Disciplina de Gentica Humana - Monitora: Scheila Seady.

HIPERMETILAO E CNCER Epigentica qualquer mudana da expresso de um gene sem que ocorra alterao estrutural na seqncia de DNA. A metilao o principal fenmeno epigentico pelo qual um gene silenciado. Ele se d pela adio covalente de um grupo metila, que transferido de um doador (S-adenosilmetionina) citosina presente na estrutura do DNA. Essa reao catalisada pela DNA-metiltransferase. Na maioria dos mamferos (incluindo o ser humano), dentre todas as bases que formam o DNA somente a citosina pode sofrer metilao. Locais particularmente susceptveis so os dinucleotdeos CpG, bases citosina e guanina adjacentes. A maioria desses dinucleotdeos ento em pequenas regies chamadas de ilhas CpG, que em clulas normais esto protegidas da adio de metila. Essas ilhas CpG so encontradas em todos os genes em regies ativas, os promotores, que so seqncias regulatrias presentes na extremidade 5 do DNA logo antes do incio do gene que ser transcrito. Se ocorrer metilao, o promotor silenciado, interrompendo a transcrio, e conseqentemente, a expresso gnica. Alm da metilao do DNA, a modifio da estrutura das histonas (protenas associadas molecula de DNA e que determinam a intensidade da compactao da cromatina) tambm considerada importante no silenciamento de genes. Uma vez adicionado o radical metila na citosina, ocorre a deacetilao das histonas, tornando a cromatina mais condensada e, portanto inacessvel aos processos de transcrio. Vale lembrar que o silenciamento de genes atravs de metilao nem sempre acarreta problemas. Processos como a Inativao do X e o Imprinting Genmico ocorrem pela adio de metila que inativa determinados genes, sendo esses eventos normais e indispensveis vida humana. Portanto, a metilao um importante meio de regulao da expresso gnica. Outra funo normal desse tipo de alterao epigentica a proteo do genoma contra invaso de seqncias de DNA vindas de fora do organismo, como DNA viral, que inativado por adio de metila. Por outro lado, existem algumas situaes em que a metilao contribui para processos patognicos, dentre eles o mais amplamente estudado o cncer. Hoje, considera-se que a hipermetilao do DNA um dos principais eventos responsveis por iniciar a maioria das formaes tumorais. So vrias as maneiras como a epigentica age na carcinognese: Metilao exagerada nas ilhas CpG: a hipermetilao nas regies promotoras, como j foi mencionado, diminui a expresso do gene afetado. Em muitos casos, essa regio silenciada um Gene Supressor Tumoral, que deixam de fazer a regulao negativa do ciclo celular, iniciando um processo neoplsico. O silenciamento devido metilao excessiva das ilhas CpG do DNA, associada a uma configurao de cromatina fechada e a perda de acesso a fatores de transcrio tem sido visto como importante mecanismo molecular alternativo para a perda de funo dos genes supressores tumorais, que uma das principais classes de gene responsveis pelo incio dos processos neoplsicos. Um exemplo disso a hipermetilao da regio 5 do gene RB ocasionado um silenciamento transcricional e provocando, entre outros tumores, o Retinoblastoma. Ainda no est bem esclarecido o que leva ao aumento da metilao nas ilhas CpG de determinadas clulas. O que se observa uma ocorrncia aumentada de hipermetilao em clulas mais velhas ou que sofreram ao de fatores ambientais como a radiao, o fumo, o nquel, entre outros agentes qumicos diversos.

Pontos quentes de mutao: quando a citosina metilada ela se transforma na 5metilcitosina, que muito instvel e tem tendncia a sofrer desaminao espontnea. O produto da desaminao ser uma timina que tomar o lugar que era ocupado pela citosina, ou seja, acontecer uma mutao pontual (troca de um par de bases), onde havia o par C-G haver o par T-A. Esse tipo de mutao pode alterar a funo dos produto dos oncogenes ou dos genes supressores de tumor. Instabilidade cromossmica em regies hipometiladas: a importncia da hipermetilao na carcinognese j amplamente aceita, todavia a contribuio de reas de citosina pouco metiladas na formao de tumores ainda est sendo melhor investigada. Acredita-se que a hipometilao seja fonte de instabilidade cromossmica, modificando a expresso dos proto-oncogenes, transformando-os em oncogenes.

Diante da importncia da metilao na formao do cncer, torna-se essencial a sua deteco precoce, bem como a sua mensurao. Alguns mtodos j foram desenvolvidos: Enzimas sensveis metilao: atuam quebrando o DNA nos locais em que h metilao. Esses fragmentos so submetidos a um gel de eletroforese e ento se torna possvel a identificao do gene silenciado. Esse mtodo tem uma srie de desvantagens, entre elas a necessidade de muito tempo para sua realizao e a grande quantidade de amostra que deve ser utilizada. PCR: um mtodo mais sensvel que detecta reas no metiladas do DNA. Como esse tipo de reao amplifica a amostra atravs do uso de primers, o teste requer quantidade bem menor de amostra de DNA. Por outro lado, existe uma limitao desse mtodo, pois somente genes j conhecidos podem ser avaliados, o que significa que poucas ilhas CpG podem ser investigadas atualmente. PCR metilao especfica: um mtodo mais recente que utiliza sdio dissulfito para converter toda a citosina no metilada no DNA em uracil. Como no DNA normal no existe uracil fica fcil a mensurao. Uma vez que a metilao um processo epigentico, tem o potencial de ser revertido. As drogas mais conhecidas so a 5-azacytidine (5-aza-CR) e a 5-aza-2-deoxycytidine (5-aza-CdR). Ambas so potentes inibidoras da metilao do DNA. Seu modo de ao ainda no foi bem elucidado, mas acredita-se que seja pela incorporao de anlogos da citosina no DNA e no RNA, mesmo mecanismo que as torna drogas perigosas, se mal administradas. Elas podem ter efeitos citotxicos e mutagnicos se utilizadas em doses elevadas. Importante lembrar que esses agentes qumicos no tm ao especfica, ou seja, acabam desmetilando genes que deveriam permanecer silenciados, o que provoca conseqncias importantes no indivduo. Uma das grandes expectativas do futuro a elaborao de medicamentos mais seletivos, capazes de reverter somente o processo de metilao responsvel por doenas. Bibliografia recomendada: 1. Thompson & Thompson. Gentica Mdica. 6a. ed. 2002 2. De Vita. Principles e Practice of Oncology. 5. ed 1997 3. Antequera F, Bird A. Number of CpG islands and genes in human and mouse. 1993 4. Gerda E, Jones AP. Epigenetica in human disease and prospects for epigenetic therapy. Maio/2004. 5. Jones AP, Baylin SB. The fundamental role of epigentics event in cancer. Junho/2002 6. Pufulete M. Methyl groups at play. 2001