PUBLICACIN TRIMESTRAL No.

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Procedimientos y tcnicas para la realizacin de estudios coproparasitoscpicos

Estudio coproparasitoscpico. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

INTRODUCCIN
La ciencia de la parasitologa tuvo un gran avance a partir del invento del microscopio y de los descubrimientos de Leevwenhoeck en el siglo XVIII. Las enfermedades parasitarias han producido a travs de los tiempos ms muertes y dao econmico a la humanidad que todas las guerras. Generalmente en los pases con poco desarrollo socioeconmico, las enfermedades causadas por los parsitos se presentan con mayor frecuencia, esto se favorece por las condiciones climticas y por la falta de medidas higinicas en los habitantes.
MVZ. Claudia Sixtos Asesor tcnico Divisin Animales de Compaa Laboratorios Virbac Mxico S.A. de C.V.

...Los parsitos intestinales...

son importantes agentes de enfermedad en animales de compaa.
El impacto de las enfermedades parasitarias en el mundo es muy importante, ya que afectan directamente la salud, la esperanza de vida, y la productividad de millones de personas y animales. Los parsitos intestinales son una causa importante de enfermedades en los animales de compaa y trasmisores de enfermedades zoonticas hacia los dueos de las mascotas. Estos parsitos pueden ser detectados al examinar muestras fecales con las diferentes tcnicas, como son: frotis directo, sedimentacin, flotacin y ELISA fecal. La tcnica de flotacin es la ms utilizada en la prctica clnica en animales de compaa. El control y la prevencin de parasitosis en animales de compaa y seres humanos requiere la adopcin de medidas para prevenir la transmisin entre animales y hacia los seres humanos, as como para reducir la contaminacin ambiental con huevos, quistes y larvas. Las medidas recomendadas por lo general son: Desparasitacin de perros con tratamientos preventivos apropiados. Reduccin del nmero de animales sin dueo, as como de animales de compaa mal cuidados. Prevencin de la defecacin de los animales de compaa en pavimentos o reas pblicas. Fomentar el concepto de responsabilidad de los dueos de animales de compaa. Educar al dueo de mascota sobre el potencial zoontico de los parsitos de perros y gatos. El peligro que para la salud pblica representan las infestaciones de parsitos es poco conocido por los dueos de los animales de compaa, quienes, por consiguiente carecen de nociones sobre las formas de adoptar medidas necesarias para minimizar este riesgo. Los veterinarios deben informar a sus clientes sobre el riesgo zoontico, los ciclos de vida de los parsitos, los modos de transmisin hacia los seres humanos, los riesgos especiales que corren los nios que tienen el hbito de geofagia, as como de los riesgos asociados con los cachorros y las hembras lactantes. El veterinario se encuentra en una posicin clave para controlar los parsitos en los animales de compaa de sus clientes y para aconsejar a los mismos sobre las medidas que pueden tomar para reducir los riesgos.

Saba usted que...?

Publicacin Trimestral de Actualizacin Cientfica y Tecnolgica

No.24 Realizado por VIRBAC MXICO S.A. de C.V. Divisin Animales de Compaa

RECOLECCIN Y ALMACENAMIENTO DE MUESTRAS

Se necesitan de 2 a 5 gr. de heces para la realizacin de estudios coproparasitoscpicos mediante las tcnicas de flotacin. Las heces se pueden obtener por la expulsin natural, teniendo cuidado de que esta no se contamine con larvas o huevos presentes en el medio (la muestra debe tomarse inmediatamente despus de que el perro defeque y tomando nicamente heces de la parte superior y no las que estn en contacto con el suelo). Cada muestra debe rotularse para permitir su identificacin posterior. Otro mtodo de recoleccin es mediante el uso de la cucharilla rectal o bien de un termmetro, en estos casos, un posible resultado negativo no tiene ningn valor diagnstico (debido a que la muestra es muy pequea), sin embargo un resultado positivo puede implicar un alto nivel de parasitismo. Nota: Las muestras fecales diarricas de animales con gran carga parasitaria, pueden contener pocos estadios parasitarios, debido a un efecto de dilucin por un mayor contenido de agua en las heces. La recoleccin de las heces debe hacerse en un recipiente que no contenga aire (puede ser una bolsa de plstico o un envase con tapadera). La muestra debe almacenarse en un lugar fresco y seco, alejada de la luz solar directa. La muestra siempre debe examinarse lo ms pronto posible. Cuando esto no es factible y la muestra requiere ser almacenada por varias horas o incluso por un da, esta se debe refrigerar. Sin embargo los trofozoitos de Giardia y Trichomona, as como algunas larvas, no sobreviven en refrigeracin (cuando se sospecha de estos parsitos la muestra debe ser examinada inmediatamente), pero no afectar a la mayora de huevos y otras fases de otras especies parasitarias.

Algunos medios qumicos permiten la conservacin de las muestras durante un tiempo mayor sin correr el riesgo de que las formas parasitarias se deformen o se destruyan; la solucin ms comn es la Formalina al 10% (se disuelven 10ml de formaldehdo en 90 ml de agua y se guarda en un frasco de plstico o vidrio hermtico, no metlico). Se debe mezclar 3 gr. de heces con 10 ml de formalina al 10%. Las muestras de heces diarricas deben ser examinadas en un plazo no mayor a 1 hora y no deben ser refrigeradas.

NMERO DE MUESTRAS
Para tener un mejor resultado es necesario la realizacin de coproparasitoscpicos seriados. Lo ptimo es la toma de 3 muestras (mnimo) en das alternos, esto se debe a la eliminacin irregular de huevos, ya que las hembras de los parsitos no ovopositan diariamente, por lo tanto la toma y examen de una sola muestra no tiene un 100% de exactitud.

MUESTRAS INADECUADAS
Resultan inadecuadas para el examen todas aquellas muestras que: Se han mantenido por ms de 24 hrs a temperatura ambiente. Han sido obtenidas despus de un estudio radiogrfico en el que se utiliz sulfato de bario. Fueron obtenidas con la posibilidad de contaminacin (tomadas directamente del suelo, parques o jardines).

Saba usted que...?

...El veterinario es pieza clave

en el control de parsitos en animales de compaa, y la reduccin de riesgo para los seres humanos.

TCNICAS COPROPARASITOSCPICAS
Examen macroscpico
Despus de recolectar las muestras fecales es muy importante observar su consistencia, color, olor, la presencia de sangre o de moco, entre otros factores, siempre en relacin con una buena anamnesis para evitar errores.

Examen microscpico
Al realizar el estudio de una laminilla con un frotis directo de heces, una flotacin, o un extendido de sangre, es conveniente hacerlo a profundidad para obtener un diagnstico confiable. Una laminilla fecal preparada es tridimensional: tiene largo, ancho y profundidad. Los parsitos ms pequeos como Giardia o coccidias pequeas, se encontraran en la primera capa. La siguiente capa hacia abajo contendr los huevos grandes (gusanos redondos, gusanos planos) ooquistes y larvas en caso de estar presentes. Se debe examinar el portaobjetos completo con el objetivo de 10X, los parsitos pequeos u otros objetos deben examinarse en el objetivo de 40X. Nunca se debe utilizar el objetivo 100X para observar las laminillas de flotacin fecal.

Cucharilla Rectal. Cortesa MVZ Carlos Lorenzana / Virbac

MTODOS DIRECTOS
El examen directo es el ms antiguo que se conoce por los datos histricos que se tienen en relacin a los primeros microscopios, Antonio Van Leevwenhoek en el siglo XVIII, fue de los primeros en utilizarlo, al encontrar y observar en sus propias heces trofozoitos de Giardia lamblia.
Toma de muestra fecal, evitando la contaminacin ambiental. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

Frotis directo de heces

El mtodo tiene entre sus caractersticas, la sencillez y rapidez para llevarlo a cabo, adems de lo econmico que resulta realizarlo, pues no requiere mucho material. Este mtodo es muy utilizado para el diagnstico de los protozoarios intestinales. En la prctica ha demostrado su eficacia cuando se utiliza lugol, para la bsqueda e identificacin de quistes, huevos y larvas, aunque en la prctica veterinaria se utilizan para el diagnstico de estos ltimos las tcnicas, de flotacin y sedimentacin. Este mtodo tiene una fuerte limitante: la muestra utilizada es tan pequea, que es poco representativa.

Mtodo de Graban (tcnica de la cinta scotch)

Es un mtodo cualitativo y muy til para el diagnstico de Dipylidium caninum. Consiste en la utilizacin de una cinta engomada trasparente, que se coloca alrededor del ano y de la zona perineal.

Procedimiento:
Se corta un trozo de cinta de aproximadamente 5-6 cm, se impregna de material presente de las zonas mencionadas y finalmente se adhiere a un portaobjetos y se observa al microscopio con el objetivo de 10X. Se puede utilizar una gota de lugol, este se coloca levantando un extremo de la cinta, despus se fija nuevamente a la laminilla. De esta manera se aclara la muestra y se obtiene un efecto de contraste con los huevos.

Procedimiento:
1. En un portaobjetos se colocan, por separado (en cada extremo), una gota de solucin salina fisiolgica y otra de lugol. 2. Con uno o dos aplicadores de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solucin salina, haciendo una suspensin homognea. 3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos. 4. Se coloca el cubreobjetos. 5. Se efecta la misma operacin en la gota de lugol. 6. Se observa al microscopio.

Mtodo de Graban. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

Frotis directo de heces. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

Mtodo de Graban. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

Frotis directo de heces. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

Mtodo de Graban. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

Saba usted que...?

al realizar un estudio coproparasitoscpico con mtodos de flotacin fecal, es necesario utilizar la solucin correcta.

...Para obtener un resultado preciso

MTODOS DE FLOTACIN
Los mtodos de flotacin fecal se utilizan para separar los parsitos en todos sus estadios (huevos, ooquistes, quistes, larvas) de otros objetos, basados en sus diferentes densidades. La densidad es el peso de un parsito u otro objeto por unidad de volumen, se expresa en forma de gravedad especfica. Para obtener un resultado preciso al realizar una flotacin fecal, es necesario utilizar la solucin correcta. La densidad (gravedad especfica) de las diferentes soluciones est determinada por la cantidad de sal o azcar que contienen. La densidad de la mayora de las soluciones est entre 1.18 y 1.20; y la densidad de la mayora de los parsitos comunes del perro es menor a 1.18.

Calentar mezclando continuamente hasta disolver la sal evitando la ebullicin. Procedimiento: 1. Separar de la muestra 2-5 gr. de heces en un recipiente (mortero, taza). 2. Agregar 15 ml de solucin salina saturada. 3. Disolver muy bien las heces con una cucharilla o un abate lenguas. Hasta que quede una pasta uniforme. 4. Pasar la mezcla por un colador en un recipiente limpio. 5. Llenar un tubo de ensayo con el lquido filtrado hasta el borde dejando un menisco convexo. 6. Eliminar con un palillo las burbujas o sustancias que flotan. 7. Colocar un cubreobjetos y esperar 15-30 min como mximo. Si se pasa de este tiempo, los huevos colapsan o se rompen debido a la accin osmtica. 8. Retirar cuidadosamente el cubreobjetos y colocarlo sobre un portaobjetos. 9. Observar al microscopio con el objetivo de 10X. El mtodo de flotacin con solucin salina debe realizarse como se describi anteriormente, el uso de solucin salina fisiolgica no sirve para sta tcnica ya que no tiene la densidad requerida. La solucin presenta como defecto una cristalizacin rpida, debido a la evaporacin de la solucin.

Solucin salina saturada (Koffoyd y Barber)

Este mtodo cualitativo es muy comn en la prctica diagnstica veterinaria, da muy buenos resultados, es fcil de preparar y se conserva por largo tiempo. Este mtodo es muy til para la identificacin de protozoarios, nematodos y algunos cestodos, tomar en cuenta que en esta solucin no flotan algunos huevos como los de Dipylidium y Taenia solium. Preparacin de la solucin salina saturada: Cloruro de sodio (Na Cl)...........331 gr. Agua corriente.............................1 lt. 6

Solucin sacarosa
Esta solucin se recomienda para el diagnstico de helmintos y no es recomendable para el diagnstico de Giardia. Preparacin de la solucin sacarosa: Azcar..............................456 gr. Agua destilada..................355 ml Fenol o Formol 10%.......... 6ml

Calentar mezclando continuamente hasta disolver el azcar evitando la ebullicin, agregar el fenol (o formol 10%) como conservador. Procedimiento: 1. Mezclar 2-5 gr. de heces en 15 ml de solucin sacarosa.

4.Colocar en un tubo de ensayo con el lquido filtrado.

Tcnica de flotacin con solucin. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

5.Centrifugar a 1500 rpm durante 10 min.

Tcnica de flotacin con solucin. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

2. Disolver muy bien las heces con una cucharilla o un abate lenguas. Hasta que quede una pasta uniforme.

Tcnica de flotacin con solucin. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

6.Colocar el tubo de ensayo en una rejilla y agregar ms solucin sacarosa hasta el borde dejando un menisco convexo.

Tcnica de flotacin con solucin. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

3. Pasar la mezcla por un colador en un recipiente limpio.

Tcnica de flotacin con solucin. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

7.Eliminar con un palillo las burbujas u objetos flotantes. 8.Colocar un cubreobjetos y esperar 10-20 min.

Tcnica de flotacin con solucin. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

Tcnica de flotacin con solucin. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

Saba usted que...?

...La tcnica de Faust tiene la gran ventaja de eliminar la mayora de residuos orgnicos.
9. Retirar cuidadosamente el cubreobjetos y colocarlo sobre u portaobjetos. 10. Observar al microscopio para detectar los parsitos.

Tcnica de Faust
La tcnica de Faust, muestra una buena concentracin de quistes de protozoarios, as como huevos y larvas de helmintos. Esta tcnica tiene una gran ventaja, las formas parasitarias se encuentran con facilidad, debido a que se eliminan la gran mayora de residuos y material orgnico que es tan comn en las heces de los carnvoros. Su limitante es que es poco eficaz para huevos pesados como los de Taenia spp. Procedimiento: 1. Mezclar bien una porcin de materia fecal para preparar una suspensin homognea con 1 a 2 g de materia fecal en 10 ml de agua destilada. 2. Filtrar la suspensin a travs de un colador o una gasa doblada en cuatro, en un recipiente limpio. 3. Colocar en un tubo de ensayo la mezcla filtrada 4. Centrifugar el filtrado a 1500 rpm por 3 min. 5. Decantar el lquido sobrenadante (dejando solo el sedimento) y volver completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. 6. Resuspender el sedimento. 7. Repetir el procedimiento 3-5 veces hasta que el lquido sobrenadante est limpio. 8. Decantar nuevamente el lquido sobrenadante reemplazndolo por igual cantidad de solucin de sulfato de Zinc al 33%. Mezclar bien la solucin con el sedimento. Centrifugar durante 3 minuto a 1500 rpm. 9. Colocar el tubo de ensayo en una rejilla y agregar ms solucin de sulfato de zinc al 33% hasta el borde dejando un menisco convexo. 10. Colocar un cubreobjetos y esperar 10-20 min. mezclar 1-2 gotas de lugol, colocar en una laminilla. 11. Observa en el microscopio.

Tcnica de flotacin con solucin. Cortesa MVZ Claudia Sixtos / Virbac

Solucin con sulfato de zinc

En esta tcnica solo se obtienen resultados cualitativos. Es recomendable para la identificacin de quistes de protozoarios los cuales no sufren alteraciones en sus estructuras. Preparacin de la solucin de sulfato de zinc al 33% Sulfato de zinc (ZnSO4)....................331 gr. Agua............................................... 1 lt. Procedimiento: 1. Mezclar 1-2 gr. de heces frescas con 15 ml de solucin de sulfato de zinc al 33% en un recipiente (mortero, taza). 2. Disolver muy bien las heces con una cucharilla o un abate lenguas. Hasta que quede una pasta uniforme. 3. Pasar la mezcla por un colador en un recipiente limpio. 4. Llenar un tubo de ensayo con el lquido filtrado hasta el borde dejando un menisco convexo. 5. Eliminar con un palillo las burbujas o sustancias que flotan. 6. Colocar un cubreobjetos y esperar alrededor de 10 min. 7. Retirar cuidadosamente el cubreobjetos y colocarlo sobre una laminilla 8. Observar al microscopio con el objetivo 20X. 8

Mtodo de Mc Master
Esta tcnica es utilizada para determinar el nmero de huevos por gramo de heces y tambin se utiliza para de larvas de nematodos y ooquistes de coccidias. Procedimiento: 1. Pesar 3 gr. de heces. 2. Colocarlas en un tubo de ensayo. 3. Agregar 28 ml de solucin sacarosa. 4. Agitar fuertemente hasta homogenizarla. 5. Pasar la solucin por un colador o cedazo (exprimir el sedimento). 6. Completar el tubo con la misma solucin sacarosa. 7. Agitar nuevamente y tomar con un gotero o pipeta parte de la solucin. 8. Humedecer con agua corriente la cmara de MacMaster para evitar la presencia de burbujas, y llenarla con la solucin. 9. Esperar unos minutos para que se nivelen por completo los huevos, ooquistes y/o larvas. 10. Observar al microscopio y hacer el conteo separando por gneros parasitarios, de las reas demarcadas en la cmara. 11. Contar mnimo dos cmaras. Clculo de recuento: Huevo por gramo= Recuento total x 100 No. De cmaras Cada cmara presenta 0.15 cm de profundidad por 1 cm2 (se examina o 15 cm cbicos). Por lo tanto los 30ml de la suspensin total (2 gr. de heces y 28 ml de solucin sacarosa) tendrn 200 cmaras pero, como se requiere solamente el nmero total de huevos por gr., se multiplica por 100 cmaras.

CONCLUSIN

Los exmenes coproparasitoscpicos nos permiten el hallazgo e identificacin de huevos, larvas, quistes de los parsitos as como de sus formas adultas. Aunque existe una serie de tcnicas para su diagnstico, es preciso recordar que cada especie de parsito, o cada grupo necesita una determinada modalidad, por lo que es recomendable realizar una historia clnica previa. Los datos necesarios para un estudio coproparasitoscpico son: - Procedencia del paciente. - Sistema de cra. - Signos que presenta el paciente (y/o animales que conviven con l). - Resultados de otros anlisis (p.ej. hemograma, en caso de haberlos realizado). - Tratamientos a los que ha sido sometido. - Otros estudios realizados. (p. ej. Radiografas con medio de contraste). Es preciso tener en cuenta que un examen coproparasitoscpico negativo carece de valor predictivo, por muchas razones. El anlisis puede ser negativo, sin embargo, el paciente puede estar parasitado. Es por esto, que es conveniente recordar que son precisos al menos tres exmenes coproparasitoscpicos sobre muestras obtenidas en das alternos para descartar la presencia de parsitos intestinales patentes. La coprologa solo es til para los parsitos patentes que son eliminados en las heces en cualquiera de sus formas (huevos, larvas, adultos, quistes, etc). Solo es posible el diagnstico en la fase patente de la infeccin parasitaria; el periodo prepatente, sea o no sintomtico y el pospatente, son negativos.
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Es importante recordar que algunas veces es conveniente la preparacin del paciente antes de realizar el estudio coproparasitoscpico. Por ejemplo: En caso de que las heces sean demasiado compactas puede aplicarse un laxante suave; es recomendable eliminar dietas altas en componentes indigestibles como fibra excesiva o huesos, as como contrastes radiolgicos. La realizacin de estudios coproparasitoscpicos deberan realizarse en la clnica diaria ya que son sencillos y econmicos de realizar, a dems nos ayudan a conocer los tipos de parsitos prevalentes en nuestra regin, y de esta manera establecer adecuados programas de desparasitacin.

BIBLIOGRAFA -Dryden MW. Payne, Ridley R, et al. Comparison of common fecal flotation techniques for the recovery of parasite eggs and oocysts. Vet Ther 2005 -Payne PA, Dryden MW. Accurate evatuation of fecal samples critical to patient. DVM Best Practices. 2005 -David ED, Linquist WD. Determination of the specific gravity of certain helminth eggs using sucrose density gradient centrigugation. J Parasitol 1982 -Vlez, R.A. Guas en Parasitologa Veterinaria. Exitodinmica Editores. Medelln Colombia. 1983 -Quiroz, R. H. Parasitologa y enfermedades parasitarias de animales domsticos. Editorial Limusa. 1984 -Kirkpatrick C.E., Feline Giardiasis: a review, J. Sm. Anim., Vol. 27, 69-80, (1986). -Mehlhor, H y piekarski, G. Fundamentos de parasitologa: Parsitos del hombre y de los animales domsticos. Acribia, Zaragoza. 1993 -M. Cordero del Campillo, F. A. Rojo Vazquez. Parasitologa Veterinaria. Espaa. Interamaricana McGraw-Hill. 1999

GUA PRCTICA DE LOS PARSITOS DEL PERRO

Huevo de Ancylostoma caninum.

Cortesa Lab. Virbac

Huevo de Capilaria spp.

Cortesa Lab. Virbac

Cortesa Lab. Virbac

Quiste de Giardia.

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Publicacin Trimestral de Actualizacin Cientfica y Tecnolgica para Mdicos Veterinarios.

Resultados profesionales.

Contenido Neto: Dos presentaciones: -Blister con dos tabletas. -Cajas expendedoras con 12 blisters de 2 tabletas cada uno. USO VETERINARIO Endoparasiticida de amplio espectro para perros con accin contra nematodos, cestodos, microfilarias y giardias. Frmula: Cada tableta contiene:

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