Ingeniera Sanitaria Bioensayo semillas de lechuga

INRODUCCION
El bioensayo de toxicidad con semillas de lechuga (Lactuca sativa) es una prueba esttica de toxicidad aguda (120 horas de exposicin) en el que se pueden evaluar los efectos fitotxicos de compuestos puros o de mezclas complejas en el proceso de germinacin de las semillas. Como puntos finales para la evaluacin de los efectos fitotxicos, se determina la inhibicin en la germinacin y la inhibicin en la elongacin en la raz. Es importante destacar que durante el perodo de germinacin y los primeros das de desarrollo de la plntula ocurren numerosos procesos fisiolgicos en los que la presencia de una sustancia txica puede interferir alterando la supervivencia y el desarrollo normal de la planta, siendo por lo tanto una etapa de gran sensibilidad frente a factores externos adversos. Si bien L. sativa no es una especie representativa de ecosistemas acuticos, la informacin generada a partir de esta prueba de toxicidad proporciona datos acerca del posible efecto de los contaminantes en las comunidades vegetales cercanas a las mrgenes de cuerpos de agua contaminados, siendo tambin una especie interesante de considerar por su importancia desde el punto de vista hortcola. Por otra parte, es de fcil y rpida germinacin por lo que es posible desarrollar la prueba en pocos das. Este bioensayo de toxicidad ha sido recomendado y aplicado por diferentes organismos de proteccin ambiental para la evaluacin eco toxicolgica de muestras ambientales y compuestos puros, adems de la evaluacin del efecto fitotxico de plaguicidas sobre especies no blanco, necesarios para el registro de estos compuestos (OECD, 1984; Wang, 1987; USEPA, 1989). En la incorporacin de esta prueba en una batera de bioensayos es importante considerar el compromiso entre la sensibilidad de la especie L. sativa, el reducido tiempo de exposicin de la prueba con semillas, los bajos costos asociados y que no requiere equipamiento sofisticado, en particular en la aplicacin a muestras ambientales o en el monitoreo de procesos de detoxificacin, saneamiento, control de efluentes. Objetivo Determinar la toxicidad de las muestras de agua utilizando la germinacin de semillas de lechuga (Lactuca sativa).

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Ingeniera Sanitaria Bioensayo semillas de lechuga 1. Materiales 4 placas de Petri (de plstico de 100 x 15 mm) 80 semillas de lechuga. 8 discos de papel absorbente, cortados para encajar dentro de las placas Petri (2 por placa). 4 pipetas para transferencia (10 ml) Una probeta (cilindro graduado) de 100 ml. 4 cuadrados de papel de estao (lo suficientemente grandes como para envolver las placas Petri) Cinta adhesiva Pinzas Mondadientes. Regla Agua embotellada no carbonatada, para el control normal. Solucin madre de sal para el control positivo. 2 botellas para las muestras, de 1 litro cada una, etiquetadas diciendo Muestra #1 y Muestra #2. 2. Preparacin de las muestras. a. Control normal.- Para cada experimento, es necesario saber cmo crecern o reaccionarn las semillas de lechuga cuando el agua no est contaminada por substancias txicas. Los controles Normales, o Negativos son muestras especiales de agua que no producen reacciones txicas pues el agua es de buena calidad. Para el control normal se har uso de agua envasada. b. Control positivo.- Las soluciones de control positivo estn diseadas para obtener resultados similares de los que se obtendran con agua contaminada. Se preparara una serie de soluciones de agua salada, utilizando sal comn de mesa (NaCl). Estas soluciones nos permitirn observar cmo reaccionan las semillas al agua contaminada. c. Solucin madre.- Esta solucin consta de 11 gramos de sal comn diluida en agua envasada no carbonatada. d. Muestra 1.- La muestra 1, ser el agua de rio, la cual ha sido recogida del rio Rmac en la interseccin con la Av. Faucett. e. Muestra 2.- Esta muestra ser el agua potable, el cual se recoger del cao.

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Ingeniera Sanitaria Bioensayo semillas de lechuga 3. Desarrollo de la prueba. Colocar en cada caja Petri dos discos de papel de filtro Marcar correctamente cada caja con la dilucin correspondiente, as como la fecha y hora de inicio y trmino del bioensayo Saturar el papel de filtro con 4 o 5 ml de la dilucin evitando que se formen bolsas de aire Con la ayuda de una pinza, colocar cuidadosamente 20 semillas, dejando espacio suficiente entre las semillas para permitir la elongacin de las races. Tapar las placas Petri y envolverlas con papel estao o aluminio, luego resguardarlas en un lugar fresco y seguro. Terminado el perodo de exposicin (120 horas), se proceder a contar y apuntar el nmero de semillas germinadas en cada placa. Se saca cada semilla germinada, mide y apunta el largo de cada raz en una hoja de datos.

4. Clculos.

Largo promedio

Largo total N semillas germinadas

% de variacin en crecimiento de la raz

Largo total de la muestra

Largo prom. Del control normal

Largo promedio del control normal

X 100

% de variacin en la germinacin

# Semillas germinadas muestra

#semillas germinadas Control normal

X 100

Largo promedio del control normal

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Ingeniera Sanitaria Bioensayo semillas de lechuga 5. Resultados. Los resultados, tanto de las semillas germinadas as como de la longitud de estas, en cada muestra se muestran en el siguiente cuadro. As como el promedio y la variacin del crecimiento de las races en comparacin a la muestra del control normal. Control Agua Normal Positivo Rio (M1) Potable (M2) 31.0 9.0 29.0 20.0 28.0 9.0 27.0 16.0 23.0 9.0 24.0 17.0 23.0 8.0 26.0 23.0 25.0 11.0 25.0 20.0 20.0 11.0 26.0 19.0 21.0 11.0 24.0 21.0 15.0 8.0 28.0 19.0 19.0 9.0 29.0 22.0 25.0 8.0 26.0 19.0 25.0 7.0 23.0 9.0 28.0 12.0 26.0 4.0 25.0 7.0 18.0 0.0 19.0 9.0 20.0 0.0 24.0 6.0 23.0 0.0 21.0 0.0 0.0 0.0 20.0 0.0 0.0 0.0 28.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 23.3 8.9 -61.7 -16.7 24.3 4.3 -16.7 17.4 -25.4 -33.3

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 PROMEDIO Long. Raz Germinacin

6. Conclusiones. El agua de las muestras 1 muestra una diferencia positiva de crecimiento con respecto al control normal, esto puede ser debido a la presencia de nutrientes, los cuales han sido favorables para la germinacin y crecimiento de las semillas. El control positivo es agua con una sustancia que es txica para la semilla de lechuga ya que las races crecieron un 33 % menos que el agua pura (control normal).

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7. Panel fotogrfico.

Probeta graduada de 100 ml.

Pipetas de transferencia de 10 ml

Placas Petri plsticas y semillas

Placas Petri y papel absorbente

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Soluciones

Control normal (agua envasada)

Solucin madre

Control positivo

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Muestra 1 (agua de rio)

Muestra 2 (agua potable)

Distribucin de las semillas en las placas Petri.

Envolviendo las placas con papel aluminio.

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