Fotoluminiscencia
Para que una sustancia origine emisin fotoluminiscente es necesario que previamente tenga lugar la absorcin de radiacin electromagntica. y un electrn pasa a un nivel energtico superior
a singulete fundamental
b singulete excitado
c triplete excitado
Las transiciones desde el estado singulete fundamental hasta el estado triplete son muy poco probables; normalmente es necesario pasar a travs del estado singulete excitado.
Proceso de desactivacin
Relajacin vibracional
v2 S 2 v1 v0
Conversin interna
S1
..
desactivacin no radiante
E Absorcin
v2 T v1 1 v0
Fluorescencia Fosforescencia
So 2 1 3 4
v2 v1 v0
Factores medioambientales
Influencia del disolvente. Influencia del pH Influencia del oxgeno disuelto Temperatura
de Excitacin
Longitudes de onda de excitacin cortas puede provocar la ruptura de enlaces o incrementar un estado de predisociacin o de disociacin desactivndose la molcula por esa ruta
* * n * La emisin ocurre desde el estado excitado de menor energa, siendo por tanto la radiacion No Resonante
Estructura molecular
Fotoluminiscentes:
Capacidad de absorcin radiacin ultravioleta o visible, (transiciones >* y n>* Sustancias con dobles enlaces conjugados con alta energia de resonancia ( ej. PAHs) Anillos aromaticos que contengan heteroatomos( Tendencia a ser fosforescentes. Grupos donadores de electrones aumentan la fluorescencia - NH2 y -:H Aumentaprobabilidad de transicin S*->S0 Sustituyentesque interacionan debilmente con electrones (Alquilo-R,SO3H,-NH2 influyen poco Atomos de n Atomico elevadoen sistemas de electrones p aumentan la fosforescencia y disminuyen fluorescencia Grupos atrayentes de electrones( -COOH, -NO2, -N=N y X ) disminuyen o eliminan la fluorescencia
Rigidez
Todo lo que contribuye a establecer estructuras planas y rgidas favorecen la fluorescencia
Fluoreno
O
bifenilo
COO
COO
fluorescena
fenolftalena
Efecto Quelato
El aumento de fluorescencia de ciertos compuestos orgnicos cuando forman quelatos con iones metlicos parece ser debido a un incremento en la rigidez del sistema.
OH2
H2O
OH
Al
HO
O O
SO3Na
SO3Na
La formacin del quelato aumenta considerablemente la rigidez molecular, al impedir que la molcula gire alrededor del grupo azo
Absorcin
A B C
Estado fundamental FranckCondon Estado fundamental polaridad disolvente
.
Influencia del pH
Los cambios en la emisin de los compuestos de este tipo provienen del nmero de especies resonantes diferentes que estn asociadas con las formas cidas o bsicas de las molculas Diferente valor de las Ka en el estado excitado
H H H H H N: . H
+
N (+)
H + H N
Influencia de la temperatura
Al aumentar la T debera aumentar la Intensidad de la fluorescencia E
N* No
=e
Por otra parte se produce una disminucin de la emisin fluorescente por el aumento de la frecuencia de choques lo que incrementa la probabilidad de desactivacin en forma de energa no radiante. El cambio en la fluorescencia es normalmente del 1 % al 5% por C,
Rendimiento Cuantico
Se define como la relacin entre el numero de molculas que emiten radiacin y el numero de las que son excitadas:
fluor =
fluor=0.0 a 1.0
fluor =
ex variable y emfija
espectro de emisin
(intensidad de la emisin fluorescente en funcin de la longitud de onda de emisin, a longitud de onda de excitacin fija);
ex fifa y em variable
equipamiento
Muestra Fuente de radiacin . monocromador de excitacin
(o filtro)
Medidor o registro
Detector .
monocromador de emisin
(o filtro)
n FotonesEmitidos n FotonesAbsorbidos
Iabs=P0-P,
If=k(P0-P)= k Po(1-P/Po)
T=
P bC = 10 Po
P bC = 1 10 Po
110bC= Serie Mac Laren =1-e-2.3bC
f =k Po (1-10-bC)
f=k Po.2.3 b C
Relacion If-Concentracion
K Po If
fluorescencia no uniforme
fluorescencia uniforme
C La no linealidad a concentraciones altas. Es debido a fenmenos de : 1. Autoatenuacin. ( del choque entre molculas excitadas, al aumentar la concentracin, aumentar la probabilidad de que se produzcan colisiones) 2. Autoabsorcin. la fluorescencia de una molcula es absorbida por otra molcula del mismo soluto
Aplicaciones
La metodologia practica de la Fotoluminiscencia es identica a la que se utiliza en espectrofotometria de Absorcin UV con la diferencia de una mayor sensibilidad y selectividad Anlisis Cuantitativo. 1.Determinacion directa 2.Determinacion mezclas Estudio de reacciones
Cuantitativo
Anlisis directo. ( recta calibrado, adicion Standard) Formacin de quelatos fluorescentes. Determinaciones indirectas
Incremento fluorescencia Atenuacin de la fluorescencia
Anlisis de Reacciones
Calculo de constantes de formacion. Estudio de complejos Marcaje de reactivos y seguimiento de reacciones Marcadores de Anticuerpos determinacin de antgenos
QUIMIOLUMINISCENCIA
La quimioluminiscencia se origina cuando se produce una especie excitada como consecuencia de una reaccin qumica que emite radiacin electromagntica en la zona UV .
A + B > X* X* > X + h
NH 2 .
O NH NH O + OH + O 2
NH 2 COO
+ N 2 + 2 H2 O + h COO
CH3-S-CH3 + Fluor
Productos + h
Aplicacin Quimiluminiscencia
NO + O3 NO2* + O2 NO2 + h NO2
UV 800
NO
Aplicacin quimiolum
C2H2O
* SO2 2
C2H2O+h 1 SO2 + h
h 1 > h