Este arquivo faz referncia prova de Professor de Bioqumica/ Metabolismo Celular do rgo IF/RJ, aplicada por IF/RJ no ano

o 2006

Antes de imprimir, pense em sua responsabilidade com o MEIO AMBIENTE.

Ministrio da Educao Secretaria de Educao Profissional e Tecnolgica Centro Federal de Educao Tecnolgica de Qumica de Nilpolis RJ

Concurso Pblico para Provimento de Cargos de Professor de Ensino de 1o e 2o Graus Edital n 12/2006

Caderno de Questes
A23 / Bioqumica, com domnio do metabolismo celular e das tcnicas de anlises bioqumicas
Voc recebeu do fiscal um CADERNO DE QUESTES e um CADERNO DE RESPOSTAS. O CADERNO DE QUESTES consta de 24 (vinte e quatro) pginas, numeradas seqencialmente, incluindo o espao para rascunho. O CADERNO DE RESPOSTAS consta de 20 (vinte) pginas, numeradas seqencialmente. Esta uma prova dissertativa, com o valor mximo de 60 (sessenta) pontos, distribudos por 05 (cinco) questes.

ATENO!

Confira o seu nome, o nmero de identidade e o de inscrio, alm da rea de Atuao/Conhecimento para a qual est concorrendo, constantes no carto grampeado ao CADERNO DE RESPOSTAS. Em caso de incorrees, comunique ao fiscal de sala. Voc dispe de 04 (quatro) horas para fazer esta prova. Distribua o tempo disponvel entre o desenvolvimento das questes no rascunho e a sua transcrio para o CADERNO DE RESPOSTAS. Para qualquer tipo de rascunho, somente ser permitida a utilizao das folhas constantes do CADERNO DE QUESTES. No permitido ao candidato destacar qualquer folha deste caderno. O desenvolvimento das questes s ser considerado se transcrito a caneta, azul ou preta, para o espao destinado resposta de cada questo no CADERNO DE RESPOSTAS. Evite rasuras, mas lembre-se de que a organizao e a limpeza da prova so importantes no momento de sua avaliao. O candidato somente poder retirar-se da sala aps decorridos 60 (sessenta) minutos do incio da prova. Os 03 (trs) ltimos candidatos permanecero na sala at que todos concluam a prova, ou que termine o tempo de durao da mesma, devendo retirar-se todos juntos. Terminada a prova, confira-a com ateno e entregue-a ao fiscal de sala o CADERNO DE QUESTES e o CADERNO DE RESPOSTAS. Siga a Agenda do Edital para acompanhar as demais etapas do Concurso.

2 3 4 5 6 7 8 9

CEFET Qumica

A23 / Bioqumica, com domnio do metabolismo celular e das tcnicas de anlises bioqumicas

Questo 01 (10 pontos)

As principais etapas da purificao e caracterizao da lectina (LCM) do mexilho de Manila, Ruditapes philippinarum, esto descritas a seguir. O extrato bruto do mexilho de Manila, Ruditapes philippinarum, foi previamente centrifugado a 10000xg para a remoo de impurezas. Aps a centrifugao, o sobrenadante foi aplicado a uma coluna de 2,6 x 3,6 cm, empacotada com mucina-Sepharose CL-6B (Figura 1A, Raia III) e equilibrada com 50 mmol/L de tampo Tris.HCl (pH 8,5), 150 mmol/L NaCl e 1mmol/L de CaCl2 (TBS-Ca2+). A eluio foi subseqentemente realizada pela adio de TBS-EDTA (1mmol/L de cido etilenodiamino tetra-actico) e as fraes correspondentes lectina foram diretamente carregadas sobre uma coluna de 1,0 x 1,5 cm, empacotada com dietilaminoetil (DEAE)-TSK 650M, (Figura 1A, Raia IV) e equilibrada com TBS-Ca2+. Nesta eluio utilizou-se um gradiente de 0,1 a 0,4 mol/L de NaCl em TBS-Ca 2+. A concentrao e atividade hemaglutinante das fraes foram determinadas em cada etapa da purificao. A amostra cromatografada em DEAE-TSK 650M foi precipitada em 60% de (NH4)2SO4, centrifugada a 1800xg e ressuspendida em TBS-EDTA. A soluo foi carregada em uma coluna de 1,0 x 45,0 cm, preenchida com gel de Superose 6 em TBS-EDTA (Figura 1A, Raia V e Figura 2). As fraes referentes amostra foram monitoradas por espectrofotometria e o enriquecimento de cada etapa foi acompanhado por eletroforese em gel de poliacrilamida na presena de dodecil sulfato de sdio (SDS-PAGE), em condies redutoras e no-redutoras. O sumrio das etapas da purificao est ilustrado na Tabela 1. Resultados

(A)

(B)

Figura 1: Anlise da MCL por SDS-PAGE. (A) Fraes coletadas em cada etapa da purificao e analisadas por SDS-PAGE sob condies no-redutoras. Raia I, padro de massa molecular; Raia II, muco do mexilho; Raia III, frao aps cromatografia em mucina-Sepharose; Raia IV, frao aps cromatografia em DEAE-TSK 650M; Raia V, frao aps cromatografia em Superose 6. (B) Anlise das lectinas purificadas (MCL e lectina de 50-kDa) por SDS-PAGE no-redutora e redutora.

-1-

CEFET Qumica

A23 / Bioqumica, com domnio do metabolismo celular e das tcnicas de anlises bioqumicas

Questo 01 (continuao)

Figura 2: Perfil cromatogrfico da MCL em Sepharose 6 e determinao da sua massa molecular em soluo. Padres de massa molecular utilizados: ferritina (386 kDa), catalase (209 kDa), aldolase (179 kDa), albumina de soro bovino (66 kDa), anidrase carbnica (29,4 kDa). Tabela 1: Purificao da lectina MCL de mexilhes de Manila, Ruditapes philippinarum.
Etapas Extrato bruto Mucina-Sepharose DEAE-TSK 650 M Superose 6 Volume (mL) 100 35 7,5 10 Concentrao (mg / mL) 2,6 0,6 0,4 0,2 Massa Total (mg) 260 21 3 2 Ttulo HA 5000 10000 40000 20000 Atividade especfica (ttulo / mg) 19 476 1333 10000 Atividade total 500000 350000 300000 200000 Rendimento (%) 100 70 60 40

Ttulo de HA (atividade hemaglutinante) = recproca da maior diluio observada com atividade hemaglutinante.

(Adaptado de BULGAKOV, A.A. et al. Purification and characterization of a lectin isolated from the Manila clam Ruditapes philippinarum in Korea. Fish and Shellfish Immunology, v. 16, p.487-499, 2004).

Explique: A. A importncia funcional das lectinas para os sistemas biolgicos. B. O princpio das tcnicas cromatogrficas utilizadas para a purificao da lectina MCL. C. O princpio da tcnica e importncia das anlises realizadas por SDS-PAGE (eletroforese em gel de poliacrilamida na presena de dodecilsulfato de sdio) redutora e no-redutora. D. Os resultados da purificao da lectina MCL, obtidos pelas estratgias utilizadas nesse protocolo.

-2-

CEFET Qumica

A23 / Bioqumica, com domnio do metabolismo celular e das tcnicas de anlises bioqumicas

Questo 02 (10 pontos)

A enzima fosfoglicomutase transforma a glicose-6-fosfato em glicose-1-fosfato e tem como um de seus inibidores o 3-fosfoglicerato. Essa inibio mostrada no grfico abaixo:

Lineweaver-Burk
5 4 3 2 1
-1

1/V (mM/min)

Com inibidor Sem inibidor

-30

-20

-10

10

20

30

40

1/[S] (mM)-1

Explique: A. O tipo de inibio apresentado no grfico, seu mecanismo de ao, alm dos parmetros cinticos que, obtidos graficamente, justifiquem sua resposta. B. O papel da fosfoglicomutase no metabolismo de glicdios e as conseqncias de sua inibio completa por uma droga hipottica.

Questo 03 (10 pontos)

Perini et al., em 1993, descreveram um caso de uma jovem adolescente, hospitalizada em decorrncia de um episdio anterior de confuso mental, vmito e agitao psicomotora. Testes realizados, durante o perodo de internao, mostraram uma hiperamonemia e hiperbilirrubinemia no-conjugada. Exames do lquido cefalorraquidiano e bipsia heptica apresentaram resultados normais. Entretanto, anlises dos aminocidos, feitas no plasma e urina, confirmaram o diagnstico da sndrome de deficincia da ornitina transcarbamoilase. A. De acordo com o metabolismo de aminocidos, por que a deficincia da enzima supracitada pode causar problemas, como o aumento dos nveis de amnia, levando o paciente a quadros de irritao do sistema nervoso central, retardo mental em crianas ou at mesmo o coma? B. Explique, bioquimicamente, por que o principal tratamento para essa sndrome se faz pela administrao de arginina ao paciente.
-3-

CEFET Qumica

A23 / Bioqumica, com domnio do metabolismo celular e das tcnicas de anlises bioqumicas

Questo 04 (20 pontos)

Voc e um amigo decidiram fazer uma caminhada juntos e saram de casa em jejum. Aps uma hora de esforo fsico, com ambos ainda em jejum, voc descobriu que seu amigo diabtico. Explique, bioquimicamente, como poderia estar o seu metabolismo e o de seu amigo naquele momento.

Questo 05 (10 pontos)

Em 1966, Peyton Rous foi agraciado com o prmio Nobel de Fisiologia e Medicina ao demonstrar a induo de tumores malignos em aves, por partculas virais. Ele utilizou, como modelo experimental, o extrato celular filtrado, proveniente de tumores de tecido conjuntivo de galinhas que, quando inoculado em animais sadios, induzia proliferao de clulas cancerosas. O agente responsvel pela transformao das clulas normais em tumorais, presente no filtrado, foi identificado como um vrus, posteriormente denominado Vrus do Sarcoma de Rous (RSV) ou Vrus do Sarcoma Avirio. Anos mais tarde, foi demonstrado que o desenvolvimento do sarcoma em animais sadios estava associado presena de apenas um gene viral, o viral-src ou v-src. Em 1976, Michael Bishop e Harold Varmus identificaram, em aves sadias, o gene celular-src ou c-src, anlogo ao viral-src. Estudos posteriores revelaram que o gene c-srv codifica uma protena tirosina cinase, responsvel pela regulao do crescimento celular. Disserte acerca do papel dos mecanismos de transduo de sinais dependentes de tirosina cinase, no controle da proliferao celular e no estabelecimento do cncer.

-4-