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CENTRO UNIVERSITRIO NOSSA SENHORA DO PATROCNIO

FACULDADE DE SADE E CINCIAS DA VIDA


CURSO DE FARMCIA

Edilaine Rodrigues Martins Nayara Macedo Tathiana da Cunha Castro Moreira

LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS: SETORES DE IMUNOLOGIA E MICROBIOLOGIA

Itu/SP 2012
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Edilaine Rodrigues Martin Nayara Macedo Tathiana da Cunha Castro Moreira

LABORATRIO DE ANLISES CLNICAS: SETORES DE IMUNOLOGIA E MICROBIOLOGIA

Trabalho apresentado como exigncia parcial para obteno de nota no Programa de Estgio em Anlises Clnicas na Graduao em Farmcia, do Centro Universitrio Nossa Senhora do Patrocnio.

Orientadora: Prof. Dra. Maria Aparecida Marczynski

Itu/SP 2012
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LISTA DE FIGURAS

Figura 1............................................................................................................................12 Figura 2............................................................................................................................12 Figura 3............................................................................................................................13 Figura 4............................................................................................................................13 Figura 5 ...........................................................................................................................14 Figura 6 ...........................................................................................................................14

SUMRIO
1 INTRODUO..........................................................................................................04 2 EXAMES LABORATORIAIS ................................................................................07 2.1 Setor de Microbiologia............................................................................................07 2.2 Setor de Imunobiologia ..........................................................................................08 3 EQUIPAMENTOS DE USO DO LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA .............................................................................................................12 3.1 Capela de fluxo laminar..........................................................................................12 3.2 Autoclaves.................................................................................................................12 3.3 Estufa de cultura......................................................................................................12 3.4 pHmetro....................................................................................................................13 3.5 Espectrofotmetro...................................................................................................13 3.6 Microscpio ptico...................................................................................................14 3.7 Centrfugas...............................................................................................................14 3.8 Agitador vortex........................................................................................................15 4 CONSIDERAES FINAIS.....................................................................................15 REFERNCIAS.............................................................................................................16

1 INTRODUO A cincia envolvida no diagnstico laboratorial, chamada atualmente de Anlises Clnicas, evoluiu muito desde as observaes empricas de Hipcrates (na era antes de Cristo) at os dias de hoje, em que equipamentos cada vez mais avanados e tcnicas de alta sofisticao permitem um diagnstico laboratorial mais preciso para inmeras doenas. Entretanto, por mais confivel que sejam os resultados dos exames laboratoriais, estes devem sempre ser interpretados luz dos achados clnicos (histrico,sinais, sintomas...).10 Nos casos onde existir incoerncias entre os resultados esperados e os resultados encontrados deve-se procurar uma explicao plausvel, sendo que vrias hipteses podem ser levantadas, tais como: interferncia no ensaio (medicamentosa); problemas de coleta (hemlise, perodo de jejum inadequado...); erros de identificao do paciente; variveis no-analticas (exerccio fsico intenso antes da coleta); falha na calibrao de equipamentos; equvocos na transcrio de resultados, entre outros.10 Embora o avano tecnolgico tenha trazido um benefcio significativo para a rea laboratorial, importante observar que o correto acompanhamento da execuo do exame, nas fases pr-analtica, analtica e ps-analtica deve ser responsabilidade de um profissional de nvel superior. Embora diversos profissionais atuem neste segmento, geralmente os exames so realizados por farmacuticos bioqumicos, que possuem uma equipe de tcnicos e auxiliares de laboratrios para apoi-los na execuo de etapas mais simples dos exames (exemplo coleta, centrifugao e preparo das amostras para anlise), auxiliares administrativos (recepo, cadastro de pacientes/amostras, digitao de resultados, atendimento telefnico) e auxiliares de higiene (limpeza e higienizao do edifcio, de materiais e de equipamentos).10 A Microbiologia um dos setores mais complexos do LAC, Laboratrio de Anlises Clnicas, e tem como principal papel a determinao de agentes etiolgicos envolvidos nos processos infecciosos e sua susceptibilidade aos antibiticos.10 Bacterioscopia Uma importante ferramenta diagnostica so os exames e testes presuntivos, tais como bacterioscopias e reaes sorolgicas.10 A microscopia pela colorao de Gram a melhor metodologia para o diagnstico presuntivo de diversos processos infecciosos. Essa colorao permite que o Laboratrio
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informe ao clnico, em um curto espao de tempo, qual o possvel grupo de microrganismo [coco ou bacilo; gram positivo ou negativo) envolvido na infeco, permitindo ao mdico iniciar um tratamento emprico mais efetivo e direcionado. Alm disso, a bacterioscopia pode auxiliar no estabelecimento da qualidade da amostra biolgica, pois quanto mais leuccitos polimorfonucleares e menos clulas do epitlio descamativo, mais representativa ser a amostra coletada.10 Amostras mal coletadas podero conter microrganismos contaminantes

(geralmente so de crescimento rpido e podero suprimir o desenvolvimento "in vitro" do patgeno), oriundos da superfcie da leso e/ou de tecido adjacente), podendo induzir o mdico a instituir um tratamento tambm inapropriado, ou seja, a antibioticoterapia visando eliminao de um contaminante/colonizador daquela amostra.10 Cultura O laboratrio recebe a amostra coletada e transportada de maneira correia e a transfere (semeia) para meios de cultura que contm todos os nutrientes necessrios para o desenvolvimento dos microrganismos comumente isolados daquela amostra. Uma vez isolado o microrganismo, o microbiologista avalia se aquele isolado tem valor clnico ou no. Este processo requer muita experincia do profissional responsvel, pois ele ter que analisar diversos parmetros antes de definir se a bactria em questo pode ou no estar envolvida no processo infeccioso.10 Entre os parmetros analisados citam-se: nmero de diferentes espcies isoladas: quanto mais espcies maior a probabilidade de contaminao; quantidade de colnias de uma mesma espcie: quanto maior o nmero de colnias, mais provvel que o microrganismo isolado esteja realmente causando a infeco; suspeita clnica: importante que o mdico indique na requisio da cultura qual a sua suspeita e o microbiologista deve realizar contato com o clnico solicitante, quando houver dvidas; provvel patgeno: os diferentes grupos de microrganismos esto mais associados a certos tipos de infeco [por exemplo: gram negativos e infeco urinria).10 Antibiograma Uma vez definido que o microrganismo pode ser patognico, o microbiologista determina o gnero e espcie ao qual a bactria pertence. O prximo passo a verificao dos antibiticos que agem sobre o microrganismo isolado. Com estas

informaes pode-se instituir uma antibioticoterapia adequada ou, se o tratamento j estiver em vigncia, rever o protocolo e realizar as devidas mudanas, caso necessrio. Alm de realizar os exames, o setor de Microbiologia do LAC um grande produtor de dados epidemiolgicos para o hospital, devendo estes dados serem discutidos com o corpo clnico e com a CCIH. A anlise destes dados possibilitar uma antibioticoterapia emprica mais adequada, um melhor conhecimento da microbiota do hospital e das diversas unidades e, portanto, um melhor controle e preveno das doenas infecciosas em geral.10 O sistema imunolgico tem como principal funo reconhecer uma substncia estranha (antgeno) ao organismo e produzir uma resposta contra ela (anticorpos).10 No setor de Imunologia por meio do sangue dos pacientes pesquisa-se uma grande diversidade de diferentes anticorpos produzidos contra vrus, bactrias, fungos, protozorios e outras estruturas estranhas ao organismo.10 O Setor de Imunologia pode ser dividido em: Sorologia As principais doenas onde so pesquisados os respectivos antgenos causadores so algumas hepatites e a pesquisa de certos antgenos utilizados como marcadores tumorais, mas na maioria das vezes so pesquisados os anticorpos produzidos contra estes antgenos, como nas seguintes doenas: AIDS, hepatites, rubola, toxoplasmose, citomegalovrus, mononucleose, chagas, doenas congnitas ou causadas por parasitas, doenas autoimunes (lpus eritematoso sistmico, artrite reumatide, etc.) e outras. 10 Anlises hormonais Dosagens de hormnios diversos (hipofisrios, tireoidianos, supra-renais e gonadais) para diagnstico e controle teraputico de diversas doenas endcrinas, utilizando-se imunoensaios, os quais empregam antgenos e anticorpos para aumentar a sensibilidade e a especificidade da reao qumica.10 As anlises so mais comumente realizadas em soro obtido por coleta de puno venosa arterial ou capilar. Por se tratar de pesquisa indireta, vale salientar que muitos resultados positivos para anticorpos presentes no sangue do paciente no podem ser considerados como diagnstico de doena. Muitas vezes necessrio que haja antes uma repetio do exame utilizando-se de metodologias diferentes ou at mesmo tcnicas de Biologia Molecular para elucidar os casos mais duvidosos ou com maior influncia de interferentes analticos. Esta uma das grandes dificuldades encontradas

no Setor de Imunologia no momento de interpretao e liberao dos resultados dos exames, visto que, na maioria das tcnicas, considera-se um valor de corte para a leitura tica obtida (cut-off) o qual determina se a amostra positiva (reagente) ou no. A regio de resultados prximos do cut-off conhecida como zona cinza (um intervalo de mais ou menos 20% do valor determinado como ponto de corte). Nesta faixa, os resultados obtidos so considerados inconclusivos. Nestes casos de grande importncia a troca de informaes entre o mdico do paciente e o laboratrio para melhor interpretao dos resultados.10 2 EXAMES LABORATORIAIS O setor de Microbiologia dentro do Laboratrio de Anlises Clnicas desempenha um papel fundamental. Dentre eles podemos citar: auxlio ao diagnstico e cura de infeces; deteco de surtos; suporte ao sucesso do programa de controle de infeco hospitalar dentro de uma instituio; fornecimento de informaes ao servio de vigilncia epidemiolgica.6 Dentre as atribuies do laboratrio de Microbiologia Clnica podemos mencionar os principais: - isolamento e identificao de microrganismo envolvido em um processo infeccioso; - determinao do perfil de sensibilidade aos antimicrobianos para uso racional dos antibiticos; - vigilncia de microrganismos considerados "problema" (resistentes a vrios ou at mesmo a todos os antibiticos) dentro de uma Instituio; - fornecimento de dados epidemiolgicos dos diferentes agentes etiolgicos de infeco hospitalar e perfil de sensibilidade. - suporte microbiolgico na investigao de surto.6 O setor de imunologia realiza as anlises laboratoriais para diagnstico, controle e avaliao de doenas infecto-contagiosas das mais variadas etiologias: rubola, toxoplasmose, citomegalovirus, hepatites A, B, C e D, HIV, HCV, HTLV, chagas, etc.6 2.1 Setor de Microbiologia Os principais testes realizados no setor de Microbiologia so:
Tabela 1: Principais exames laboratoriais microbiolgicos ANTIBIOGRAMA AUTOVACINA (VACINA AUTGENA) BACTERIOSCOPIA PARA PESQUISA DIRETA DOS B.A.A.R. BACTERIOSCOPIA em GERAL (SECREES em geral, SEDIMENTO URINRIO, LESES, etc.)

BACTERIOSCOPIA de SECREO VAGINAL + PESQUISA de Trichomonas e LEVEDURAS CULTURA DE BK (Mycobacterium sp) CULTURA DE FEZES = COPROCULTURA CULTURA DE SECREES EM GERAL CULTURA DE URINA COM CONTAGEM DE COLNIAS = UROCULTURA CULTURA DE SECREES GENITAIS (c/ PESQUISA de Gardnerella vaginalis) HEMOCULTURA p/ ISOLAMENTO DE BACTRIAS AERBICAS HEMOCULTURA p/ ISOLAMENTO DE BACTRIAS ANAERBICAS IDENTIFICAO DE BACTRIA ISOLADA * PESQUISA DE Chlamydia sp PESQUISA DE Campylobacter sp * PESQUISA DE MICOPLASMAS COM CONTAGEM DE COLNIAS * SENSIBILIDADE DE MICOPLASMAS A ANTIBITICOS * PESQUISA DE ROTAVRUS PESQUISA DE TREPONEMA EM CAMPO ESCURO PESQUISA DE Yersinia enterocoltica Disponvel em: <http://www.fcf.usp.br/Departamentos/FBC/en/lac.asp>

2.2 Setor de Imunologia Os principais testes imunolgicos analisados em laboratrio so:


Tabela 2:Exames laboratoriais imunolgicos ADENOVIRUS, RFC ALERGENOS - PERFIL ANTIGNICO (PAINEL C/ 36 ANTGENOS) AMEBASE, (RFC OU IFI OU HA) ANTI CARDIOLIPINA - ELISA - IgG ANTI CARDIOLIPINA - ELISA - IgM ANTI CENTRMERO ANTI CRTEX SUPRARENAL, IFI ANTI GLIADINA (GLUTEN), ELISA - IgG E IgA (CADA) ANTI HIALURONIDASE, DETERMINAO DA ANTI ILHOTA LANGHERANS, IFI ANTI INSULINA ANTI LKM-1, IFI PARA ANTI-ACTINA, IFI ANTI-DESOXIRIBONUCLEASE B, NEUTRALIZAO QUANTITATIVA ANTI-DMP ANTI-DNA - ELISA ANTI-DNA - IFI OU HA ANTI-ENA (Sm E RNP), HA QUANTITATIVA ANTI-ESCLERODERMA (SCL 70) - IMUNODIFUSO (Idi) DUPLA ANTI-ESCLERODERMA (SCL 70) ELISA ANTI-FIGADO (GLOMRULO, TUB. RENAL, CORTE RIM DE RATO), IFI ANTI-Sm ANTI PARIETAL, IFI ANTI PEROXIDASE TIREOIDEANA ANTI-HIV1 OU HI2, ELISA ANTI-JO1 ELISA ANTI-JO1 - IMUNODIFUSO (Idi) DUPLA ANTI-LA/SSB - ELISA ANTI-LA/SSB - IMUNODIFUSO (Idi) DUPLA ANTI-MEMBRANA BASAL, IFI (RIM HUMANO) ANTI-MICROSSOMAL (TIREOIDIANO) ANTI-MITOCONDRIA (M2) ELISA ANTI-MITOCONDRIA - IFI ANTI-MSCULO CARDACO, IFI ANTI-MSCULO ESTRADO, IFI

ANTI-MSCULO LISO,IFI ANTI-NEUTRFILOS (ANCA) I.F. ANTI-RNP - ELISA ANTI-RNP - IMUNODIFUSO (Idi) DUPLA ANTI-Ro/SSA - ELISA ANTI-Ro/SSA - IMUNODIFUSO (Idi) DUPLA ANTI-TIREOGLOBULINA ANTICORPOS NATURAIS - ISOAGLUTININAS, TITULAGEM ANTICORPOS NATURAIS - ISOAGLUTININAS, PESQUISA ANTGENOS METLICOS SOLVEIS DO BCG (1 APLICAO) ASLO - HEMLISE OU LTEX ASLO - TURBIDIMETRIA OU NEFELOMETRIA ASPERGILUS - RFC, Idi DUPLA OU CIE (CADA) BETA-2 MICROGLOBULINA BLASTOMICOSE, RFC, Idi DUPLA OU CIE (CADA) BRUCELA - PROVA RPIDA BRUCELA - PROVA TUBO C1q, IDiR C2, IDiR C3A (FATOR B), IDiR CA- 125 CA- 19/9 CA - 72/4 CA 50 CA- 15/3 CA-242 CANDIDASE, RFC, Idi DUPLA OU CIE (CADA) CAXUMBA, ELISA CAXUMBA,RFC CEA - ANTGENO CARCINOEMBRIOGNICO CHAGAS - ELISA TOTAL CHAGAS - IFI - IgG CHAGAS - IFI - IgM CHAGAS,RFC (MACHADO GUERREIRO) CHAGAS-HA CHLAMYDIA - IFI - (IgG E IgM) CADA CISTICERCOSE - ELISA CISTICERCOSE - HA CISTICERCOSE - IDeR CISTICERCOSE - IF CITOMEGALOVIRUS - IgG - ELISA CITOMEGALOVIRUS - IgG - IFI CITOMEGALOVIRUS - IgM - ELISA CITOMEGALOVIRUS - IgM IFI CITOMEGALOVIRUS - PCR ..... ( - ) CLOSTRIDIUM DIFFICILE, TOXINA A - ELISA COMPLEMENTO C3,C4 - TURBID. OU NEFELOMTRICO (CADA) COMPLEMENTO C3, IDiR COMPLEMENTO C4, IDiR COMPLEMENTO CH-50 DOSAGEM CRIO-AGLUTININA,-GLOBULINA,-FIBRINOGNIO, DOSAGEM (CADA) CRIO-AGLUTININA,-GLOBULINA,-FIBRINOGNIO, PESQUISA (CADA) CRIOGLOBULINAS, CARACTERIZAO - IMUNOELETROFORESE CROSS MATCH (Prova cruzada de histocompatibilidade p/ transplante renal) CULTURA OU ESTIM. LINFCITOS IN VITRO POR CONCANAVALINA, FH OU POKEWEED DNCB - TESTE DE CONTATO EQUINOCOCOSE (CASONI) IDeR EQUINOCOCOSE, RFC ESPOROTRICOSE, AGLUTINAO PELO LTEX

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ESPOROTRIQUINA, IDeR FATOR ANTI-NCLEO (FAN) - ELISA FATOR ANTI-NCLEO (FAN) - FGADO DE RATO - IN PRINT - IFI FATOR ANTI-NCLEO (FAN) - HEP2 - IFI FATOR REUMATIDE - TESTE DO LTEX FATOR REUMATIDE - TURBID. OU NEFELOMTRICO FILARIOSE, ELISA FREI (LINFOGRANULOMA VENREO), IDeR GIRDIA, ELISA OU IFD GONOCOCO - HEMAGLUTINAO GONOCOCO - IFI HELICOBACTER PYLORI, ELISA HEPATITE A - HAV - IgG - ELISA HEPATITE A - HAV I IgM - ELISA HEPATITE B - HBcAc IgG (ANTI CORE IgG OU ACOREG) - ELISA HEPATITE B - HBeAc IgM (ANTI CORE IgM OU ACOREM) - ELISA HEPATITE B - HBeAc (ANTI HBe) HEPATITE B - HBeAg (ANTGENO e) HEPATITE B - HBsAc (ANTI ANTGENO DE SUPERFCIE) - ELISA HEPATITE B - HBsAg (AU, ANTGENO AUSTRLIA) - ELISA OU RIE HEPATITE B - PCR ( - ) HEPATITE C - ANTI - HCV ELISA HEPATITE C - ANTGENO HCV - PCR QUALITATIVO HEPATITE C - ANTGENO HCV - PCR QUANTITATIVO ( - ) HEPATITE DELTA, ANTICORPO HERPES SIMPLES - IgG - ELISA HERPES SIMPLES - IgM - ELISA HERPES SIMPLES - PCR ( - ) HERPES ZOSTER - IgG - ELISA HERPES ZOSTER - IgM - ELISA HIDATIDOSE (EQUINOCOCOSE), Idi DUPLA HIPERSENSIBILIDADE RETARDADA - (Intradermo Reao (IDeR) Candinina, Caxumba, Estreptoquinase-Domase, PPD, Tricofitina, Virus Vacinal, outro (s) - cada HISTONA, ELISA HISTOPLASMOSE, RFC, Idi DUPLA OU CIE (CADA) HIV - ANTIGENO P24 - ELISA HIV AMPLIFICAO DO DNA (PCR) HIV PCR - QUANTITATIVO ( - )HIV1 + HIV2 (DETERMINAO CONJUNTA) PESQUISA DE ANTICORPOS HIV1 OU HIV2 - ELISA PESQUISA DE ANTICORPOS HPV (VRUS DO PAPILOMA HUMANO), SONDA DNA HTL V1 (VRUS DA PARAPARESIA ESPSTICA TROPICAL) - Ac - PESQUISA IgA, IDiR IgD, IDiR IgE, GRUPO ESPECFICO (CADA) IgE, POR ALERGENO (CADA) IgE, TOTAL IgG, IDiR IgG, SUBCLASSES 1,2,3,4 - IDiR (CADA) IgM, IDiR IMUNOCOMPLEXOS CIRCULANTES IMUNOELETROFORESE (ESTUDO DA GAMOPATIA) INIBIDOR DE C1 ESTERASE - CONCENTRAO IDiR INIBIDOR DE C1 ESTERASE - FUNO, IDiR ITO (CANCRO MOLE), IDeR KVEIM (SARCOIDOSE) IDeR LEGIONELLA - IFI LEISHMANIOSE, IFI LEISHMANIOSE, REAO SOROLGICA

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LEPTOSPIROSE - AGLUTINAO LEPTOSPIROSE - IFI OU ELISA - IgG LEPTOSPIROSE - IFI OU ELISA - IgM LINFCITOS T HELPER CONTAGEM DE (IF com OKT-4)(CD-4+) CITOMETRIA de FLUXO LINFCITOS T e B, CONTAGEM DE (ROSETA E/OU IF) (CADA) LINFCITOS T SUPRESSORES CONTAGEM de (IF com OKT-8) (D-8) CITOMETRIA de FLUXO LISTERIOSE - AGLUTINAO, POR ANTGENO LYME, SOROLOGIA MALRIA, IFI MANTOUX, IDeR MCA (ANTGENO CARCINO MAMRIO) MICOBACTRIA, SOROLOGIA MICOPLASMA PNEUMONIAE (PPLO) - ELISA - IgG MICOPLASMA PNEUMONIAE (PPLO) - ELISA - IgM MICOPLASMA PNEUMONIAE (PPLO) - IFI - IgG MICOPLASMA PNEUMONIAE (PPLO) - IFI - IgM MICOPLASMA PNEUMONIAE ,RFC MITSUDA, IDeR MONONUCLEOSE - MONOTESTE MONONUCLEOSE, ANTI- VCA (EBV) IgG OU IgM - CADA MONONUCLEOSE, PAUL-BUNNELL DA VIDSOHN MONONUCLEOSE - EPSTEIN BARR - PCR ( - ) MONTENEGRO, IDeR NBT ESTIMULADO PPD (TUBERCULINA), IDeR PROTENA C REATIVA, PESQUISA PROTENA C REATIVA, TURBID. OU NEFELOMTRICA PROTENA EOSINOFLICA CATINICA (ECP) - FLUOROIMUNOENSAIO PSA (ANTGENO PROSTTICO ESPECFICO) PSA LIVRE (INCLUI O PSA TOTAL) ( - ) PSITACOSE, RFC RUBOLA ANTICORPO IgG - ELISA RUBOLA ANTICORPO IgM - ELISA RUBOLA-IHA, SARAMPO - RFC OU IFI SCHISTOSOMOSE - RFC OU IFI SFILIS - FTA - Abs - IgM SFILIS - FTA - Abs - IgG SFILIS - REAO DE HEMAGLUTINAO, TPHA SFILIS - VDRL INCLUSIVE QUANTITATIVO, OU OUTRO CARDIOLIPNICO TESTE DE INIBIO DA MIGRAO DOS LINFCITOS (P/ CADA ANTGENO) TOXOCARA CANNIS, ELISA TOXOPLASMINA, IDeR TOXOPLASMOSE - RFC, HA (CADA) TOXOPLASMOSE, ELISA - IgA TOXOPLASMOSE - ELISA - IgG e IgM (CADA) TOXOPLASMOSE - IFI - IgG e IgM (CADA) VARICELA, IgG - ELISA VARICELA, IgG - IFI VARICELA, IgM - ELISA VARICELA, IgM - IFI VARICELA, RFC PARA VRUS (SINCICIAL, RESPIRATRIO) PESQUISA DIRETA WAALER ROSE (FATOR REUMATIDE) WEIL FELIX (RICKETSIOSE), REAO DE AGLUTINAO WESTERN BLOT (ANTICORPOS ANTI - HIV) WIDAL, REAO DE Disponvel em: < http://www.bragafilho.com.br/exames/imunologia.html>

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3 EQUIPAMENTOS DE USO DO LABORATRIO DE MICROBIOLOGIA E IMUNOLOGIA Dentro de um laboratrio de anlises clnicas existem vrios equipamentos que permitem a praticidade e realizao de sequncias de exames clnicos laboratoriais, sendo alguns clssicos e de mais fcil acesso financeiro e outros de tecnologia de ponta, que ficam mais restritos a grandes laboratrio e centros de pesquisas. Alguns equipamentos esto descritos de forma sucinta. 3.1 Capela de fluxo laminar A capela de fluxo laminar um equipamento de laboratrio projetado para criar reas de trabalho estreis para a manipulao de materiais biolgicos ou estreis que no possam sofrer contaminao do meio ambiente, garantindo a segurana da manipulao. A capela de fluxo laminar vertical, exemplo de modelo de capela, apresenta fluxo de ar laminar vertical. Isso oferece proteo ao produto manipulado e garante a proteo do operador e do ambiente contra agentes biolgicos de risco.9

Figura 1 3.2 Autoclaves Autoclaves so equipamentos muito utilizados em laboratrios de anlises clnicas e laboratrios de controle de qualidade para esterilizar artigos como frascos fechados, pipetas, material tubular, entre outros. O processo de esterilizao se d atravs do calor vapor sobre presso, que pode ser divido em trs etapas: Remoo do ar penetrao do vapor secagem. 9 3.3 Estufa de cultura A estufa de cultura trata-se de um equipamento que utilizado em laboratrios de investigao, laboratrios de patologias clnicas, microbiologia, entre outros inmeros laboratrios. Estas so estruturas que tem como objetivo, acumular e conter o calor no

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seu interior, sempre mantendo a temperatura maior no seu interior do que externamente. Que, em geral, so compostas de uma caixa e uma fonte de calor.9

Figura 2

3.4 pHmetro O aparelho medidor de pH (ou tambm chamado de pHmetro, com a fontica phgametro) consiste de um potencimetro (aparelho que mede a diferena de potencial), um eletrodo de vidro, um eletrodo de referncia e um sensor ph de compensao de temperatura.9 A determinao do pH feita eletrometricamente com a utilizao de um potencimetro e eletrodos. 9

Figura 3 3.5 Espectrofotmetro A espectrofotometria o mtodo de anlises ptico mais usado nas investigaes biolgicas e fisico-qumicas. O espectrofotmetro um instrumento que permite comparar a radiao absorvida ou transmitida por uma soluo que contm uma quantidade desconhecida de soluto, e uma quantidade conhecida da mesma substncia.9

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Figura 4 3.6 Microscpio ptico O microscpio um dos instrumentos mais versteis e utilizados no laboratrio de semicondutores. Para tamanhos caractersticos menores que submicrons seu uso se torna invivel.7 A utilizao do microscpio tico no se restringe apenas a anlise de caractersticas dos circuitos integrados, tambm usado para analisar partculas encontradas nos circuitos, e ainda freqentemente usado para olhar e medir o tamanho, o tipo e a densidade de defeitos em circuitos semicondutores.7

Figura 5

3.7 Centrfugas Realizar a centrifugao nada mais do que acelerar o processo de decantao. Se o objetivo for separar rapidamente o slido de um lquido, podemos submeter a mistura a uma centrfuga. Ela vai girando em alta velocidade e depositando no fundo as partculas slidas, que so mais densas.4 Um exemplo prtico desse mtodo a centrifugao do sangue. O sangue colocado em compartimentos e, ento, sofre a ao de uma fora centrpeta (fora que puxa a mistura para o centro da trajetria em um movimento circular). Dessa forma, o plasma separado dos outros componentes do sangue para anlise posterior.4

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Figura 6

3.8 Agitador vortex O Agitador Vortex de micro tubos e tubos de ensaio concebido para misturar substncias em tubos de ensaio ou frascos pequenos atravs de movimento circular com operao contnua e possibilidade de mudar a frequncia da vibrao com acionamento sob presso com o frasco ou tubo de ensaio sob o suporte. 4 EXAMES REALIZADOS (POP) 4.1 Tipagem sangunea
Esse teste classifica de acordo com a presena de antgenos principais A e B na superfcie das hemcias e de acordo com os anticorpos sricos anti-A e anti-B. A tipagem sangunea ABO, usa tanto o mtodo direto quanto o reverso, necessria antes de uma transfuso, para evitar uma reao letal. - PROCEDIMENTO Adicionar 200L de amostra (sangue). Lavar as hemcias com adio de soro fisiolgico e centrifugar por 2 min a 2000 rpm. Repetir o processo por 3 vezes. Preparar uma suspenso de hemcias, 1:10 com soro fisiolgico. Adicionar 50L da suspenso nos respectivos tubos, com uma gota de cada reagente Anti-A, Anti-B, AntiD, centrifugar por 1 min a 2000 rpm. Observar a formao ou no de aglutinao dos tubos.
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- RESULTADO Seguindo o procedimento descrito acima, fez-se anlise de matrias sanguneos dispostos no laboratrio. Obteve-se resultados baseados na tabela abaixo:

Reagentes Tipo A positivo

Anti-A Aglutinao

Anti-B No aglutinao

Anti-D Aglutinao

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Tipo A negativo Tipo B positivo Tipo B negativo Tipo AB positivo Tipo negativo Tipo O positivo Tipo O negativo AB

Aglutinao No aglutinao No aglutinao Aglutinao Aglutinao

No aglutinao Aglutinao Aglutinao Aglutinao Aglutinao

No aglutinao Aglutinao No aglutinao Aglutinao No aglutinao

No aglutinao No aglutinao

No aglutinao No aglutinao

Aglutinao No aglutinao

Laudo dos testes realizados:

Amostra 1 2 3 4 5

Descrio (aglutinao) Anti- A Anti-A, Anti-B, Anti-D Anti-D Anti- A, Anti-D Anti- A, Anti-D

Resultado A negativo AB positivo O positivo A positivo A positivo

Alm do tipo de sangue A, B, AB ou O, h tambm a protena D, a do fator RH, presente em mais ou menos 75% das pessoas. Esse fator, quando presente, determina que o sangue do tipo positivo, e quando est ausente do tipo negativo. Item importante, pois RH negativo, s gera anticorpos quando for exposta, a uma transfuso de sangue tipo positivo. Na medicina h tcnicas e procedimentos para reverter esses casos.

4.2 Beta HCG


Beta HCG um imunoensaio cromatogrfico para a determinao qualitativa rpida da Gonadotrofina Corinica Humana (hCG). Utiliza-se uma membrana com dois anticorpos imobilizados, um anticorpo de captura, anti-hCG, e um anticorpo de controle. Na execuo do teste, a amostra de 17

soro ou urina colocada para reagir com um conjugado de ouro coloidal-anticorpo monoclonal anti-hCG e a mistura se move cromatograficamente na membrana por ao capilar. Quando existe hCG na amostra,ir se formar uma linha colorida na regio onde est imobilizado o anti-hGC, significando um teste positivo. Como a mistura continua sua migrao na membrana, ocorrer a formao de uma segunda linha colorida onde est aplicado o anticorpo de controle, confirmando que o teste se processou adequadamente. O limite de deteco foi estabelecido como sendo igual a 25 mUl/ml. Quando o teste positivo, ocorre a formao de duas linhas horizontais coloridas, enquanto que no teste negativo ocorre apenas formao de uma linha. A ausncia de formao da linha colorida na posio de controle indica que o teste no se processou adequadamente e que deve ser repetido.

- PROCEDIMENTO Soro ou Urina 1) As placas e as amostras devem estar entre 15-25 C antes de iniciar o teste. 2) Remover a placa de reao do envelope protetor, identific-la adequadamente e coloc-la em uma superfcie horizontal. 3) Adicionar 5 gotas (0,2 ml) da amostra no orifcio de amostra. 4) Esperar que asd linhas coloridas apaream. Dependendo da concentrao de hCG na amostra, podendo-se encontrar resultados positivos em 1 minuto. Entretanto para confirmar resultados negativos, deve-se esperar completar o tempo de 5 minutos. No interpretar os resultados depois de decorridos 5 minutos. 5) Proceder interpretao da reao: NEGATIVO: Ocorre a formao de uma linha colorida na posio de controle. POSITIVO: Ocorre a formao de uma linha colorida na posio de teste e outra linha colorida na posio de controle. A linha na posio de teste, claramente identificvel, mesmo quando sua intensidade for menor que a linha na posio de controle, mostra que o teste deve ser considerado positivo, indicando uma concentrao de hCG igual ou maior que 25mUl/ml.

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A intensidade da cor da linha de teste decorrente da concentrao de hCG na amostra, mas o teste no deve ser usado para uma avaliao quantitativa ou paradeterminar a taxa de elevao dos nveis de hCG. A intensidade da cor na linha de controle pode ser menor que a da linha de teste, sem que isto signifique problema no desempenho do teste.

Disponvel em <http://www.biomedicina3l.com/2010/07/hcg-teste-rapido.html>

- RESULTADOS Todos os testes realizados foram negativos para a gravidez. 4.3 Serolatex PCR A PCR uma das protenas de fase aguda, ou seja, protenas que apresentam concentrao elevada no soro em decorrncia de processos inflamatrios e grandes leses tissulares. Partculas de ltex estabilizadas e sensibilizadas com anticorpo anti-protena Creativo (anti-PCR) humano aglutinado quando a PCR est presente na amostra. A intensidade da aglutinao, medida em absorbncia, proporcional quantidade de PCR.

- PROCEDIMENTO MTODO QUALITATIVO:

1) No necessrio que os reagentes atinjam a temperatura ambiente antes de us-los. 2) Em uma rea da lmina colocar 0,05ml da amostra de soro. Colocar uma gota de cada controle em outras reas da lmina. 19

3) Colocar 1 gota (0,05ml) do ltex PCR, previamente homogeneizado nas reas de amostra e dos controles. Misturar em forma de crculo com o auxlio do basto. 4) Inclinar a lmina para a frente e para trs fazendo movimentos oscilatrios em vrios planos durante dois minutos e observar imediatamente a presena ou no de aglutinao macroscpica, comparando o resultado das amostra com os padres obtidos com os controles.

NEGATIVO: Suspenso homognea semelhante ao padro obtido com o controle negativo. POSITIVO: Aglutinao macroscpica que varia desde a formao de grumos finos at grumos grosseiros caracterizando uma concentrao maior que 6 mg/l. - RESULTADOS Todos os exames realizados foram negativos.

5 CONSIDERAES FINAIS Dentre os vrios setores das anlises clnicas, a Imunologia e Microbiologia, so reas de grande importncia para diagnsticos laboratoriais, pois emprestam subsdios essenciais para deteco de diversas patologias, patgenos e constataes clnicas, o que reflete significativamente no segmento e qualidade de vida do paciente analisado, atravs do material biolgico coletado, alm de dar as vertentes para a atuao do especialista em cada caso especfico.

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