea acestor medicamente nu sunt selective i afecteaz la fel celulele animalelor ct i celulele bacteriene, datorit acestui fapt neavnd aplicare terapeutic. Totui, dou grupe de medicamente care au activitate selectiv mpotriva procariotelor i unele utilizri medicale sunt quinolonele i rifamicinele (O'Grady i col., 1997). 4.1. Inhibitori ai sintezei ADN i ai replicrii Quinolonele inhib sinteza acizilor nucleici prin inhibarea ADN topoizomerazei (ADN-giraza). inta de aciune a acestor antibiotice este subunitatea A a ADN-girazei, enzim esenial pentru viaa bacteriei, care permite meninerea structurii superhelicoidale a ADN; prin fixarea pe subunitatea A a ADN-girazei, quinolonele mpiedic sinteza ADN, avnd un efect bactericid (De Jong i Mrner, 1999). ADN-giraza este o topoizomeraz cu rol esenial n meninerea geometriei spaiale a moleculei circulare de ADN, n interiorul celulei bacteriene. Alterrile funciei topoizomerazei au efect asupra reglrii nu numai cantitative ci i calitative a exprimrii genelor, alte procese ca trancrierea, replicarea, recombinarea i transpoziia suferind, de asemenea, modificri. Enzima permite supermpachetarea moleculei de ADN cromozomial impus de dimensiunea celulei bacteriene. Inhibarea sintezei ADN determin, n celula bacterian, intervenia unui sistem de reparare a acidului nucleic care are indirect un efect bactericid. Pentru a-i atinge inta, quinolonele trebuie s traverseze peretele bacterian utiliznd fie porinele, la fel ca betalactaminele i aminoglicozidele, fie lipozaharidul; n ambele cazuri este vorba de o difuzie pasiv (Matinca Doina, 2002). Gradul de inhibare al ADN-girazei este diferit n funcie de specia bacterian. ADNgiraza la Escherichia coli nu are aceeai structur cu cea de la Staphylococcus aureus i Pseudomonas aeruginosa, ceea ce face ca afinitatea acesteia pentru quinolone s fie mai bun i rezultatul este o aciune antibacterian mai eficient n cazul infeciilor produse de E. coli. La bacteriile

18

Anca Mrculescu

Medicamentul veterinar / Veterinary drug Year 2, o. 1. June 2008

gram-pozitive inta primar de aciune este topoizomeraza IV care, din punct de vedere structural, prezint similitudini cu ADNgiraza, inta de aciune n cazul bacteriilor gram-negative. Novobiocina, un antibiotic cu spectru ngust, care poate fi bacteriostatic sau bactericid n concentraii ridicate, inhib ADN-giraza bacteriilor prin legarea de subunitatea B a acesteia. Activitatea antibacterian a quinolonelor, care leag subunitatea A, este inhibat de novobiocin, un antibiotic dealtfel utilizat destul de rar, n prezent, n infecii stafilococice rezistente i atunci, n asociere cu alte antibiotice. Modul de aciune al metronidazolului, un chimioterapic antibacterian i antiprotozoaric, nu este foarte clar, totui, se pare c, dup ce medicamentul ptrunde n organismele susceptibile, sufer prima dat o reducere, apoi se leag la ADN, determinnd pierderea structurii helicoidale i ruperea acestuia, ducnd la alterarea funciei ADN (Merck Manual, 2005). 4.2. Inhibitori ai ARN-polimerazei ADNdependent Civa derivai semisintetici (rifamicina, rifampinul rifampicina , rifamida) ai rifamicinelor naturale se utilizeaz ca antibiotice cu spectru extins. Rifamicinele acioneaz specific asupra ARN-polimerazei bacteriene. inta de aciune a acestor antibiotice este transcriptaza (ARNpolimeraza ADN-dependent) a crei activitate este inhibat, mpiedicndu-se astfel sinteza ARNm (ARN mesager) i prin urmare, transcrierea informaiei din molecula de ADN. Inhibarea enzimei este obinut rapid, prin legarea la subunitatea beta a polimerazei, n felul acesta blocnd intrarea primei nucleotide necesare activrii polimerazei, dar numai atunci cnd ARNpolimeraza este liber. Rifamicinele nu se fixeaz pe transcriptaza deja fixat pe ADN (O'Grady i col., 1997). 4.3. Inhibitori competitivi Muli dintre agenii chemoterapeutici sintetici sunt inhibitori competitivi ai metaboliilor eseniali sau ai factorilor de cretere care sunt necesari metabolismului bacterian. n consecin, aceste tipuri de
19

ageni antimicrobieni sunt denumii antimetabolii sau analogi ai factorilor de cretere, de vreme ce sunt concepui pentru a inhiba specific o cale metabolic esenial a unui patogen bacterian. Din punct de vedere chimic, inhibitorii competitivi sunt similari structural cu un factor de cretere bacterian sau metabolit, dar ei nu ndeplinesc funcia lor metabolic n celul. Unii sunt bacteriostatici, iar alii bactericizi. Toxicitatea lor selectiv este bazat pe premisa c, calea metabolic bacterian nu apare la organismul-gazd. Sulfonamidele i trimetoprimul sunt inhibitori ai enzimelor bacteriene cerute de sinteza acidului tetrahidrofolic (THF), component esenial n structura coenzimei responsabil de metabolismul carbonului n celul. Spre deosebire de eucariote, bacteriile nu asimileaz folai exogeni, ele fiind cele care realizeaz sinteza acestora, proces care are loc n dou etape: n prima etap se sintetizeaz acidul dihidrofolic (acid folic) ADHF - prin intervenia unei pteridine, a acidului paraaminobenzoic, a acidului glutamic i a unei enzime denumit dihidropteratsintetaza (DHPS); n a doua etap acidul folic este folosit la sinteza tetrahidrofolatului (acid folinic) ATHF , etap n care intervine o alt enzim dihidrofolatreductaza (DHFR). Sulfamidele sunt analogi structurali ai acidului paraaminobenzoic (APAB), substratul primei enzime din calea metabolic a tetrahidrofolatului (THF) i inhib competitiv etapa enzimatic n care intervine dihidropteratsintetaza, n timpul creia APAB este ncorporat n sinteza acidului folic. Datorit reducerii sintezei dihidrofolatului (DHF), nivelurile de THF (acid folinic) formate din DHF diminu. Trimetoprimul este similar structural cu dihidrofolatul i inhib competitiv etapa a doua din sinteza acidului folinic mediat de dihidrofolatreductaz (Todar K., 2002). Prin urmare, sulfamidele i trimetoprimul inhib sinteza folailor, acionnd ca inhibitori competitivi ai celor dou enzime (DHPS i DHFR) implicate n sinteza acestora. Astfel, aceti ageni antimicrobieni blocheaz activitatea enzimelor care sunt necesare n sinteza bazelor purinice, pentru biosinteza metioninei, glicinei. Ca urmare, este

Anca Mrculescu

Medicamentul veterinar / Veterinary drug Year 2, o. 1. June 2008

suprimat sinteza proteinelor i a proceselor metabolice necesare n dezvoltarea i multiplicarea microorganismelor. Celulele animale nu i sintetizeaz acidul folic propriu, ele obinndu-l ca vitamin, prin aport exogen. Prin urmare, ele

nu sunt influenate de aceste medicamente, ceea ce determin toxicitatea selectiv a acestor antibiotice pentru bacterii (Mrculescu, Anca 2007). Reprezentarea sistematizat a modului de aciune al antibioticelor este redat n tabelul 1.
Tabel 1.

Table 1
Aciunea antibacterian a antibioticelor (dup Angelescu M., 1998, modificat Mrculescu, 2007) Antibacterial action of antibiotics (from Angelescu M., 1998, modified Mrculescu, 2007) Antibioticul Betalactamine Vancomicin Colistin Vancomicin Aminoglicozide Tetracicline Cloramfenicol Macrolide Lincosamide Rifampina Mecanismul de aciune Aciune asupra peretelui celular Se leag de PBP, enzime din membrana citoplasmatic, inhib sinteza peptidoglicanului Inhib sinteza peptidoglicanului Aciune asupra membranei citoplasmatice Modific bariera osmotic a membranei Inhibare a sintezei proteinelor la nivel ribozomal Se leag la interferena dintre cele 2 uniti ribozomale 30S i 50S Se leag la unitatea 30S Se leag la unitatea 50S Se leag la unitatea 50S Se leag la unitatea 50S Aciune asupra aparatului nuclear Inhib ARN-polimeraza ADN-dependent, blocnd sinteza ARNm, i, secundar, blocnd sinteza proteinelor ribozomale Inhib ADN-giraza, enzim care supraspiraleaz ADN, blocnd diviziunea celular Efect toxic direct asupra ADN Inhib acidul folic i, consecutiv, sinteza ADN Efect antibacterian Bactericid Bactericid Bactericid Bactericid Bacteriostatic Bacteriostatic Bacteriostatic Bacteriostatic Bactericid

Quinolone Metronidazol Sulfonamide

Bactericid Bactericid Bacteriostatic

BIBLIOGRAFIE
1. Angelescu Mircea (1998) Terapia cu antibiotice, Ed. Medical, Bucureti 2. Boothe Dawn (2003) Which antimicrobial should I use? Optimizing antibacterial therapy for small animals using the professional flexible label, Auburn University College of Veterinary Medicine 3. Coman Mioara, Cristina Bota, Carmen POP (2004) Biotehnologii farmaceutice, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj-Napoca 4. Cristina T. Romeo (2007) Mic dictionar biomedical, Editura IMPACTMEDIA, Timioara 5. De Jong A. i Anne Mrner (1999) Prudent use of fluoroquinolones in veterinary medicine, Proceedings of Agriculture's Role in managing Antimicrobial Resistance, Conference Toronto, Canada, 24-26 October, 190 6. Levy B. Stuart (2002) The antibiotic paradox: How the misuse of antibiotics destroys their curative nd powers, 2 Ed. Perseus Publishing, Cambridge, M.A. 7. Matinca Doina (2002) Antibiotice, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj-Napoca. 8. MAYER (2003) Antibiotics - protein synthesis, nucleic acid synthesis and metabolism, Medical Microbiology, MBIM 650/720 lecture 29. 9. Mrculescu Anca (2007) Tez de doctorat: Studiu privind evoluia fenomenului de

antibiorezisten i posibilitatea diminurii acestuia prin asocierea de antibiotice, pe baza relaiilor de sinergism, USAMV, Cluj-Napoca. 10. Montoya Echeverri Flor Angela (2002) Bases farmacologicas. Practicas, Avicultores FENAVI, 92; 11. O'Grady F., P.H. Lambert, G.R. Finch, D. Greenwood (1997) Antibiotic and Chemotherapy: Antiinfective Agents and their Use in Therapy. Seventh Edition, Churchill Livingstone Inc., New York 12. Oniga O., Brndua Tiperciuc (2003) Antibiotice Antibacteriene, Editura Medical Universitar Iuliu Haieganu, Cluj-Napoca 13. Todar Kenneth (2002) Antimicrobial agents used in treatment of infectious disease, Textbook of Bacteriology, Wisconsin-Madison xxx The Merck Veterinary Manual. Ninth Edition 14. (2005), Merck&Co., Inc. Whitehouse Station, N.J., USA.

20