Gua: Realizacin de Frotis Sanguneo y Tincin de Lminas

ESCUELA SALUD

GUIA REALIZACION DE FROTIS SANGUINEO Y TINCION DE LMINAS

DIRIGIDO A ALUMNOS DE:

Tcnico Superior de Laboratorio Clnico y Banco de Sangre

PRE-REQUISITO:
Laboratorio Clnico I (LCS 2100) .

Autores: BQ Cecilia Lpez Reyes EU. Eliana Escudero DuocUC

Gua: Realizacin de Frotis Sanguneo y Tincin de Lminas

INTRODUCCIN
El frotis sanguneo es realizado en forma rutinaria en todo hemograma, ya sea que se realice en forma manual o automatizada. En este ltimo sistema, cuando hay normalidad en todos los elementos, se obtienen los datos grficamente desde el equipo y es opcional el uso del frotis ( lectura total , parcial o nada). Esto depender del laboratorio y de la experiencia del profesional. La importancia de un buen extendido y su correcta tincin son fundamentales a la hora de la observacin al microscopio, ya que un frotis mal hecho entrega muy poca informacin acerca de la morfologa celular, y en algunos casos es esta observacin la que entrega al Clnico la informacin que requiere para realizar su diagnstico.

OBJETIVOS
Al finalizar el taller el alumno ser capaz de: Realizar frotis sanguneos Realizar las tinciones hematolgicas corrientes Manipular con seguridad material contaminado

REALIZADO POR
Tecnlogo Mdico, Bioqumico, Qumico Farmacutico, Bilogo.

DURACIN
90 minutos

NUMERO DE ALUMNOS POR DOCENTE

Mximo 10 alumnos

Autores: BQ Cecilia Lpez Reyes EU. Eliana Escudero DuocUC

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MARCO TERICO
Frotis sanguneo: es la extensin de sangre realizada sobre un portaobjeto y a partir de la cual se observarn, al microscopio, las caractersticas de las clulas sanguneas. Usos: Es un anlisis rutinario que acompaa a todo hemograma, ya sea en forma manual o automatizado. En este ltimo caso, cuando hay normalidad en todos los elementos sanguneos, se obtienen los datos grficamente y es opcional verificarlo, esto depender de cada laboratorio. Este preparado entrega valiosa informacin en casos como las leucemias, deficiencias de hierro, trastornos genticos de la forma de los eritrocitos, posibles deficiencias de vitamina B12.

Observacin microscpica de un frotis ya teido 1.

Observacin microscpica de un frotis teido 2

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Gua: Realizacin de Frotis Sanguneo y Tincin de Lminas Una leucemia o leucopenia acentuada, se reconoce fcilmente en estudio panormico. Para esto, las extensiones deben ser delgadas, bien extendidas y bien coloreadas. Se dice que hay anisocitosis, cuando el tamao de los hemates es variable y poiquilocitosis cuando hay variaciones en su forma.

Foto 3 Realizacin Frotis sanguneo Habitualmente ste se realiza al momento de tomar el hemograma al paciente. En algunos laboratorios prefieren que ste sea hecho por personal capacitado y lo realizan al recibir la muestra. Esto estar relacionado con el tiempo de traslado del hemograma al laboratorio; ya que si es menor a dos horas la calidad de un frotis se conserva, pero si es mayor puede empezar a adulterarse el estado de las clulas. En laboratorios de pases desarrollados y slo en algunos laboratorios de Chile existen equipos automatizados que realizan los frotis y esto implica disminuir el riesgo de la manipulacin y aumentar las medidas de bioseguridad. La tecnica ser revisada en detalle en el taller.

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INSUMOS Y EQUIPOS REQUERIDOS

Portaobjetos (10 por alumno) Tinciones para hematologa, 1 set por alumno (solucin May-Grunwall en solucin alcohlica, tampn fosfato pH 7.2 con 3 mL de solucin MayGrunwall, tampn fosfato pH 7.2 con 12.5 mL de Giemsa) Cubetas para tincin, 1 set de tres cubetas por cada alumno (o recipientes plsticos de 15 x 15 x15 cm). Carros de tincin (para poner portaobjetos en las cubetas de tincin), 1 por alumno Pizetas con agua destilada Toalla de papel Guantes Cubreobjetos 1 caja Tubos con muestras de sangre con EDTA

DESCRIPCION DEL PROCEDIMIENTO

Tcnica para la realizacin de un frotis:

1. Con la lanceta estril realizar una puncin en un pulgar o utilizar una gota de sangre del tubo de hemograma. ( lo ideal es una gota sin mezcla de anticoagulante) 2. Depositar una gota de sangre en la parte central de un portaobjetos muy limpio (libre de pelusas y grasa). 3. Con un cubreobjetos (tomarlo lateralmente entre las yemas de los dedos) deslizarlo sobre toda la superficie del porta de manera que se pueda obtener una fina pelcula de sangre. El inicio del frotis se denomina cabeza y la parte final del frotis se denomina cola. ( observe la foto 3) 4. Esperar a que se seque la lmina, dejarla sobre una rejilla o toalla de papel, con la zona donde est la muestra mirando hacia arriba.

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Gua: Realizacin de Frotis Sanguneo y Tincin de Lminas Preparacin de tinciones (modificadas por TM Ruth Crdova, Hematloga Laboratorio. Vida Integra) (slo informativo, no se realiza el procedimiento) 1. Tincin May-Grunwall: Para preparar 1000 ml de solucin, pesar 1.3 gramos de May Grunwald y enrasar en matraz aforado a 1000 ml con metanol. Agitar y dejar a 37 C por 3 das. Pasados los tres das filtrar la solucin y guardar. 2. Tincin de Giemsa: Pesar 3.8 gramos de Giemsa y agregar 200 ml de glicerina. Mezclar y llevar a bao Mara a 56 C por una hora. Transcurrido este tiempo, sacar la solucin del bao y agregar 300 ml de metanol. Dejar reposar la solucin por 24 horas. Pasadas las 24 horas filtrar la solucin y guardar. Preparacin de las cubetas de tincin: En las cubetas de tincin realizar el siguiente procedimiento: 1 cubeta: poner solucin May-Grunwall suficiente para cubrir el nivel de los frotis. Proteger las soluciones de la evaporacin, para esto mantener tapado mientras no se utilice (contiene May-Grunwall en solucin alcohlica). 2 cubeta: 300 mL de tampn fosfato pH 7.2 con 3 mL de solucin MayGrunwall. 3 cubeta: 300 mL de tampn fosfato pH 7.2 con 12.5 mL de Giemsa.

Al finalizar el proceso, guardar la primera solucin en un frasco. Desechar las otras dos soluciones.

Procedimiento de Tincin: 1. Poner los frotis, con la preparacin seca, en el carro de tincin. 2. Poner este carro en la 1 cubeta por 4 minutos. 3. Pasar el carro de tincin a la 2 cubeta, antes estilar el colorante de la primera cubeta. Dejar por 1 minuto. 4. Sacar el carro y ponerlo sobre papel absorbente. 5. Poner en la 3 cubeta por 12 minutos. 6. Sacar el carro de la tincin y lavar con agua corriente por 1 minuto. 7. Dejar sobre papel absorbente. Trasladar los frotis a una bandeja para su secado. Limpiar los frotis por el reverso, con papel suave. 8. La preparacin est lista para la observacin microscpica.

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ACTIVIDAD PARA EL ALUMNO

Actividad 1: El docente explica y muestra realizar frotis. Actividad 2: El docente realiza una simulacin de la tincin de un frotis explicando en detalle la tcnica. Actividad 3: Cada alumno realiza la tecnica de realizacin de frotis, hasta tener seguridad y un resultado adecuado. Actividad 4: Cada alumno realiza la tcnica de tincin de a lo menos 5 frotis, de los realizados en la actividad anterior. en detalle los pasos del procedimiento para

BIBLIOGRAFA
http://www.joseacortes.com/index.htm (visita 10/02/2005) http://mavortis.uv.es/gueb/%20practicas/sangre/elige.html (visita 10/02/2005)

METODOLOGA DE EVALUACIN
El taller se evala a travs de una pauta de competencias logradas de acuerdo a los objetivos planteados:

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Nombre del alumno:............................................... Fecha:............................................Nota.......................

Realizacin de frotis sanguneo y tincin de laminas 1.Respeta tcnicas de asepsia y antisepsia - lavado de manos - uso de guantes - elimina lo corto punzante segn norma 2 Realiza la tcnica para frotis, cumpliendo los pasos en orden 3. Trabaja en orden y silencio 4. Muestra habilidad manual con los materiales de laboratorio 5. Realiza tcnica de tincin de frotis adecuadamente 6.Demuestra interes preguntando y/ o repitiendo las tcnicas hasta lograr resultado frotis tincin C: competente MC: medianamente competente NC: no competente

MC

NC

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