UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS Facultad de Farmacia y Bioqumica

E.A.P. Farmacia y Bioqumica

Departamento Acadmico de Bioqumica

INFORME: Recuento de Plaquetas y Reticulocitos

Mtodo Directo e Indirecto
ALUMNO: ARANGO REYNAGA, Juan Carlos Curso: Anlisis Clnicos Semestre acadmico: 2012-I Profesor: Dr. Juan Parreo Tipian Da de Prctica: Jueves 10.00 -14.00 Hrs.

19 de Abril del 2012

PARTE EXPERIMENTAL
Objetivo de la prctica
Realizar el recuento de plaquetas y reticulocitos.

Reactivos
Reactivo de Rees-Ecker. Sulfato de magnesio 14%. Colorante de Wright. Citrato de cresil.

Materiales y Equipos
Pipeta de THOMA. Retculo de THOMA. Microscopio. Cmara de Neubauer.

Procedimiento de Mtodo Directo de Recuento de Plaquetas

Tomar 0.5L de sangre Completar hasta 101 L con el lquido diluyente (Azul brillante de cresil). Reposar dos minutos y depositar en el retculo de THOMA. Realizar el conteo.

Ecuacin:
Nx D x FC = plaqueta/mm3

N: Nmero de plaquetas contados. D: Ttulo de dilucin realizada (200). FC: Factor de correccin de la profundidad para llevar a 1mm3 (10). N x 10 x 200 = plaquetas/mm3

Procedimiento de Mtodo Indirecto de Recuento de Plaquetas

Agregar una gota de Mg2SO4 en el dedo indicado. Realizar una puncin en el dedo con el Mg2SO4. Mezclar la sangre junto al Mg2SO4 en el dedo. Realizar un frotis. Agregar colorante de Wright. Identificar a los glbulos rojos, leucocitos y plaquetas por las distintas coloraciones resultantes. Realizar el conteo de plaquetas.

N: Nmero de plaquetas contados. H: Hematimetra.

Procedimiento de Mtodo Indirecto de Recuento de Reticulocitos

Realizar una puncin en el dedo indicado Agregar dos gotas de sangre a un tubo de ensayo. Agregar dos gotas de azul brillante de cresillo. Realizar un frotis. Agregar colorante de Wright. Realizar el conteo de reticulocitos.

CUESTIONARIO

1. Fundamento del recuerdo de plaquetas por el mtodo indirecto o mtodo directo. Mtodo Directo (en cmara). Se basa en evaluar la cantidad de plaquetas existentes en la sangre para lo cual se diluye una muestra de sangre con una sustancia con un lquido diluyente (Reactivo de Rees Ecker) que hace a las plaquetas ms visibles para un recuento de plaquetas en una cmara de conteo microscpico (cmara de Neubauer). Mtodo Indirecto. Se fundamenta en la relacin proporcional entre plaquetas y eritrocitos en un extendido de sangre coloreada. Las muestras de sangre obtenidas directamente mediante la puncin de la yema del dedo se diluyen con un liquito anticoagulante que simultneamente tie las plaquetas. Luego se

determina microscpicamente la relacin de plaquetas/eritrocitos y se calcula el nmero de plaquetas a partir del recuento de globulos rojos predeterminado (normal: de 3-8 plaquetas/100 glbulos rojos) Significado clnico. Valor de referencia: 150.000-450.000 plaquetas/mm3. 2. Composicin qumica del reactivo de Rees Ecker Rees Ecker Azul brillante de Cresillo R.A. Sodio Citrato R.A. Formol neutro Agua desmineralizada tipo II 3. En qu casos se produce trombopenia y trombocitosis? Trombopenia, Trombocitopenia o Plaquetopenia. Es la disminucin de plaquetas por debajo de 130 000/mm3. Causas. Disminucion de la trombopoyesis: pancitopenia, anemia mieloctica. Trombopeyesis eficaz: Trombopenias hereditarias, hemoglobiniuria paroxstica nocturna. Dficit de acido flico o vitamina B12. Aumento de la destruccin de las plaquetas: Prpura Trombocitopenia Idioptica, Prpura Trombocitopenia Trombocitopnica, hiperesplenismo, Sepsis bacteriana, Coagulacin intravascular diseminada. Trombocitosis. Aumento de la concentracin de plaquetas por encima de 450 000/mm3. Causas. PRIMARIAS: Trombocitemia esencial u otros sndromes mieloproliferativos. SECUNDARIOS: Esplenectoma, Infecciones que cursan una formacin de depsitos purulentos, Enfermedad de Crohn, Colitis ulcerosa, Neoplasias malignas. Composicin 1 g/L 38 g/L 22 mL 978 mL

4. Cmo se explica el comportamiento de las plaquetas en la Prpura Trombocitopenia

Idioptica?
La Prpura Trombocitopnica Idioptica es una enfermedad hemorrgica autoinmune causada por defecto en el numero de plaquetas circulantes en la sangre (menos de 50 000 mm3). Ocurre en unos 5 casos por cada 100 000 nacidos vivos menores de 15 aos. Su denominacin prpura es debida a los hematomas (equimosis) en la piel caracterstica de la enfermedad, tromboticopenia significa una cantidad de plaquetas por debajo del valor normal, e idioptica porque su etiologa es desconocida.

5. Fundamento del recuento de reticulocitos. Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen restos de rRNA (cido ribonucleico ribosomal). Cuando son sometidos a colorantes llamados supravitales, como el azul de cresilo brillante, ste precipita sobre los restos de rRNA permitiendo observarlo en forma de cuentas de rosario, que los eritrocitos maduros no contienen. Este recuento permite evaluar la actividad eritropoytica de la mdula sea, se hace utilizando tinciones supravitales

6. Mtodos que existen para el recuento de retitulocitos. En los extendidos de sangre preparados con los mtodos de Wirght, de Giemsa o de Romanowsky, un punteado basfilo de los eritrocitos se ve en la intoxicacin con plomo. Este fenmeno no debe confundirse con la tincin del basfilo del reticulocito la cual solo se detecta con procedimientos supravitales (mezcla de colorantes con sangre fresca antes de la preparacin de un extendido de sangre secado al aire). Los filamentos granulares observados o el de la coagulacin endoplasmtica por el efecto de los coloraste lipfilos utilizados en los procedimientos supravitales. Los reticulocitos se cuentan en forma manual media la tincin supravital de sangre fresca con una solucin de colorante anticoagulante. El mtodo de expresin habitual es:

El recuento de reticulocitos corregidos para poder determinar con una mayor precisin clnica el grado de anemia se calcula expresando el porcentaje de reticulocitos por L de sangre total.

Los mtodos de recuento indirectos se basan en la preparacin de una pelcula delgada de la mezcla sangre-colorante en un portaobjeto utilizando la tcnica de Wright como tincin y los reticulocitos se cuentan en proporcin a un recuerto de eritrocidos predeterminado. En los procedimientos directos los reticulocitos se cuantifican en pelculas humedas sintincion. Los colorantes apropiados son el azul brillante de cresilo, el azul de metilo y el verde Jano. Estos mtodos estn sujertos a un alto margen de error en el conteo. El anlisis por citrometra de flujo usando la tincin fluorescente de RNA aumenta significativamente la precisin y la exactitud del recuento de reticulocitos. Sistemas de conteo especficos, como el analizado de reticulocitos Sysmex R-3000 (TOA Medical Instruments), permite evaluar cientos de miles de clulas que duran un ciclo de conteo de 45 segundos y subclasificar los reticulocitos segn la edad.

[Un aumento en el nmero de reticulocitos es un ndice de hematopoyesis acelerada y se observa en la hemorragia aguda o en el tratamiento adecuado de la anemia ferropnica o de la anemia perniciosa. En los casos de prdida de sangre crnica o depresin de la medula sea se observa una disminucin de la cantidad de reticulocitos].

BIBLIOGRAFA
http://www.ihrdiagnostica.com/tecnicas/pdf/ColorantePlaquetasReesEckerv2.pdf http://es.scribd.com/doc/49575164/62/Conteo-plaquetario http://books.google.com.pe/books?id=Av4IIsyHqcC&pg=PA649&dq=recuento+de+plaquetas&hl=es&sa=X&ei=cCeKT9vSNsS3tweX4LnOCQ&ved=0CEIQ6 AEwAzgK#v=onepage&q=recuento%20de%20plaquetas&f=false http://es.scribd.com/doc/44262123/Manual-Hema-Practicas-Lety-Incluidas http://es.scribd.com/doc/82620149/28/RECUENTO-DE-PLAQUETAS-Metodo-directo-en-camara http://es.scribd.com/doc/8551328/RECUENTO-DE-RETICULOCITOS