Obtencin de placas mitticas en tejido intestinal Microlophus peruvianus.

(Squamata: Tropiduridae) Obtaining mitotic plates in intestinal tissue of Microlophus peruvianus. (Squamata: Tropiduridae)

M. Isabel. Hurtado1, R. Jaemy Romero1 y E. Adrian Torres1. Laboratorio de Anatoma y Farmacognosia Vegetal. Departamento de Botnica. Facultad de Ciencias Biolgicas. Universidad Nacional Mayor de San Marcos. Email: ge.qhura@gmail.com Resumen. El estudio citogentico de la lagartija costera Microlophus peruvianus en tincin con Giemsa 4% puede ser una alternativa para determinar las caractersticas de los cromosomas mitticos. En el presente estudio se trabajo con tejido del epitelio intestinal de la especie en mencin, tratado con un protocolo experimental. Palabras clave: lagartija, mittico, cromosomas, intestino. Abstract. The cytogenetic study of coastal lizard Microlophus peruvianus in 4% Giemsa staining may be an alternative to determine the characteristics of mitotic chromosomes. In this study we worked with intestinal epithelial tissue of the species in question, treated with an experimental protocol. Key words: lizard, Microlophus chromosomes, intestine. Introduccin. La lagartija de las playas Microlophus peruvianus Lesson 1826, es una de las especies ms abundantes del Desierto Costero peruano (Dixon y Wright 1975; Prez & Balta 2007), y su amplia distribucin abarca casi todo el litoral peruano desde Piura hasta Arequipa (Carrillo & Icochea 1995, Zeballos et al. 2004). Debido a esta considerable amplitud en el nicho trfico, la lagartija de las playas M. peruvianus es considerada una especie con dieta de tipo peruvianus, mitotic, Microlophus peruvianus,
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generalista (Pfaur y Lpez-Tejeda 1983; Prez y Balta 2007) y oportunista (Prez y Balta 2007). Esta lagartija consume principalmente artrpodos (Pfaur y Lpez-Tejeda 1983; Prez y Jhancke 1998; Prez y Balta 2007), tambin consume material vegetal (Pfaur y Lpez-Tejeda 1983; Prez y Balta 2007), e inclusive individuos juveniles de su propia especie (Prez 2005a). No se registran datos sobre la informacin gentica de esta especie, lo cual nos muestra el largo camino por recorrer para conocer este particular ser. Materiales y mtodos: Material biolgico. Se utilizo una lagartija de la playa Santa Rosa de Ancn, Microlophus peruvianus es uno de los saurios ms visibles del desierto costero peruano (Prez y Balta, 2007). La captura se realizo el jueves 24 de mayo, se observo el espcimen sobre una piedra frente al mar, el mtodo de captura fue realizado manualmente, entre las horas en las cuales las lagartijas toman el sol, entre las 10 a 15 horas, pues as aumenta la probabilidad de observarlas, luego se la guardo en una caja de madera hasta la universidad. El 25, se la peso, 48,3 g y se preparo la solucin de Colchicina 0,25%. Los mtodos de trabajo se basan en la Declaracin de Helsinki de 1975 y a las leyes peruanas vigentes (Ley 27265). Tratamiento. Se sigui el protocolo indicado por la Mara Siles. Blga.

Inocular intraperionalmente colchicina 0,025% (por lo cual se diluyo en 2mL una pastilla de colchicina del laboratorio farmaindustria de 0,5mg). La dosis fue 0,012 ml/g; as q se inyecto 0,58 ml de solucin. Luego de transcurridas las dos horas, se sacrifico al animal, haciendo que este inhale cloroformo dentro de una cmara; se disect y se extrajo el intestino delgado. Despus se abri, limpio y lavo con agua de la grifera y agua destilada, tres veces, para evitar que la muestra se procese contaminada. Colocar el tejido en KCl para hipotonizar, al 4% por 20 minutos a 50C en bao mara, luego enjuagar con agua destilada, tres veces. Por ltimo se fijo el intestino en Carnoy I (3:1) en un frasco mbar. Obtencin de placas. Colocar una pequea tejido, de preferencia 1 cm2, sobre una porcin del placa petri

inclinada. Luego agregar 1 gota de acido actico 50% por un minuto y disgregar las clulas hasta obtener una suspensin. Poner una gota de suspensin sobre portaobjeto apoyado sobre plancha trmica a 50C (es el squash, debe hacerse desde una altura mnima de 40 cm), pero nosotros pusimos a una altura de 2 metros aproximadamente. Al final se tie en Giemsa 4% por unos 7 a 8 min, observar y fotografiar. Resultados Los ncleos de las clulas del epitelio intestinal de Microlophus peruvianus se muestran deformadas por la accin fsica ejercida mecnicamente. Los ncleos en su mayora se encuentran en interfase, otros pocos se observan en profase y algunos menos estn con la membrana nuclear estallada dejando escapar pequeos corpsculos que tericamente serian cromosomas mitticos. Discusin. La poca presencia de placas metafsicas se debe a que la Colchicina no actu efectivamente, ya que el tiempo de accin preestablecido para el protocolo no fue el ms adecuado. Posiblemente un mayor tiempo de accin de la Colchicina, aproximadamente 6 horas, como indica Gonzales et al. (2011)sera ms adecuado. Se pueden ver corpsculos saliendo del interior de las membranas nucleares que han estallado por accin fsica mecnica. Se plantea la hiptesis que estos corpsculos son cromosomas mitticos del epitelio intestinal. Se dejan abiertas las posibilidades para futuros estudios sobre estos corpsculos nucleares. Conclusiones. Finalmente podemos concluir que el protocolo efectuado en el presente estudio no es el adecuado para tratar el tejido del epitelio intestinal de Microlophus peruvianus, ya que presenta ciertas deficiencias que se deben ajustar, como por ejemplo el tiempo de accin de la Colchicina. Recomendaciones. Se recomienda ajustar los siguientes puntos que muestran ms falencias:

Tiempo de accin de la Colchicina. Elegir un tejido con mayor resolucin. Ajustar altura para ruptura de membrana mediante accin mecnica.

nuclear

Bibliografa: a. Carrillo N. & J. Icochea. 1995. Lista taxonmica preliminar de los Reptiles vivientes del Per. Publicaciones del Museo de Historia Natural Universidad Nacional Mayor de San Marcos (A) 49:127. b. Dixon J. & J. Wright. 1975. A review of the lizards of the iguanid genus Tropidurus in Peru. Contribution in Science of Los Angeles County Museum. 271: 1-39. c. Gonzales L.A. et al. 2011. Cariotipo de lagarto Tropirus hispidus (Sauria: Tropidurudae) en el oriente de Venezuela. Facultad de ciencias, Universidad Central de Venezuela. Caracas, Venezuela. Acta biol. Colomb, Vol 16 N2: 121-134. d. Kasahara S. et al. 1996. Comparative cytogenetic studies of eleven species of the Tropidurus torquatus group (Sauria, Tropeduridae), with bandaing patterns. Hereditas 125: 37-46 e. Machado K.C. et al. 1994. Citogenetic studies in six species of tropiduridae (sauria). Rev. Brasil. Genet. 17 (4): 401-408 f. Quispitpac, E & J. Prez. 2009. Dieta de la lagartija de las playas Microlophus peruvianus (Reptilia: Tropiduridae) en la playa Santo Domingo, Ica, Per. Revista Peruana de Biologa. 15(2): 129130. g. Pefaur J. & E. Lpez-Tejeda. 1983. Ecological notes on the lizard Tropidurus peruvianus in southern Peru. Journal of Arid Environmnets 6:155-160. h. Prez, J. & K. Balta. 2007. Ecologa de la comunidad de saurios diurnos de la Reserva Nacional de Paracas. Revista Peruana de Biologa 13(3): 169-176.

i. Prez, J. & J. Jhancke. 1998. Saurios como consumidores de ectoparsitos de aves guaneras. Boletn del Instituto del Mar de Per. 81-86. j. Prez, J. 2005a. Microlophus peruvianus. Cannibalism. Herpetological Review 36 (1): 63. k. Zeballos P. et al. 2004. Distribucin de los reptiles de Arequipa, sur del Per. Dilloniana 4 (2).

Anexo 1

Figura 3.1. Se observa a Microlophus peruvianus Vista lateral y B. Vista dorsal

en A.

Anexo 2

Figura 3.2. Ncleos de las clulas de tejido intestinal de Microlophus peruvianus teidos en Giemsa 4%. A.- Detalle de la dispersin de los ncleos en la lamina tratada. B.Ncleo en profase mittica. C, D.- Corpsculos que provienen del interior de los ncleos explotados mecnicamente (posiblemente cromosomas).