GENETICA TALLER No. 5 1. Presente el concepto de los siguientes trminos: ligamiento, recombinacin, quiasma, interferencia, coincidencia, mapa gentico.

- Ligamiento
En gentica se denomina ligamiento a la asociacin fsica entre dos loci (esto es, su cercana en una misma hebra de ADN, lo que repercute en una baja frecuencia de recombinacin entre ellos durante la meiosis, y, por tanto, a una mayor probabilidad de herencia conjunta. Esto se debe a que los quiasmas, estructuras de entrecruzamiento generadas durante la recombinacin, se producen al azar a lo largo de un cromosoma; de este modo, a menor distancia entre dos loci, menor probabilidad de que se d un quiasma y, por tanto, se generen variantes recombinantes.1 La disposicin de dos loci con mxima frecuencia de recombinacin (esto es, de 0,5 o, lo que es lo mismo, del 50%) es sobre cromosomas separados, puesto que, as, si slo se transmite las clulas germinales una copia del genoma y existen dos cromosomas homlogos (el paterno y el materno) en la clula diploide de la lnea germinal, su segregacin al azar dar lugar a la transmisin de uno de los dos, y 1/2 corresponde a la mencionada frecuencia de recombinacin de 0,5. Cuando los dos loci se encuentran en cromosomas distintos se dice que no estn ligados: es una situacin de no ligamiento.1

Ligamiento y cartografa [editar]

Puesto que la frecuencia de recombinacin est relacionada con la distancia fsica entre dos loci o marcadores, es lgico pensar que podra emplearse este parmetro para dilucidar la disposicin de stos sobre un cromosoma, definiendo incluso las distancias entre ellos. Alfred Sturtevant, un estudiante del laboratorio de Thomas Hunt Morgan, emple esta metodologa para generar, por primera vez, para generar un mapa de cartografa gentica basado en frecuencias de recombinacin. Para ello analiz estadsticamente el nmero de recombinantes obtenidos en una progenie, relacionando el porcentaje de stos con la distancia existente entre marcadores; dicha distancia se expresa en en unidades de mapa (u.m.) o centiMorgan (cM).2

Recombinacin gentica
La recombinacin gentica es el proceso por el cual una hebra de material gentico (usualmente ADN; pero tambin puede ser ARN) es rota y luego unida a una molcula de ADN diferente. La recombinacin de eucariotas comnmente se produce durante la meiosis como entrecruzamiento cromosmico entre los cromosomas apareados. Este proceso conduce a que la progenie tenga diferentes combinaciones de genes de sus padres y puede producir alelos quimricos. En biologa evolutiva se cree que esta mezcla de genes tiene varias

ventajas, incluyendo que permite a los organismos que se reproducen sexualmente y evitar el trinquete de Muller. En biologa molecular, "recombinacin" tambin se refiere a la recombinacin artificial y deliberada de piezas de ADN disitintas, a menudo de diferentes organismos, creando lo que se llama ADN recombinante. Enzimas llamadas recombinasas catalizan las reacciones de recombinacin natural. RecA, la recombinasa encontrada en Escherichia coli, es responsable de la reparacin de las roturas en el ADN de doble hebra. En levaduras y otros organismos eucariotas hay dos recombinasas requeridas para reparar esas roturas. La protena RAD51 es requerida para la recombinacin mittica y meitica y la protena DMC1 es espefica de la recombinacin meitica.

Contenido
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1 Tipos de recombinacin gentica o 1.1 Recombinacin homloga 1.1.1 Entrecruzamiento cromosmico 1.1.2 En clulas B 1.1.3 Conversin gnica o 1.2 Recombinacin especfica de sitio o 1.3 Recombinacin no homloga 2 Enlaces externos

Tipos de recombinacin gentica [editar]

Existen varios tipos de recombinacin gentica, en las clulas eucariotas:

Recombinacin homloga [editar]

La recombinacin homloga (tambin llamada recombinacin general) sucede durante la profase I de la meiosis y tiene lugar entre las largas regiones de ADN cuyas secuencias son homlogas, es decir altamente similares pero no idnticas..

Entrecruzamiento cromosmico [editar]

Artculo principal: Entrecruzamiento cromosmico

Thomas Hunt Morgan's illustration of crossing over (1916)

El entrecruzamiento cromosmico se refiere a la recombinacin entre los cromosomas apareados heredado de uno de los padres, generalmente ocurre durante la meiosis. Durante la profase I, las cuatro cromtides disponibles estn estrechamente posicionadas una con respecto a la otra. Mientras en este formacin, los sitios homlogos en las dos cromtides pueden conicidir entre s, y pueden intercambiar informacin gentica. Como la recombinacin puede producirse con baja probabilidad en cualquier lugar del cromosoma, la frecuencia de recombinacin entre dos puntos depende de sus distancia. Por lo tanto, para genes sufcientemente distantes en el mismo cromosoma la cantidad de recombinacin es lo suficientemente alta para destruir la correlacin entre alelos.

En clulas B [editar]
Artculo principal: Inmunoglobulina

Las clulas B del sistema inmunitario realizan una recombinacin gentica llamada cambio de clase de inmunoglobulinas. Es un mecanismo biolgico que cambia un anticuerpo de una clase a otra, por ejemplo, de un isotipo llamado IgM a otro llamado IgG.

Conversin gnica [editar]

Artculo principal: Conversin gnica

En la conversin gnica, una seccin de material gentico es copiada de un cromosoma a otro, pero deja el cromosoma donante sin cambios.

Recombinacin especfica de sitio [editar]

Otro tipo de recombinacin es la especfica de sitio que tiene lugar por rotura y posterior unin de regiones de homologa corta y especfica de dos ADN diferentes, o dentro de la misma molcula. Ocurre en virus (por ejemplo, el bacterifago T4) y en plsmidos

Recombinacin no homloga [editar]

Artculo principal: Recombinacin no homloga

La recombinacin puede ocurrir entre secuencias de ADN que no contienen secuencias homlogas. Estos es conocidos como recombinacin no homloga. Acontece raramente en procariotas y levaduras, pero es ms frecuente en clulas de mamferos.

- Quiasma
El quiasma es el entrecruzamiento entre cromtidas no hermanas en el proceso de recombinacin meitica, tal como puede ser visualizado citogenticamente.

En una meiosis humana masculina pueden observarse un promedio de 52 quiasmas repartidos uniformemente entre los 23 pares de cromosomas homlogos. En la meiosis femenina se producen ms quiasmas (98) que presenta un promedio prximo a 1 quiasma. Cada una de las cromtidas hermanas tiene el 50% de probabilidad de establecer un quiasma concreto, por lo que la fraccin mxima de recombinacin (frecuencia de recombinacin) esperable entre dos locus es de 0,5.

- Cartografa gentica
La cartografa gentica es una disciplina de la gentica que, mediante varias tcnicas, busca asignar a los distintos genes de un genoma su lugar fsico en aqul. Existen dos variantes fundamentales de mapas: los genticos, definidos mediante unidades de frecuencia de recombinacin, y los fsicos, en los que las distancias entre loci se expresan en unidades de distancia en nucletidos.1

Contenido
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1 Descubrimiento del ligamiento 2 Anlisis basados en la recombinacin 3 Tcnicas o 3.1 FISH o 3.2 RFLP o 3.3 Cartografa mediante deleciones 4 Referencias

Descubrimiento del ligamiento [editar]

Tras los estudios de gentica clsica sobre la transmisin de caracteres independientes por parte de Mendel que condujeron en el siglo XIX a la formulacin de sus leyes,2 otros investigadores, William Bateson y R. C. Punnet, encontraron en 1911 una desviacin a este tipo de herencia al estudiar la segregacin de cruzamientos entre dos lneas de flores que diferan en dos caracteres dados.3 Aunque la base fsica de esta peculiaridad se desconoca en la poca, dicha anomala se debe a que aquellos caracteres se encontraban acoplados fsicamente en el cromosoma: esto es, se encontraban ligados, a diferencia de los estudiados por Mendel, que se encontraban en cromosomas distintos. De esta manera, la tasa de recombinantes producidos tras el cruce de los parentales era menor a la esperada, debido a que, por cercana fsica en la hebra de ADN, la probabilidad de que se produjese un evento de recombinacin, un quiasma, era pequea, e inversamente proporcional a la distancia entre los dos loci codificantes de esos caracteres. En cambio, en el modelo inicial de Mendel, la probabilidad de recombinacin, de 0,5, expresaba la transferencia aleatoria de uno u otro alelo de cada carcter debido a la transferencia al azar hacia el gameto de uno u otro cromosoma durante la meiosis.1

Anlisis basados en la recombinacin [editar]

Se define recombinacin meitica como cualquier proceso meitico que da lugar a un genotipo haploide distinto de los dos genotipos haploides cuya fusin dieron lugar a la clula meitica diploide. Esto es, la recombinacin meitica da lugar a recombinantes. Dicha recombinacin puede proceder tanto de una segregacin independiente como de una la existencia de entrecruzamientos.1 En el caso de la segregacin independiente, se observa que, al cruzar dos lneas puras, la progenie resultante es homocigtica en su totalidad. De efectuar un cruzamiento de prueba, es decir, un cruce de la primera generacin filial, la F1 heterocigtica en este caso, con uno de los parentales, que es una lnea pura, se obtiene una distribucin genotpica en la cual el porcentaje de recombinantes es de la mitad de la progenie: existe un 25% de cada tipo recombinante. En cuanto a los recombinantes obtenidos mediante entrecruzamiento, stos se producen mediante hechos de recombinacin entre cromtidas no hermanas en un lugar entre dos loci dados. Tras el entrecruzamiento, la mitad de los productos de esa meiosis son recombinantes para esos dos loci.

Tcnicas [editar]
FISH [editar]
Artculo principal: Hibridacin fluorescente in situ

FISH metafsico: el cromosoma 2 se marca en amarillo. A la izquierda, DNA de orangutn y, a la derecha, de humano. El patrn confirma que el cromosoma 2 humano deriva de la fusin de 2 cromosomas ancestrales. La hibridacin fluorescente in situ es una tcnica que se basa en la unin selectiva de un polinucletido de cadena sencilla y de secuencia dada (denominado sonda) a una o ms zonas del genoma que posean secuencias complementarias, en una preparacin de clulas o tejidos. Dicha unin se observa mediante un microscopio de fluorescencia o un microscopio confocal, puesto que la sonda est marcada mediante un fluorocromo.4 Dicha tcnica se emplea sobre muestras histolgicas en los que los cidos nucleicos han sido fijados: por ejemplo, puede emplearse sobre clulas en estado metafsico (debido a un tratamiento previo con colchicina o colcemida) lo cual puede permitir asignar un marcador a un cromosoma concreto. No obstante, tambin es posible emplear la tcnica sobre ncleos interfsicos.5

RFLP [editar]
Artculo principal: RFLP

Un RFLP (denominado RFLP por el ingls restriction fragment length polimorphism, es decir, polimorfismo en la longitud del fragmento de restriccin) o polimorfismo en la longitud de un fragmento de restriccin representa un polimorfismo asociado generalmente a una mutacin puntual en un punto determinado de un genoma. Se detecta mediante la digestin mediante enzimas de restriccin de ADN genmico o bien de un amplicn producido mediante PCR previamente (en este ltimo caso, se habla de CAPS o Cleaved Amplified Polymorphic Sequence, o polimorfismo de fragmento amplificado y digerido).6

Cartografa mediante RFLP. Se muestra un individuo homocigoto (A) y uno heterocigoto (B), as como sus respectivos Southern blots.

Una forma de detectar dicho polimorfismo es mediante Southern blot. Para ello se digiere el ADN genmico de dos individuos con una enzima y luego se hibrida la mezcla de fragmentos resultante con una sonda marcada que hibrida en la zona de la diana que muestra polimorfismo. De este modo, puede detectarse luego el tamao de los fragmentos generados. En el grfico se observa: un individuo A que es homocigtico para la ausencia de diana, luego muestra en el southern una nica banda de 5 KB (el tamao acotado por dos dianas de restriccin para la enzima empleada); y un heterocigoto, que muestra la misma banda de 5 KB (procedente de su cromosoma homlogo "sin diana") ms dos bandas (de 3 y 2 KB, pues la sonda complementa con una secuencia en ambos fragmentos, pues stos colindaban en origen con la diana de restriccin).7

Cartografa mediante deleciones [editar]

Esquema que muestra dos molculas de ADN distintas correspondientes a dos mutantes distintos. El gen posee 5 partes y ambos mutantes slo comparten el bloque B, que equivale al segmento 3. Las deleciones son mutaciones que ocasionan la prdida de fragmentos de ADN. Empleando cruzamientos de mutantes, las deleciones pueden permitir la topologa de una determinada secuencia. En la imagen de ejemplo se observa el genotipo de dos mutantes para un gen con cinco segmentos: el mutante de arriba slo contiene los segmentos 1, 2 y 3; y el de abajo, el 3, 4 y 5. Un mutante nuevo que produzca recombinantes con fenotipo silvestre al cruzarse con el de abajo estar mutado en un sitio en el rea A. Uno que los produzca al cruzarse con el de arriba pero no con el de abajo estar mutado en la regin C.1 Este mtodo permiti a Seymour Benzer definir la topologa del gen, es decir, la forma en que estn interconectadas sus partes.8 2. Cul es la importancia del ligamiento y la recombinacin en el mejoramiento de plantas. LA VARIABILIDAD GENETICA DE LAS FAMILA F2

LIGAMIENTO Y RECOMBINACIN
INTRODUCCIN
El fenmeno de la reproduccin sexual prev un reordenamiento de la informacin de origen parental (P), contenida en los cromosomas, antes que un individuo (F1) la transmita a su descendencia. Este proceso se denomina "recombinacin gnica", que no implica la aparicin en la progenie de nuevas alternativas (nuevos fenotipos) para los caracteres en

estudio, sino nuevas combinaciones de estos en relacin a las observadas en los progenitores. La recombinacion gnica se lleva a cabo mediante dos mecanismos que ocurren durante la meiosis : la recombinacin independiente que se manifiesta en la metafase de la primera divisin meitica (ya analizada en el captulo 5) y el entrecruzamiento o crossing over, en la profase meitica (paquitena). Resumiendo: La recombinacin independiente ocurre entre aquellos pares gnicos que se encuentran ubicados en diferentes pares cromosmicos; es decir, no tienen ningn tipo de ligamiento fsico y por lo tanto pueden combinarse independientemente unos con otros (distribucin al azar). En cambio, se dice que dos genes estn ligados cuando sus loci estn situados en el mismo cromosoma, constituyendo un grupo de ligamiento; por lo que entre ellos no puede ocurrir recombinacin independiente. El anlisis de la recombinacin entre pares gnicos incluye la obtencin de un hbrido, al cual se le hace un cruzamiento prueba (CP). Siguiendo este esquema y a partir de un ejemplo hipottico, veremos cules son los resultados que se obtienen al analizar la recombinacin gnica entre pares de loci que se encuentran ubicados a diferentes distancias entre s sobre el mismo cromosoma (figura 6.1). Figura 6.1 - Ubicacin de los loci C/c, D/d, F/f, H/h y R/r sobre un par cromosmico.

3. En el cromosoma 1 del tomate se encuentran los siguientes genes recesivos: lc= frutos pluriloculares bk= frutos en forma de pera s= inflorescencia compuesta Se realiz el cruzamiento prueba y se obtuvo una progenie de 3000 plantas discriminadas as 259 plantas con frutos pera 40 inflorescencia compuesta, frutos pera 931 inflorescencia compuesta

260 normales 268 frutos pluriloculares, forma de pera, inflorescencia compuesta 941 frutos pluriloculares, formato de pera 32 frutos pluriloculares 269 frutos pluriloculares, inflorescencia compuesta Presente los genotipos de los progenitores y descendientes. Estime la recombinacin, interferencia y coincidencia. Elabore el mapa gentico. Interprete los resultados.