Breve Historia de la Biologa Biologa Molecular

BIOL 5019 JA Negrn, Ph.D.

Temas
Resumen Hershey and Chase Meselson and Stahl Watson and Crick Biotecnologa: Herramienta de la biologa molecular
Ingeniera gentica Tcnica PCR Clonacin del primer mamfero Genoma humano Puerto Rico y la biotecnologa

Correlation between DNA and genetic information

Alfred Hershey and Martha Chase

Conclusion: The active component of the bacteriophage that transmits the infective characteristic is the DNA. There is a clear correlation between DNA and genetic information

DNA Structure

1953 James Watson and Francis Crick describe double helix structure of DNA (received Nobel Prize in 1962)

JAMES DEWEY WATSON (1928-)

Francis Harry Compton Crick (1916-2004)

ROSALIND ELSIE FRANKLIN (1920-1958) MAURICE HUGH FREDERICK WILKINS (1916-)

Semiconservative DNA Replication

The semiconservative mode of replication had been predicted by Watson and Crick, and was subsequently supported by Meselson and Stahl in a density-labeling experiment: Escherichia coli bacteria were cultured for several generations in a growth medium containing the heavy nitrogen isotope 15N in the form of NH4Cl. The cells were then transferred to a light 14Ncontaining medium, and the DNA was isolated at various times after this transfer and analyzed by CsCl density gradient centrifugation.

The principle of this analysis is as follows: When a solution of CsCl is centrifuged at high speed, a concentration gradient develops as the consequence of an equilibrium being reached between sedimentation and diffusion. The Cs-salt of DNA, if mixed into the centrifuge tube, will within a couple of days from a narrow band at the CsCl concentration that corresponds to its buoyant density. 14N-and 15N-containing DNA molecules have different buoyant densities and thus can be distinguished in CsCl density gradients. (Note that this centrifugation is different from sucrose gradient centrifugation, where rates of sedimentation are determined.)

Meselson and Stahl observed that, after transfer to the light medium, more and more of the DNA, which originally banded at the heavy 15N-position in the gradient, formed a new band at a position of lighter density until, after one generation, essentially all DNA was of a hybrid density in-between that of fully 15Nlabeled heavy DNA and that of light 14N-labeled DNA. In the course of a second round of replication (generation) in the light medium, a new band gradually appeared at the position of light DNA while the hybrid band remained unchanged in quantity (next figure).

DNA Replication

PCR Inventor
Dr. Kary Mullis, biochemist, inventor of PCR on 1983. He was awarded the 1993 Nobel Prize in Chemistry

PCR Process

By Dr. Donald F. Slish at SUNY, Plattsburgh http://faculty.plattsburgh.edu/donald.slish/PCR.html

PCR Main Events

100

Melting 94 oC Annealing Primers 50 oC Extension 72 oC

Melting 94 oC

30x

Temperature

50

T i m e

BASES MOLECULARES genoma DE LA VIDA

Clula cromosomas genes

ADN ARN

ADN

PROTENAS
los genes contienen instrucciones para hacer protenas

ADN

protenas

las protenas actan solas o en complejos para realizar las funciones celulares

BIOTECNOLOGA
Es el medio o va de manipulacin de las formas de vida (organismos) para proveer un producto deseable para el uso del hombre.
Areas cubiertas por el trmino Biotecnologa incluyen: i) Biologa Molecular: ADN recombinante, cultivo de clulas animales, cultivo de tejidos vegetales, inmunologa, mejoramiento animal y vegetal, ii) Fermentacin, iii) Sistema de Enzimas y iv) Otras.

Proteins are synthesized from DNA

Protein DNA mRNA

Ribosome

El genoma de un organismo es el juego completo de ADN. La planificacin del Proyecto Genoma Humano se inici en 1986, previsto para el 2007. En Junio de 2000 se present el 90% del borrador con la secuenciacin de unos 30,000 genes y 3 mil millones de pares de bases (pb). Los genes son secuencias especficas de bases que codifican instrucciones para hacer protenas. Los genes son un 2% del genoma humano.
Entre una persona y otra el ADN solo difiere en 0.2% 60% De 289 genes humanos implicados en enfermedades, hay 177 cercanamente similares a los genes de Drosophila.

GENOMAS

IDENTIDAD GENTICA
70%

20%

95% idntico

Humano s 30,000 genes

Chimpanc 30,000 genes

Ratn 30,000 genes

A. thaliana 25,000 genes

C. elegans 19,000 genes

D. melanogaster 13,000 genes

Recombinant Human Insulin

In 1978, a synthetic version of the human insulin gene was constructed and inserted into the bacterium Eschericia coli, in the laboratory of Herbert Boyer at the University of California at San Francisco.

Eli Lilly Carolina, Puerto Rico

Ingeniera Gentica NUEVOS ANIMALES

1987 secrecin de Beta-lactoglobulina en leche de ratn. Produccin de protena C humana en leche de cerdos, para desrdenes como hemofilia. Hormonas de crecimiento humano en tejido seminal de cerdo. Antitrombina humana III, anticoagulante sanguneo secretada en leche de cabras transgnicas. Cabras transgnicas para producir BioSteel fibra hecha por el hombre con propiedades de tela de araa.

Ingeniera Gentica NUEVOS ALIMENTOS ARROZ DORADO con beta caroteno de genes de narciso y de Erwinia uredovora, pigmentos que se transforman en pro-vitamina A al ser ingeridos. ARROZ fortificado con un gen de la ferritina del frijol de soya. ARROZ con amino

cidos esenciales.

Ingeniera Gentica NUEVOS ALIMENTOS Salmn transgnico por

hormona de crecimiento. Producido por AF Protein Inc. Cuenta con el promotor de la protena de anticongelamiento de otra especie de pez. Crece de 4 a 6 veces ms rpido que un salmn no transgnico. Tiene un 20% en mejoramiento de la eficiencia de conversin del alimento. (ISB, 2001, oct; Netlink, 2000). Cerdo transgnico para el precursor de la hormona de crecimiento proteasa resistente (GHRH). Por tcnicas de mutagnesis sitio dirigida y terapia electrognica, se introdujo en msculo de cerdo. Los efectos de una inyeccin de 10 mg de dosis del plsmido, en cerdos de tres semanas de edad, se mantuvo sobre 60 das con un 42% mayor que los controles a los 62 das (42 kg contra 29 kg). (ISB, 2000 mar).

Ingeniera Gentica NUEVOS ANTIBITICOS

PAPA con la vacuna que previene la insulina dependencia de la diabetes mellitus 100 veces ms poderosa que la actual vacuna. PAPA con la sub-unidad B antignica de la enterotoxina del Vibrio cholerae causante del clera). FRIJOL de SOYA con anticuerpos que protegen contra el virus 2 de Herpes simplex (HSV). TABACO con anticuerpos que previenen la caries dental producida por

Streptococcus mutans.

Ingeniera Gentica

CLONACION

Trmino genrico para la replicacin en un laboratorio de genes, clulas u organismos de una entidad original, con copias genticas exactas del gen, clula u organismo original. Esta tcnica ha producido avances sensacionales en medicinas y vacunas. Tambin hay investigacin en clonacin de clulas humanas, rganos y otros tejidos. Esto puede producir el reemplazo de piel, cartilagos y hueso para victimas de quemaduras y accidentes, o de rganos.

Ingeniera Gentica

TERAPIA DE CLULAS MADRE

D A 4

C avid ad

c lu la s de c u b ie rta in te rn a

M a sa d e c lu la s in te rn as

M a sa d e c lu la s in te rn as (c lulas M a d re Em b rion a ria s)

C lu las M A D R E p ar a tran sp lan te s d e O rg an os

MAS DE CELUL INTE A AS RNAS

Clulas NERVI S O AS

Clulas Formadoras de S ANG RE

CELULAS MADRE

BLASTOCISTO
M odificad o d e: S cientific A m erican, 2001 Clulas PANCRE CAS ATI Clulas CARDI CAS A

Life Science Companies in Puerto Rico

http://www.pridco.org/portal/

Internet resources
http://highered.mcgrawhill.com/sites/0072437316/student_view0/ chapter14/animations.html# http://highered.mcgrawhill.com/sites/0072437316/student_view0/ chapter14/animations.html#