Sensory, kimia dan perubahan bakteriologis selama cumi penyimpanan es (Todaropsis eblanae) T. Paarup 1, J.A. Sanchez1, A. 1 Moral, H.

Christensen 2, M. Bisgaard 2 dan L. Gram 3 1Instituto del Fr'o (CSIC), Departemen Ilmu dan Teknologi Produk Daging dan Daging dan Ikan dan Produk Perikanan, Ciudad Universitaria, Madrid, Spanyol, 2Department Mikrobiologi Hewan, Royal Hewan dan Universitas Pertanian, Frederiksberg, dan Lembaga Riset 3Danish Perikanan, Departemen Penelitian Seafood, c / o Technical University of Denmark, Lyngby, Denmark 2001/299: diterima 8 Oktober 2001, revisi 29 November 2001 dan diterima 19 Desember 2001 Metode dan Hasil: kaos dimasak dari seluruh individu dan memusnahkan ditolak setelah 10 dan 12 hari penyimpanan, masing-masing, karena off-bau amoniak. Tingkat produksi baik amonia dan trimetilamina tertinggi di seluruh banyak. Agmatine, yang hanya hadir dalam jumlah jejak dalam menangkap baru-cumi, meningkat pesat di kedua banyak. Utama mikroflora pada saat penolakan sensor cumi seluruh es termasuk Gram-negatif, motil dan batang non-fermentasi, yang psychrophilic dan memiliki persyaratan untuk NaCl. 16S analisis urutan rDNA mengidentifikasi strain sebagai milik Pseudoalteromonas genus. Shewanella putrefaciens, Pseudoalteromonas sp. dan Pseudomonas sp. mendominasi di manja memusnahkan cumi-cumi. Identifikasi strain dari perut dan kelenjar pencernaan baru-baru ini ditangkap cumi menunjukkan bahwa flora utama terdiri dari phosphoreum Photobacterium. Kesimpulan: pembusukan cumi es mungkin hasil dari kombinasi autolytic dan bakteri perubahan. Agmatine tampaknya menjadi indikator kesegaran yang sangat baik. Photobacterium phosphoreum dapat berkontribusi untuk pembusukan melalui kegiatan di kelenjar pencernaan, diikuti oleh difusi senyawa volatil dan amina ke lapisan. Signifikansi dan Dampak Kajian: Karena sifat psychrophilic dari phosphoreum P. dan sp Pseudoalteromonas., menyebar-plating dan inkubasi suhu rendah yang dianjurkan untuk evaluasi bakteriologis cumi es. PENDAHULUAN Penurunan stok ikan, mungkin berhubungan dengan over-fishing, telah menyebabkan peningkatan eksploitasi laut kurang dimanfaatkan sumber daya seperti cumi, yang urutan Teuthoidea (tanya) secara kuantitatif yang paling penting. Pada tahun 1996, cumi terdiri 32% dari total tangkapan dibandingkan dengan 2% pada tahun 1966 (FAO 1998), sesuai dengan kira-kira 3 dan 085 juta ton, masing-masing. Spesies yang paling berharga milik perintah Octopoda (gurita) dan Sepioidea (sotong), dan untuk keluarga
Loliginidae ('pantai cumi') dalam subordo Myopsida dari Teuthoidea. Namun, cumi-cumi samudera disebut adalah menarik dari sudut pandang komersial karena mereka kelimpahan. Spesies yang termasuk keluarga Ommastrephidae dianggap paling penting, meskipun mereka relatif keras dan elastis tekstur. Spesies tersebut terutama

mendarat beku karena mereka sering ditangkap oleh jarak jauh memancing. Namun demikian, lain keluarga cumi kelautan memiliki praktis tidak mendapat perhatian komersial, dan telah diperkirakan hanya 10% dari saham terdeteksi ditangkap (Guerra 1996). Alasan utama untuk hal ini adalah mungkin dispersi besar spesies ini samudera di laut, kurangnya pengetahuan tentang karakteristik teknologi, keberadaan spesies dengan kandungan amoniak yang sangat tinggi (Iida et al. 1992), dan rak pendek hidup-es.

Squid konsumsi terbatas di sebagian besar dunia, khususnya di Amerika Utara dan Eropa bagian utara, di mana komoditas ini terutama diusahakan sebagaimana beku (dilapisi tepung roti) cincin ditakdirkan untuk menggoreng ('a la Romana'). Pada sisi lain, jumlah yang cukup dari cumi yang dikonsumsi di timur dan Asia Tenggara, di mana berbagai cumi produk yang diperdagangkan, dan di Mediterania negara, di mana cumi sering diperdagangkan ungutted di es untuk persiapan rumah tangga dari berbagai hidangan.
Mikrobiologi ikan segar dan memanjakan telah dipelajari secara ekstensif, yang dikaji oleh Liston (1980), Hobbs dan Hodgkiss (1982) dan Gram dan Huss (1996), tetapi mikrobiologi data kualitatif pada cumi langka sebagai perubahan autolytic diyakini menjadi alasan utama untuk memburuknya kualitas sensori (LeBlanc dan Gill 1984). Sebagian besar studi tentang cumi dingin segar telah dilakukan pada terisolasi karakteristik sensorik (Ohmori et al 1975;. Learson dan Ampola 1977; Botta et al. 1979; Ke et al. 1979). Seperti penelitian terutama difokuskan pada warna kulit, yang merupakan parameter kualitas halus karena adanya kromatofora yang mudah pecah saat terkena post mortem untuk mengarahkan kontak dengan es, yang menyebabkan perubahan warna. Studi sensorik dan biokimia telah Gabungan dilakukan oleh Ke dkk. (1984, 1991), yang dijabarkan yang bermanfaat prosedur grading illecebrosus Illex segar berdasarkan Surat kandungan basa total volatile, trimetilamina dan lemak bebas asam, sebelumnya berkorelasi dengan hasil organoleptik, dan Yamanaka et al. (1987), yang terkait produksi biogenik amina dengan kualitas indrawi hemprichii Todarodes. Hanya beberapa studi telah dibahas sensorik, kimia dan mikrobiologi perubahan (Slabyj dan True 1981; Licciardello et al. 1985; Ohashi et al. 1991; Morales 1997), dan mikrobiologi penelitian terutama difokuskan pada total aerobik penting. Pemahaman yang lebih baik dari mekanisme pembusukan bisa menyebabkan langkah-langkah untuk meningkatkan-umur simpan, yang dapat merangsang daya jual cumi dingin segar. Dalam karya ini, sensorik, kimia dan bakteriologis

perubahan mantel cumi dipelajari selama penyimpanan es individu utuh dan memusnahkan. Beban mikrobiologi dan komposisi isi perut, kelenjar pencernaan dan jubah-cumi baru-baru ini tertangkap juga dipelajari. BAHAN DAN METODE Penyimpanan percobaan dan kondisi

Spesies cumi Todaropsis eblanae digunakan di masa sekarang studi. Itu tertangkap di sepanjang pantai Galicia (Spanyol) di musim dingin dan dibawa ke Instituto del Fr'o dalam es dalam 48 jam penangkapan tersebut. Dua banyak yang berasal dari hasil tangkapan yang sama disusun. Sebuah banyak menghancurkan budaya dibuat secara manual oleh memeras keluar jeroan, kepala dan lengan, dan cuci sebentar dalam dan luar permukaan mantel dengan air keran, sedangkan seluruh banyak tidak dikenakan terhadap manipulasi apapun. Semua banyak disimpan dalam es. Sampel dianalisis segera setelah tiba di laboratorium dan setelah hari 4, 7 dan 11 penyimpanan. Dengan demikian, titik sampling tercermin kali penyimpanan 2, 6, 9 dan 13 hari setelah menangkap. Cumi-cumi-rasio-es sekitar 2:1 (dilumatkan es air tawar) dan es baru ditambahkan pada reguler interval untuk mempertahankan rasio. Para individu yang terpisah dari es dengan kertas kasar, yang dihindari langsung kontak antara individu dan es tetapi diizinkan perjalanan lelehan-air, sebagai metode penyimpanan memungkinkan untuk efektif chilling dan melindungi kromatofora dari kerusakan fisik. Suhu penyimpanan diukur pada interval 3 jam oleh termokopel dimasukkan di dalam mantel rongga baik banyak dan di ruang dingin. Dua pijar dari tiap lot menjadi sasaran bakteriologis dan kimia analisis, dan tiga untuk analisis sensori, pada setiap titik sampling. Selain itu, dikumpulkan isi perut dari 10 individu menjadi sasaran bakteriologis analisis, sedangkan duplikat sampel kelenjar pencernaan dianalisis dengan metode kimia dan mikrobiologi di waktu kedatangan h (squid sekitar 48 dari waktu capture).
Sensory analisis Sensory analisis dilakukan, oleh enam sampai delapan panelis, pada pijar yang sebelumnya telah dikuliti, dicuci sebentar dalam air keran, ditempatkan dalam kantong plastik dan dimasak dalam air mendidih selama 30 menit setelah penyegelan. Parameter bau dari masak air, dan rasa dan tekstur sampel, yang diberikan poin pada skala 0-10, dengan 10 mengungkapkan kualitas optimal dan 4 batas penolakan. Namun, karena skala harus dipertimbangkan bipolar dalam hal tekstur, nilai 5 menyatakan apa yang panelis dianggap seperti biasa tekstur cumi, nilai yang lebih tinggi dan lebih rendah mengekspresikan lebih keras

tekstur dan lembut, masing-masing; batas penolakan itu 8 dan 2, masing-masing. Pijar yang telah dibekukan pada saat kedatangan cumi itu dimasukkan sebagai kontrol. Kimia Trimetilamina (TMA) dan oksida trimetilamina (TMAO) ditentukan dengan metode AOAC (1995) dan Bystedt et al. (1959), masing-masing. Amonia (NH3) dan urea ditentukan dengan menggunakan kit komersial (Boehringer Mannheim, Mannheim, Jerman). pH diukur dengan menggunakan Radiometer 93 PHM referensi pH meter (Radiometer, Copenhagen, Denmark). Analisis biogenik amina dilakukan dengan mencampurkan 25 g mantel otot dengan 50 ml 75% larutan asam trikloroasetat (Panreac). Sampel kemudian dihomogenkan, disentrifugasi selama 10 menit di 25 000 g, dan kemudian dilewatkan melalui nilon MFS lm 022 filter (Advantec MSF, Inc, Pleasanton, CA, USA). Konsentrasi amina biogenik ditentukan dalam model PerkinElmer 1022 HPLC (Perkin Elmer, Norwalk, CT, USA) dilengkapi dengan sebuah Pickering ALKIONTM pertukaran ion kolom (4 150 mm, , CA Pickering Labs, Inc, Mountain View, USA) dan Pickering PCX 3100 pasca-kolom sistem, dengan menggunakan o-phthalaldehyde (OPA, Pickering Labs) sebagai reagen derivatizing (Tracy et al 1995.). Mobile fase yang digunakan adalah yang komersial disediakan oleh Pickering Labs, dengan Polyamine Aplikasi Kit (0052-0040) untuk analisis amina biogenik: K-600 kalium fosfat buffer, K-563 fosfat kalium buffer dan K-130 regenerant kalium kolom. Sebuah metode gradien elusi (Pickering Labs, dengan sedikit. adaptasi (hasil tidak diterbitkan) untuk menentukan agmatine dan 2-etil-fenil-amine) telah diprogram dengan arus 08 ml menit-1 untuk tahap mobile dan 03 ml min-1 untuk derivatizing reagen. Detektor fluoresensi (PerkinElmer) panjang gelombang adalah 330 nm (eksitasi) dan 465 nm (emisi). Prosedur ini digunakan untuk menentukan enam biogenik amina biasanya diuji dalam makanan (Tapia-Salazar et al. 2000), ditambah agmatine dan 2-Phenylethylamine yang dihitung dibandingkan dengan standar eksternal berikut: agmatine garam sulfat (Sigma), dihidroklorida kadaverina (Sigma), histamin dihidroklorida (Sigma), 2-Phenylethylamine hidroklorida (Sigma), dihidroklorida putresin (Sigma), trihydrochloride spermidine (Sigma), spermine tetrahydrochloride dan hidroklorida tyramine (Sigma). Analisis bakteriologis Dari setiap kelenjar mantel dan pencernaan, 10 sampel g dihomogenisasi dengan 90 ml air pepton (01%) dalam stomacher (400 lab blender, Seward, London, Inggris) dan pengenceran desimal yang tepat disusun. Perut isi dikumpulkan dari 10 individu dalam Petri steril piring. Setelah manual pencampuran, 10 g diambil dan yang bersifat dilutif

dijelaskan di atas. Informasi non-selektif, indikatif atau selektif media digunakan untuk memantau perubahan flora bakteri selama penyimpanan. Spread-berlapis dingin Besi Agar Lyngby (ADSA Mikro) dilengkapi dengan 0A 5% NaCl (Panreac) dan diinkubasi pada 15 C selama 5 hari (Besi Agar dengan garam (IAS)) digunakan untuk jumlah piring aerobik. Media ini juga digunakan untuk menghitung bakteri bercahaya dengan mengamati piring di ruangan gelap. Tuangkan-berlapis, berlapis ganda Besi Agar, diinkubasi pada 20 C selama 3 hari, digunakan untuk penghitungan H2S-memproduksi bakteri. Pseudomonas spp. dicacah pada Cetrimide-Fucidin-Cephaloridine (CFC) agar (Oxoid), diinkubasi pada 20 C selama 48 jam Isolasi dan identifikasi Komposisi mikroflora ditentukan dengan mengisolasi dan mengidentifikasi 20% dari koloni dari IAS (15 C) piring. Koloni secara acak terisolasi dari pelat dengan suhu 30 "250 koloni mengambil semua koloni dari bagian dari piring. Sebelumnya identifikasi, koloni disubkultur di Veal Infusion Kaldu (0344 " 17A" 6, Difco, Detroit, Michigan, USA), ditambah dengan 0A 5% NaCl (VIBS) dan berlapis di IAS dan diinkubasi pada 15 C selama 18A "24 jam atau sampai pertumbuhan terlihat adalah diamati. Morfologi dan motilitas studi dilakukan pada murni budaya di VIBS tumbuh di 15 C dengan fase kontras mikroskop. Gram-reaksi diuji dengan metode-KOH (Gregersen 1978), sitokrom oksidase dengan metode Kovacs (1956) dan katalase pada cawan Petri steril menggunakan tetes H2O2 3%. Kecuali dinyatakan lain, berikut tes dilakukan pada 15 C dan reaksi dimonitor sampai 7 hari. Oksidatif atau fermentasi metabolisme glukosa dilakukan dalam medium Hugh dan Leifson (H & L) (Hugh dan Leifson 1953) dilengkapi dengan 0A 5% NaCl. Budaya yang menunjukkan tidak fermentasi atau reaksi oksidatif diuji dalam H & L, ditambah dengan air laut setengah-kekuatan buatan (ASW, MacLeod 1968), untuk mendukung pengasaman oleh bakteri laut, dan ekstra terbuka tabung, di mana pepton telah diganti dengan ((NH) 4) 2SO4, ditambahkan untuk mengizinkan asidifikasi oleh Pseudomonas sp. TMAO pengurangan dan produksi H2S diuji dengan metode Gram et al. (1987). Beberapa isolat diuji untuk ketahanan terhadap vibriostaticum (150 lg, 0 / 129 cakram, Oxoid) pada IAS, kemampuan untuk tumbuh tanpa NaCl dalam VIBS dan kemampuan untuk tumbuh di VIBS pada 1 C selama 21 hari inkubasi. Berdasarkan reaksi yang ditunjukkan pada Tabel 1, strain yang sementara diidentifikasi sesuai dengan Barrow dan Feltham (1993). Sebuah subset dari strain juga diuji untuk arginin

deaminasi (MA ller 1955) dan hidrolisis gelatin (Anon 1965) dan urea (Christensen 1946). Uji arginin adalah dilakukan di media dipersiapkan dengan ASW setengah kekuatan, sedangkan konsentrasi NaCl media gelatin dan urea telah disesuaikan untuk 1% (w / v). Inkubasi dilakukan pada 15 C sampai 7 hari kecuali gelatin, yang diinkubasi sampai 21 hari. Penentuan G +% C mol dan 16S rDNA gen analisis urutan G + C% mol dan urutan gen 16S rDNA ditentukan untuk 11 dan lima strain, masing-masing. Strain yang diisolasi dari cumi manja.

Kromosom DNA diekstraksi dan dimurnikan sebagai dijelaskan oleh Fonnesbech Vogel et al. (1997). Singkatnya, beberapa koloni bakteri yang baru-tumbuh dihentikan pada fosfat buffered saline (PBS) dan diobati dengan RNase. Setelah Gambaran dengan dodesil sodium sulfat (SDS), DNA diendapkan dengan isopropanol dan dicuci dua kali dengan icecold etanol. Setelah kering, DNA dilarutkan dalam Millipore PERUBAHAN SELAMA PENYIMPANAN es SQUID 943 2002 Masyarakat untuk Mikrobiologi Terapan, Jurnal Mikrobiologi Terapan,, 92 941-950 kualitas air. G + C% mol ditentukan menurut Fonnesbech Vogel et al. (1997) mengikuti prosedur dijelaskan oleh Mesbah et al. (1989). Sebuah strain Shewanella putrefaciens (ATCC 8071) dengan% G + C 45% adalah termasuk sebagai kontrol. Pembongkaran dilakukan Amplifikasi PCR Yang Dibuat dijelaskan Fonnesbech Vogel et al. (1997). Oligonukleotida untuk kedua Amplifikasi PCR dan Sekuensing disintesis menurut untuk chronology dan Posisi KESAWAN diberikan 16S rRNA Dewhirst et al. (1989) dan Paster dan Dewhirst (1988). PCR-amplified Fragmen dimurnikan PADA Kolom Microspin (Pharmacia Biotech, Piscataway, NJ, USA) dan siklus sequencing (Thermo sequenase primer berlabel neon siklus sequencing kit, Amersham, Little Chalfont, Inggris) PADA A.L.F. Sequencer (Pharmacia Biotech) menggunakan fluoresceinlabelled primer. Mencari chronology 16S rRNA adalah Dibuat dilakukan Fasta dan Blas menggunakan Sequence Wisconsin Analisis Paket (Genetika Computer Group, Madison, USA). Nukleotida chronology Yang dijelaskan Suami KESAWAN Laporan Artikel Baru telah disimpan Genbank Bawah aksesi AF293975 Nomor. HASIL Kondisi penyimpanan Rata-rata suhu dari individu-individu secara keseluruhan dan memusnahkan

adalah 0A 3 0A 1 C dan " 0A 1 0A 1 C, masing-masing; yang suhu ruang dingin di mana penyimpanan Percobaan yang dilakukan adalah dari 2A 7 0A 4 C. Shelf-life, karakteristik sensorik dan kimia dari manja cumi Evaluasi rasa, parameter sensorik dan bau air masak, oleh panelis rasa menunjukkan kehidupan rak10 dan 12 hari untuk seluruh banyak dan memusnahkan, masing-masing (Tabel 2). Sebagai penilaian sensori dilakukan pada hari 9 dan 13, batas rak-hidup tersebut diperoleh dengan interpolasi dan dengan demikian, dalam hal rasa, cumi seluruh dianugerahi skor 5 dan 08 pada hari 9, dan 13 masing-masing, dan memusnahkan cumi, 55 dan 33, masing-masing. Regresi linier antara titik-titik ini menunjukkan bahwa skor 4 (penolakan) di seluruh individu dan memusnahkan diperoleh pada hari 10 dan 12, masing-masing, dengan asumsi busuk yang dekat dengan linier antara hari 9 dan 13. Kebanyakan panelis mengeluhkan amoniak off-bau dan off-rasa di kedua banyak, dan lembut tekstur di seluruh banyak pada 13 hari. Diinterpolasi NH3-N konsentrasi pada akhir kehidupan rak-utuh dan memusnahkan cumi adalah 33 dan 24 mg 100 g-1, masing-masing, sementara TMAN meliputi 17 dan 12 mg 100 g-1. nilai pH 72 dan 73, masing-masing. Itu juga diasumsikan dalam kasus ini pembusukan mendekati linier antara hari 9 dan 13. Kimia perubahan selama penyimpanan Konsentrasi awal TMAO-N di dalam mantel adalah 20 mg 100 g-1. Nilai pH awal 68, yang meningkat secara bertahap untuk 75 dan 74 di seluruh dan memusnahkan banyak, masing-masing (hasil tidak ditampilkan). NH3 dan TMA produksi meningkat dari hari 2 di cumi utuh, dan laju produksi senyawa ini meningkat di kedua banyak dari hari ke hari 9 13 (Gbr. 1). Produksi NH3 dan TMA lebih rendah pada memusnahkan cumi selama penyimpanan seluruh periode, tetapi pola evolusi adalah serupa dengan seluruh banyak. Pada hari 10, konsentrasi NH3 dan TMA dalam memusnahkan banyak meliputi 61 dan 59%, masing-masing, dari konsentrasi terdeteksi di seluruh banyak. Konsentrasi urea tetap tidak berubah pada sekitar 10 mg 100 g-1 di kedua banyak di seluruh penyimpanan. The agmatine biogenik amina, yang hanya hadir dalam jumlah jejak dalam cumi-cumi segar, meningkat pesat di kedua banyak selama penyimpanan, dari kurang dari 1 sampai 120 mg 100 g-1 dalam 9 hari (Gbr. 2). Lain biogenik amina, kadaverina, tyramine dan putresin, terdeteksi di squid keseluruhan pada hari 13 (Gbr. 2). Histamin dan spermine tidak pernah melebihi 2 dan 5 mg 100 g-1, masing, dan hanya melacak jumlah amina-fenil-etil dan spermidine ditemukan selama periode penyimpanan seluruh

untuk kedua banyak (data tidak ditampilkan). Bakteriologis perubahan Awalnya, gutting dan mencuci menyebabkan pengurangan log 1-15 unit dari jumlah cumi utuh, dengan pengecualian bakteri bercahaya di mana konsentrasi awal 103 cfu g-1 (Gbr. 3). Luminous bakteri meningkat menjadi 105 cfu-g 1 di baik secara keseluruhan dan memusnahkan cumi setelah 13 hari penyimpanan es. Pada hari itu, aerobik piring jumlah dan jumlah H2S produsen dalam memusnahkan banyak adalah 5 107 dan 1 107 cfu g-1, masing. Tingkat di seluruh cumi lebih rendah pada 107 dan 106 upk g-1. Pseudomonas jumlah itu, pada umumnya, lebih rendah dibandingkan jumlah produsen H2S di kedua banyak. Identifikasi flora bakteri pada awal dan akhir sampling poin Sebuah kelompok heterogen bakteri Gram-negatif diisolasi dari cumi segar (Tabel 3). Terkecuali flora mendominasi kemudian diidentifikasi sebagai Pseudoalteromonas sp., semua isolat dialokasikan berdasarkan skema sederhana dari Tabel 1. The mendominasi flora termasuk motil, Gram-negatif, non-fermentasi batang dengan reaksi oksidase positif dan katalase. Ini adalah tidak non-alkali menghasilkan Pseudomonas atau Alcaligenes spp., karena mereka memiliki persyaratan untuk NaCl. G + C % mol bervariasi antara 398 dan 412% selama 11 strain diuji. Urutan gen 16S rDNA analisis diidentifikasi ini strain sebagai Pseudoalteromonas (lihat di bawah). Sebagai bagian dari karakterisasi kualitatif dari isolat dari manja cumi-cumi, yang berasal dari percobaan ini dan dua unpublished percobaan, 96% dari 86 Pseudoalteromonas dugaan sp. terisolasi dari gelatin cair manja cumi dan hanya 3% dimetabolisme arginin. Reaksi ini, bersama-sama dengan reaksi nitrat negatif dan ketat aerobik pertumbuhan, berada dalam perjanjian dengan deskripsi genus (Gauthier et al 1995.). Selain itu, 92% menghasilkan NH3 dari urea (Paarup, data tidak dipublikasikan). Selama penyimpanan es cumi utuh, ini Pseudoalteromonas dan strain diidentifikasi sebagai Photobacterium phosphoreum menjadi bakteri dominan, akuntansi untuk 85% dari flora. Dalam cumi memusnahkan, flora lebih heterogen muncul, berisi jumlah yang sama putrefaciens Shewanella, Pseudomonas sp. dan Pseudoalteromonas (Tabel 3). Juga tidak Pseudoalteromonas sp. juga P. phosphoreum terdeteksi oleh isolasi koloni dari agar-agar Besi diinkubasi pada 20 C, mereka diisolasi hanya dari piring menyebar, yang menunjukkan bahwa mereka tidak bertahan kontak dengan agar-agar hangat. Moraxella / Psychrobacter, Vibrio dan Aeromonas sp. semua terdeteksi dalam persentase lebih rendah pada akhir penyimpanan periode cumi memusnahkan, yang

tidak ada di seluruh es hewan. Identifikasi Pseudoalteromonas oleh gen analisis rDNA urutan 16S Urutan diperoleh untuk wilayah 28-1492 (coli coli posisi) gen 16S rRNA. Urutan adalah 1456 basis panjang. Kelima jenis sequencing adalah identik. Pencarian di database GenBank dan EMBL 997 menunjukkan kesamaan% untuk Pseudoalteromonas [gracilis] (gracilis bukan nama spesies yang valid), dengan GenBank nomor aksesi AF038846. Tinggi kesamaan untuk lainnya strain Pseudoalteromonas dari% antara 98 dan 99 adalah juga ditemukan; 97-98% kemiripan ditemukan Pseudoalteromonas Antartica strain, dan antara 95 dan 96% kemiripan ditemukan terhadap jenis lainnya terdaftar sebagai Pseudoalteromonas sp. dan untuk citrea Pseudoalteromonas dan aurantia Pseudoalteromonas. Bakteriologis karakteristik perut isi dan bakteriologis dan kimia karakteristik kelenjar pencernaan dari baru-baru ini tertangkap cumi (48 h) Berat rata-rata kelenjar pencernaan adalah 30 9 g, yang dibuat naik 13% dari berat total dari individu-individu secara keseluruhan. Nilai pH (68) dan urea (74 mg 100 g-1) tidak berbeda dari orang-orang dari mantel, tapi konsentrasi amonia dan TMA kira-kira lima dan 18 kali lebih tinggi, masing-masing. Juga, isi dari amina biogenik jauh lebih tinggi daripada di mantel (hasil tidak ditampilkan). Hitungan aerobik piring dari isi perut 48 jam setelah penangkapan itu 106 upk g-1. Photobacterium phosphoreum mendominasi flora bakteri, diikuti oleh strain diidentifikasi sebagai Pseudoalteromonas dan Pseudomonas sp. Beban mikroba kelenjar pencernaan adalah sekitar satu log lebih rendah dari isi perut unit, dan semua koloni terisolasi diidentifikasi sebagai phosphoreum P. (data tidak ditampilkan). DISKUSI Es cumi manja cepat dalam waktu kurang dari dua minggu. Gutting dari cumi diperbolehkan rak-hidup untuk diperpanjang oleh sekitar dua hari, yang tidak dalam perjanjian dengan Park dan Hur (1990), yang bekerja hanya pada subjek sejauh diketahui. Ini penulis melaporkan rak-hidup Loligo vulgaris dari 10-12 hari, independen gutting. Sebaliknya, ekstensi mirip untuk kisaran satu sampai enam hari dilaporkan untuk ikan berbagai spesies (Huss dan Asenjo 1976). Kehadiran amoniak off-bau adalah sesuai dengan laporan lainnya pada karakteristik sensor cumi manja (Botta et al 1979;. Ke et al 1984.). Selain itu, NH3 telah

terbukti menjadi indikator yang sangat baik kualitas squid (Illex illecebrosus) menurut LeBlanc dan Gill (1984), yang disebabkan produksi untuk otolisis karena kenaikan linier selama periode penyimpanan secara keseluruhan, dengan menggunakan metode yang sama seperti dalam karya ini. Onset cepat produksi NH3 pada sel bakteri rendah menunjukkan kepadatan otolisis yang menyebabkan produksi selama sembilan hari pertama penyimpanan dalam karya ini. The perubahan dalam tingkat produksi setelah sembilan hari penyimpanan, khususnya pada individu secara keseluruhan, menunjukkan bakteri kontribusi. Demikian pula, Licciardello et al. (1985) diamati peningkatan eksponensial akhir NH3 dalam Loligo seluruh es pealei. Para penulis ini melaporkan konsentrasi 29 mg NH3-N 100 g-1 dalam sampel kualitas sensori marjinal, yang sesuai dengan tingkat dalam karya ini. Meskipun bukti utama akan memerlukan pemantauan kelenjar pencernaan selama periode penyimpanan secara keseluruhan, tinggi isi awal NH3 membuat difusi dari kelenjar ke mantel selama penyimpanan kemungkinan. Dengan demikian, LeBlanc dan Gill (1984) terdeteksi konsentrasi NH3 dua kali lebih tinggi di bagian mantel yang telah berubah warna melalui kontak langsung dengan kelenjar. Selain itu, difusi exoenzymes autolytic dari kelenjar mantel telah diusulkan sebelumnya oleh Moral et al. (1998) berdasarkan pada tingkat lebih tinggi dari asam amino bebas dalam pijar dari seluruh individu daripada yang memusnahkan selama 13 hari penyimpanan. Difusi mungkin juga menjelaskan tingkat sedikit lebih tinggi dari TMA ditemukan di seluruh banyak dibandingkan dengan memusnahkan banyak. Tingkat dilaporkan dalam penelitian ini mirip dengan 13 mg-N 100 g-1 dilaporkan oleh Licciardello et al. (1985). Jumlah keseluruhan bakteri terlalu rendah untuk menjelaskan TMA produksi (Gram dan Huss 1996), tetapi keberadaan dari ceruk untuk bakteri yang menghasilkan enzim menyebar ke daging tidak dapat dikesampingkan. Onset awal produksi agmatine menunjukkan suatu autolytic mekanisme, tetapi kenyataan bahwa hal itu dihasilkan oleh dekarboksilasi dari arginin menunjukkan keterlibatan dekarboksilase aktivitas bakteri. Amina ini tampaknya menjadi kesegaran baik indeks dalam cumi-cumi, yang dalam perjanjian dengan et al Yamanaka. (1987). Munculnya kadaverina, putresin dan tyramine antara hari sembilan dan 13 mendukung pandangan bahwa aktivitas bakteri berkontribusi busuk di penyimpanan akhir panggung. Kadaverina dan putresin memiliki keduanya telah disarankan sebagai indikator busuk cumi al (et Takagi 1971.; Yamanaka et al. 1987). Peran kemungkinan agmatine di keracunan oleh amina biogenik tidak diketahui, tetapi menurut untuk Hala'sz et al. (1994), mungkin bertindak sebagai keracunan histamin potentiator bersama kadaverina dan putresin. Namun,

rendahnya tingkat histamin terdeteksi selama ini percobaan membuat masalah keracunan tersebut dalam cumi-cumi tidak relevan. Pseudoalteromonas adalah genus laut (Baumann et al 1984.; Gauthier et al. 1995) dan sejauh diketahui, ini adalah yang pertama Laporan menghubungkan organisme untuk pembusukan makanan laut laut. Genus ini diciptakan oleh Gauthier et al. (1995) yang termasuk semua spesies Alteromonas dengan pengecualian A. macleodii. van Spreekens (1977) terisolasi shrimpspoiling beberapa strain dengan 'Alteromonas' khas reaksi, yang mungkin telah Pseudoalteromonas. Pseudoalteromonas spp. adalah antagonistik dan menghasilkan bakteriostatik dan bacteriolytic senyawa (Nair dan Simidu 1987; Holmstro M dan Kjelleberg 1999) serta siderophores besi-mengikat (Reid et al. 1993). Sifat semacam mungkin telah terlibat dalam Surat dominasi dalam cumi-cumi utuh, tetapi mereka tidak menjelaskan kompleks mikrobiologi gambar dalam individu memusnahkan. Urease kegiatan di sp Pseudoalteromonas. dapat berkontribusi untuk amonia akumulasi akhir di kedua utuh dan memusnahkan cumi mana nomor yang sama yang terdeteksi. Dominasi phosphoreum P. dalam pencernaan kelenjar dan perut mungkin adalah alasan bagi kehadiran bakteri ini di seluruh cumi manja. Bahkan lebih tinggi nomor (107-108) dari bakteri ini telah dijelaskan dalam usus isi cod (van Spreekens 1974;. Dalgaard et al 1993). Ini organisme-mikro, yang menghasilkan sejumlah besar TMA, adalah organisme busuk khusus modifiedatmospheredikemas cod fillet (Dalgaard et al 1993.; Dalgaard 1995). Beberapa studi telah menunjukkan bahwa 107 g cfu) 1 diperlukan untuk menghasilkan tingkat terdeteksi TMA dan Oleh karena itu, tingkat terakhir dari 106 cfu-g 1 dari bakteri ini terdeteksi di dalam mantel dari jauh tidak mungkin memiliki berkontribusi pada produksi senyawa ini. Hal ini mungkin bahwa pertumbuhan kelenjar pencernaan, di mana awal tingkat lebih tinggi, disebabkan TMA produksi yang kemudian, oleh difusi, memasuki mantel. Photobacterium phosphoreum juga mungkin terlibat dalam produksi agmatine, sejak awal hasil yang diperoleh dalam sistem model telah menunjukkan bahwa pameran kuat aktivitas dekarboksilase arginin (Paarup, data tidak dipublikasikan). Juga, arginin prekursor berlimpah dalam keadaan bebas di squid (Suyama dan Kobayashi 1980). Banyak spesies cumi-cumi memiliki photophores (organ cahaya) dari simbiotik jenis berdasarkan emisi cahaya dari P. phosphoreum (Guerra 1992), dan spesies tersebut dapat menunjukkan pola dipercepat busuk. Tidak adanya phosphoreum P. di tuangkan agar-agar besi berlapis sesuai dengan Dalgaard et al. (1997).

Putrefaciens Shewanella tidak mungkin memainkan penting peran dalam busuk dari jauh, dengan tingkat akhir sekitar 106 upk g-1, karena konsentrasi 108-109 diperlukan untuk menghasilkan off-bau di jus cod (Jrgensen dan Huss 1989). Demikian pula, Pseudomonas spp. adalah dari kecil pentingnya dalam busuk dari jauh, dan akhir konsentrasi 107 cfu-g 1 di petak memusnahkan sangat rendah dibandingkan dengan cfu 108-109 g-1 diperlukan untuk memanjakan dingin ikan (Gram et al 1989.). Sebagai kesimpulan, gutting dari eblanae T. memperpanjang kehidupan raksekitar dua hari dan mengurangi produksi amonia dan TMA. Agmatine produksi terjadi pada tahap penyimpanan awal. Untuk alasan yang sama, amina ini tampaknya menjadi indikator kesegaran yang sangat baik. Plate count metode berdasarkan menuangkan-plating (yaitu menggabungkan sampel di mencair agar, 45 C hangat) adalah tidak sesuai untuk penghitungan mikroflora cumi sejak psychrophilic, peka panas bakteri, yang merupakan sebagian besar flora pembusukan, akan hilang oleh seperti metode. Pseudoalteromonas sp. selalu hadir dalam manja T. eblanae. Kinetika pertumbuhan dan potensi pembusukan / aktivitas kuantitatif yang paling penting mikro-organisme terisolasi dari cumi manja saat ini sedang diselidiki di model sistem.