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NDICE I. II. 2.1. 2.2. INTRODUCCN 1 MARCO TERICO 3 Antecedentes. 3 Aspectos botnicos de la Mentha aff. arvensis L. hierba buena. 5

2.2.1. Clasificacin sistemtica.. 5 2.2.2. Caractersticas botnicas de la familia Lamiaceae.. 5 2.2.3. Descripcin de La especie Mentha aff. arvensis L. hierba buena.. 6 2.2.4. Habitad... 7 2.2.5. Usos medicinales.. 7 2.3. Droga, principios activos y descripcin de los metabolitos secundarios 7

2.3.1. Aceites esenciales. 8 2.3.2. Saponinas... 8 2.3.3. Cumarinas.. 9 2.3.4. Taninos 9 2.3.5. Alcaloides 9 2.3.6. Triterpenos. 9 2.4. 2.5. Aparato Respiratorio. 10 Acetilcolina. 12

2.5.1. Mecanismo de accin de la Acetilcolina.................................................. 12 2.6. 2.7. Broncodilatadores. 13 Estimulantes Beta Adrenrgicos........................................................... 13

2.7.1 Aspectos farmacolgicos de los Beta Adrenrgicos 14 2.7.2. Mecanismo de accin de los Beta- Adrenrgicos 14 2.7.3. Identificacin de los Beta Adrenrgicos. 15 2.7.4. Dosificacin y posologa de los Beta- Adrenrgicos15 2.8. Frmacos Anticolinrgicos.. 15

2.8.1. Aspectos farmacolgicos de los Anticolinrgicos... 16 2.8.2. Mecanismo de accin de los Anticolinrgicos.. 16 2.8.3. Indicaciones y contraindicaciones de los Anticolinrgicos. 16 2.9. Teofilinas 16

2.9.1. Aspectos farmacolgicos de las Teofilinas.. 16 2.9.2. Mecanismo de accin de las Teofilinas 17 2.9.3. Indicaciones y contraindicaciones de las Teofilinas.. 17 2.10. Salbutamol 17

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2.10.1. Mecanismo de accin del salbutamol.. 18 2.10.2. Efectos secundarios del salbutamol. 18 2.11. Metabolitos secundarios y patologa del Aparato Respiratorio..18 III. 3.1. 3.2. MATERIALES Y MTODOS. 21 Ubicacin.. 21 Materiales. 22

3.2.1. Poblacin.. 22 3.2.2. Muestra. 22 3.2.3. Material biolgico. 22 3.3. Procedimiento experimental.. 22

3.3.1. Secado.. 22 3.3.2. Molienda 22 3.3.3. Obtencin de extractos para Tamizaje Fitoqumico 22 3.3.4. Identificacin fitoqumica 23 3.3.5. Obtencin del extracto fluido. 25 3.3.6. Estudio farmacolgico. 26 3.4. IV. V. VI. VII. VIII. Anlisis estadstico.. 28 RESULTADOS. 29 DISCUSION. 36 CONCLUSIONES 40 RECOMENDACIONES.. 41 REFERENCIAS BIBLIOGRAFICAS. 42

ANEXOS

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Evaluacin del efecto broncodilatador del extracto fluido de Mentha aff. arvensis L. hierba buena en trquea aislada de Cavia porcellus cobayo. Ayacucho 2011 Autor: BAUTISTA LIVIA, Emma Edith RESUMEN El presente trabajo de investigacin se realiz en los Laboratorios del Centro de Desarrollo, Anlisis y Control de Calidad de Medicamentos y Fitomedicamentos de Farmacia y Bioqumica de Ayacucho, durante el ao 2011, para lo cual se plantearon los siguientes objetivos: a) Identificar los metabolitos secundarios presentes en el extracto fluido de las hojas de Mentha aff. arvensis L. hierba buena; b) Evaluar las respuesta contrctil de la trquea aislada en Cavia porcellus cobayo por efecto de la administracin del extracto fluido y c) Evaluar las respuesta contrctil de la trquea aislada en Cavia porcellus cobayo por efecto de la administracin de jarabe de Salbutamol 2.mg/.5.mL. El mtodo utilizado para evaluar el efecto broncodilatador fue el Mtodo de Magnus de trquea aislada, evaluando la respuesta contrctil por -4 administracin de Acetilcolina 5 x 10 M y el extracto fluido a diferentes concentraciones. Entre los resultado podemos mencionar que, del tamizaje fitoqumico las hojas de Mentha aff. arvensis L. presentan alcaloides, lactonas y cumarinas, triterpenos y esteroides, aceites y grasas, azcares reductores, saponinas, catequinas, resinas, quinonas, fenoles y taninos, antocianinas, flavonoides, muclagos y principios amargos. El extracto fluido obtenido present las siguientes caractersticas: color verde; olor caracterstico; pH 7,0; densidad relativa 0,9769 g/mL.; ndice de refraccin 1,3648; slidos totales 8,31 % y contenido alcohlico 10%. El extracto fluido al 20% present una disminucin de la respuesta contrctil de 3,67 0,33 mm, siendo estadsticamente mayor (p.<.0,05) al de los extractos fluidos de 10 y 15% que presentaron una disminucin de la respuesta contrctil de 1,43..0,07 mm y 2,17..0,17 mm respectivamente. El Salbutamol 2.mg/.5 mL. present una disminucin de la respuesta contrctil de 3,83..0,33 mm, estadsticamente similar al extracto fluido al 20% (p > 0,05). Por lo tanto, al disminuir la respuesta contrctil presenta efecto broncodilatador. Palabras claves: Extracto fluido, Mentha aff. arvensis L. hierba buena; broncodilatador. SUMMARY This research was conducted in the laboratories of the Development, Analysis and Quality Control of Medicines and Pharmacy and Biochemistry Phytomedicines of Ayacucho, in 2011 and raised the following objectives: a) Identify the secondary metabolites present in fluid extract of the leaves of Mentha aff. arvensis L. "Mint", b) Evaluate the contractile response of isolated trachea in Cavia porcellus "guinea pig" for effect of administration of fluid extract c) Evaluate the contractile response of isolated trachea in Cavia porcellus "guinea pig" for effect of administration Salbutamol 2.mg/.5.mL syrup. The method used to assess the bronchodilator effect is the Magnus method of isolated trachea, evaluating the contractile response to acetylcholine administration of 5 x -4 10 M and the fluid extract at different concentrations. Among the results we mention that the phytochemical screening of Mentha leaves aff. arvensis L. have alkaloids, lactones and coumarins, triterpenes and steroids, oils and fats, reducing sugars, saponins, catechins, resins, quinones, phenols and tannins, anthocyanins, flavonoids, mucilage and bitter principles. The fluid extract obtained had the following characteristics: green, characteristic odor, pH 7.0, relative density 0.9769 g / mL., 1.3648 refractive index, 8.31% total solids and 10% alcohol content. The fluid extract 20% showed a decrease in the contractile response of 3.67 0.33 mm, was statistically higher (p <0.05) to the fluid extracts of 10 and 15% had reduced the contractile response of 1.430.07 mm and 2.170.17 mm respectively. Salbutamol 2 mg/ 5 mL. showed a decrease in the contractile response of 3.830.33 mm, statistically similar to the fluid extract 20% (p> 0.05). Therefore, to decrease the contractile response has bronchodilating effect. Keywords: Fluid extract, Mentha aff. arvensis L., bronchodilator.

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I. INTRODUCCIN La medicina tradicional es un conjunto de conocimientos y prcticas que tiene como fundamento el saber mdico ancestral de la poblacin modificado a lo largo de los siglos por la influencia de la medicina popular, la religin cristiana, etc.; es una prctica que se transmite por la tradicin familiar o comunitaria, que tiene sus propios agentes de salud y sus ideas especificas sobre la enfermedad y curacin. Como se sabe las plantas elaboran dos productos qumicos: los principios inmediatos y los principios activos, siendo estos ltimos los que ejercen la actividad farmacolgica. En nuestro pas y especficamente en nuestra regin existen muchas plantas medicinales que son utilizadas en el tratamiento de diversas patologas, muchas de ellas carecen de base cientfica, por ello es necesario realizar estudios y de esta manera contribuir con el uso adecuado de la poblacin. El empleo de las plantas medicinales atribuidas con efectos

broncodilatadores por presentar en su composicin diferentes principios activos que son propios de esta actividad como: la manzanilla, culantro de pozo, hierba buena, hinojo, ans, mua, oqeqora, eucalipto, borraja, hierba buena etc. con

incompleta informacin cientfica que lo sustente, han generado su consumo emprico siguiendo en muchos casos la creencia popular. La Mentha aff. arvensis L. hierba buena, es empleada por su propiedad broncodilatadora y por esta razn se desarroll el presente trabajo de investigacin que estuvo orientado a conocer los principales metabolitos secundarios mediante un tamizaje fitoqumico y corroborar el efecto

broncodilatador del extracto fluido de esta especie utilizando la tcnica de rganos aislados y que son contrastados con drogas patrones, en este caso la acetilcolina que tiene una accin espasmognica a nivel de la musculatura lisa. Este trabajo se desarroll teniendo en cuenta los siguientes objetivos: Objetivos Generales: Evaluar el efecto broncodilatador del extracto fluido de Mentha aff. arvensis L. hierba buena en trquea aislada de Cavia porcellus cobayo. Objetivos Especficos: Identificar los metabolitos secundarios presentes en el extracto fluido de las hojas de Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Evaluar las respuesta contrctil de la trquea aislada en Cavia porcellus cobayo por efecto de la administracin del extracto fluido de las hojas de Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Evaluar las respuesta contrctil de la trquea aislada en Cavia porcellus cobayo por efecto de la administracin de jarabe de Salbutamol 2.mg/.5.mL.

II. MARCO TERICO 2.1. ANTECEDENTES La medicina tradicional, suele estar presente en los pases en vas de desarrollo; la O.M.S. estima que actualmente alrededor de un 80% de los habitantes del planeta recurren a remedios tradicionales, donde las plantas

medicinales son fuentes para la obtencin de frmacos fitoteraputicos que mediante transferencias de tecnologas, se evale la calidad y eficacia de estas medicinas con la ayuda de tcnicas modernas (Chifa, 2001). De esta forma se busca normalizar la creciente comercializacin de plantas o partes de plantas en su estado natural para su uso teraputico directo sin el procesamiento qumico al que estn sometidos los frmacos, lo que en medicina se denomina fitoterapia. De todos modos, el 25 por ciento de los frmacos actuales tienen su origen en alguna planta, y es an mayor el porcentaje de las que tienen un principio activo vegetal: por ejemplo Taxol, el frmaco antioncolgico ms vendido del mundo, se extrae de la corteza del tejo del pacfico; la aspirina viene de la corteza del sauce y la morfina de las amapolas.

A continuacin se mencionan los siguientes trabajos de investigacin con relacin a nuestro trabajo de investigacin: Fernndez y col. (2005); realiz el trabajo de investigacin Formulacin y evaluacin del efecto antiespasmdico del extracto fluido de jarabe elaborado a base de extracto fluido Mentha aff. arvensis L. en leo aislado de cobayo en el cul concluy que dicho extracto presentaba efecto antiespasmdico frente a la Acetilcolina. Dicho resultado motivo el presente trabajo de investigacin, ya que dicho neurotransmisor tambin se encuentra a nivel del msculo liso bronquial. Torres y col. (2007); realiz el trabajo Formulacin y evaluacin del efecto broncodilatador del jarabe elaborado a base de extracto fluido de Borago officinalis L. y aceite esencial de Eucalyptus globulus Labill. Ayacucho-2005, en el cul concluy que los jarabes elaborados (frmula N 01, 02 y 03) presentan un efecto broncodilatador similar al jarabe salbutamol 2mg/5 mL., al inhibir el espasmo producida por la acetilcolina. Este trabajo permiti establecer que la prueba experimental de trquea aislada reportaba datos fiables. Otro trabajo de investigacin realizado en nuestra Universidad, en rganos aislados, es la investigacin que lleva por ttulo: Efecto

Antiespasmdico de los extractos de Melissa Officinalis L. Toronjil en leon aislado con el objetivo de determinar la accin espasmoltica de los extractos acuoso y alcohlico de Melissa Officinalis L. Toronjil a diferentes

concentraciones (dosis): 5% y 15%. Se observ y registro la respuesta contrctil mxima del leon en presencia de acetilcolina. Lo que sirvi de base para calcular los valores relativos en milmetros de respuesta contrctil del rgano a la acetilcolina, en presencia de los extractos acuoso y alcohlico al 5 y 15% y utilizando atropina como frmaco de referencia. Donde se llego a determinar el efecto antiespasmdico (Espinoza, 2004).

2.2.

ASPECTOS BOTNICOS

2.2.1. Clasificacin sistemtica de la Mentha aff. arvensis L. Sistema de clasificacin de Cronquist (1988): Divisin Clase Sub clase Orden Familia Gnero Especie Nombre vulgar (Anexo N 1) Fuente: Constancia emitida por el Museo de Historia Natural de la UNMSM. 2.2.2. Caractersticas botnicas de la familia Lamiaceae La Familia Lamiaceae comprende plantas del ms variado porte: hierbas (anuales o perennes), lianas, arbustos y pequeos rboles, generalmente con aceites esenciales, aromticos. Tallos y Ramas.- Cuadrangulares o tetrgonos, glabros o pubescentes, los pelos a menudo glandulosos. Hojas.- Opuestas o verticiladas, simples o pinnati-partidas o raramente compuestas, pecioladas o ssiles, sin estipulas, mayormente pinnatinervias. Inflorescencias.- en cimas formando verticilastros de pocas o muchas flores que se renen en pseudo espigas o captulos. Flores.- Solitarias a menudo ssiles en las axilas. Flores hermafroditas, zigomorfas o raramente actinomorfas, con o sin bracteolas, ssiles o pediceladas. Cliz persistente, generalmente acrescente, imbricado, bilabiado o regular, a veces con 5 - 10 - 13 o 15 costillas (nervios), tomentosos, pubescentes : : : : : : : : Magnoliophyta Magnoliopsyda Asteridae Lamiales Lamiaceae Mentha Mentha aff. arvensis L. hierba buena.

o glandulosos. Corola gamoptala, 5-lobulada, bilabiada, labio superior plano o cuculado, labio inferior trilobulado. Estambres 3-4 epiptalos, mayormente didnamos, libres (monadelfos en Coleus), anteras 2-1, oculares, con dehiscencia longitudinal; lculos paralelos o divergentes, conectivos a veces muy desarrollados (salvia). Ovario supero, bicarpelar, 4-locular, placentacin basal; vulos 1 por lculo, antropos; estilo filiforme, ginobsico o terminal; estigma simple o bfido. Fruto.- Tetraquenio, descompuesto en 4 nculas (muy raramente carnoso), incluso en el cliz persistente y a veces acrescente. Semillas.- Con endospermo escaso o nulo (Mostacero, 1993). La familia

comprende unos 200 gneros con 3200 especies esparcidas en las zonas clidas y templadas del globo, con el centro de la distribucin en la regin mediterrnea; del Per se conocen 22 gneros entre espontneos y cultivados. Entre sus gneros figuran el Rosmarinus (3 especies), Salvia (500- 900 especies), Satureja (200 especies), Stachys (250-300 especies), Melissa (3-4 especies), Mentha (25-30 especies), Mithostachys (12 especies), Ocimum (50-60 especies), Origanum (25-30 especies), Marrubium (40 especies), Marsypianthes (3 especies), Leonorus (4 especies), etc. (Mostacero, 1993). 2.2.3. Descripcin de la especie Mentha aff. arvensis L. La Mentha aff. arvensis L. es conocida tambin como menta japonesa. Es una planta herbcea de 50 a 90 cm de altura. Presenta un tallo cuadrangular, glabro, ramificado y con manchas violetas. Las hojas son opuestas con un pecolo corto, acuminadadas, con la base asimtrica y con los bordes del limbo acerrados. Las inflorescencias son falsas espigas con pequeas bracteas. Las flores son de un color violeta y tienen un olor caracterstico fuerte a mentol. Es por ello que estn reforzadas aquellas propiedades que son especficamente

atribuidas al aceite y al mentol como las antispticas, antiespasmdicas y fungicidas (Leal, 1988). En cuanto a su composicin qumica la Mentha aff. arvensis L. hierba buena contiene un aceite esencial, utilizado en su casi totalidad para la extraccin de mentol. Existen otros componentes identificados en la esencia como: acetato de mentilo, canfeno, limoneno, cariofileno, valerianato de mentilo, mentona, piperitona, furfurol, alcohol etlico, pineno, etc. 2.2.4. Habitad La Mentha aff. arvensis L. hierba buena es una planta nativa de la zona templada norte, naturalizada en Estados Unidos, introducida en Cuba y cultivada en muchos pases a 1,500 - 2,700 m.s.n.m. (Leal, 1988). 2.2.5. Usos medicinales La infusin o decoccin de la planta se usa por va oral para tratar afecciones digestivas (clico, indigestin, diarrea dispepsia, flatulencia,

gastralgia, nausea, vomito), dismenorrea, dolores, reumatismo y neuralgia. Tpicamente se usa en cataplasma y compresas para tratar abscesos, piodermis, reumatismo y tumores; en baos para desodorizar los pies, lavar heridas y raspones. La decoccin y el jugo de hojas se aplican en cataplasma y baos para cncer, endurecimientos, tumores y lceras. Se le atribuye propiedad analgsica, antisptica, antiemtica, calmante, carminativa, diafortica, digestiva, diurtica, emenagoga, espasmoltica,

estimulante, estomquica, expectorante, febrfuga, hipotensora, sudorfica y vermfuga (Cceres, 1996). 2.3. DROGA, PRINCIPIO ACTIVO Y DESCRIPCIN DE LOS

METABOLITOS SECUNDARIOS La buena calidad de una droga es de importancia fundamental se debe tratar de alcanzar y mantener ese nivel de calidad, siendo los medios ms

importantes para cumplir con ese objetivo: La recoleccin de la droga de una fuente natural debe ser correcta, en el momento apropiado y de la manera adecuada. La preparacin conveniente de la droga recolectada por limpieza, secado y pulverizado. La preservacin de la droga pura, limpia y seca (Tyler, 1979).

Droga.- Es una sustancia simple o compuesta, natural o sinttica que puede emplearse en la elaboracin de medicamentos, medios de diagnostico, productos dietticos, cosmticos u otra forma, que pueden o no modificar la salud de los seres vivos (Cotillo, 1999). Principio Activo.- Es la sustancia qumica ms importante desde el punto de vista farmacolgico y la responsable de la accin farmacolgica de la droga, por ejemplo la morfina y codena en el opio (Cotillo, 1999). 2.3.1. ACEITES ESENCIALES Son sustancias aromticas, olorosas y voltiles. Se trata de mezclas de molculas muy diversas, normalmente derivadas del terpeno, pero que tambin pueden contener alcoholes, fenoles, aldehdos, cetonas, steres e incluso nitrgeno y azufre. Se encuentran en cualquier parte del tejido vegetal normalmente se depositan en clulas especiales, vas o pelos oleaginosos. Se encuentra en un nmero restringido de familias, pertenecientes a los rdenes de las Magnoliales, Laurales, Lamiales, Rutales y Asteralea (Lock, 1988). 2.3.2. SAPONINAS Son glicsidos de estructura triterpenoide o esteroide, dan soluciones jabonosas amargas, muy solubles en agua, disminuye la tensin superficial de sta, al agitar la solucin acuosa forma espuma abundante y relativamente estable. Posee propiedades hemolticas (Lock, 1988).

2.3.3. CUMARINAS A las cumarinas se les atribuye diversas actividades farmacolgicas tales como: accin anticoagulante y antibacterial, accin insecticida cabe destacar tambin aplicaciones de las cumarinas como saborizante y en la perfumera (Limaylla, 1985). 2.3.4. TANINOS Los taninos son sustancias astringentes que abundan en los vegetales, disueltas en la savia celular. Se encuentran especialmente en la corteza de los rboles, en las hojas y en frutos inmaduros. Su composicin qumica es variable pero poseen una caracterstica comn, la de ser astringente y coagular los alcaloides, albuminas y metales pesados. Externamente las decocciones, se emplean para detener hemorragias locales; en inflamaciones de la cavidad bucal, catarros, bronquitis, quemaduras, etc. Internamente son tiles contra la diarrea, enfriamiento intestinal, afecciones vesiculares, y como contraveneno en caso de intoxicacin por alcaloide vegetal. 2.3.5. ALCALOIDES Son sustancias orgnicas nitrogenadas, con propiedades bsicas, de origen vegetal en su mayora. Poseen una complejidad molecular que causa algunos potentes efectos fisiolgicos en el cuerpo. Parece que se forman a partir de aminocidos; son de naturaleza bsica y se unen a radicales cidos para formar sales. Ej. Morfina, cocana, atropina, etc. 2.3.6. TRITERPENOS Y ESTEROIDES Son compuestos con un esqueleto carbonado basado en seis unidades de isopreno que derivan biogenticamente del escualeno, hidrocarburo aciclico de 30 carbonos. Son de estructura relativamente compleja generalmente tetraciclico o pentacclico con grupos hidroxilos, aldehdos o cetonas y cido

carboxlico. Muchos se encuentran como glicsidos formando las llamadas saponinas triterpenoides. Los esteroides biogenticamente se relacionan con los triterpenoides. Se clasifican como esteroles, saponinas esferoidales, glicsidos cardiacos,

esteroalcaloides y las llamadas hormonas esferoidales (Bruneton, 1991; Lock, 1988 y Cceres, 1999). 2.4. APARATO RESPIRATORIO El aparato respiratorio tiene como funcin primordial el transporte del aire desde el exterior hasta los alvolos pulmonares, donde se produce el intercambio gaseoso. Las vas areas o tracto respiratorio (nariz, faringe, laringe y bronquios) constituyen a la vez estructuras de conduccin y proteccin, puesto que disponen de mecanismos de defensa para que el aire entrante llegue hasta el delicado tejido alveolar en ptimas condiciones. Las fosas nasales poseen una mucosa muy vascularizada, lo que facilita el calentamiento del aire inspirado. Dicho aire es tambin humedecido mediante el contacto con la secrecin de la citada mucosa. A su vez, esta secrecin, junto a las posibles partculas extraas, es drenada hasta la faringe mediante el movimiento de los cilios del epitelio. La faringe, a su vez, es la va de paso del aire, constituyendo la laringe el rgano de fonacin. Los bronquios estn tapizados por una mucosa, que posee tambin un epitelio ciliar que se extiende desde la trquea hasta los bronquiolos. Estos cilios, como los mencionados con anterioridad poseen un movimiento ondulatorio que tienen por objeto arrastrar el moco y las partculas extraas hacia la faringe, desde donde son deglutidas normalmente. Esta limpieza se ve facilitada por el reflejo de la tos que favorece la expectoracin. Los sntomas ms caractersticos de muchas afecciones respiratorias son la tos, la mucosidad y la expectoracin.

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La tos constituye el sntoma ms frecuente en la patologa respiratoria y est presente en afecciones comunes como el resfriado, las anginas, la gripe, etc. El reflejo de la tos nace por irritacin de los receptores nerviosos de la mucosa de las vas areas o de la pleura. Consiste en una inspiracin profunda, seguida de una expiracin forzada con la glotis cerrada y, cuando la presin es suficiente, se abre la glotis y se produce una corriente de aire que expulsa el material extrao de las vas areas. La tos y el sistema mucociliar son mecanismos de defensa mecnica que se encargan de expulsar violentamente en el caso de la tos o lentamente a travs del transporte mucociliar, aquellas secreciones, partculas, grmenes, etc., que obstruyen o irritan las vas respiratorias. El origen de la tos es muy variado y existen diferentes clasificaciones de los tipos de tos, aunque nosotros solo vamos a diferenciar entre tos seca y tos hmeda. La tos seca se conoce tambin como no productiva, porque no se acompaa de eliminacin de secreciones bronquiales y, en general se recomienda su control con los preparados antitusivos. La tos productiva es aquella que se acompaa de expectoracin ms o menos abundante y fluida. Esta tos (hmeda o blanda) no debe ser tratada con antitusivos, porque ello retardara la eliminacin de la secrecin. Cuando esa secrecin es demasiada escaza o demasiado viscosa para facilitar el drenaje de las vas respiratorias, es el momento en que estn indicados los mucolticos y expectorantes. La tos ser considerada crnica si se produce durante un perodo superior a 2 - 3 semanas y aguda si dura un tiempo inferior. La duracin de la tos puede sealar la causa de la misma. Si se trata de una tos aguda, puede indicar una afeccin viral o bacteriana; si es crnico un proceso retrofaringeo.

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2.5.

ACETILCOLINA La acetilcolina se biosintetiza en el citoplasma de las terminaciones

axnicas, se almacena en las vesculas, liberndose por estimulacin neuronal, se destruye por la acetilcolinesterasa hidrolizndola a cido actico y colina. Las respuestas fisiolgicas a la acetilcolina dependen del lugar en el que acta en la placa motora terminal e inicia una serie de fenmenos que conducen a la contraccin del msculo. La accin de la acetilcolina en los ganglios del sistema autnomo perifrico es posiblemente similar, la primera funcin de la respuesta autnoma postganglionar a la acetilcolina estriba en el mantenimiento de las funciones fisiolgicas. La acetilcolina ejerce accin sobre los receptores muscarnicos y en algunos casos sobre los receptores nicotnicos, los receptores muscarnicos estn situados en las terminaciones postganglionares autnomas y las acciones que se califican como muscarnicos comprenden: Inhibicin cardiaca, vaso dilatacin perifrica, contraccin de la pupila ocular, aumento de la salivacin y del flujo de la mayora de las glndulas secretorias, contraccin y accin peristltica de los tractos gastrointestinal y urinario. Los receptores muscarnicos de la acetilcolina se encuentran en mayor densidad en el msculo liso bronquial, en menor grado en los bronquiolos proximales y est ausente en los dstales. Su activacin produce broncoconstriccin acusada, con signos de tiraje y ruidos respiratorios. Estimulan las clulas mucosas y serosas de las glndulas de la submucosa, incrementando la secrecin de lquido, iones y glucoprotenas en la trquea y los bronquios (Flores, 1992). 2.5.1. Mecanismo de accin de la acetilcolina La acetilcolina es hidrolizada rpidamente por la acetilcolinesterasa mediante un proceso sucesivo de acetilacin de la enzima, separacin de la colina y separacin del grupo acetilo. Por definicin, los inhibidores de la acetilcolinesterasa interfieren en este proceso al interactuar con la enzima e

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inactivarla, pero lo consiguen por mecanismos algo diferentes. De la intensidad con que se fijan a la enzima y de la rapidez con que se revierte espontneamente dicha fijacin dependen de la intensidad y la duracin de la accin anticolinestersica (Flores, 1992). 2.6. BRONCODILATADORES Los frmacos broncodilatadores son sustancias que relajan la

musculatura lisa del rbol respiratorio a travs de diferentes mecanismos. Con ello disminuyen la obstruccin de la va area, mejoran las alteraciones de la funcin pulmonar y alivian las manifestaciones clnicas que ocasiona la reduccin de la luz bronquial. Entre los distintos frmacos broncodilatadores, tenemos: los estimulantes beta-adrenrgicos, sobre todo los que actan sobre los receptores de tipo beta2, los anticolinrgicos antimuscarnicos de accin corta y las teofilinas de accin prolongada (Rodrguez y Col., 2002). 2.7. ESTIMULANTES BETA-ADRENRGICOS Conocidos tambin como simpaticomimticos o betamimticos, siguen siendo en la actualidad, los broncodilatadores ms usados y eficaces. A partir de la adrenalina, aislada en 1902, se fueron sintetizando nuevas sustancias con propiedades agonistas beta-adrenrgicas, en un intento de conseguir una mayor selectividad en el estmulo de los receptores beta-2 adrenrgicos; Land, pudo subdividir los receptores beta en dos variedades: los beta-1, localizados en el corazn y en el msculo liso intestinal, y los beta-2, situados en el msculo liso bronquial, vascular y en la mucosa uterina. Actualmente, los frmacos ms utilizados son el salbutamol y la terbutalina, entre los de accin inmediata, y el salmeterol y el formoterol, entre los de accin sostenida (Rodrguez y Col., 2002).

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2.7.1. Aspectos farmacolgicos de los beta - adrenrgicos Algunas sustancias beta-adrenrgicas, como la adrenalina o el isoproterenol, tienen la estructura qumica de las catecolaminas, son casi inactivas por va oral, se transforman por la monoaminooxidasa (MAO) y la catecol-orto-metiltransferasa, la duracin de su accin es muy corta y se excretan por la orina. 2.7.2. Mecanismo de accin de los beta - adrenrgicos El receptor beta-adrenrgico es una glucoprotena de gran tamao, que atraviesa la membrana celular y cuyo peso molecular oscila entre 64.000 y 80.000 daltons. El agonista se fija, a travs del medio acuoso, en la porcin activa del receptor, que se encuentra en el medio lipdico de la membrana. Cuando un agonista ocupa el receptor beta se activa la subunidad alfa de la protena G, que es una molcula que capta las seales externas que llegan a la membrana celular y las transforma en estmulos para los sistemas efectores. En este caso, la unin del frmaco al receptor pone en marcha una cascada de cambios bioqumicos intracelulares. Estos cambios, llevan a la activacin de la adenilciclasa en la superficie de la membrana celular, tienen como episodio final la broncodilatacin. La adenilciclasa induce la formacin intracelular de 3,5adenosn monofosfato cclico (AMPc), a partir del adenosn trifosfato (ATP). El AMPc acta como segundo mensajero intracelular y activa la protena cinasa A. Esta molcula, a su vez, fosforiliza una serie de protenas intracelulares. En el msculo liso de las vas respiratorias inhibe la fosforilacin de la cadena ligera de la miosina y promueve el intercambio del calcio (Ca2+) intracelular por el sodio (Na+) de fuera de la clula, lo que ocasiona una disminucin del primero. El AMPc tambin puede inhibir la liberacin del Ca2+ desde los depsitos intracelulares, favoreciendo as la relajacin del msculo liso bronquial y la broncodilatacin. Existe, adems, otro mecanismo, independiente del AMPc,

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para facilitar la broncodilatacin. Acta abriendo los canales de potasio de la membrana del miocito bronquial, como consecuencia directa de la unin del agonista beta-adrenrgico con su correspondiente receptor. 2.7.3. Indicaciones de los beta - adrenrgicos El efecto principal de los estimulantes beta-adrenrgicos es la relajacin del msculo liso de la va area. Esta accin se produce con independencia, cul sea el factor desencadenante de la broncoconstriccin (un alergno, el fro o la inhalacin de irritantes inespecficos). Los agonistas beta-2 adrenrgicos inhalados de accin corta, como el salbutamol o la terbutalina, son los frmacos de eleccin, por su rapidez de accin, eficacia y elevado ndice teraputico, para conseguir el alivio inmediato del broncospasmo provocado por el ejercicio o cualquier otro estmulo. 2.7.4. Dosificacin y posologa de los beta - adrenrgicos Los agonistas beta-2 adrenrgicos son frmacos que pueden

administrarse por distintas vas. La ms habitual, adems de eficaz, es la inhalada; la oral, que produce ms efectos secundarios, apenas se emplea actualmente. En las agudizaciones graves o en las crisis de broncospasmo puede utilizarse la adrenalina, la terbutalina o el salbutamol por va subcutnea o, incluso, el salbutamol por va intravenosa (Rodrguez y Col., 2002). 2.8. FRMACOS ANTICOLINRGICOS Los aerosoles de atropina se han usado como broncodilatadores desde finales del siglo XIX. Su limitacin ms importante esta en relacin con el estrecho margen teraputico de esta sustancia. En la actualidad el

anticolinrgico ms utilizado es el Bromuro de Ipratropio. El comienzo de su accin es relativamente tardo (entre 15 y 30 minutos). Alcanza la broncodilatacin mxima entre 30 minutos y 3 horas despus de su inhalacin y su efecto dura entre 4 y 6 horas.

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2.8.1. Aspectos farmacolgicos de los anticolinrgicos El Bromuro de Ipratropio es un derivado cuaternario de la atropina, cuando se administra por va inhalatoria, el frmaco que no va al tracto respiratorio y se deglute, apenas se absorbe en el intestino. Las molculas que pasan a la circulacin se eliminan con la orina. La Atropina y el Ipratropio son antagonistas no selectivos de los receptores muscarnicos que bloquean competitivamente la accin de la acetilcolina. 2.8.2. Mecanismo de accin de los anticolinrgicos Los anticolinrgicos bloquean los receptores muscarnicos de las clulas musculares lisas bronquiales y posiblemente tambin los de las glndulas submucosas. 2.8.3. Indicaciones y contraindicaciones de los anticolinrgicos En los enfermos asmticos el Bromuro de Ipratropio tiene menos potencia broncodilatadora que el Salbutamol o el Fenoterol. Sin embargo, es el frmaco de eleccin en el tratamiento de la EPOC. En los pacientes con esta enfermedad el Ipratropio mejora la funcin pulmonar y la calidad de vida, y aumentan la tolerancia al ejercicio, sin que se produzca taquifilaxia cuando su uso se prolonga en el tiempo. El Ipratropio est contraindicado en los enfermos con una hipersensibilidad conocida a la atropina o a los derivados de esta sustancia (Rodrguez y Col., 2002). 2.9. TEOFILINAS Las Teofilinas o Metilxantinas pueden administrarse por va oral. Esta caracterstica diferencia a estas sustancias del resto de los broncodilatadores. 2.9.1. Aspectos farmacolgicos de las Teofilinas La Teofilina es una xantina, en concreto la 1,3-dimetilxantina, que se presenta en forma anhidra. Es poco soluble en agua, por lo que debe mezclarse con una base, para constituir la aminofilina, cuando quiere usarse por va

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parenteral. Las teofilinas de liberacin lenta o retardada tienen que desintegrarse en el estmago antes de que puedan absorberse en el intestino. Alcanzan su concentracin plasmtica mxima al cabo de 4 a 6 horas. 2.9.2. Mecanismo de accin de las Teofilinas El mecanismo de accin de las teofilinas no se conoce con exactitud. Hasta hace pocos aos se crea que actuaban a travs de inhibir la fosfodiesterasa, lo que aumentaba los niveles intracelulares de AMP y de GMP cclico. Este aumento permitira la relajacin del msculo liso bronquial y de los vasos pulmonares e inhibira la activacin de las clulas inflamatorias. Hoy en da se sabe, que las teofilinas a dosis teraputicas, slo inhiben la actividad de la fosfodiesterasa en un 10% a 20%. En el momento actual se estn estudiando inhibidores ms selectivos de esta enzima con menos efectos secundarios, por lo que es posible que estas nuevas sustancias puedan utilizarse, en breve plazo, como frmacos broncodilatadores. 2.9.3. Indicaciones y contraindicaciones de las Teofilinas Las teofilinas, aunque son eficaces en el tratamiento de la EPOC y del asma, han quedado relegadas a un segundo plano, como medicacin broncodilatadora, por su toxicidad, menores efectos sobre la va area y necesidad de ajustar en cada enfermo la dosis requerida. Pueden emplearse en los casos ms graves, cuando el paciente no responde a otros

broncodilatadores, al objeto de potenciar su accin teraputica (Rodrguez y Col., 2002). 2.10. SALBUTAMOL Son agonistas selectivos de accin corta. Son drogas que se utilizan para aliviar sntomas de asma agudo, severo y para la prevencin de asma producidos por el ejercicio. Se utiliza para prevenir y tratar todo tipo de broncoespasmos.

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Su nombre comercial es Ventolin, tambin se conoce como Albuterol. Tiene las siguientes caractersticas: es un agonista beta 2 selectivo: relaja el msculo liso de los bronquios, tero y vasos, accin estimulante sobre el corazn es poca, modifica poco la presin arterial, aumenta el movimiento ciliar, disminuye la liberacin de mediadores por los mastocitos. 2.10.1. Mecanismo de accin del Salbutamol 1. Relajacin potente del msculo liso bronquial de la va area central y perifrica. 2. 3. 4. Disminuyen liberacin de histamina y leucotrienos de los mastocitos. Aumentan la depuracin mucociliar. Reducen la exudacin plasmtica (Daz y Col., 2001).

2.10.2. Efectos secundarios del Salbutamol Sus efectos secundarios son: nerviosidad, temblores musculares, sudoracin, taquicardia, nauseas, vmitos y cefalea. Se considera que los beta-2 selectivos no lo son 100% selectivos en realidad. Los preparados de salbutamol se encuentran en aerosol (0.1 mg/dosis), jarabes (2 mg/5mL.) y tabletas (4mg). 2.11. METABOLITOS SECUNDARIOS USADOS EN LAS PATOLOGAS DEL APARATO RESPIRATORIO Las plantas con actividad antitusgena actan mediante variados mecanismos de accin, tanto a nivel central (deprimen el centro reflejo bulbar que controla el reflejo de la tos), como a nivel perifrico (actan como analgsico o como anestsicos, sobre las terminaciones nerviosas bronquiales que constituyen el inicio del reflejo tusgeno). En este grupo tambin se incluyen las sustancias demulcentes. Se deben utilizar cuando la tos, por su frecuencia, provoca fatigas sin resultados positivos, cuando es dolorosa y dificulta la vida activa normal, y en mujeres gestantes, a partir de la semana 24 de embarazo, ya que los excesos de tos pueden provocar el parto.

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Tambin se pueden usar en la fase inicial de afecciones bacterianas o virales de vas areas altas o que causen vmitos. No deben ser administradas en caso de tos productiva, cuando existe obstruccin bronquial o cuando se trata de una tos demasiado persistente. Entre las plantas que actan a nivel central, destacan las que presentan hetersidos cianogenticos, como el laurel cerezo (Prunus lauro cerasus L.) que contiene prunassido, con propiedades estimulantes respiratorias y antiespasmdicas y los alcaloides de la adormidera (Papaver somnferum) destacando la Codena, por su especificidad y baja toxicidad a dosis teraputica. A nivel perifrico los mecanismos de accin son muy diversos, se utilizan cuando el origen de la dolencia es la bucofarngea o las vas superiores del rbol bronquial. Los aceites esenciales son mezclas complejas de sustancias voltiles (olorosas) presente en los vegetales, normalmente lquidas, que presentan una caracterstica: su volatilidad, siendo extrables en corriente de vapor de agua. En general son los responsables del olor de las plantas. Qumicamente estn formados principalmente por terpenos (monoterpenos y sesquiterpenos) hidrocarburos, alcoholes, cetonas, en ocasiones tambin contienen derivados del fenilpropano y, ms raramente, cumarinas. Entre las principales acciones debidas a la presencia de aceites esenciales cabe destacar: antisptica, antiespasmdica, expectorante, carminativa y eupptica, etc. Por ejemplo, el azuleno es un componente de los aceites esenciales que posee actividad antiinflamatoria y espasmoltica. Las preparaciones que contienen mentol, alcanfor o eucaliptol se usan habitualmente en forma de pomadas para extender el pecho y en todas formas farmacuticas para ser aplicadas en los orificios nasales y para realizar inhalaciones; sin embargo es necesario tomar en cuenta la dosis ya que tienen efecto txico.

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Las saponinas, muchas de ellas poseen propiedades hemolticas. Muchos de los efectos farmacolgicos que producen estos compuestos estn relacionados con su capacidad para permeabilizar membranas biolgicas. Se les ha atribuido adems se han actividad utilizado antiviral, como citotxica, antitusivos espermicida, y etc.

Clsicamente

expectorantes,

antiinflamatorios, analgsicos, venotnicos y antihemorroidales y adaptgenos. Los muclagos, poseen una estructura qumica que corresponde a polisacridos hetergenos con un alto contenido en galactosa, manosa, glucosa y derivados de osas (principalmente cidos). Muchas de estas plantas se utilizan como laxantes mecnicos, ya que los muclagos que contienen al absorber una gran cantidad de agua. Estos compuestos en contacto con el agua se hinchan formando soluciones muy viscosas y geles no adherentes. Algunos de estos muclagos son capaces de absorber ms de cien veces su peso en agua. Estos geles altamente hidratados actan como demulcentes, disminuyendo la irritacin de la faringe y de la mucosa bronquial y calmando la tos.

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III. MATERIALES Y MTODOS 3.1. UBICACIN El estudio se llev a cabo en los Laboratorios del Centro de Desarrollo, Anlisis y Control de Calidad de Medicamentos y Fitomedicamentos de Farmacia y Bioqumica de la Facultad de Ciencias Biolgicas de la Universidad Nacional de San Cristbal de Huamanga, durante el ao 2012. Las muestras de Mentha aff. arvensis L. hierba buena fueron recolectadas durante los meses de enero y febrero 2012, en el centro poblado de San Jos de Viaca, Distrito de San Jos de Ticllas, Provincia de Huamanga, Departamento de Ayacucho.

Altitud: Distancia: Longitud: Latitud: Coordenadas:

2500 m.s.n.m. Ayacucho San Jos de Viaca: 23.5Km. 130514 741637 UTM 578,714-8553, 333

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3.2.

MATERIALES

3.2.1. Poblacin Todas las plantas de Mentha aff. arvensis L. hierba buena de los sembros del Centro Poblado de San Jos de Viaca, Provincia de Huamanga, Departamento de Ayacucho. 3.2.2. Muestra 5 kg. de hojas y tallos, escogidos aleatoriamente. 3.2.3. Material biolgico 15 cobayos de ambos sexos con un peso entre 300 y 500 g. en ayunas adquiridos en el Instituto Nacional de Investigacin Agraria (INIA). 3.3. PROCEDIMIENTO EXPERIMENTAL

3.3.1. Secado Las hojas y tallos fueron secados durante cuatro semanas a temperatura ambiente, bajo techo y previamente acondicionado, removiendo el vegetal para evitar la descomposicin. 3.3.2. Molienda Una vez seleccionado las hojas de la Mentha aff. arvensis L. hierba buena se someti a molienda hasta obtener un polvo fino. 3.3.3. Obtencin de extractos para tamizaje fitoqumico Se pes 10 g de de la planta seca y pulverizada y se introdujo en un cartucho de papel de filtro y se someti a tres extracciones sucesivas utilizando bencina, etanol y agua. Extracto bencnico.- 10 g de planta seca y molida fue sometida a 250 mL. de bencina por 18 horas, obtenindose un extracto bruto (1.2866g). Extracto alcohlico.- El residuo del cartucho se sec en la estufa a una temperatura de 30 40 C, luego se someti a una segunda extraccin con

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250.mL. de alcohol etlico de 96 por un periodo de 15 horas, obtenindose un extracto bruto (1.4863g). Extracto acuoso.- El residuo del cartucho se sec en la estufa a una temperatura de 30 - 40 C, luego se someti a una tercera extraccin con 250.mL. de agua destilada por un periodo de 13 horas, luego el solvente es recuperado utilizando el rotavapor, obtenindose un extracto bruto (2.9408g). El tamizaje fitoqumico se realiz con la metodologa propuesta por MIRANDA, M. 1996; basadas en pruebas de coloracin y precipitacin para la identificacin de los principales metabolitos secundarios que contiene en los extractos bencnicos, alcohlicos y acuoso del Mentha aff. arvensis L. hierba buena. 3.3.4. Identificacin fitoqumica Ensayo de Dragendorff.- Esta prueba es para reconocer la presencia de

alcaloides, para realizar este ensayo se evapor en bao de agua el solvente orgnico, luego el residuo se disolvi en 1mL. de cido clorhdrico al 1% en agua, si el extracto es acuoso agregar una gota de cido clorhdrico concentrado. Agregar 3 gotas de reactivo de Dragendorff, si hay opalescencia se considera (+), turbidez definida (++), precipitado (+++). Ensayo de Wagner.- Se parte igual que en el caso anterior de la solucin

cida. Luego se aadi 2 a 3 gotas del reactivo, se clasifican los resultados igual que en el caso anterior. Ensayo de Mayer.- Se procedi de la forma descrita anteriormente,

hasta obtener la solucin cida, luego se aadi una pizca de de cloruro de sodio en polvo, se agit y filtr. Se aadi luego 2 a 3 gotas del reactivo de Mayer, si se observa opalescencia (+), turbidez definida (++), precipitado coposo (+++).

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Ensayo

de

Baljet.-

Nos

permite

reconocer

compuestos

con

agrupamiento lactnico, en particular las cumarinas, para ello la muestra se evapor en bao de agua y se disolvi en la menor cantidad de alcohol. Se adiciona 1.mL. de reactivo y se considera positivo la aparicin de de coloracin o precipitado rojo. Ensayo de Sudn. Este ensayo nos permite reconocer compuestos

grasos, a una alcuota de la extraccin se le aade 1.mL. de una solucin diluida en agua del colorante de Sudn III. Se calent en bao de agua hasta la evaporacin del solvente. Es positivo si aparece una pelcula coloreada de rojo. Ensayo de Lieberman Burchard. Este ensayo nos permite reconocer la

presencia de triterpenos y esteroides por poseer ambos un ncleo de androstano, generalmente insaturado en el anillo B y la posicin 5-6. Se adiciona 1 mL. de anhdrido actico y se mezcla bien. Por la pared del tubo de ensayo se deja resbalar 2 a 3 gotas de cido sulfrico concentrado en zona. Un ensayo positivo se tiene por cambio rpido de coloracin. Rosado azul muy rpido. Verde intenso visible aunque rpido. Verde oscuro negro, final de la reaccin. Ensayo de Bortrager. Nos permite reconocer la presencia de quinonas,

para ello se debe evaporar el solvente y el residuo disolver en 1.mL. de cloroformo. Se adiciona 1.mL. de hidrxido de sodio, de potasio o amonio al 5% en agua. Se agita mezclando las fases y se deja en reposo hasta su separacin, si la fase alcalina (superior) se colorea de rosado o rojo, el ensayo se considera positivo. Ensayo de Catequinas.- Se toma de la solucin alcohlica una gota con

un capilar y se aplica la solucin en un papel de filtro, sobre la mancha se aplica

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una solucin de carbonato de sodio. La aparicin de una mancha verde carmelita a la luz U.V. indica un ensayo positivo. Ensayo de Ninhidrina.- Permite reconocer aminocidos libres o de

amina en general. Se toma una alcuota del extracto, si el extracto se encuentra en otros solventes orgnicos, se mezcla con 2.mL. de solucin al 2% de Ninhidrina en agua. La mezcla se calienta 5 - 10 minutos en bao mara. Es positivo si desarrolla un color azul violceo. Ensayo de Shinoda.- Nos permite reconocer la presencia de

flavonoides. S la alcuota se encuentra en alcohol se diluye con 1.mL. de cido clorhdrico concentrado y un pedacito de cinta de magnesio metlico. Despus de la reaccin se espera 5 minutos, se aade 1.mL. de alcohol amlico, se mezclan las fases y se deja reposar hasta que se separen. Se considera positivo cuando el alcohol amlico se colorea de amarillo, naranja, carmelita o rojo. Ensayo de Kedde.- Para reconocer glicsidos cardiotnicos. Una

alcuota del extracto de etanol se mezcla con 1.mL. de reactivo y se deja reposar durante 5 - 10 minutos. Un ensayo positivo es cuando se desarrolla una coloracin violcea persistente durante 1 - 2 horas. Ensayo de resinas.- Para detectar este tipo de compuestos, se adiciona

2.mL. de la solucin alcohlica 10.mL. de agua destilada. La aparicin de un precipitado indica un ensayo positivo. Ensayo de Fehling.- Permite reconocer la presencia de azucares

reductores. Para ello la alcuota debe estar en agua, se adiciona 2.mL. del reactivo y se calienta en bao de agua de 5 a 10 minutos. El ensayo se considera positivo si la solucin se colorea de rojo o aparece precipitado rojo. Ensayo de la espuma.- Este ensayo nos permite reconocer la presencia

de saponinas tanto del tipo esteroidal triterpnica, de modo que si la alcuota se

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encuentra en alcohol, se diluye con 5 veces su volumen en agua y se agita la mezcla fuertemente durante 5 a 10 minutos. Es positivo si aparece espuma en la superficie del lquido de ms de 2.mm. de altura, persistente por ms de 2 minutos. 3.3.5. Obtencin del extracto fluido 500 g de muestra molida de Mentha aff. arvensis L. se macer en alcohol de 70 durante 12 horas. Transcurrido ese tiempo se traslad a un percolador y se dej macerar otras 12 horas, despus del cual se inici la percolacin a razn de 20 a 30 gotas por minutos, as se obtuvo la primera fraccin. Se adicion ms alcohol de 70 al percolador, se dej macerando 12 horas y nuevamente se recolect el extracto obteniendo la segunda fraccin. Se repiti el mismo proceso hasta obtener 4 fracciones. A la primera fraccin ms concentrada, se adicion las dems fracciones previa concentracin en bao mara a 40C. Obtenido el extracto fluido se realiz el control fsico qumico evaluando los siguientes parmetros: color, olor, pH, densidad relativa, ndice de refraccin, slidos totales, contenido alcohlico y el anlisis capilar (Miranda, 2001) 3.3.6. Estudio farmacolgico a) Procedimiento experimental de la tcnica de trquea aislada de cobayo Los animales de experimentacin (cuyes peso de 300 a 500g.) fueron llevados al laboratorio y se mantuvo en ayunas durante 24 horas antes del experimento. Los animales fueron sacrificados. Luego la trquea fue diseccionado y es sumergido rpidamente a la solucin de Krebs a 37 C con suministro de oxgeno.

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Se separ cuidadosamente anillo por anillo cortando transversalmente entre los segmentos de cartlago, para obtener varios anillos de msculo traqueal.

Se unieron cinco anillos con hilo de algodn rpidamente para formar una cadena traqueal, y se les coloc en el bao para rganos aislados que contena 30 mL. de solucin de Krebs a 37C con suministro de oxgeno.

Se fij uno de los extremos del hilo a la aguja inscriptora, la cual estuvo conectada al tambor giratorio del quimgrafo.

Las respuestas contrctiles obtenidas con esta preparacin fueron lentas, para cada dosis es posible esperar unos 15 minutos a 30 minutos por ciclo hasta su completa recuperacin y con la droga se dej actuar durante 5 minutos (Perry, 1968). La concentracin de Acetilcolina usada fue de 5.x.10 report Torres y Col. en el ao 2006.
-4

M, tal como

b)

Tratamientos Se realizaron 5 tratamientos, cada tratamiento con 3 repeticiones: Tratamiento I (Acetilcolina 5.x.10-4M) Se adicion 0,5 mL. de Acetilcolina 5.x.10-4M) Tratamiento II: (Control - jarabe de Salbutamol 2mg/5mL.) Se administr 1 mL. de jarabe de salbutamol 2mg/5mL. y luego se le agreg 0,5 mL. de acetilcolina 5.x.10-4M). Tratamiento III: Extracto fluido - concentracin 10% Se administr 3 mL. y luego se le agreg 0,5.mL.de acetilcolina 5.x.10-4M. Tratamiento IV: Extracto fluido - concentracin 15% Se administr 4,5 mL. y luego se le agreg 0,5.mL. de acetilcolina a una concentracin de 5.x.10-4M.

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Tratamiento V: Extracto fluido - concentracin 20% Se administr 6 mL. y luego se le agreg 0,5.mL. de acetilcolina 5.x10-4M. La secuencia conveniente que se us fue la siguiente: Encender el quimgrafo Agregar 1 mL. de Acetilcolina 5 x 10-4 M y registrar la respuesta contrctil. Enjuagar los anillos traqueales con solucin de Krebs a 37C. Adicionar los mililitros de extracto fluido e inmediatamente agregar 1 mL. de Acetilcolina 5 x 10-4 M y registrar la respuesta contrctil. Enjuagar los anillos traqueales con solucin de Krebs a 37C. Agregar 1 mL. de Acetilcolina 5 x 10-4 M y registrar la respuesta contrctil. Seguir la misma secuencia para el Salbutamol 2 mg/ 5 mL. Para la obtencin de datos se midi las respuestas contrctiles en milmetros, registradas en el quimgrafo. 3.4. ANLISIS ESTADSTICO Los valores de la respuesta contrctil (mm) se present a grficas, que representan la variacin de la respuesta contrctil en funcin de los diferentes tratamientos. Para la comparacin de las medias de la respuesta contrctil se realiz el anlisis de varianza al 95% de nivel confianza, para identificar diferencias estadsticamente de todos los tratamientos. Se realiz la prueba de comparaciones mltiples de Tukey a un nivel de confianza del 95%, para identificar subgrupos homogneos.

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IV. RESULTADOS

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Cuadro 1. Identificacin cualitativa de los metabolitos secundarios presentes en el extracto bencnico de Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Ayacucho -2012
METABOLITOS SECUNDARIOS ALCALOIDES - Ensayo de Dragendortf - Ensayo de Hager - Ensayo de Wagner - Ensayo de Mayer LACTONAS Y CUMARINAS - Ensayo de Baljet ++ Formacin de una + + + + Formacin opalescencia de una RESULTADOS OBSERVACIONES

coloracin rojiza TRITERPENOS Y ESTEROIDES - Ensayo de Lieberman y Burchard + Formacin de dos fases: una superior de color verde y otra interior de color rosado oscureciendo ACEITES Y GRASAS - Ensayo de Sudan +++ Hay formacin de una que fue

pelcula roja al borde del tubo

Resultados: Escaso = (+) Bueno = (++) Excelente = (+++)

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Cuadro 2. Identificacin cualitativa de los metabolitos secundarios presentes en el extracto alcohlico de Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Ayacucho -2012
METABOLITOS SECUNDARIOS AZUCARES REDUCTORES - Ensayo de Benedict ALCALOIDES - Ensayo de Dragendorff - Ensayo de Hager - Ensayo de Wagner - Ensayo de Mayer TRITERPENOS Y ESTEROIDES - Ensayo de Lieberman y Burchard +++ Formacin de una coloracin verde oscuro LACTONAS Y CUMARINAS - Ensayo de Baljet SAPONINAS - Ensayo de Espuma CATEQUINAS ++ ++ Formacin de espuma Formacin de coloracin verde +++ Formacin de una coloracin roja + + ++ + Formacin de una opalescencia +++ Formacin de precipitado rojo ladrillo RESULTADOS OBSERVACIONES

carmelita a la luz UV RESINAS QUINONAS - Ensayo de Borntrager FENOLES Y TANINOS - Ensayo de FeCI3 ANTOCIANINAS - Ensayo de Kedde GRASAS Y ACEITES - Ensayo de Sudan ++ Formacin de una pelcula roja al borde del tubo ++ Fase amlica es de color anaranjado ++ Formacin de una coloracin oscura +++ La fase amlica es de color rojiza +++ Formacin de precipitado blanco

Resultados: Ausente = (-) Escaso = (+) Bueno = (++) Excelente = (+++)

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Cuadro 3. Identificacin cualitativa de los metabolitos secundarios presentes en el extracto acuoso de Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Ayacucho -2012

METABOLITOS SECUNDARIOS ALCALOIDES - Ensayo de Dragendorff - Ensayo de Hager - Ensayo de Wagner - Ensayo de Mayer AZUCARES REDUCTORES - Ensayo de Benedict - Ensayo de Fehling FENOLES Y TANINOS - Ensayo de Cloruro Frrico FLAVONOIDES - Ensayo de Shinoda SAPONINAS - Ensayo de Espuma MUCILAGOS

RESULTADOS

OBSERVACIONES

+ + ++ + Formacin opalescencia de una

++ +++

Formacin de precipitado rojo ladrillo Formacin de una coloracin

+++

negruzca Ligera coloracin amarilla en

la fase amlica

+++ ++

Formacin de espuma Formacin de un gel

ligeramente blanco PRINCIPIOS AMARGOS GRASAS Y ACEITES ++ ++ Es amargo al paladar Formacin de una coloracin roja al borde del tubo

Resultados: Escaso = (+) Bueno = (++) Excelente = (+++)

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Cuadro 4. Caractersticas organolpticas y fsico- qumicas del extracto fluido de Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Ayacucho -2012. CARACTERSTICAS ENSAYOS Color ORGANOLPTICAS Olor pH Densidad relativa (g/mL. a 0.9769 25C) FSICO QUMICAS ndice de refraccin a 20 C Slidos totales (%) Contenido alcohlico (%) Anlisis capilar 1.3648 8.31 10 Responde Caracterstico 7.0 RESULTADOS Verde oscuro

LEYENDA: Responde: Color, vivamente coloreada (verde claro); de alta altura; presentando una franja festonada y una banda con mayor intensidad de color

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10.0

Disminucin de la respuesta contrctil (mm)

8.0

6.0

4.0

2.0

0.0
Salbutamol Extracto fluido 10% Extracto fluido 15% Extracto fluido 20%

Tratamientos

p < 0,05 SIGNIFICATIVO

Grfico 1. Disminucin de la respuesta contrctil de la trquea aislada inducida por acetilcolina y por efecto del extracto fluido de las hojas Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Ayacucho - 2012.

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Cuadro 5. Resultado de la Prueba de Tukey de la disminucin de la respuesta contrctil de la trquea aislada inducida por acetilcolina y por efecto del extracto fluido Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Ayacucho - 2012.

Subgrupos para p = 0.05 Tratamientos Extracto fluido 10% Extracto fluido 15% Extracto fluido 20% Salbutamol Sig. N 3 3 3 3 0,193 1 1,33 2,17 3,67 3,83 0,968 2

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V. DISCUSIN A partir de la hojas del Mentha aff. arvensis L. se obtuvo tres extractos bencnico, alcohlico y acuoso y se realiz un tamizaje fitoqumico para identificar la presencia de metabolitos secundarios (Miranda, 2000). Resultado de ello, podemos concluir que las hojas de Mentha aff. arvensis L. presentan alcaloides, lactonas y cumarinas, triterpenos y esteroides, aceites y grasas, azcares reductores, saponinas, catequinas, resinas, quinonas, fenoles y taninos, antocianinas, flavonoides, muclagos y principios amargos, tal como se muestra en los Cuadros 1, 2 y 3. Cceres 1991, menciona que la composicin qumica de la Hierba buena es variable y compleja. El tamizaje fitoqumico demuestra la presencia de alcoholes, cidos orgnicos, derivados diterpnicos y aceite esencial. El aceite esencial de hojas contiene l carnova (50 70%), l limoneno (13 20%) felandreno, y pineno (2 5%), pineno, alcohol octlico, acetato de dihidrocarveol y cineol (2 4%). El anlisis proximal de 100 g de hojas frescas contiene: agua (83 g), protena (4,8 g), grasa (0,6 g), carbohidratos (10,0 g), fibra (2,0 g), ceniza (1,6 g), calcio (200 mg), fsforo (80 mg), hierro (15,6 mg), caroteno (1,620 ug), tiamina (0,05 mg), fiboflavina (0,08 mg), niacina (0,4 mg).

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Los aceites esenciales son mezclas complejas de sustancias voltiles (olorosas) presente en los vegetales, normalmente lquidas, que presentan una caracterstica: su volatilidad, siendo extrables en corriente de vapor de agua. En general son los responsables del olor de las plantas. Qumicamente estn formados principalmente por terpenos (monoterpenos y sesquiterpenos) hidrocarburos, alcoholes, cetonas, en ocasiones tambin contienen derivados del fenilpropano y, ms raramente, cumarinas. Entre las principales acciones debidas a la presencia de aceites esenciales cabe destacar: antisptica, antiespasmdica, expectorante, carminativa y eupptica, etc. Por ejemplo, el azuleno es un componente de los aceites esenciales que posee actividad antiinflamatoria y espasmoltica. Las preparaciones que contienen mentol, alcanfor o eucaliptol se usan habitualmente en forma de pomadas para extender el pecho y en toras formas farmacuticas para ser aplicadas en los orificios nasales y para realizar inhalaciones; sin embargo es necesario tomar en cuenta la dosis ya que tienen efecto txico. Las saponinas, muchas de ellas poseen propiedades hemolticas. Muchos de los efectos farmacolgicos que producen estos compuestos estn relacionados con su capacidad para permeabilizar membranas biolgicas. Se les ha atribuido adems se han actividad utilizado antiviral, como citotxica, antitusivos espermicida, y etc.

Clsicamente

expectorantes,

antiinflamatorios, analgsicos, venotnicos y antihemorroidales y adaptgenos. Los muclagos, poseen una estructura qumica que corresponde a polisacridos hetergenos con un alto contenido en galactosa, manosa, glucosa y derivados de osas (principalmente cidos). Muchas de estas plantas se utilizan como laxantes mecnicos, ya que los muclagos que contienen al absorber una gran cantidad de agua. Estos compuestos en contacto con el agua se hinchan formando soluciones muy viscosas y geles no adherentes. Algunos de estos

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muclagos son capaces de absorber ms de cien veces su peso en agua. Estos geles altamente hidratados actan como demulcentes, disminuyendo la irritacin de la faringe y de la mucosa bronquial y calmando la tos. A partir de la hojas de Mentha aff. arvensis L. se obtuvo un extracto fluido (Miranda, 2000). Un extracto fluido se definen como preparaciones liquidas de los principios activos contenidos en los vegetales, se utiliza el etanol como disolvente, como preservativo o en ambos fines, de forma tal que cada mililitro de extracto contenga los principios activos que aporte 1g de droga (Miranda, 2000). El extracto obtenido present las siguientes caractersticas: color verde; olor caracterstico; pH 7,0; densidad relativa 0,9769 g/mL.; ndice de refraccin 1,3648; slidos totales 8,31 % y contenido alcohlico 10%, tal como se muestra en el Cuadro 4. Con el extracto fluido se procedi a evaluar el efecto broncodilatador mediante la tcnica in vivo de trquea aislada, usando un bao de rganos aislados. El procedimiento consisti en la preparacin de anillos traqueales de cobayo (4 a 5 anillos) y se coloc en el bao de rganos aislados que contena una Solucin de Krebs a 37 C y con suministro de oxgeno. En primer lugar se registr en un quimgrafo la respuesta contrctil de la trquea con la Solucin de Krebs, luego con Acetilcolina y con el extracto fluido a concentraciones de 10, 15 y 20% (volumen de extracto fluido en funcin del volumen de Solucin de Krebs (Perry, 1968). En el Grfico 1, se muestra la disminucin de la respuesta contrctil de la trquea aislada inducida por acetilcolina y por efecto del extracto fluido de las hojas de hierba buena. El extracto fluido al 20% present una disminucin de la respuesta contrctil de 3,67 +/- 0,33 mm, siendo estadsticamente mayor (p < 0,05) al de los extractos fluidos de 10 y 15% que presentaron una disminucin de la respuesta contrctil de 1,43 +/- 0,07 mm y 2,17 +/- 0,17 mm

38

respectivamente. El Salbutamol 2mg/5mL. present una disminucin de la respuesta contrctil de 3,83 +/- 0,33 mm. En el Cuadro 5, se presentan los resultados de la prueba de Tukey, donde se identificaron dos subgrupos homogneos. El extracto fluido al 10 y 15% presentan valores de disminucin estadsticamente similares. El extracto fluido al 20% y el Salbutamol 2mg/5mL., presentan una disminucin de la respuesta contrctil estadsticamente similares (p > 0,05). Por lo tanto, al disminuir la respuesta contrctil presenta efecto broncodilatador. El aparato respiratorio tiene como fundamento primordial el transporte del aire desde el exterior hasta los alvolos pulmonares, donde se produce el intercambio gaseoso. Las vas areas o tracto respiratorio (nariz, faringe, laringe y bronquios). Los sntomas ms caractersticos de muchas afecciones respiratorias son la tos, la mucosidad y la expectoracin. Las plantas con actividad antitusgena actan mediante varios

mecanismos de accin, tanto a nivel central (deprimen el centro bulbar que controla el reflejo de la tos), como a nivel perifrico (actan como analgsicos o anestsicos, sobre las terminaciones nerviosa bronquiales que constituyen el inicio del reflejo tusgeno). En este grupo tambin se incluyen las sustancias demulcentes. Entre las plantas que actan a nivel central destacan las que presentan hetersidos cianogenticos, como el laurel cerezo, que contienen prunassidos, con propiedades estimulantes respiratorias y antiespasmdicas y los alcaloides de la adormidera, destacando la codena, por su especificidad y baja toxicidad a dosis teraputicas. A nivel perifrico los mecanismos de accin son muy diversos, se utilizan cuando el origen de las dolencias es la

bucofaringeo las vas superiores del rbol bronquial.

39

VI. CONCLUSIONES 1. Las hojas de Mentha aff. arvensis L. presentan alcaloides, lactonas y cumarinas, triterpenos y esteroides, aceites y grasas, azcares reductores, saponinas, catequinas, resinas, quinonas, fenoles y taninos, antocianinas, flavonoides, muclagos y principios amargos. 2. El extracto fluido obtenido present las siguientes caractersticas: color verde; olor caracterstico; pH 7,0; densidad relativa 0,9769 g/mL.; ndice de refraccin 1,3648; slidos totales 8,31 % y contenido alcohlico 10%. 3. El extracto fluido al 20% present una disminucin de la respuesta contrctil de 3,67 +/- 0,33 mm, siendo estadsticamente mayor (p < 0,05) al de los extractos fluidos de 10 y 15% que presentaron una disminucin de la respuesta contrctil de 1,43 +/- 0,07 mm y 2,17 +/- 0,17 mm respectivamente. 4. El Salbutamol 2mg/5mL. present una disminucin de la respuesta contrctil de 3,83 +/- 0,33 mm, estadsticamente similar al extracto fluido al 20% (p > 0,05). Por lo tanto, al disminuir la respuesta contrctil presenta efecto broncodilatador.

40

VII. RECOMENDACIONES Realizar formulaciones a base del extracto fluido de Mentha aff. arvensis L., por ejemplo jarabes Realizar estudios clnicos que demuestren la eficacia teraputica del jarabe a base de extracto fluido de Mentha aff. arvensis L.

Aprovechar los estudios realizados de las diferentes plantas medicinales, elaborar formas farmacuticas que estn en nuestro alcance y as dar una alternativa de uso, a bajo costo para la poblacin Ayacuchana.

41

VIII. 1.

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45

ANEXOS

46

ANEXO 1

47

ANEXO 2

Cuadro 6. Resultados descriptivos de la disminucin de la respuesta contrctil de la trquea aislada inducida por acetilcolina y por efecto del extracto fluido de las hojas Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Ayacucho - 2012.

Intervalo de Desviacin Error estndar confianza al 95% Mnimo Mximo estndar Lmite inferior Salbutamol Extracto fluido 10% Extracto fluido 15% Extracto fluido 20% Total 3 3 3 3 12 3,83 1,43 2,17 3,67 2,75 0,58 0,12 0,29 0,58 1,16 0,33 0,07 0,17 0,33 0,33 2,40 1,15 1,45 2,23 2,01 Lmite superior 5,27 1,72 2,88 5,10 3,49 3,50 1,30 2,00 3,00 1,00 4,50 1,50 2,50 4,00 4,50

Tratamientos

Media

48

ANEXO 3

Cuadro 7. Disminucin de la respuesta contrctil de la trquea aislada inducida por acetilcolina y por efecto del extracto fluido de las hojas Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Ayacucho - 2012.

Suma de Tratamiento cuadrado Entre grupos Dentro de grupos Total 13,783 11 12,256 1,527 3 8 Df

Media de F cuadrados 4,085 0,191 21,408 3,53 x 10-4 Sig.

49

ANEXO 4

Ach

Ach

Ach

Figura 1. Respuestas contrctiles de la Acetilcolina a una concentracin de 5x10-4M en cadena de trquea aislada de cobayo. Ayacucho-2012.

50

ANEXO 5

Ach

Salbutamol + Ach

Ach

Ach

Salbutamol + Ach

Ach

Figura 2. Respuestas contrctiles del jarabe de Salbutamol 2mg/5 mL. frente a la Acetilcolina en cadena de trquea aislada de cobayo. Ayacucho-2012.

51

ANEXO 6

FOTO N 1: Fotografa de Mentha aff. arvensis L. hierba buena.

52

ANEXO 7

FOTO N 2: Proceso de percolacin de Mentha aff. arvensis L.hierba buena.

53

ANEXO 8

FOTO N 3: Equipo de Termostato, quimgrafo, bao mara y otros materiales usados en el experimento de trquea aislada de cobayo

FOTO N 4: Anillos de trquea de cobayo presentes en la solucin de Krebs a 37C y su respectiva oxigenacin.

54

ANEXO 9

FOTO N 5: Proceso de unin de los anillos de la trquea de cobayo ayudados con un hilo y pinzas, en condiciones dadas.

FOTO N 6: Cadena de 6 anillos colocado en bao de rganos.

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MATRIZ DE CONSISTENCIA
TITULO Evaluacin del efecto broncodilatador del extracto fluido de Mentha aff. arvensis L hierba buena en trquea aislada de Cavia porcellus cobayo . Ayacucho-2012 PROBLEMA Poseer efecto broncodilatador el extracto fluido de Mentha aff. arvensis L hierba buena evaluado en trquea aislada de Cavia porcellus cobayo? OBJETIVOS Objetivo General: Evaluar el efecto broncodilatador del extracto fluido de Mentha aff. arvensis L hierba buena evaluado en trquea aislada de Cavia porcellus cobayo MARCO TERICO VARIABLES Variable independiente Volumen del extracto fluido de las hojas de Mentha aff. arvensis L. hierba buena. Variable dependiente Efecto broncodilatador. Indicadores Efecto Broncodilatador: Respuesta contrctil de la trquea. Temperatura. Oxigenacin. Lquido nutricio. HIPTESIS El extracto fluido de Mentha aff. arvensis L hierba buena presenta una respuesta contrctil menor a la Acetilcolina. : METODOLOGA Tipo de Investigacin: Bsica experimental.

Mentha aff. arvensis L. hierba buena presentan; alcaloides, lactonas y cumarinas, tritepenos y esteroides, aceites y grasa, azucares reductores, saponinas, catequinas, resinas, quinonas, fenoles y taninos, antocianinas, flavonoides, mucilagos y principios amargos. Utilizada en nuestra Objetivos Especficos: localidad en forma emprica para afecciones de las vas respiratorias (tos, resfro, gripe, Obtencin del extracto fluido de bronquitis, faringitis) Mentha aff. arvensis L. hierba Broncodilatadores: buena Identificar los metabolitos Son aquellos que relajan el msculo liso de secundarios presentes en el las vas respiratorias e inhiben la liberacin extracto fluido de las hojas de de sustancias broncoconstrictoras a partir de Mentha aff. arvensis L. hierba las clulas cebadas, aumentan el transporte buena. mucociliar y estimulan la adenilciclasa. Evaluar la respuesta contrctil de la trquea aislada de cobayo por efecto de la administracin del jarabe de Salbutamol. Evaluar las respuestas contrctiles de la trquea aislada de cobayo frente a la administracin del extracto fluido de Mentha aff. arvensis L. hierba buena.

Muestras: 5Kg. de Hojas secas y tallos de Mentha aff. arvensis L. recolectado en los sembrios del Respuesta contrctil del leo aislado de rat Centro Poblado de San Jos de Viaca, Provincia de Huamanga, Departamento de Ayacucho. Metodologa: Extracto fluido de Mentha aff.arvensis L. por percolacin. Evaluar el efecto basal de la trquea aislada del cobayo. Administrar extracto fluido y Acetilcolina en el mismo momento y evaluar la respuesta contrctil. Efecto broncodilatador en trquea aislada de cobayo.