CAPTULO I Bacteria

Las bacterias son microorganismos unicelulares que presentan un tamao de algunos micrmetros de largo (entre 0,5 y 5 m, por lo general) y diversas formas incluyendo esferas, barras y hlices. Las bacterias son procariotas y, por lo tanto, a diferencia de las clulas eucariotas (de animales, plantas, etc.), no tienen ncleo ni orgnulos internos. Generalmente poseen una pared celular compuesta de peptidoglicano. Muchas bacterias disponen de flagelos o de otros sistemas de desplazamiento y son mviles. Del estudio de las bacterias se encarga la bacteriologa, una rama de la microbiologa.

Escherichia coli aumentada 25.000 veces.

Las bacterias son los organismos ms abundantes del planeta. Son ubicuas, encontrndose en todo hbitat de la tierra, creciendo en el suelo, en manantiales calientes y cidos, en desechos radioactivos, en las profundidades del mar y de la corteza terrestre. Algunas bacterias pueden incluso sobrevivir en las condiciones extremas del espacio exterior. Se estima que hay en torno a 40 millones de clulas bacterianas en un gramo de tierra y un milln de clulas bacterianas en un mililitro de agua dulce. En total, se calcula que hay aproximadamente 51030 bacterias en el mundo. Las bacterias son imprescindibles para el reciclaje de los elementos, pues muchos pasos importantes de los ciclos biogeoqumicos dependen de stas. Como ejemplo cabe citar la fijacin del nitrgeno atmosfrico. Sin embargo, solamente la mitad de los filos conocidos de bacterias tienen especies que se pueden cultivar en el laboratorio, por lo que una gran parte (se supone que cerca del 90%) de las especies de bacterias existentes todava no ha sido descrita. En el cuerpo humano hay aproximadamente diez veces tantas clulas bacterianas como clulas humanas, con una gran cantidad de bacterias en la piel y en el tracto digestivo. Aunque el efecto protector del sistema inmune hace que la gran mayora de estas bacterias sea inofensiva o beneficiosa, algunas bacterias patgenas pueden causar enfermedades infecciosas, incluyendo clera, sfilis, lepra, tifus, difteria, escarlatina, etc. Las enfermedades bacterianas mortales ms comunes son las infecciones respiratorias, con una mortalidad slo para la tuberculosis de cerca de dos millones de personas al ao
1

Resea Histrica
Las primeras bacterias fueron observadas por Anton van Leeuwenhoek en 1683 usando un microscopio de lente simple diseado por l mismo.Inicialmente las denomin animalculos y public sus observaciones en una serie de cartas que envi a la Royal Society. El nombre de bacteria fue introducido ms tarde, en 1828, por Ehrenberg. Deriva del griego -, bacterion -a, que significa bastn pequeo.

Enfermos de clera.

Louis Pasteur demostr en 1859 que los procesos de fermentacin eran causados por el crecimiento de microorganismos, y que dicho crecimiento no era debido a la generacin espontnea, como se supona hasta entonces. (Ni las levaduras, ni los mohos, ni los hongos, organismos normalmente asociados a estos procesos de fermentacin, son bacterias). Pasteur, al igual que su contemporneo y colega Robert Koch, fue uno de los primeros defensores de la teora germinal de las enfermedades infecciosas. Robert Koch fue pionero en la microbiologa mdica, trabajando con diferentes enfermedades infecciosas, como el clera, el ntrax y la tuberculosis. Koch logr probar la teora germinal de las enfermedades infecciosas tras sus investigaciones en tuberculosis, siendo por ello galardonado con el premio Nobel en Medicina y Fisiologa, en el ao 1905. Estableci lo que se ha denominado desde entonces los postulados de Koch, mediante los cuales se estandarizaban una serie de criterios experimentales para demostrar si un organismo era o no el causante de una determinada enfermedad. Estos postulados se siguen utilizando hoy en da. Aunque a finales del siglo XIX ya se saba que las bacterias eran causa de multitud de enfermedades, no existan tratamientos antibacterianos para combatirlas. Fue ya en 1910 cuando Paul Ehrlich desarroll el primer antibitico, por medio de unos colorantes capaces de teir y matar selectivamente a las espiroquetas de la especie Treponema pallidum, la bacteria causante de la sfilis. Erlich recibi el premio Nobel en 1908 por sus trabajos en el campo de la inmunologa y por ser pionero en el uso de tintes y colorantes para detectar e identificar bacterias, base fundamental de las posteriores tincin de Gram y tincin de Ziehl Neelsen. Un gran avance en el estudio de las bacterias fue el descubrimiento realizado por Carl Woese en 1977, de que las arqueas presentan una lnea evolutiva diferente a la de las bacterias. Esta nueva taxonoma filogentica se basaba en la secuenciacin del ARN ribosmico 16S y divida
2

a los procariotas en dos grupos evolutivos diferentes, en un sistema de tres dominios: Arquea, Bacteria y Eukarya.

rbol filogentico de los seres vivos obtenido a partir de genomas completamente secuenciados. El dominio Bacteria presenta una gran diversidad en comparacin con los otros dominios, Archaea y Eukarya. Los rboles moleculares colocan a Archaea y Eukarya ms prximos entre s que a Bacteria

CAPTULO II. Tamao, morfologa y agrupaciones celulares

Tamao de las bacterias
El tamao es un parmetro que est determinado genticamente, pero los valores concretos para cada raza o cepa de bacterias vienen influenciados por una serie de condiciones ambientales (nutrientes, sales, temperatura, tensin superficial, etc). Las bacterias suelen presentar un tamao pequeo, por lo general menor que el de una clula eucaritica tpica. Sin embargo, existe un amplio rango de tamaos, segn las especies. El tamao microscpico de las bacterias est determinado genticamente. La unidad de medida bacteriana es el micrmetro (m), que equivale a 1/1000 milmetros (10-3mm = 1 micrmetro). Para darse una idea de su tamao se calcula que en un centmetro cbico cabe alrededor de un milln de billones de bacilos de tamao medio. Algunas especies poseen dimensiones tpicamente asociadas a las bacteriaas, como por ejemplo Bacillus Rango de tamaos de las clulas procariotas en relacin a otros megaterium (1.3 x 3 m) y Escherichia coli (0,5 x 2 organismos y biomolculas. m). Pero las hay de mayor y menor tamao a estas. Una bacteria grande es Beggiatoa gigantea, con un tamao similar al de muchas clulas eucariticas (40 m). Pero, los autnticos gigantes entre las bacterias se han descubierto hace poco: En 1993 se descubri una bacteria que mide 0,5 mm de longitud. Se trata de Epulopiscium, un comensal del intestino del pez cirujano. En 1999 se descubri en un lago de Namibia una bacteria (a la que se bautiz como Thiomargarita) que alcanza los 700 m. La especie Epulopiscium consiste de bacterias grandes y simbiticas que se encuentran dentro de los tractos intestinales de algunas especies de peces cirujanos tropicales (Familia Acanthuridae). Estas bacterias son importantes en la digestin de la comida digerida por el pez husped y tienden a ser asociadas con especies de peces cirujanos que comen primariamente alga o detritus. Las clulas ms grandes de Epuloiscium pueden llegar a longitudes de 600 m (0.6 mm) o ms. Estas bacterias fueron descubiertos por un grupo de bilogos que estudiaban los peces cirujanos marrones (Acanthurus nigrofuscus) del Mar Rojo. Su trabajo caracterizo la asociacin simbitica y examino un poco sobre la biologa rara de estas bacterias excepcionales.
4

En un reportaje consecuente, los simbiontes intestinales de peces cirujanos marrones fueron llamados Epulopiscium fishelsoni. Epulopisciumsignificainvitado al banquete de un pez. Los autores tambin describieron en detalle un modo extrao de la reproduccin celular de E. Micrografa electrnica de Epulopiscium fishelsoni en cual varios vstagos son formados fishelsoni (coloreada artificialmente) adentro de la clula madre. Thiomargarita namibiensis ("perla sulfurosa de Namibia") es una proteobacteria gramnegativa. Esta especie fue descubierta por Heide H. Schulz et al. en 1999, en la costa de Namibia.En 2005 se descubri una especie muy cercana en el Golfo de Mxico, plantendose a s la posibilidad de que la Thiomargarita est mucho ms difundida de lo que se pensaba anteriormente. Es una bacteria quimiolitotrfica, y es capaz de usar el anin nitrato como aceptor electrnico terminal en la cadena de transporte electrnico. Ya que la bacteria es ssil, y la concentracin de nitrato vara considerablemente con el tiempo, es capaz de almacenar altas concentraciones (hasta 10.000 veces ms) de nitrato en una inmensa vacuola, la cual es responsable del 98% de su tamao. Cuando las concentraciones de nitrato en el medio exterior son bajas, esta bacteria usa el nitrato contenido en su vacuola para poder seguir respirando. Una investigacin reciente ha mostrado que la bacteria podra ser anaerobia facultativa, ms que anaerobia Micrografa electrnica de filamento de obligatoriamente, y por tanto ser capaz de Thiomargarita namibiensis respirar oxgeno si est disponible. Otra adaptacin poco comn es su patrn de divisin reductiva. Bajo condiciones de estrs, como la inanicin, dicha bacteria es capaz de reproducirse, pero de forma que se parta la clula manteniendo el volumen total constante. Este patrn de comportamiento podra deberse a su gran tamao. Una bacteria relativamente pequea es Haemophilus influenzae, que mide 0.25 x 1.2 m, es un cocobacilo gramnegativo no mvil descrito en 1892 por Richard Pfeiffer durante una pandemia de gripe. Es generalmente aerobio pero puede crecer como anaerobio facultativo. H. influenzae fue considerado errneamente como la causa de la gripe comn hasta 1933, cuando la etiologa viral de la gripe lleg a ser aparente. Sin embargo, H. influenzae es responsable de un amplio rango de enfermedades. Debido a su pequeo genoma, H. influenzae fue el primer organismo de vida libre cuyo genoma completo fue secuenciado. Su genoma consiste de 1.830.140 pares de bases y contiene 1.740 genes. Los organismos celulares cultivables ms pequeos que existen son los micoplasmas, muchos de los cuales no superan los 0.2 m de dimetro y las nanobacterias o ultramicrobacterias miden en torno a 0.05 m, pero la mayora no se han podido cultivar, y slo se pueden estudiar al microscopio.
5

Consecuencias del tamao pequeo de las bacterias

El pequeo tamao de las bacterias conlleva consecuencias de tipo metodolgico o de estudio y consecuencias por efecto en sus propiedades fsicas y qumicas. Consecuencias Metodolgicas: Debido a su pequeo tamao, se necesita recurrir a microscopios para su visualizacin, y emplear tcnicas especiales de tincin Para sacar conclusiones sobre muchas caractersticas de las bacterias hay que hacer estudios promediados, es decir, obtenidos a partir de una gran poblacin de clulas, y no sobre un solo individuo. (El estudio de clulas bacterianas aisladas es posible, pero es complicado y no se emplea en la mayor parte de la investigacin habitual sobre procariotas). Propiedades fsicas: se derivan del comportamiento como partculas coloidales y son: Movimiento browniano (movimiento aleatorio derivado del empuje de molculas de agua alrededor de la bacteria); Capacidad de dispersar la luz (el llamado efecto Tyndall). Por esta razn, las suspensiones acuosas relativamente densas de bacterias tienen una apariencia turbia (traslcida); Aumento de la viscosidad del medio donde van suspendidas. Por tener carga elctrica: migran en un campo elctrico y aglutinan y precipitan a altas concentraciones de sales. Propiedades biolgicas: La relacin superficie/volumen (S/V) es muy alta. En efecto, supongamos una clula esfrica; en dicha clula, la relacin S/V es 3/r, (la superficie de una esfera es 4r2 mientras que su volumen es 4/3r3). O sea, cuanto menor sea el radio (r) mayor ser esta relacin. Esto significa que el pequeo tamao de las bacterias condiciona un mayor contacto directo con el medio ambiente inmediato que las rodea, lo que se traduce en que reciben las influencias ambientales de forma inmediata. El pequeo tamao condiciona una alta tasa de crecimiento. La velocidad de entrada de nutrientes y la de salida de productos de desecho es inversamente proporcional al tamao de la clula, y a su vez, estas tasas de transporte afectan directamente a la tasa metablica. Por lo tanto, en general, las bacterias crecen (se multiplican) de forma rpida.

Por qu son pequeos los procariotas?

Limites teorticos Koch observ que el tamao celular de los procariotas ms pequeos, en realidad, es mucho mayor que el necesario para albergar a sus componentes celulares. Es decir, estas clulas tienen espacio suficiente como para incluir todo su cido nucleico, protenas, complejos moleculares y dems elementos requeridos para su supervivencia y proliferacin. El tamao mnimo (estimado) para contener los elementos vitales de una clula procariota de vida libre, estara representado por una esfera de 250 a 300 nm de dimetro; tamao muy cercano al exhibido por las bacterias ms pequeas que tpicamente habitan ambientes oligotrficos ocenicos; las cuales, son pequeas clulas de formas bacilares o cocoides con un dimetro de entre 300 a 500 nm. Relacin superficie/volumen El argumento tpico de porque los procariotas son pequeos, es que su tasa de transporte de nutrientes al interior celular est en funcin de la cantidad de rea de superficie expuesta al medio circundante. Sin embargo, no es el rea superficial per-se la que es importante, sino el hecho de que la clula pueda insertar un gran nmero de complejos de transporte de nutrientes que lleven nutrientes al citoplasma. As, es la necesidad de difusin la que crea una fuerte tendencia a generar formas celulares pequeas, lo que aumenta la relacin superficie/volumen y disminuye la cantidad de citoplasma que tiene que ser mantenido o suplementado por un transportador. La esfera de difusin El problema nutricional de una clula es complicado por la existencia de la llamada esfera de difusin o Envoltura Reynolds, que se agrega a las dimensiones efectivas de las clulas y que forma una barrera de difusin alrededor de la misma. La esfera de difusin puede ser una gruesa o delgada capa de lquido externo adherido a la superficie de la clula, rodendola y viajando con la bacteria, y a travs del cual los nutrientes y los desechos deben de pasar. La existencia y dimensiones de esta esfera no son afectadas ni por las condiciones ms turbulentas de los cuerpos de agua natural. Por lo que, esta capa suele considerarse como el rea superficial en contacto con nutrientes concentrados en el medio externo. La forme de esta rea es similar a la misma forma celular y es perfectamente simtrica en los cocos y bacilos rectos. Sin embargo, la capa de difusin de una clula espiralada es menos espiralada que el cuerpo celular, debido a que algunas zonas de la esfera de difusin se superponen. La forma en que esta esfera rodea a la clula es distintiva y puede darse de diversas maneras y potencialmente afectar su acceso a los nutrientes. Por ejemplo, si un bacilo recto y un espirilo tienen esferas de difusin equivalentes, la clula en espiral podr adquirir ms nutrientes porque tiene una mayor rea de superficie en la que se insertan transportadores. Mezcla intracelular No solo la difusin afecta el tamao celular al determinar la tasa con la cual dicha clula adquiere nutrientes, la difusin tambin afecta el tamao celular al limitar la tasa con la cual las protenas y los nutrientes entran en contacto unos con otros en el citoplasma celular.
7

Beveridge calcul que en un tpico bacilo bacteriano (0,8 x 4,8 m), a una protena de 50 kDa puede tomarle unos 0,5 s para migrar desde un lado de la pared celular hasta el centro de la clula (una distancia de 0,4 m) o podra necesitar cerca de 5 s para migrar de un polo al otro. Schulz y Jorgensen han calculado tiempos relativamente similares a los ya mensionados para el llamado tiempo de trfico interno de las molculas. Han calculado que en un coco que posee 1 m de dimetro, a las molculas pequeas les toma cerca de 1 milisegundo reaparecer, con igual probabilidad, en cualquier lugar de la clula; mientras que, a las grandes protenas les toma cerca de 10 milisegundos. Estos tiempos de hecho sern diferentes para cada tipo de clula, tanto por su forma como por sus dimensiones. Todo esto tambin generar lmites particulares para las reacciones bioqumicas que en ellas se lleven a cabo

Formas bacterianas
Se podra esperar que organismos pequeos, relativamente simples como las bacterias, fuesen uniformes en cuanto a forma y tamao. Aun que es cierto que muchas bacterias tienen morfologa similar, existen importantes variaciones. La forma de las bacterias es muy variada y, a menudo, una misma especie adopta distintos tipos morfolgicos, lo que se conoce como pleomorfismo.

Representacin grfica a escala de la Diversidad de formas procariticas

La figura contiene la variedad de formas procariticas que podemos encontrar. Este collage de diferentes formas celulares, ha sido establecido a partir de descripciones e ilustraciones realizadas por Starr et al. (1981) o por Zinder and Dworkin (2001). Las clulas se encuentran a escala. Aquellas rodeadas por el crculo de color negro correspondes al grupo de 5m. Estas
8

clulas tambin estn incluidas en el circulo de punteado celeste, para que comparen su tamao con otras ms grandes que corresponden a la lnea de los 10 m. (A) Stella cepa IFAM1312; (B) Microcyclus (gnero que a sido renominado como Ancylobacter) flavus; (C) Bifidobacterium bifidum; (D) Clostridium cocleatum; (E) Aquaspirillum autotrophicum; (F) Pyroditium abyssi; (G) Escherichia coli; (H) Bifidobacterium sp.; (I) seccin transversal de la bacteria asociada a la podredumbre de raz de caa soca; (J) Planctomyces sp.; (K) Nocardia opaca; (L) Cadena de bacteria asociada a la raz de caa soca; (M) Caulobacter sp.; (N) Spirochaeta halophila; (O) Prosthecobacter fusiformis; (P) Methanogenium cariaci; (Q) Ciclo de crecimiento de Arthrobacter globiformis; (R) Alphaproteobacteria de esponjas marinas; (S) Ancalomicrobium sp.; (T) Nevskia ramosa (133); (U) Rhodomicrobium vanniellii; (V) Streptomyces sp.; (W) Caryophanon latum; (X) Calothrix sp. La lnea amarilla y el espacio por debajo de ella, representa una pieza de la bacteria gigante Thiomargarita namibiensis que est representada a escala con los otros organismos. Pero de todas las formas que podemos hallar entre las bacterias, podemos distinguir dos tipos fundamentales de bacterias: Oval o esfrica (cocos) Cilndrica o de bastn (bacilos) COCOS (del griego kkkos, grano) Los cocos son clulas casi esfricas. Pueden existir como clulas individuales, pero se asocian tambin en agrupaciones caractersticas que son tiles frecuentemente para identificar a las bacterias. Las bacterias esfricas son las ms homogneas con respecto al tamao, presentando un dimetro medio de 0,6 a 1,0 m. La forma no siempre es exactamente esfrica, observndose como ms comunes las siguientes variaciones: Formas lanceoladas. Formas en grano de caf. Formas cocobacilares (achatadas) Las diferencias entre los subtipos de cocos se basan en los agrupamientos celulares. Estos aparecen como consecuencia de dos factores: el plano o planos de divisin celular y la tendencia de las clulas hijas a permanecer unidas entre s, una vez que se completa la divisin. Los cocos que se separan completamente despus de la divisin aparecen individualmente, y a esta forma se le llama coco. Cuando hay una ligera tendencia a que las clulas hijas permanezcan unidas y la divisin celular ocurre en un solo plano, los cocos se agrupan predominantemente en pares, llamados diplococos. Si la unin es ms marcada, se ven largas cadenas de cuatro cocos o ms; estos agrupamientos se conocen como estreptococos. Cuando los cocos se dividen en varios planos, y hay una elevada tendencia a que permanezcan unidos, aparecen racimos irregulares de cocos, semejantes a racimos Agrupaciones de cocos bacterianos de uvas; estos agrupamientos se denominan estafilococos. Sin embargo, la separacin de subtipos morfolgicos no es absolutamente ntida, y en una misma colonia pueden observarse cadenas o racimos junto con formas aisladas o en parejas. A
9

pesar de todo esto, los grupos morfolgicos tienen mucho valor prctico en la identificacin y clasificacin de cocos. BACILOS (del latn baculus, varilla) La otra forma ms comn bacteriana es el bastoncillo, denominado bacilo. Las formas alargadas o bacilares agrupan una gran cantidad de subtipos morfolgicos. Las diferencias en anchura, longitud y forma de los extremos de la clula proporcionan una considerable heterogeneidad a la forma bacilar. Los bacilos varan considerablemente entre la proporcin de longitud y dimetro, siendo los cocobacilos tan cortos y anchos que parecen cocos. .La forma del extremo del bacilo vara a menudo entre especies; puede ser plana, redondeada, en forma de puro o bifurcada. Aunque muchos bacilos aparecen aislados, pueden permanecer juntos despus de dividirse, formando parejas o diplobacilos, formar cadenas a las que se denomina estreptobacilo o bacilo en empalizada Agrupaciones de bacilos bacterianos (/////), en V (<<<) o en letras chinas. Todo ello en funcin de la tendencia de las clulas hijas a permanecer. Aunque son hasta cierto punto caractersticos, los agrupamientos de clulas bacilares no tienen la misma importancia morfolgica que el agrupamiento de cocos. OTRAS FORMAS Aparte de estas formas ms frecuentes, las bacterias pueden adquirir una gran variedad de formas. Vibrios: bacterias en forma de bastoncillos, curvados, con forma de coma o de espiral incompleta. Proyectada su imagen sobre el plano tienen forma de coma, pero en el espacio suelen corresponder a una forma espiral con menos de una vuelta de hlice Actinomicetos: largos filamentos multinucleados caractersticos o hifas, que pueden ramificarse para constituir una red denominada micelio. Espirilos: al igual que los bacilos, tienen un eje ms largo que otro, pero dicho eje no es recto, sino que sigue una forma de espiral, con una o ms de una vuelta de hlice rgidos. Espiroquetas: Forma de bacilos largos retorcidos como espirales o hlices flexibles. Con yema: de forma ovalada a pera que produce una yema al final de una larga hifa. Con pednculos: Forma bacilar que tiene prolongaciones en forma de rabillo o chichn. Pleomrficas: bacterias que tienen formas variables, aunque generalmente tienen forma bacilar. Algunas especies presentan incluso formas tetradricas o cbicas. Esta amplia variedad de formas es determinada en ltima instancia por la composicin de la pared celular y el citoesqueleto, siendo de vital importancia, ya que puede influir en la capacidad de la bacteria para adquirir nutrientes, unirse a superficies o moverse en presencia de estmulos.
10

Estos distintos tipos de morfologas celulares deben de haberse originado por mecanismos evolutivos, a saber, por seleccin y estabilizacin adaptativa frente a las distintas presiones ambientales presentes en diferentes nichos ecolgicos.

Otras formas celulares que pueden presentar las bacterias

Relaciones entre tamao y forma Difusin citoplsmica: Este aspecto ya lo hemos ilustrado con una bacteria tpica de forma vacilar, en la cual una protena de unos 50 kDa difundira desde la periferia del citoplasma al eje longitudinal en menos de medio segundo, mientras que si difundiera desde un polo de la clula al opuesto, tardara unos 5 segundos. Como vemos, el tiempo de difusin es muy breve. Difusin desde el medio exterior: el entorno inmediato de las bacterias es bastante peculiar, debido al bajo valor de nmero de Reynolds que poseen. El nmero de Reynolds (R) es un parmetro muy empleado en Ingeniera y Arquitectura para expresar la tensin o estrs que soporta una estructura determinada inmersa en el medio local que la sustenta. R equivale a la relacin entre la fuerza de inercia y fuerza de friccin. Teniendo en cuenta la masa y velocidad de movimiento de una bacteria como E. coli: m = 10 -12 g y v = 30 m/s Tenemos que el valor R para esta bacteria es de 10-5. De aqu se deduce que la inercia es irrelevante, mientras que predominan las fuerzas viscosas. Por lo tanto, las bacterias llevan, en su avance, un entorno local debido a la resistencia por viscosidad. Este entorno es una fase fluida cuya forma reproduce, ampliada, la forma de la bacteria en cuestin. Mejora en las propiedades hidrodinmicas o de flotacin: Es posible que la forma tambin tenga relacin con propiedades hidrodinmicas. Por ejemplo, las bacterias mviles raramente son esfricas; la forma ptima sera aqu la bacilar. De hecho, existen pocos casos de cocos flagelados. Para el grupo de bacterias alargadas pero con morfologa espiral y que estn muy bien adaptadas a avanzar en medios muy viscosos, su morfologa ha debido ser seleccionada evolutivamente precisamente por este factor ecolgico. Por otro lado, las formas con prostecas, prolongaciones, las morfologas en disco o en lmina parecen estar especializadas en facilitar la flotacin.
11

Las bacterias adoptan formas en las que optimizan la relacin S/V, y por consiguiente su entorno local. Veamos algunos ejemplos de valores S/V: los menores valores los poseen las bacterias esfricas (cocos), en las que S/V es de 5.8. La forma esfrica permite una mayor resistencia frente a la desecacin; los bacilos alcanzan valores de S/V de alrededor de 10; las formas espirales y las bacterias con prolongaciones vivas (prostecas) tienen valores mayores que los de los bacilos; la mejor relacin S/V conocida (de 16) la posee la curiosa bacteria cuadrada de Walsby Otras formaciones especiales Biopelculas Las bacterias presentan la capacidad de anclarse a determinadas superficies y formar un agregado celular en forma de capa denominado biopelcula o biofilme, los cuales pueden tener un grosor que va desde unos pocos micrmetros hasta medio metro. Estas biopelculas pueden congregar diversas especies bacterianas, adems de protistas y arqueas, y se caracterizan por formar un conglomerado de clulas y componentes extracelulares, alcanzando as un nivel mayor de organizacin o estructura secundaria denominada microcolonia, a travs de la cual existen multitud de canales que facilitan la difusin de nutrientes. En ambientes naturales tales como el suelo o la superficie de las plantas, la mayor parte de las bacterias se encuentran ancladas a las superficies en forma de biopelculas. Dichas biopelculas deben ser tenidas en cuenta en las infecciones bacterianas crnicas y en los implantes mdicos, ya que las bacterias que forman estas estructuras son mucho ms difciles de erradicar que las bacterias individuales. La formacin de los biofilm pasa por cinco etapas que son ilustradas en la figura siguiente.

Matriz extracelular

Etapas de la formacin de biopelculas bacterianas

Cuerpos fructferos Cabe destacar un tipo de morfologa ms compleja an, observable en algunos microorganismos del grupo de las mixobacterias. Cuando estas bacterias se encuentran en un medio escaso en aminocidos son capaces de detectar a las clulas de alrededor, en un proceso conocido como quorum sensing, en el cual todas las clulas migran hacia las dems y se
12

agregan, dando lugar a cuerpos fructferos que pueden alcanzar los 0,5 mm de longitud y contener unas 100.000 clulas. Una vez formada dicha estructura las bacterias son capaces de llevar a cabo diferentes funciones, es decir, se diferencian, alcanzando as un cierto nivel de organizacin pluricelular. Por ejemplo, entre una y diez clulas migran a la parte superior del cuerpo fructfero y, una vez all, se diferencian para dar lugar a un tipo de clulas latentes denominadas mixosporas, las cuales son ms resistentes a la desecacin y, en general, a condiciones ambientales adversas

Agregacin

Montculo

Formacin de ondas CICLO DE DESARROLLO Mixospora

Cuerpo fructfero

Hambruna

Ciclo de crecimiento vegetativo y dispersin

Germinacin

Formacin de cuerpo fructfero en Mixobacterias

Generacin y mantenimiento de la forma celular La forma en que las clulas generan y mantienen una forma definida es uno de los problemas fundamentales desde las bacterias a los humanos. El citoesqueleto eucariota, que consiste de microtbulos, filamentos de actina y filamentos intermediarios, es el que determina las diversas formas celulares de los organismos superiores. Sin embargo, para el caso de las bacterias an se conoce muy poco sobre los mecanismos moleculares involucrados en la determinacin de su forma celular. En algunas bacterias que carecen de pared celular, como es el caso de Spiroplasma, un citoesqueleto poco desarrollado est involucrado en su motilidad y en la deformacin de su forma celular. Pero, Spiroplasma al igual que otros mollicutes son bacterias inusuales por su caracterstica de carecer de una pared celular rgida y por slo estar rodeados de una membrana citoplasmtica que contiene colesterol, un raro componente en los procariotas. En la mayora de las bacterias, el mantenimiento de la forma celular requiere de la
13

integridad de la pared extracelular cuya rigidez y fuerza le son primariamente conferidas por un polmero de glucopeptidos unidos por puentes cruzados conocido como peptidoglicano o mureina. La degradacin de este elemento con lisozima, resulta en alteraciones en la forma de la clula bacteriana que lo contiene. Debido a esto y al hecho de carecer de filamentos intracelulares definidos, por dcadas llevaron a que se asuma que era la pared celular la responsable absoluta de la forma de las bacterias. Sin embargo, estudios en Escherichia coli y en Bacillus subtilis han demostrado la existencia de una protena denominada como MreB cuya secuencia de aminocidos es similar al de la actina; esta protena es esencial en la determinacin de la forma bacilar y su desintegracin induce la formacin de clulas con formas redondeadas e infladas. MreB no solo es similar a la actina en su composicin sino que tambin y al igual que ella se ensambla en protofilamentos con una unidad repetitiva similar al de Comparacin de la estructura la actina-F, lo que evidencia que MreB y la tridimensional de los protofilamentos de actina-F provienen de un antecesor procariotico Actina-F y MerB comn. En E. coli y en B. subtilis, los filamentos de MreB forman estructuras filamentosas helicoidales que se enrollan en crculos alrededor del citoplasma y justo por debajo de la membrana celular. Evidencias recientes sugieren una asociacin entre la biosntesis del peptidoglicano y el citoesqueleto bacteriano tipo actina. MerB se encuentra ampliamente distribuida entre las bacterias con formas alargadas, tanto grampositivas como gramnegativas e incluso en algunos mollicutes y arqueas; pero est ausente en todas las bacterias con morfologa esfrica. Debido a que la forma celular ha sido ampliamente estudiada solo en especies de forma bacilar, an permanece incierta la manera en que bacterias con otra morfologa, generan y mantiene su forma. En B. subtilis se ha determinado la presencia de tres isoformas de esta protena: MerB, Mbl y MerBH que se postula que si bien las tres forman estructuras helicoidales similares, estas tendran diferentes configuraciones. Estudios de colocalizacin han mostrado que las tres isoformas MerB de esta bacteria, estn de hecho muy prximas y conforman un solo aparato de estructura helicoidal en el cual los filamentos de Mbl se extienden de polo a polo y en cambio los de MreB no. Asimismo, se ha determinado que el movimiento axial de la espira de Mbl es mucho ms amplio que el de MreB; por lo cual se ha deducido que los filamentos MreB controlan el ancho y los filamentos Mbl controla el eje longitudinal de la clula. Asimismo, se ha sugerido que la participacin o funcin de los filamentos MerBH sera facilitar la insercin de elementos estructurales de la pared celular naciente. Investigaciones con la bacteria helicoidal Caulobacter crescentus, han determinado la existencia en ella de la protena MerB, pero tambin la presencia de un elemento fibrosos de su citoesqueleto necesario para generar la forma vibrioide o espiral de esta bacteria. Esta protena de citoesqueleto ha sido nominada como crescentina (CreS) y es la responsable de generar la curvatura celular al formar filamentos intracelulares similares a los filamentos intermedios en uno de los lados de la clula.
14

Micrografas con contraste de faces de clulas de Caulobacter crescentus salvajes (A), mutantes sin creS (B) y mutantes con reinsercin del gen creS (C). Ntese la curvatura tpica de esta bacteria en A y C y la alteracin de su morfologa en C al faltarle la protena CreS.

Efecto de la difusin en la forma celular Si la difusin y la extraccin de nutrientes son elementos claves para la determinacin del tamao y la forma celular, la forma ms eficiente para el copio de nutrientes debera maximizar la relacin superficie-volumen. Por lo tanto, si una clula tiende a la esfericidad, esta podra tender a ser la esfera ms pequea posible, ya que disminuyendo su tamao, incrementa su relacin S/V. Sin embargo, aunque las clulas esfricas poseen la mejor forma posible para una eficiente adquisicin de nutrientes, uno podra esperar que la naturaleza favoreciera a las formas bacilares cuya relaciones S/V son mucho mayores que de los cocos con igual volumen. Adems, las clulas de forma bacilar se alargan sin aumentar su ancho y as no cambian mucho su valor S/V. Si ambas caractersticas se incrementan linealmente, la relacin S/V sufre cambios muy pequeos; lo cual explicara porque muchas bacterias producen filamentos en respuesta a cambios nutricionales de su medio ambiente. Esta ventaja de la filamentacin puede estar entre las razones fundamentales para que las clulas mantengan de manera constante su dimetro. El problema es que, si maximizar la relacin S/V fuese un principio importante que gobierna la morfologa de las bacterias, las formas celulares ms delgadas, planas, en forma de disco seran la mejor alternativa: Sin embargo, con la excepcin de las haloarqueas, las bacterias planas son realmente escasas. Variaciones Morfolgicas Microbilogos ambientales han hecho exhaustivas apreciaciones de que la morfologa bacteriana vara con la tasa de crecimiento y con las condiciones nutricionales. Desafortunadamente, en ninguna de sus apreciaciones sealan si la forma por s misma es benfica para estas situaciones; esto debido a que pocos son los experimentos realizados con tal fin. Sin embargo, alguna importancia debe de tener ya que numerosas bacterias rutinariamente alteran su morfologa en respuesta al tipo y concentracin de compuestos externos. Variacin con la tasa de crecimiento En el clsico trabajo de Schaechter y sus colaboradores, en el cual Salmonella entrica serovar typhimurium produce clulas que son ms anchas cuando se le incuba en un medio de cultivo enrriquecido que cuando crece en un medio mnimo, y tiene un crecimiento lento con clulas ms cortas que aquellas que crecen ms rpidamente. Algo similar se ha observado al trabajar con E. coli B/r que cuando est medio mnimo desarrolla ms lentamente y produce clulas con un tiempo de generacin de 72 min y con dimetros de alrededor de 0,5 m; en cambio, cuando crece en un medio de cultivo rico, exhibe tiempos de generacin de 22 min en promedio y
15

clulas ms gruesas con dimetros mayores o iguales a 1m.Sinembrago, no todas las cepas responden de la misma manera. Por ejemplo. E. coli B/r es ms alargada cuando crece con altas tasas, pero E. coli B/r H266 son ms redondeadas. Un efecto ms permanente de la tasa de crecimiento en la forma celular ha sido sugerido por el evolucionario experimento de Lenski y Mongold que identificaron un cambio de forma medible en E. coli durante un experimento de 10 000 generaciones. El cambio era simple, un aumento en longitud y ancho se dan en las clulas para duplicar su volumen, pero fue adaptativo y heredable, verificaron en practica que un ligero cambio de forma esta correlacionado con la habilidad para superar competidores. El resultado de este y otros experimentos es que la morfologa bacteriana no es esttica y el tamao y la forma de una clula individual no tiene que estar predeterminadas, ni ten er dimensiones permanentes. En su lugar, aunque la forma celular puede ser una (por ejemplo, puede ser una bacteria bacilar), la longitud y el ancho puede cambiar en respuesta a las condiciones de crecimiento. Filamentacin con estatus nutricional Tal vez el cambio de forma ms frecuente por estrs nutricional es la filamentacin disparada por la limitacin en la disponibilidad de uno o ms nutrientes. Por ejemplo, en ausencia de fosfato, cistena o glutamina, Actinomyces israelli crece como bacilos filamentosos y ramificados y cuando se le adicionan estos compuestos las clulas retornan a su morfologa regular de bacilos cortos. Cuando el medio es limitante en biotina, Arthrobacter globiformis forma bacilos anormalmente largos y ramificados de diversos tamaos; de igual modo se observa cuando falta manganeso en el medio de cultivo. Un efecto anlogo por deficiencia de manganeso con divisin celular que genera filamentacin pero no ramificada, ha sido observada en Clostridium wellchii y en condiciones de pobreza de nutrientes en Pseudomonas aeruginosa, Ps. Putida y Ps. Fluorescens clulas alargadas y delgadas son observadas a diferencia de los tpicos bacilos cortos que se observan en medios lquidos. La explicacin ms simple para estas respuestas es que, cuando el medio ambiente lo demanda, muchas bacterias pueden acelerar o retardar su divisin celular y septacin, creando clulas largas o cortas respectivamente. Por qu sucede esto? Primero, como acotamos antes, la elongacin incrementa la superficie de la clula para una ms eficiente adquisicin de nutrientes, sin tener que cambiar apreciablemente su relacin superficie/volumen. Esta puede ser razn suficiente para clulas en suspensin. Segundo, la filamentacin puede mejorar la adherencia celular a las superficies, no porque la su elongacin aumente el rea superficial total, sino porque aumenta el rea superficial especfica que entra en contacto directo con el medio slido. Steinberger y sus colaboradores, calcularon que un coco perfectamente esfrico contacta con un plano slido usando menos del 17% de su superficie celular, y un bacilo con un largo que es el doble del dimetro de esta esfera contacta con solo el 20% de su superficie. Para un bacilo cuya longitud es 7 veces el dimetro de la esfera, su superficie de contacto se incrementa a un 23%, pero si el bacilo es 10 veces ms largo, incrementa su superficie de contacto a solo 24% y prolongaciones mayores tienen pequeos efectos adicionales. As, este incremento de superficie de contacto de los bacilos podra favorecer a este tipo de clulas en su superficie de contacto con su principal fuente de nutrientes. Finalmente, la filamentacin podra llevar a las clulas a tener acceso a nutrientes que de otro modo no estaran disponibles por razones mecnicas, al incrementar la posibilidad de que parte del filamento entre en contacto con una zona rica en nutrientes y capte nutrientes para el resto de la biomasa celular.
16

Estreptococos nutricionalmente deficientes En 1961, Frenkel y Hirsch aislaron estreptococos que crecan con un rango de morfologas inusual. Cuando los hicieron crecer bajo condiciones limitantes de nutrientes, los aislamientos tuvieron paredes celulares delgadas y a menudo crecieron como verdaderos filamentos y no como tpicos cocos que son. Estos investigadores fueron los primeros en describirlos como estreptococos nutricionalmente variantes pero que ahora los conocemos como estreptococos nutricionalmente deficientes. Cuando clulas de la cepa 14NDS fueron vistos por microscopa electrnica, so observ que tena forma variable, con delgadas paredes celulares y septos inadecuados. Las primeras observaciones de estreptococos del grupo viridans con forma variante fueron designadas como dos nuevas especies de Streptococcus: S. defectivus y S. adjacens que posteriormente fueron identificados, por anlisis de 16S RNAr, como pertenecientes a un nuevo gnero: Abiotrophia, que ahora tiene una tercera especie A. elegans. Desde su descubrimiento, las cepas nutricionalmente deficientes o NDS han sido aisladas de diversas fuentes clnicas, pero siguen siendo difciles de identificar debido su bizarra morfologa que incluye bacilos y filamentos con abultamientos bulbosos irregularmente espaciados. Actualmente se encuentran clasificados bajo dos gneros: Abiotrophia y Granulicatella. El cambio de forma de los NDS representa otra respuesta al estatus nutricional. Las aberraciones morfolgicas de los NDS pueden manipularse alterando la concentracin de vitamina B6: bajas concentraciones inducen formas tipo bacilo, filamentos, hinchados y morfologas aberrantes. De hecho, muchos NDS revierten a la clsica forma cocoide cuando son suplementados con nutrientes apropiados (cistena, tioles o vitamina B6). Las clulas filamentosas se deben a la formacin de septos incompletos, debido a que la vitamina B6 es necesaria para la conversin de L-alanina en D-alanina para la sntesis del peptidoglicano. En muchos casos, los NDS representan otro ejemplo de bacteria que responde a la deplecin nutricional por medio de una controlada filamentacin. Una verdadera forma? El comportamiento de los organismos NDS plantea una interesante posibilidad. Algunas bacterias que conocemos como pleomrficas, exhiben estas morfologas porque ellas estn desprovistas de nutrientes esenciales durante su cultivo in vitro, y que tendran una forma uniforme en presencia del nutriente requerido. Esta podran ser formas generadas como artefactos de nuestros mtodos de cultivo, lo que tambin podra aplicarse para otros organismos que solemos llamar como no cultivables. Por otro lado, la habilidad de adoptar formas aberrantes es usada por muchas bacterias en sus hbitats naturales. En cualquier caso, las variaciones de forma celular nutricionalmente dependientes podran tomarse como un reporte de lo natural; podemos estudiar las formas in vivo de los organismos y as responder s la forma bacteriana se acomoda a placer de la clula, de acuerdo a su estatus nutricional o por otros aspectos que le rodeen.

MORFOLOGA COLONIAL Caractersticas de las colonias bacterianas. Cuando las bacterias crecen en la superficie de un medio de cultivo slido, las clulas en divisin permanecen aproximadamente fijas en su posicin y forman masas de muchos
17

millones de clulas visibles a simple vista. Las colonias as formadas varan desde un tamao diminuto, apenas visible, hasta masas de varios milmetros de dimetro. Su tamao, forma, textura, olor y en algunos casos color son, a veces, muy orientativos para la identificacin de las bacterias que la componen. Aunque estas caractersticas dependen a menudo de la naturaleza del medio de cultivo y de las condiciones de incubacin, cuando stas se controlan cuidadosamente, son muy constantes y, en muchas ocasiones, tienen un valor diferencial considerable. La morfologa de las colonias es una de las caractersticas bsicas de las bacterias y es indispensable su estudio para comenzar correctamente una identificacin preliminar. Las caractersticas morfolgicas ms importantes de una colonia bacteriana aislada sobre un medio de cultivo slido son: Tamao: El tamao de las colonias bacterianas es, en condiciones de cultivo favorables, bastante uniforme para cada especie o tipo. La visualizacin del tamao se suele hacer a simple vista, aunque a veces es preferible utilizar lupas o estereoscopios para poder discernir con mayor claridad las caractersticas morfolgicas a observar. Las colonias de estreptococos, por ej., son relativamente pequeas (menos de 1 mm de dimetro), mientras que las de estafilococos o las de algunos bacilos pueden alcanzar hasta 1 cm de dimetro. Es importante destacar que las caractersticas de una colonia deben estudiarse siempre sobre el mismo tipo de medio de cultivo, para evitar las diferencias surgidas por la diferente composicin de los mismos. El tamao de las colonias bacterianas podemos expresarlo en las siguientes categoras: Pequeas o puntiformes: 1 mm de dimetro o menor Medianas: hasta 4 mm de dimetro Grandes: mayores de 4 mm de dimetro El tamao de las colonias debe ser considerado y medido en la parte final de la zona de aislamiento, que es donde presentan su mximo tamao. No deben valorarse ms que colonias bien aisladas. Morfologa: La morfologa de una colonia viene dada por su borde y forma de elevarse sobre el medio de cultivo. El borde puede ser liso (redondeado u ovalado) o irregular (aserrado, lobulado o espiculado). Si pudisemos hacer un corte en un plano perpendicular a la base de la colonia podramos encontrar las siguientes posibilidades: semiesfrica o convexa plana o en disco acuminada cerebroide plana con bordes elevados (en crter). plana con centro elevado (en huevo frito) Superficie: La superficie de la colonia, examinada mediante luz reflejada, puede mostrar un aspecto liso y brillante a la luz o, por el contrario, una textura irregular, rugosa y mate, sin brillo. Puede mostrar un aspecto filamentoso o cerebroide. La utilizacin de una lupa estereoscpica permite la observacin de esta caracterstica mediante la deteccin del reflejo del filamento de la lmpara en la superficie de la colonia.
18

Consistencia: Las colonias bacterianas pueden tener una consistencia variable, desde seca y frgil a grasienta y cremosa o viscosa y pegajosa. Esta caracterstica slo se aprecia cuando tocamos las colonias con el asa de siembra. Podremos observar colonias "duras" que se deslizan fcilmente por la superficie del medio, siendo difcil manipularlas con el asa. A menudo estas colonias se fragmentan al intentar cogerlas. Otras colonias tienen apariencia cremosa, con superficie brillante generalmente y fciles de manipular con el asa. La mayora de las colonias tienes consistencia mantecosa, siendo muy fcil obtener pequeas porciones de la misma, que quedan bien adheridas al asa de siembra. En algunas ocasiones las colonias son extremadamente viscosas y tienden a formar filamentos mucosos cuando intentamos retirarlas con el asa.

Tabla de caracterizacin de la morfologa colonial bacteriana

Pigmentacin: Es caracterstico slo de unas pocas especies bacterianas. La pigmentacin slo se observa en colonias, y nunca en clulas individuales. Dentro de las bacterias patgenas, una de las formas pigmentadas ms importantes es Stahpylococcus aureus, cuyas colonias son normalmente de color amarillo dorado. En ocasiones, el pigmento difunde al medio, dando a ste una tonalidad caracterstica en algunas especies. Pseudomonas, por ejemplo, produce un pigmento verdoso que puede ser fcilmente reconocido en medios incoloros como el Mueller-Hinton.

Colonias de S. aureus en agar sangre y de P. aeruginosa en agar Muller Hinton.

Hay que tener especial precaucin para no atribuir una falsa pigmentacin a colonias que se han desarrollado en medios con determinadas sustancias nutritivas (azcares) e indicadores de
19

cambio de pH. Por ejemplo, los grmenes que utilizan la lactosa para su metabolismo darn colonias de color amarillo en un medio que contenga este azcar y un indicador de pH adecuado. Hemlisis: Algunas bacterias, fundamentalmente los cocos, pueden ser capaces de hemolizar los hemates de un medio nutritivo slido como el agar sangre. Esto es debido a la liberacin de unas sustancias denominadas hemolisinas. La hemlisis de los hematies adyacentes a la colonia puede ser intensa o ligera y se observa como un halo verdoso ms o menos claro alrededor de la colonia. La hemlisis intensa se denomina eta hemlisis; la hemlisis parcial se conoce como alfa hemlisis y la ausencia de sta se define como gamma hemlisis. La produccin de hemlisis en una placa de agar sangre es una de las caractersticas que ayudan a diferenciar los Tipos de hemolisis en Agar Sangre diferentes tipos de estreptococos. Olor: Ciertos tipos de bacterias descomponen los sustratos que utilizan para su metabolismo desprendiendo sustancias voltiles que proporcionan un olor caracterstico a los cultivos puros de dichas bacterias. Como intentar definir un olor es tan difcil como subjetivo, slo os dir que ser nicamente la prctica diaria la que os permita un reconocimiento adecuado de esta caracterstica. Puesto que estas caractersticas aparecen en grados y combinaciones variables de unas bacterias a otras, el aspecto de las colonias es a menudo bastante caracterstico, permitiendo distinguir distintas clases de bacterias en cultivos mixtos o contaminados. La diferenciacin en base a un criterio morfolgico de las colonias es slo orientativa, y para poder identificar una bacteria se necesita un estudio detallado de sus caractersticas fisiolgicas e inmunolgicas.

20

REFERENCIAS SUPLEMENTARIAS
Angert, E.R., K.D. Clements and N.R. Pace. 1993. The largest bacterium. Nature (362): 239241 Ausmees, N.; J.R. Kuhn, and C. Jacobs-Wagner. 2003. The Bacterial Cytoskeleton: An Intermediate Filament-Like Function in Cell Shape.Cell (115): 705-713 Beveridge, T. J. 1988. The bacterial surface: general considerations towards design and function. Can. J. Microbiol. 34:363372. Cabeen, M, and C. Jacobs-Wagner. 2005. Bacterial cell shape. Nat Rev Microbiol. (3), N 8: 601610 Carballido-Lpez, R. 2006. The Bacterial Actin-Like Cytoskeleton. Microb. Molec. Biolog. Rev.(70), N4: 888909 DeLong E, Pace. 2001. Environmental diversity of bacteria and archaea. Syst Biol(50).N 4: 470-478 Daz Martn, G.A.2009. Fundamentos y tcnicas de anlisis microbiolgicos Morfologa y estructura bacteriana 1.Laboratorio de Diagnstico Clnico. Centro de Formacin Profesional Instituto Villaverde- Madrid, Espaa. Gitai, Z. 2005. The New Bacterial Cell Biology: Moving Parts and Subcellular Architecture. Cell. (120), N5: 577-586 Kaiser, D. 2002. Signaling in myxobacteria. Annu Rev Microbiol. (58): 7598 Lechuga-Zrate, A.I. y Y.K. Gutirrez-Mercado. 2005. Bacterias. Universidad de Guadalajara, Centro universitario de Ciencias Biolgicas y Agropecuarias, departamento de Biologa Celular y Molecular. Mxico National Research Council Space Studies Board. 1999. Size limits of very small microorganisms: proceedings of a workshop. National Academic Press, Washington, D.C. Prescott, Harley & Klein. Microbiologa. 5ta. Edicin. Editorial McGraw Hill Schulz, H. N., and B. B. Jrgensen. 2001. Big bacteria. Annu. Rev. Microbiol. 55:105137 Starr, M. P., H. Stolp, H. G. Trper, A. Balows, and H. G. Schlegel (ed.). 1981. The prokaryotes: a handbook on habitats, isolation, and identification of bacteria. Springer-Verlag, Berlin, Germany Young ,K. 2006. The selective value of bacterial shape. Microbiol Mol Biol Rev.(70), N 3: 660703 Thanbichler, M., S. Wang, and L. Shapiro. 2005. The bacterial nucleoid: a highly organized and dynamic structure. J Cell Biochem.(96), N3: 506521 Whitman W., D. Coleman, and Wiebe W. 1998.Prokaryotes: the unseen majority. Proc Natl Acad Sci U S A.(95).N 12: 6578 6583 Woese, C, O. Kandler, and M. Wheelis. 1990. Towards a natural system of organisms: proposal for the domains Archaea, Bacteria, and Eucarya. Proc Natl Acad Sci U S A.(87), N12:45764579 Young, K.D. 2006. The Selective Value of Bacterial Shape. Microb. Molec. Biolog. Rev.(70), N3: 660703 Zinder, S. H., and M. Dworkin. 2001. Morphological and physiological diversity. In M. Dworkin et al. (ed.), The prokaryotes: an evolving electronic resource for the microbiological community, 3rd ed. Springer-Verlag, New York, N.Y.

21

22