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Quim. Nova, Vol. 26, No. 5, 687-693, 2003 FLUIDOS SUPERCRTICOS EM QUMICA ANALTICA. II.

CROMATOGRAFIA COM FLUIDO SUPERCRTICO: INSTRUMENTAO Emanuel Carrilho, Maria Ceclia H. Tavares e Fernando M. Lanas* Instituto de Qumica de So Carlos, Universidade de So Paulo, CP 780, 13560-970 So Carlos - SP Recebido em 12/6/02; aceito em 6/12/02

SUPERCRITICAL FLUID IN ANALYTICAL CHEMISTRY. II. SUPERCRITICAL FLUID CHROMATOGRAPHY: INSTRUMENTATION. The first paper in this series discussed the basic theory involved in supercritical fluid chromatography (SFC) and how the technique progressed from gas and liquid chromatography. The first SFC instruments were simple adaptations of the commercially available liquid chromatographs with packed columns followed by modifications in gas chromatographs using open tubular capillary columns. In this paper, the most important aspects regarding instrumentation are covered, including practical, simple, and the most important, inexpensive solutions to build a home-made SFC system. Keywords: instrumentation; SFC; home-made systems.

Conforme discutido em publicao anterior1, a cromatografia com fluido supercrtico (SFC) foi desenvolvida a partir do conhecimento j bem sedimentado da cromatografia gasosa (GC) e da cromatografia lquida (LC). Os primeiros cromatgrafos empregados para SFC foram simples adaptaes de cromatgrafos comercialmente disponveis para cromatografia lquida de alta eficincia (HPLC). A principal modificao instrumental geralmente consiste na adaptao de bombas de pressurizao e de celas de deteco, principalmente do tipo UV-vis, para resistirem s presses elevadas. Inicialmente, as colunas eram as mesmas usadas em HPLC. A introduo, no incio da dcada de 80, dos tubos de slica fundida para preparo de colunas capilares em cromatografia gasosa foi rapidamente absorvida em SFC. Assim, surgiram as colunas capilares (ou tubulares abertas) em SFC, as quais requeriam instrumentos diferentes daqueles j existentes para SFC usando colunas empacotadas (recheadas) provenientes da HPLC. Estabeleceram-se, ento, duas modalidades de instrumentos para SFC: para colunas empacotadas (ou recheadas) (pSFC) ou para colunas capilares (tubulares abertas) (cSFC). No presente trabalho o uso dos dois tipos de coluna em SFC sero descritos e as vantagens e limitaes da instrumentao pertinente sero discutidas. INTRODUO O esquema genrico ilustrado na Figura 1 mostra os principais componentes de um cromatgrafo utilizando fluido supercrtico como fase mvel. Na parte (A) da Figura 1, ilustra-se um sistema tpico para uso com colunas empacotadas (recheadas) enquanto que na parte (B), esquematizado um sistema para colunas capilares (tubulares abertas). Apesar do esquema genrico diferir apenas com relao s colunas, em decorrncia de suas caractersticas, vrios detalhes sero discutidos a seguir, uma vez que a otimizao dos sistemas pode depender da escolha dos componentes. INSTRUMENTAO PARA SFC Sistema de bombeamento e pressurizao Sendo as presses de trabalho em SFC geralmente elevadas, existe
*e-mail: flancas@iqsc.usp.br

Figura 1. Diagrama de um cromatgrafo para pSFC (colunas empacotadas ou recheadas) (A) e de um cromatgrafo para cSFC (colunas capilares ou tubulares abertas) (B). 1- cilindro de CO 2, 2- vlvula, 3- bomba para pressurizar o CO2, 4- forno, 5- injetor, 6- coluna, 7- restritor, 8- detector

a necessidade de um maior cuidado sobre o sistema de bombeamento e pressurizao. O sistema ideal para SFC deve ser capaz de suportar altas presses, apresentar rpida resposta aos comandos de alterao da presso e manter-se a nveis constantes com baixas flutuaes no bombeamento do eluente. Todas os sistemas de pressurizao apresentados e discutidos na Tabela 1 podem ser satisfatoriamente usados para SFC, porm a escolha vai depender do custo, do fluido empregado, da vazo compatvel com a coluna empregada e da aplicao a ser realizada.

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Tabela 1. Caractersticas de trs tipos de sistemas de pressurizao para SFC Tipo de Bomba pressurizao pneumtica Funcionamento um lquido em um recipiente metlico pressurizado diretamente com nitrognio (ou outro gs inerte) Vantagens a opo mais fcil e barata de se implementar em um laboratrio, pois o vaso de pressurizao pode ser construdo em uma oficina mecnica simples2 sistema amplamente utilizado em HPLC; possvel controlar satisfatoriamente a presso e operar facilmente com programao de composio de fase mvel e/ou adio de modificadores a mais indicada para o uso em SFC pois apresenta fluxo estvel, rpida resposta programao e permite tambm a utilizao de gases como fluido supercrtico, desde que estejam no estado lquido (para tal necessrio resfriar o sistema antes da pressurizao)4 Limitaes este sistema bastante limitado, uma vez que a maior presso disponvel de se obter igual do cilindro de nitrognio (aproximadamente 160 bar) existe a necessidade de instalao de um supressor de pulso, eletrnico ou mecnico, para se obter um bombeamento livre de pulsao3 Uso se o sistema dispuser de uma boa vlvula de alta presso, a programao de presso possvel, podendo ser efetuados incrementos contnuos se o fluido for lquido temperatura ambiente, nenhuma modificao necessria, porm se o fluido for um gs, ento necessrio refrigerar a bomba

pisto reciprocante

uma bomba tpica de HPLC; funciona com um ou dois pistes de pequeno volume que alternadamente puxam o lquido do reservatrio e o comprimem em direo coluna cromatogrfica

seringa

funciona como um pisto nico, porm de grande volume (~20 mL)

sem dvida, a bomba seringa a opo de melhor desempenho por ser livre de pulsao e por atingir altas presses, porm tambm a de maior custo e no permite mudana rpida de composio de fase mvel

a seringa preenchida com o fluido na composio a ser usado, podendo ser usado tanto com vazo ou presso constantes ou com gradiente de densidade

Injetores Vrios autores pioneiros chegaram a construir seus prprios injetores. Jentoft e Gouw5 montaram um injetor de alta presso do tipo stop flow. Sie e Rijnders6 descreveram um sistema onde a amostra era injetada pneumaticamente para dentro da coluna. Atualmente esto sendo desenvolvidos sistemas de injeo de amostras para alta presso baseados no tempo7, os quais possibilitam a injeo de volumes bastante reduzidos com alta preciso e exatido. O injetor convencional de GC, o qual permite insero direta da agulha de uma seringa em um septo, foi usado apesar de apresentar problemas em sistemas com a presso inicial elevada (geralmente quando a presso crtica do eluente maior que 70 bar), mas mostrou bom desempenho a presses menores (fluidos com presso crtica em torno de 40 bar)8. Sem dvida alguma, o sistema mais usado o injetor tpico de HPLC com vlvula de mltiplos prticos. Este injetor apresenta alto desempenho em presses elevadas e boa reprodutibilidade de amostragem. Para colunas em pSFC, um sistema convencional de injeo para HPLC adequado. Entretanto, para sistemas com coluna capilar, um volume menor de amostra necessrio. Para tal, deve-se adaptar um split (divisor de amostra) entre o injetor e a coluna. Os injetores mais antigos utilizavam um volume grande de amostra, geralmente com loop externo9, enquanto que os mais modernos j apresentam loop interno da ordem de nanolitros, o que diminui a relao de diviso (split ratio). As dimenses da coluna capilar regulam a capacidade mxima de amostra a ser injetada. Na Tabela 2 so apre-

Tabela 2. Volumes tpicos de injeo (Vinj) em funo do dimetro interno (d.i.) e comprimento (L) da coluna capilar em SFC10 Dimetro interno d.i. (m) 200 100 050 Volume do injetor Vinj (L) 1,50 0,27 0,05 Comprimento da coluna L (m) 4,8 3,4 2,4

sentadas algumas relaes de volume de injeo em funo do dimetro e comprimento da coluna10. Colunas As primeiras tentativas na utilizao de colunas capilares em cromatografia com fluido supercrtico foram frustradas pelo fato de que vrias fases estacionrias foram lavadas da coluna pelo alto poder de solvatao do fluido supercrtico. Isto levou os pesquisadores a desenvolverem fases de maior massa molecular (entrecruzadas) e com ligao direta ao suporte slido (tubo de slica fundida no caso de colunas capilares ou partculas de slica no caso de colunas empacotadas). O tamanho das partculas de empacotamento (recheio) tem grande influncia no desempenho cromatogrfico devido ao seu efeito na queda de presso ao longo da coluna. Partculas de tamanho pequeno (1 a 10 m) permitem elevada resoluo cromatogrfica e gran-

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de nmero de pratos (eficincia elevada), porm a queda de presso grande, da ordem de 5 a 10 bar, o que causa efeitos adversos. Por outro lado, partculas de dimetro maior (20 a 120 m) apresentam menor eficincia devido menor rea de partio, porm produzem pequena queda de presso (quase desprezvel em alguns sistemas, da ordem de 0,5 bar) o que permite o uso de vazes de fase mvel maiores, reduzindo o tempo de anlise. A escolha da fase estacionria deve ser feita levando em considerao o soluto a ser analisado e a estabilidade da fase sob as condies crticas; neste aspecto, tanto o filme lquido quanto o suporte slido devem ser considerados. Tanto colunas empacotadas quanto colunas capilares de tubo aberto podem ser usadas em SFC. A diferena entre os sistemas no recai somente nos dois tipos de coluna mas, tambm, na fase estacionria, na instrumentao e na aplicao dessas diferentes formas de SFC. A teoria bsica, todavia, igualmente vlida para ambas situaes. As caractersticas mais relevantes de cada tipo de coluna sero destacadas a seguir: Caractersticas de uma coluna capilar tubular aberta para cSFC: Na coluna capilar de tubo aberto a fase estacionria um filme polimrico depositado na parede interna do tubo. O volume da coluna, exceto aquele ocupado pela fase estacionria, disponvel para o fluxo da fase mvel. Para uma dada coluna, trs dimenses so relevantes: o dimetro interno da coluna, a espessura de filme da fase estacionria e o comprimento da coluna. a) Dimetro interno (d.i.): a variao do dimetro afeta a eficincia pois acarreta numa variao da vazo da fase mvel pela coluna alterando vrias propriedades cromatogrficas. b) Comprimento: o aumento no comprimento causa um aumento na resoluo assim como um aumento no tempo de anlise. O comprimento da coluna deve ser o menor possvel, porm suficiente para ocorrer a separao. c) Espessura de filme (df): se df aumentado, pode-se aumentar o equivalente na amostra injetada na coluna, obtendo-se um aumento na sensibilidade. Caractersticas de uma coluna empacotada para pSFC: O tamanho de partcula um parmetro adicional que afeta a eficincia e a sensibilidade. Os efeitos do tamanho de partcula na pSFC so similares aos efeitos do dimetro da coluna na cSFC. As partculas usadas nas colunas de pSFC so as mesmas usadas para HPLC. O comprimento e o dimetro interno das colunas para pSFC so mais limitadas que em HPLC devido alta presso utilizada e maior restrio da primeira quanto a queda de presso. A queda de presso ocorre atravs da coluna e depende do dimetro da partcula de empacotamento e do comprimento da coluna, podendo ser estimada pela Equao 1: (1) onde: P = presso (bar) u = velocidade linear (cm/s) = constante (~1000 para partculas esfricas de empacotamento) = viscosidade (poise) L = comprimento da coluna (cm) dp = dimetro da partcula de empacotamento (mm) O maior problema da variao da presso atravs da coluna que a densidade do fluido de arraste no incio e no final da coluna sero diferentes e, conseqentemente, o poder de solvatao ser diretamente proporcional variao da densidade do fluido e, com

isso, o poder de eluio varia dentro da coluna11. Um resumo das vantagens e desvantagens do uso das colunas capilares e empacotadas apresentado na Tabela 3. Tabela 3. Resumo das caractersticas do emprego das colunas capilares e empacotadas em SFC12 Coluna capilar Vantagens: Baixa queda de presso Alta eficincia Facilidade de interface com detectores FID e MS Baixa vazo de fase mvel (bomba seringa) Baixa velocidade tima Difcil controle de vazo Baixa sensibilidade com detectores UV e IR

Desvantagens:

Coluna empacotada Vantagens: Menor tempo de anlise Alta capacidade de amostra (sensibilidade) Possibilidade de uso de detectores UV e IR Alta queda de presso Baixa eficincia Grande rea superficial (possvel efeito de adsoro)

Desvantagens:

Sistema de aquecimento e controle de temperatura O controle da temperatura em SFC muito importante pois a variao da temperatura acarreta variao da densidade do fluido e, conseqentemente, influencia na partio, na volatilizao dos analitos e na seletividade, principalmente na regio prxima ao ponto crtico. Nesta regio, isto , em torno do ponto crtico, o controle da temperatura deve ser o melhor possvel para manter a densidade do fluido constante. O forno cromatogrfico dever funcionar numa faixa desde a temperatura ambiente at cerca de 300 oC. Em alguns casos h necessidade de ter um pr-aquecedor para que o fluido chegue na coluna com a temperatura prxima da qual ser usada. Para isso, pode-se instalar o injetor dentro do forno; desta forma a amostra introduzida na coluna sob a mesma temperatura de anlise. O sucesso do transporte do analito at o detector tambm depende da volatilidade, da solubilidade na fase fluida, da geometria do restritor, da presso e da temperatura do fluido. Para compostos pouco volteis, possvel que o analito precipite e concentre-se na parede do restritor, o qual pode chegar ponta e, eventualmente, obstruir o restritor. A Figura 2 mostra uma foto dos diferentes perfis de expanso da gua, em funo da temperatura do restritor13. Pode-se perceber que a temperaturas mais elevadas o aerossol mais fino e evita o entupimento do restritor. Para evitar a obstruo do restritor, a temperatura na zona de expanso do fluido deve ser maior que a temperatura crtica. O aumento da presso facilita o transporte de analitos no sistema cromatogrfico devido ao alto poder de solubilizao do fluidos, mas aumentar a temperatura pode ser contraproducente uma vez que a densidade da fase fluida diminui. Para analitos que apresentam alguma volatilidade, o aumento da temperatura pode aumentar a solubilidade. Restritores Os restritores so usados para que se mantenha a presso homognea dentro da coluna cromatogrfica. Os restritores so os ele-

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Figura 2. Fotografia do perfil da expanso da gua para 600 bar em vrias temperaturas de expanso (Te) - reproduzida da ref. 13, com permisso da American Chemical Society

Figura 3. Diagrama de vrios restritores que podem ser usados para SFC. A)de slica fundida com redutor, B) de slica fundida com extremidade cnica, C) e D) de slica fundida com diferentes dimetros de orifcio, E) de slica fundida com orifcio interno formado a partir da compresso da coluna temperatura elevada, F) formado pela deposio de material no final do capilar, G) de orifcio tipo pinhole, muito usado para SFC-MS, H) de slica fundida formada por filtro poroso (frit), I) Restritor com a extremidade comprimida (pinched). Adaptado da ref. 21

mentos da instrumentao em SFC que devem apresentar os maiores cuidados na escolha devido compatibilidade com os diferentes detectores, alm de manterem a presso interna constante. Na tentativa de obter resultados satisfatrios e consistentes, diversas possibilidades foram testadas. Por exemplo, Lee e Campbell14 montaram um sistema dotado de vasos de coleta pressurizados com nitrognio, servindo para duas finalidades: recuperar a amostra em fraes distintas e produzir uma presso de retorno (back pressure). Sistema anlogo foi descrito por Hirata e Nakata15 onde a back pressure era produzida por outra bomba de pressurizao equilibrando, assim, a presso de entrada e a presso de sada. Restritores mais simples so constitudos de tubo de slica fundida de pequeno dimetro interno (<10 m) como o utilizado por McNair e Hensley16. Bertsch e Green17 compararam 5 tipos de restritores: restritor de slica fundida, restritor de slica fundida no tratada, restritor de ao inox, restritor de vidro Pyrex e restritor de filtro sinterizado microporoso, tendo obtido um melhor resultado com o primeiro. A Figura 3 ilustra, de forma esquemtica, diferentes geometrias de restritores que foram investigados para SFC e SFCMS18-23. Muitos dos detectores usados para SFC, como o detector de ionizao de chama (FID) e o espectrmetro de massas (MS), requerem que o efluente cromatogrfico seja despressurizado antes da deteco. A despressurizao , geralmente, realizada pela expanso da fase mvel atravs do restritor na regio onde ocorre a deteco. Muitos instrumentos empregados em SFC utilizam alguma forma de restritor capilar com dimenses empiricamente selecionadas para dar fase mvel uma velocidade linear adequada para a temperatura e presso cromatogrficas desejadas. Na Figura 4 ilustrado o processo adiabtico no qual a entalpia do fluido a mesma antes e depois da expanso (H1). Se o restritor for curto, o processo pode ser considerado adiabtico, se o restritor for longo e a temperatura for mantida constante, a expanso poder ser considerada isotrmica. Em ambos os casos, o estado de equilbrio do fluido, no restitor e aps a expanso, podem ser expressos

Figura 4. Ilustrao esquemtica da expanso do fluido supercrtico para um processo adiabtico no qual os estados inicial e final do fluido so conhecidos - reproduzida da ref. 13, com permisso de American Chemical Society

pelas relaes termodinmicas descritas nas Equaes 2 e 31. A densidade do fluido na sada do capilar (2) pode ser estimada pela relao entre as presses aps o processo de expanso (P2) e a presso no interior da coluna (P1). , sendo = 1,4 para o CO2 (2)

onde: 1 = densidade do fluido na entrada do capilar (g/cm3) 2 = densidade do fluido na sada do capilar (g/cm3) P1 = presso no interior da coluna (bar) P2 = presso aps o processo de espanso (bar) = razo entre a capacidade calorfica a presso constante (Cp) e a volume constante (Cv)

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Para uma expanso adiabtica a temperatura na sada do capilar (T2) ser dada, tambm, pela relao entre a temperatura no interior da coluna (T1) e . (3) As dimenses dos restritores podem ser as mais variadas possveis e produzir o mesmo resultado. Por exemplo, o restritor capilar pode ser curto com um dimetro interno bastante reduzido ou longo com dimetro interno maior. O diagrama da Figura 5 mostra a dependncia da relao entre o comprimento e o dimetro do restritor capilar (L/D) e o efeito desta relao na reduo do fluxo de fase mvel e na reduo da presso. O restritor ideal para SFC deve apresentar as seguintes caractersticas24: a) manter uma vazo uniforme, mesmo durante a programao de temperatura e presso; b) ser inerte para no permitir adsoro de analitos durante a despressurizao da fase mvel; c) ser facilmente substitudo para variao de vazo e d) manter a transferncia completa de solutos que se degradam ou que no so volteis ao detector sem pirlise ou formao de partculas.

Figura 5. Parmetros de reduo de fluxo como uma funo da razo comprimento/dimetro da coluna (L/d) para uma expanso adiabtica no final do capilar - reproduzida da ref. 13, com permisso da American Chemical Society

Detectores A princpio, qualquer detector convencional de cromatografia lquida ou gasosa pode ser usado em SFC sem que, para isso, necessite de grandes modificaes instrumentais. Detectores de UV so amplamente usados desde que estejam dotados de uma cela de alta presso25. Normalmente, os detectores de absoro UV apresentam bons resultados na anlise de hidrocarbonetos aromticos polinucleares. Pode-se adaptar um detector UV para deteco oncolumn devido ao reduzido volume de cela, quando a separao feita em cSFC26. As desvantagens destes detectores so as mesmas encontradas em HPLC, como a ausncia de resposta para compostos que no possuam grupos cromforos. Um detector que tem sido usado com bons resultados por ser compatvel com os dois sistemas SFC o detector evaporativo com espalhamento de luz (ELSD). O ELSD particularmente adequado para uso em SFC. O seu funcio-

namento consiste numa etapa de vaporizao do efluente com posterior espalhamento de luz pelas molculas dos analitos, o que ocorre automaticamente no processo de descompresso da fase mvel. Este detector ainda apresenta boa sensibilidade, podendo ser considerado um detector pseudo-universal27. Mais sensvel e mais abrangente o detector por ionizao em chama, FID, largamente utilizado em GC, o qual permite a deteco da maioria dos compostos orgnicos com boa sensibilidade e excelente linearidade de resposta, sendo adequado para anlises quantitativas. Alguns problemas foram encontrados na utilizao de restritores antes do FID, incluindo o resfriamento nas regies de expanso adiabtica13 e a deposio de material de alta massa molecular durante a descompresso da fase mvel28. Se o fluido liquido temperatura ambiente (tal como pentano) o detector mais indicado o UV, enquanto que o FID o detector preferido quando se utiliza CO2 como fluido supercrtico. Alguns trabalhos recentes avaliam o uso de espectrmetros de massas como detectores em SFC29. Apesar de promissores, sistemas dedicados SFC-MS ainda so raros e indisponveis comercialmente30. A expectativa de alta eficincia combinada com o baixo fluxo volumtrico mostrou que a SFC possibilita fcil interfaceamento com os detectores da cromatografia gasosa, em particular, com a espectrometria de massas. O grande interesse nesta tcnica est na separao de compostos no polares de elevada massa molecular, como oligmeros sintticos e surfactantes no-inicos, que podem ser separados por SFC e apresentam a vantagem da deteco por MS. Assim, a caracterizao de misturas complexas certamente foi beneficiada com esta evoluo. No incio do desenvolvimento da SFC-MS no foi obtido um progresso substancial pois no houve a possibilidade de acoplamento direto. Foram feitas vrias tentativas usando bombas de alto vcuo em estgios adicionais para tolerar altas vazes de fase mvel31-33. Com o desenvolvimento de novas colunas e diferentes interfaces, o interesse pela SFC-MS voltou a aumentar com vrios trabalhos mostrando o sucesso neste interfaceamento34. Durante a ltima dcada, a interface mais comum de SFC-MS era feita pela insero direta do restritor na fonte de ons do espectrmetro de massas, podendo este operar tanto no modo de impacto eletrnico (EI) como em ionizao qumica (CI). Por vrias razes, este mtodo de introduo direta de fluido mostrou-se efetivo: a) o volume reduzido de fase mvel dispensada pela coluna capilar pode ser facilmente removido pelo sistema de vcuo do espectrmetro de massas padro, sem a necessidade de estgios adicionais de vcuo; b) apresenta um volume morto mnimo e c) com o aquecimento suficiente da ponta do restritor pode-se compensar o resfriamento adiabtico. A influncia do restritor no desempenho da interface do MS foi estudada35. Entre os restritores comuns de SFC, o afilado de parede delgada fornece inigualvel vantagem na separao de algumas misturas de oligmeros, os quais no podem ser completamente resolvidos quando se usa um restritor de filtro poroso (frit) ou um integral36. Duas das possveis interfaces utilizadas para o acoplamento SFC-MS com introduo direta da amostra esto mostradas na Figura 6. Os primeiros equipamentos adaptados para acoplamento LC-MS suportavam altas vazes de fase mvel, podendo esta ser variada sem influenciar o mecanismo da produo de ons. Com este ponto de vista, a SFC tornou-se interessante novamente. A maior parte dos trabalhos em SFC-MS com ionizao presso atmosfrica (API) tm sido realizados com colunas capilares39-41. Para a interface SFC com fonte API, equipamentos LC-MS comerciais foram usados sem modificaes, requerendo somente a introduo de um restritor. Alguns problemas podem surgir quando o instrumento apresentar um

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dedicados a colunas empacotadas (tanto para colunas microbore quanto para colunas analticas e preparativas). Uma exceo era a ABB Process Analytics, que oferecia a possibilidade de escolha entre colunas capilares e empacotadas. Para uma completa comparao entre todos os sistemas comerciais disponveis veja as Revises de Produto (Product Review) nas Pginas A do peridico Analytical Chemistry30, 44. COMENTRIOS FINAIS O ressurgimento da SFC ainda tmido, todavia ele inegvel44. A indstria farmacutica est sendo sua principal promotora por ter encontrado na SFC uma ferramenta analtica particularmente apropriada para seus compostos de interesse. Compostos farmacuticos so, em sua grande maioria, ou compostos termicamente instveis, ou de baixa volatilidade ou compostos quirais. Estes ltimos, constituem no principal foco das aplicaes na indstria farmacutica, pois SFC normalmente gera uma resoluo maior por unidade de tempo do que HPLC em separaes quirais, o que extremante interessante para aplicaes industriais45. Curiosamente, aparentemente o efeito de solvatao do dixido de carbono induz mudanas conformacionais que so geometricamente favorveis discriminao quiral46. Nos ltimos 2 anos pouco foi mudado na instrumentao comercial em SFC e os instrumentos adaptados ainda esto sendo usados e testados com pequenas variaes para utilizao com coluna capilar e diferentes detectores, como o MS47. Depois de um perodo de quase estagnao, trabalhos realizados pelo uso de tcnicas API durante os ltimos anos tm dado um novo mpeto no campo da SFC-MS. Observa-se que existe uma grande oportunidade se abrindo no interfaceamento pSFC-MS sem restries s limitaes cromatogrficas, obtendo-se, assim, uma poderosa ferramenta analtica, muito mais verstil que cSFC-MS, a qual tem dominado os trabalhos em SFCMS nos anos recentes. Atualmente, h ainda um nmero reduzido de grupos de pesquisa trabalhando em SFC-API-MS, parcialmente devido aos altos custos dos equipamentos. Particularmente, a fonte API tem sido usada apenas em escala de pesquisa em instrumentos MS adaptados. Contudo, uma vez que equipamentos miniaturizados podero ser feitos e disponveis, espera-se que SFC-MS ter uma ampla aceitao. Outra grande potencialidade do acoplamento SFC-MS est relacionada com o desenvolvimento da cromatografia unificada48, na qual o grande desafio compatibilizar a fase mvel com o sistema de deteco. Neste caso, usando CO2 e MS, pode-se utilizar a fase mvel em qualquer estado (lquido, gs ou supercrtico) e um sistema de deteco universal. Ser apresentada, nos prximos artigos, uma avaliao de dois sistemas para cromatografia com fluido supercrtico, sendo um para colunas empacotadas e o outro para colunas capilares abertas. Ambos foram projetados e construdos pelo Grupo de Cromatografia (CROMA) do Instituto de Qumica de So Carlos/USP. O primeiro, uma verso completamente artesanal, foi montado e adaptado a partir de alguns componentes cromatogrficos antigos e outros desenhados e construdos no IQSC2. O segundo, j mais sofisticado e moderno, foi construdo com correes observadas no desenvolvimento do primeiro sistema, empregando uma coluna capilar de tubo aberto49. AGRADECIMENTOS Os autores agradecem s agncias de fomento FAPESP, CAPES e CNPq pelo suporte financeiro por meio de auxlios pesquisa e bolsas de estudo e de produtividade, respectivamente.

Figura 6. Diagramas de duas interfaces SFC-MS - reproduzidos das ref. 37 e 38, com permisso de Wiley - VCH

restritor no apropriado. Uma limitao no uso de fonte API est na utilizao de uma composio programada (gradiente) da fase mvel em SFC39,40. H dois mecanismos fundamentais no processo de ionizao do soluto em efluente SFC presso atmosfrica. Primeiro, a ionizao pode ser executada na fase gasosa por meio de uma descarga Corona produzida com a aplicao de uma alta tenso na ponta de um eletrodo agulha, localizado na sada do restritor. Este processo denominado de ionizao qumica a presso atmosfrica (APCI) e requer uma vaporizao completa do efluente da coluna, a qual auxiliada pelo aquecimento do restritor e de um nebulizador de gs. O segundo mecanismo d-se por um processo de nebulizao sob alta tenso ou electrospray. A ionizao electrospray (ESI) d-se inicialmente pela formao de gotculas finas no aerossol na sada da coluna. Com a vaporizao constante destas microgotas, a presena de cargas provenientes dos analitos inicos ou de tampes cidos provoca uma grande repulso eletrosttica na superfcie da gota. No limite da estabilidade entre a tenso superficial e a repulso inica ocorre uma exploso coulmbica, a qual ocorre sucessivamente at o analito se encontrar ionizado em fase gasosa. Este processo particularmente interessante para macromolculas41-43. Sistemas comerciais Um indcio de que existe uma demanda em crescimento para instrumentos comerciais de SFC pode ser observado pelo nmero atual de fabricantes de equipamentos. Por exemplo, em 1994, apenas Hewlett Packard, Dionex, Suprex e Gilson tinham modelos de instrumentos disponveis no mercado. Em 1997, das quatro companhias iniciais, apenas a Gilson ainda se mantinha ativa na rea de SFC, porm, na companhia de outros seis fabricantes que, ou criaram os prprios modelos ou licenciaram dos primeiros. Juntos ofereciam oito modelos diferentes de equipamentos, sendo que todos

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REFERNCIAS
1. 2. 3. 4. 5. 6. 7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. Carrilho, E.; Tavares, M. C. H.; Lanas, F. M.; Quim. Nova 2001, 24, 509. Carrilho, E.; Lanas, F. M.; Cincia e Cultura, Sup. 1988, 40, 431. Miller Jr., T. E.; Davis, C. M.; Anal. Chem. 1988, 60, 1965. Lesellier, E.; Analusis 1999, 27, 241. Jentoft, R. E.; Gouw, T. H.; J. Chromatogr. Sci. 1970, 8, 138. Sie, S. T.; Rijnders, G. W. A.; Sep. Sci. Technol. 1967, 2, 729. Nixdorf, S. L.; Camara, C. A.; Mazo, L. H.; Oliveira, P. C.; Lanas, F. M.; J. Microcolumn Sep., no prelo. Tong, D. X.; Barnes, A. M.; Bartle, K. D.; Clifford, A. A.; J. Microcolumn Sep. 1996, 8, 353. Kohler, J.; Rose, A.; Schomburg. G.; J. High Resol. Chromatogr. 1988, 11, 191. Peaden, P. A.; Lee, M. L.; J. Chromatogr., A 1983, 259, 1. Shen, Y.; Lee, M. L.; Anal. Chem. 1998, 70, 737. Shoenmakers, P. J. Em Supercritical Fluid Chromatography; Smith, M., ed.; Royal Society of Chemistry: London, 1988. Smith, R. D.; Fulton, J. L.; Petersen, R. C.; Kopriva, A. J.; Wright, B. W.; Anal. Chem. 1986, 58, 2057. Campbell, R. M.; Lee, M. L.; Anal. Chem. 1986, 58, 2247. Hirata, Y.; Nakata, F.; Chromatographia 1986, 21, 627. Hensley, J. L.; McNair, H. M.; J. Liq. Cromatogr. Relat. Technol. 1986, 9, 1985. Green, S.; Bertsch, W.; J. High Resol. Chromatogr. 1988, 11, 414. Chester, T. L.; J. Chromatogr., A 1984, 299, 424. Smith, R. D.; Fjeldsted, J. C.; Lee, M. L.; J. Chromatogr., A 1982, 247, 241. Guthrei, E. J.; Schwartz, H. E.; J. Chromatogr. Sci. 1986, 24, 236. White, C. M.; Gere, D. R.; Boyer, D.; Pacholec, F.; Wong, L. K.; J. High Resol. Chromatogr. & CC 1988, 11, 94. Markides, K. E.; Fields, S. M.; Lee, M. L.; J. Chromatogr. Sci. 1986, 24, 254. Grob, K.; J. High Resol. Chromatogr. 1983, 6, 178. Olesik, S. V.; Pekay, L. A.; Chromatographia 1990, 29, 69.

25. Gere, D. R.; Board, R.; McManigill, D.; Anal. Chem. 1982, 54, 736. 26. Vindevogel, J.; Schuddinck, G.; Dewaele, C.; Verzele, M.; J. High Resol. Chromatogr. 1988, 11, 317. 27. Henry, C.; Anal. Chem. 1997, 69, 561A. 28. Peaden, P. A.; Lee, M. L.; J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 1982, 5, 179. 29. Sjoberg, P. J. R.; Markides, K. E.; J. Chromatogr., A 1999, 855, 317. 30. Erickson, B.; Anal. Chem. 1997, 69, 683A. 31. Smith, R. D.; Udseth, H. R.; Anal. Chem. 1987, 59, 13. 32. Chapman, J. R.; Rapid Commun. Mass Spectrom. 1988, 2, 6. 33. Berry, A. J.; Games, D. E.; Mylchreest, I. C.; Perkins, J. R.; Pleasance, S.; Biomed. Environ. Mass Spectrom. 1988, 15, 105. 34. Chester, T. L.; Pinkston, J. D.; Raynie, D. E.; Anal Chem. 1998, 70, 301R. 35. Pinkston, J. D.; Bowling, D. J.; Anal. Chem. 1993, 65, 3534. 36. Pinkston, J. D.; Hentschel, R. T.; J. High Resol. Chromatogr. 1993, 16, 269. 37. Berry, A. J.; Games, D. E.; Mylchreest, J. R.; Pleasance, S.; J. High Resol. Chromatogr. 1988, 11, 61. 38. Mertens, M. A. A.; Janssen, H-G. M.; Cramers, C. A.; Genuit, W. J. L; Velzen, G. J.; Dirkzwager, H.; Binsbergen, H.; J. High Resol. Chromatogr. 1996, 19, 17. 39. Fuchslueger, U.; Socher, G.; Grether, H-J.; Grasserbauer, M.; Anal. Chem. 1999, 71, 2324. 40. Tuomola, M.; J. Chromatogr., B: Biomed. Sci. Appl. 1998, 719, 25. 41. Carrot, M. J.; Jones, D. C.; Davidson, G.; Analyst 1998, 123, 1827. 42. Tyrefors, L. N.; Moulder, R. X.; Markides, K. E.; Anal. Chem. 1993, 65, 2835. 43. Sadoun, F.; Virelizier, H.; Arpino, P. J.; J. Chromatogr., A 1993, 647, 351. 44. Harris, C. M.; Anal. Chem. 2002, 74, 87A. 45. Bargmann, N.; Tambute, A.; Caude, M.; Analusis 1992, 20, 189. 46. Bargmannleyder, N.; Sella, C.; Bauer, D.; Tambute, A.; Caude, M.; Anal. Chem. 1995, 67, 952. 47. Chester, T. L.; Pinkston, J. D.; Anal. Chem. 2000, 72, 129R. 48. Lanas, F. M. Em Dekker Encyclopedia of Chromatography; Cases, J., ed.; Marcel Dekker Inc.: USA, 2000. 49. Tavares, M. C. H.; Vilegas, J. H. Y.; Lanas, F. M.; Phytochem. Anal. 2000, 11, 1.