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HEMATOLOGIA

Apostila Terico-Prtica

Sangue Consideraes Gerais


O sangue composto de duas fases distintas: fase lquida e fase slida ou elementos figurados. A fase lquida composta principalmente por gua (cerca de 90%) e por substncias orgnicas e inorgnicas dissolvidas nesta gua, tais como eletrlitos, protenas, hormnios e fatores da coagulao. Na fase slida ou elementos figurados esto as hemcias, leuccitos e plaquetas. A fase lquida tambm conhecida como plasma e pode ser definida como soro quando perder os fatores da coagulao logo aps a coleta sangunea. Plasma = fase lquida (gua + todos os elementos dissolvidos) Soro = Plasma fatores da coagulao (utilizados para formar o cogulo aps a coleta) O volume sanguneo total cerca de 70 mL por quilo de peso, desta forma uma pessoa de 70 Kg possui cerca de 4,9 L de sangue. A perda mxima sangunea permitida e recomendada 10% do volume total, para que no ocorram grandes danos ao paciente ou doador. As principais funes do sangue so: transporte de gases (hemoglobina e hemcias); defesa imunolgica (leuccitos); coagulao (plaquetas e fatores da coagulao); transporte de nutrientes (plasma); transporte de metablitos da excreo (plasma); regulao trmica; regulao da presso arterial e manuteno do pH sanguneo. A hematopoiese o processo de formao do sangue e comea desde a fase intrauterina de cada indivduo. Ainda na vida uterina as clulas so formadas pela linhagem primitiva e aps o nascimento pela linhagem definitiva (srie vermelha ou eritroctica; srie plaquetria ou megacarioctica; srie granuloctica; srie linfocitria ou linfoctica e srie monocitria ou monoctica). a) Hemograma: a principal ferramenta diagnstica em Hematologia, constitudo pelos seguintes exames: Contagem de Hemcias (Hm) Dosagem de Hemoglobina (Hb) Determinao do Hematcrito (Ht) ndices Hematimtricos (VCM; HCM; CHCM; RDW). Contagem Global de Leuccitos Contagem Diferencial de Leuccitos Hematoscopia Contagem de Plaquetas (*opcional)

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b) Coleta de material O xito da coleta sangunea depende de vrios fatores, tais como: colhedor bem treinado; veias do paciente; instrumental utilizado; identificao correta do material (etapa pr-analtica); tipos de amostras necessrias; relao sangue-anticoagulante; anti-sepsia; tempo de garroteamento; estancar o sangramento; homogeneizao da amostra e biossegurana. c) Confeco e colorao dos esfregaos sanguneos

Cabea Corpo

Cauda

d) Cmara de Neubauer Utilizada para contagem de clulas em hematologia. dividida em 9 quadrantes idnticos em tamanho, rea e profundidade e diferentes de acordo com as subdivises.

A B

C D

AULA PRTICA 01: CONTAGEM DE HEMCIAS


1) Fundamento

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Diluir a amostra (sangue total) em soluo diluidora de hemcias (Lquido de Hayen, Gower, Dacie).

2) Procedimento
Pipetar 4,0 mL do lquido diluidor em um tubo de ensaio ou frasco pequeno. Pipetar 0,02 mL (20L) de sangue e transferir para o tubo contendo o lquido diluidor. Homogeneizar e aguardar cerca de 5 minutos. Encher a cmara de Neubauer com a soluo, tendo o cuidado de homogeneizar novamente antes da pipetagem. Levar a cmara ao microscpio para efetuar a contagem de hemcias. Focalizar com a objetiva de 10x e fazer a contagem com a objetiva de 40x, utilizando o retculo central da cmara de Neubauer. Fazer a contagem de pelo menos 5 quadrados (1/5 da rea de contagem) e somar as parcelas. 3) Clculos n Hm / mm3 = 10.000 x Y* *Y = soma dos 5 quadrados contados na cmara 4) Valores de Referncia Homem 4.400.000 a 6.000.000 / mm3 Mulher 4.200.000 a 5.500.000 / mm3 Rn 5) Interpretao Valores aumentados Diarrias, desidratao, queimaduras, policitemia Vera, cardiopatia crnica, intoxicaes com lcool etlico ou outras drogas, vmitos profusos, acidose metablica. 4.000.000 a 6.000.000 / mm3

Valores diminudos Anemias, leucemias, aps hemorragias intensas e nas infeces graves.

AULA PRTICA 02: DOSAGEM DE HEMOGLOBINA


1) Fundamento O ferrocianeto transforma o ferro da hemoglobina do estado ferroso (bivalente) para o estado frrico

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(trivalente), formando metahemoglobina que, por sua vez, combina com o cianeto de potssio para produzir a cianometahemoglobina, que lida em 540 nm. 2) Procedimento Pipetar 5,0 mL do lquido diluidor (Drabkin) em um tubo de ensaio. Pipetar 0,02 mL (20L) de sangue e transferir para o tubo contendo o lquido diluidor. Homogeneizar e aguardar cerca de 10 minutos. Fazer um tubo BRANCO apenas com o lquido diluidor e um tubo PADRO com 5,0 mL do lquido diluidor e 0,02 mL do padro de hemoglobina. Fazer a leitura em espectrofotmetro, no comprimento de onda de 540 nm. 3) Clculos [Hb] g/dL = Abs Teste X 10

Abs Padro 4) Valores de Referncia Homem 13,5 a 18,0 g/dL Mulher 12,0 a 16,0 g/dL Rn 5) Interpretao Valores aumentados e valores diminudos esto presentes praticamente em todas as condies que determinam aumento e diminuio das hemcias, respectivamente. 13,5 a 19,5 g/dL

AULA PRTICA 03: HEMATCRITO (micro)


1) Fundamento Volume ocupado pelas hemcias numa amostra de 100 mL de sangue total.

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2) Procedimento Preencher um tubo capilar com sangue total, at cerca de 2/3 do seu comprimento. Limpar a parede externa do tubo capilar com um papel absorvente. Vedar a extremidade vazia (limpa) com uma massinha ou fech-la no calor. Colocar o tubo capilar na centrfuga de microhematcrito com a parte vedada voltada para fora, equilibrando-o com outro tubo. Tampar a centrfuga. Centrifugar durante 5 minutos numa velocidade de 3.500 rpm ou superior. Fazer a leitura do resultado, utilizando a tabela prpria para microhematcrito. O menisco inferior (hemcias) deve coincidir com a linha zero e o menisco superior (plasma) deve coincidir com a linha cem. A leitura feita onde ocorre separao entre as duas fases (interface). 3) Valores de Referncia Homem 40 a 54% Mulher 37 a 47% Rn 4) Interpretao Valores aumentados ocorrem quando h hemoconcentrao como nas policitemias, desidrataes, queimaduras, diarrias e vmitos intensos. Um hematcrito aumentado sugestivo de macrocitose. Valores diminudos ocorrem quando h reduo do nmero de eritrcitos (oligocitemias), como nas anemias, leucemias e infeces. Um hematcrito reduzido d idia de microcitose. 44 a 64%

AULA PRTICA 04: CONTAGEM GLOBAL DE LEUCCITOS


1) Fundamento Sangue + soluo diluidora de leuccitos (dilui o sangue e destri as hemcias). 2) Procedimento

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Pipetar 0,4 mL do lquido diluidor em um tubo de ensaio ou frasco pequeno. Pipetar 0,02 mL (20L) de sangue e transferir para o tubo contendo o lquido diluidor. Homogeneizar e aguardar cerca de 20 minutos para que haja destruio das hemcias. Encher a cmara de Neubauer com a soluo, tendo o cuidado de homogeneizar novamente antes da pipetagem. Levar a cmara ao microscpio para efetuar a contagem de leuccitos. Focalizar com a objetiva de 10x e fazer a contagem com a objetiva de 10 ou 40x, utilizando os 4 retculos laterais da cmara de Neubauer (A, B, C e D). Fazer a contagem de todos os quadrados e somar as parcelas. 3) Clculo n leuccitos / mm3 de sangue = Y* x 50 *Y= nmero de leuccitos contados na cmara 4) Valores de Referncia Adultos 4.000 a 10.000 / mm3 Rn 10.000 a 26.000 / mm3 5) Interpretao Valores aumentados (Leucocitose): ocorrem em associao aos processos inflamatrios, infecciosos e leucemias. Fisiologicamente temos leucocitose na infncia, gravidez, durante o parto, durante a digesto, variaes circadianas e aps exerccios fsicos extenuantes. Valores diminudos (Leucopenia): ocorrem quando h reduo na produo dos leuccitos (deficincia de vitamina A; depresso dos tecidos leucopoiticos por infeco ou intoxicao; uso de medicamentos) ou no caso de aumento da destruio celular, provavelmente por anticorpos. Algumas infeces podem cursar com leucopenia, principalmente de um nico tipo de leuccito: febre tifide, dengue, rubola, caxumba e tripanossomose.

AULA PRTICA 05: CONTAGEM DIFERENCIAL DE LEUCCITOS


1) Fundamento a contagem de 100 leuccitos em esfregao sanguneo, diferenciando-os segundo suas variedades morfolgicas. 2) Procedimento

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A) CONFECO DO ESFREGAO SANGUNEO Colocar uma gotcula de sangue em uma lmina limpa e seca. Com o auxlio de outra lmina, colocar a gota de sangue em contato com sua borda, formando um ngulo de 45, esfregar uma lmina sobre a outra rapidamente, antes que o sangue seque ou coagule. Esperar o esfregao secar. Identificar a lmina pela cabea do esfregao com o auxilio de outra lmina ou lpis. Fazer a colorao. B) COLORAO DO ESFREGAO SANGUNEO Colocar a lmina sobre um suporte de colorao com o esfregao voltado para cima. Cobrir todo o esfregao com o corante May-Grnwald. Aguardar 2 a 3 minutos. Aps este tempo, gotejar sobre o corante gua de torneira ou tampo fosfato (pH 7,2). Aguardar 2 minutos. Desprezar o corante e o tampo. Cobrir a lmina com o corante Giemsa diludo (Giemsa de uso). Aguardar 12 minutos. Desprezar o corante e enxaguar a lmina com gua de torneira. Esperar secar e limpar o verso da lmina com lcool. Examinar com objetiva de imerso, fazendo a contagem diferencial de 100 leuccitos. 3) Resultado Expresso em nmero relativo (%) e absoluto (/mm3) 4) Valores de Referncia Neutrfilos bastonetes (b) Neutrfilos Segmentados (S) Eosinfilos (E) Basfilos (B) Moncitos (M) Linfcitos (L) 5) Interpretao Neutrofilia: frequente nas infeces bacterianas, leucemias, processos inflamatrios. Eosinofilia: frequente nas parasitoses, processos imunoalrgicos e leucemias. Basofilia: processos imunoalrgicos e leucemias. 0 a 5% 40 a 80% 1 a 6% 0 a 2% 2 a 10% 20 a 30% 0 a 400 / mm3 2.000 a 7.000 /mm3 2 a 500 / mm3 0 a 100 / mm3 200 a 1000 /mm3 1.000 a 3.000 / mm3

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Monocitose: infeces (septicemia, mononucleose e tuberculose). Linfocitose: infeces virais agudas e infeces crnicas (tuberculose e sfilis), leucemias, amigdalites e processos ganglionares. Funes dos leuccitos (FISIOLOGIA LEUCOCITRIA) 1) Neutrfilos: localizar, fagocitar e destruir partculas estranhas. Propriedade de quimiotaxia; fagocitose por adeso, ingesto e degranulao. Possuem meia vida de aproximadamente 6 horas no sangue perifrico.

2) Eosinfilos: Tambm realizam fagocitose, mas em menor proporo que os neutrfilos. Fixam
parasitas (degranulao e digesto de parasitas). Reao e patognese de doenas imunoalrgicas e neoplsicas. Possuem meia vida de aproximadamente 8-12 horas minutos no sangue perifrico. Depois migra para os tecidos. 3) Basfilos: mediadores da reao imuno-alrgica imediata, com degranulao e liberao de histamina. Presentes na asma, urticria, anafilaxia. Possuem meia vida de aproximadamente 4 horas no sangue perifrico. 4) Moncitos: Tambm realizam fagocitose, mas de forma mais especializada que os neutrfilos e por isso em menor proporo. Participam da resposta imune como clulas apresentadoras de antgenos. Recebem diferentes nomes em cada tecido, por exemplo: clulas de Kupfer (fgado); macrfagos (lquido cefalorraquidiano); osteoclastos (ossos destruio do tecido sseo). Possuem meia vida de aproximadamente 14 horas no sangue perifrico.

5) Linfcitos: Circulam no sangue e na linfa. Recirculam entre o sangue e os tecidos. O pequeno


linfcito uma clula em repouso e o grande linfcito est envolvido na resposta imunolgica (clula em atividade). Os linfcitos saem morfologicamente maduros da medula ssea, mas tm que passar pelo timo para amadurecerem funcionalmente. Possuem meia vida no sangue perifrico muito variada, podendo ser de dias para os L B at anos para os L T. Participam da resposta imunolgica:

a) mediada por clulas destruio direta do alvo (L TC); ativao de macrfagos


b) humoral sntese e secreo de anticorpos pelos plasmcitos.

AULA PRTICA 06: HEMOSSEDIMENTAO


1) Fundamento Consiste na medida da velocidade de sedimentao espontnea das hemcias, a qual est relacionada com a agregao destas clulas em grumos. 2) Procedimento Preencher a pipeta de Westergreen at a marca zero e adapta-la ao suporte de Westergreen.

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Aguardar 60 minutos exatos e fazer a leitura do volume de plasma que foi liberado. 3) Resultados Expresso em mm/ 60 minutos 4) Valores de Referncia Homens at 15 mm Mulheres at 20 mm 5) Interpretao Sabe-se que as hemcias possuem em sua superfcie carga eltrica negativa, no permitindo que estas clulas formem grumos. A presena de macromolculas proticas neutraliza parte dessas cargas negativas, favorecendo a aproximao e sedimentao das hemcias. Valores elevados de hemossedimentao: Aumento das alfa-2-globulinas (ppte haptoglobina) encontrada nos processos inflamtrios agudos. Aumento das gama-globulinas, geralmente devido elevao de imunoglobulinas policlonais. Aumento de fibrinognio, devido a um estado inflamatrio ou nos distrbios da coagulao.

Em geral os processos inflamatrios e/ou infeciosos cursam com elevao discreta ou acentuada da velocidade de hemossedimentao (VHS).

AULA PRTICA 07: CONTAGEM DE RETICULCITOS


1) Fundamento Sangue + corante supravital (Azul de Cresil Brilhante ACB) 2) Procedimento Pipetar 0,2 mL (200 L) do corante ACB em um tubo de hemlise ou tubo de ensaio pequeno.

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Adicionar 0,2 mL (200 L) de sangue total e homogeneizar. Pipetar 0,15 mL (150 L) do corante ACB em um tubo de hemlise ou tubo de ensaio pequeno. Adicionar 0,30 mL (300 L) de sangue total e homogeneizar. (Hematcrito > 45%) Adicionar 0,45 mL (450 L) de sangue total e homogeneizar. (Hematcrito 30-45%) Adicionar 0,60 mL (600 L) de sangue total e homogeneizar. (Hematcrito <30%) Levar ao banho-maria 37C durante 20 minutos. Homogeneizar e fazer um esfregao em lmina limpa e seca. Fazer a contagem de 1.000 hemcias com objetiva de imerso, anotando os reticulcitos encontrados em cada compo. 3) Resultado Expresso em % e /mm3 4) Valores de Referncia Rn at 6% Adultos 0,5 a 1,5% 5) Interpretao Reduo da porcentagem: anemias carenciais, aplasias medulares, anemias no-hemolticas. Aumento da porcentagem: anemias hemolticas, hiperplasia medular, doena hemoltica do recmnascido, hemorragias intensas aps acidentes ou cirurgias. Impotncia clnica: discriminar entre as anemias hemolticas e no-hemolticas. Verificar a eficcia do tratamento nas anemias carenciais (crise reticulocitria).

AULA PRTICA 08: CONTAGEM DE PLAQUETAS


1) Fundamento Diluir a amostra (sangue total) em soluo diluidora de plaquetas (Recs) para contagem em cmara de Neubauer. 2) Procedimento

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Pipetar 2,0 mL do lquido diluidor em um tubo de ensaio ou frasco pequeno. Pipetar 0,02 mL (20L) de sangue e transferir para o tubo contendo o lquido diluidor. Homogeneizar e aguardar cerca de 15 minutos. Encher a cmara de Neubauer com a soluo, tendo o cuidado de homogeneizar novamente antes da pipetagem. Aguardar cerca de 5 minutos em cmara mida para que as clulas sedimentem na cmara de Neubauer. Levar a cmara ao microscpio para efetuar a contagem de plaquetas. Focalizar com a objetiva de 10x e fazer a contagem com a objetiva de 40x, utilizando o retculo central da cmara de Neubauer. Fazer a contagem dos 25 quadrados, diferenciando as plaquetas entre as hemcias. 3) Clculos n Plq / mm3 = 1.000 x Y* *Y = contagem das plaquetas na cmara 4) Valores de Referncia 150.000 a 400.000 / mm3 5) Interpretao A trombofilia decorre da existncia de alteraes da hemostasia que determinam a predisposio trombose. As alteraes podem ser congnitas, determinadas por alteraes genticas e herdadas pelos membros da famlia, ou por situaes adquiridas que alteram o equilbrio da hemostasia. As alteraes congnitas da hemostasia que determinam a trombofilia incluem a deficincia de antitrombina III (ATIII), de protena C, de protena S, a resistncia protena C ativada causada pela presena de uma molcula anormal do fator V, o chamado fator V Leiden, alguns tipos de desfibrinogenemia, a deficincia de plasminognio e uma mutao do gene da protrombina. As alteraes adquiridas responsveis por trombofilia so: presena de anticorpo anti -fosfolpide, neoplasia, ciclo gravdico-puerperal, sndrome nefrtico, perodo peri -operatrio, hemoglobonria paroxstica noturna, sndromes mieloproliferativas.

Valores aumentados (trombocitose) Aumento da produo de plaquetas, aps hemorragias, fraturas sseas, trombose vascular, leses endoteliais.

Valores diminudos (trombocitopenia)

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A trombocitopenia causada por : Reduo da produo medular aumento do seqestro esplnico aumento na destruio plaquetria

No primeiro citado, as causas comuns so aplasia medular, fibrose ou infiltrao por clulas malignas, quimioterapia oncolgica, hipoplasia amegacarioctica congnita. O diagnstico se faz facilmente pela bipsia de medula ssea. No segundo, a esplenomegalia aumenta o nmero de plaquetas aprisionadas no bao, aumentando a taxa de lise plaquetria. Causas comuns: hipertenso porta, leucemia com infiltrao esplnica de clulas tumorais, linfoproliferao esplnica (linfoma). No terceiro citado, vasos anormais, prteses vasculares, trombos de fibrinas podem encurtar a sobrevida das plaquetas. Exemplos: prpura trombocitopnica trombtica, vasculites, sndrome hemoltico-urmica, coagulao intravascular disseminada, prteses cardacas.

REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS
CARVALHO, M. G.; SILVA, M. B. S. Hematologia Tcnicas laboratoriais e Interpretao. Belo Horizonte, 1988. Manual de Exames do Laboratrio Clnico.

14 LORENZI, T.F. Manual de Hematologia Propedutica e clnica. Rio de Janeiro: Medsi, 2003. 655 p. ZAGO, M. A. et al. Hematologia Fundamentos e Prtica. So Paulo: Atheneu, 2001. 1081p.