Microbiologa Mtodos de diagnstico para Staphylococcus aureus 1.

- Prueba de la catalasa Fundamento Comprueba la presencia de la enzima catalasa que se encuentra en la mayor parte de las bacterias aerobias y anaerobias facultativas que contienen citocromo. La catalasa funciona para catalizar la destruccin de perxido de hidrgeno en oxgeno y agua, y es de utilidad para evitar la formacin de radicales txicos formados por el sistema de la mieloperoxiasa en las clulas fagocticas.17 La catalasa constituye un blanco para pruebas de identificacin bioqumica (vase ms adelante). Procedimiento La prueba se realiza agregando una gota de perxido de hidrgeno (3% vol.) sobre la muestra en un portaobjetos de vidrio Imagen de control positivo y negativo

2.- Coagulasa Fundamento Permite comprobar la facultad de un organismo de coagular el plasma por accin de la enzima coagulasa. Coagulasa es un activador de protrombina3 presente en la mayora de las cepas de S. aureus, tambin conocida como factor de agregacin y constituye una prueba muy sensible y especfica para esta bacteria.

Procedimiento Mtodo en tubo que contenga plasma citratado u oxalatado (anti coagulado) congelado, no preservado, entre 0,5 a 1 ml, se aade 0,5 o 1ml de una suspensin del cultivo aislado, mezclar suavemente por inversin, no agitar Incubar al bao mara a 35Cy leer cada 30 min por 2 a 4 horas Interpretacin de resultados

Es positivo para Staphylococcus aureus 3.- Prueba de la oxidasa Fundamento La prueba se basa en que evidenciar la reaccin de xido-reduccin. Staphylococcus aureus, y la mayora de las especies del mismo gnero son oxidasa-positivos. Tambin son oxidasa positivos las bacterias del gnero Neisseria y la mayora se las enterobacterias Procedimiento Se usan discos de papel filtro con tetrametil-p-fenilendiamina como reactivo y dimetilsulfxido para hacer permeables a las bacterias al reactivo Interpretacin de resultados Se torna violeta a los 30 segundos cuando es positiva

4.- Prueba de la DNAsa Fundamento El agar DNasa contiene DNA, y se utiliza para detectar la presencia de desoxirribonucleasa en bacterias Procedimiento Incubar las placas durante 18 24 h en atmsfera aerobia a 35 37 C. Si se analizan cepas de otras especies bacterianas u hongos, incubar segn sus requisitos. Despus de la incubacin, inundar las placas con suficiente cido clorhdrico 1 N (HCl). Dejar que el cido penetre en toda la superficie del medio durante 2 min. Interpretacin de los resultados Despus de la aplicacin y penetracin del cido clorhdrico en el medio, los organismos positivos a la DNasa, tal como Staphylococcus aureus o Serratia marcescens estarn rodeados de zonas transparentes de ADN despolimerizado S. aureus producir una lisis del DNA presente en la placa si posee este enzima, con el consiguiente aclaramiento del medio.

5.- Prueba del manitol salado Fundamento Capacidad que posee Staphylococcus aureus, para fermentar el manitol, degradndolo hasta cido, sin produccin de gas, induciendo a un viraje de color por cambio en el pH del indicador (rojo fenol). Procedimiento Cultivar Staphylococcus aureus en una solucin de NaCl 7,5% ya que estos microorganismos son osmotolerantes u osmfilos pueden multiplicarse en l. Manitol es el nico azcar fermentado por las cepas patgenas de este gnero bacteriano. Interpretacin de resultados

Para Neisseria gonorrhoeae 1.- Prueba de la oxidasa Fundamento La prueba se basa en que evidenciar la reaccin de xido-reduccin. Neisseria gonorrhoeae, y la mayora de las especies del mismo gnero son oxidasa-positivos. Tambin son oxidasa positivos las bacterias del gnero Staphylococcus y la mayora se las enterobacterias

Procedimiento Se usan discos de papel filtro con tetrametil-p-fenilendiamina como reactivo y dimetilsulfxido para hacer permeables a las bacterias al reactivo Interpretacin de resultados Se torna violeta a los 30 segundos cuando es positiva