CAPITULO 7 CONTROL DEL CRECIMIENTO MICROBIANO 7.

1 INTRODUCCIN

Antes de empezar a describir los mtodos fsicos y qumicos utilizados para el control del crecimiento microbiano sera til definir primero los trminos ms importantes relacionados con el control. El control microbiano es necesario para prevenir la transmisin de las infecciones, la contaminacin y la putrefaccin. Pero como se ver no siempre es necesario matar a los microbios; algunas situaciones requieren que simplemente se inhiban o eliminen. Se ha desarrollado una gran variedad de agentes y procedimientos; cada uno tiene sus aplicaciones y espectro de eficacia en diferentes situaciones. La tabla contiene una lista de trminos relacionados con la destruccin o inhibicin de crecimiento microbiano.

TABLA 7-1. Terminologa relacionada con el control del crecimiento microbiano.

Trmino Trminos referidos a fe de los microorganismo Esterilizacin

Definicin i destruccin s El proceso de destruccin de todas las formas de vida en un objeto o material, incluidas las endosporas, las formas ms resistentes de vida microbiana. La esterilizacin es absoluta; no hay grados de esterilidad

Comentarios Las temperaturas requeridas normalmente son: calor hmedo, 121 C durante 15 minutos; calor seco, 170C durante dos horas. Otros mtodos son radiaciones ionizantes y gases, como el oxide de etileno.

Desinfeccin

El proceso de destruccin de las formas vegetativas de los patgenos, pero no necesariamente endosporas o virus. Normalmente un desinfctame es un compuesto qumico que se aplica sobre un objeto o material. Los desinfectantes tienden a reducir o inhibir el crecimiento; no suelen esterilizar

Este trmino se suele aplicar al uso de soluciones qumicas sobre superficies o a la eliminacin de patgenos del agua, como en la cloracin de aguas.

Antisepsia

Desinfeccin qumica de la piel, mucosas u otros tejidos, en vivo.

Trmino aplicado especficamente al tratamiento de heridas. Antisepsia es un tipo concreto de desinfeccin.

Germicida (cida, que mata)

Un agente qumico que mata rpidamente a

Un bactericida mata bacterias, un esporicida

los microbios, pero no necesariamente a sus destruye esporas, un fungicida hongos, un endosporas virucida virus y unamebicida mata amebas.

Trminos referidos a k de tos microorganismo Bacteriostasis (estasis, detencin)

i supresin s

Situacin que inhibe el crecimiento y multiplicacin bacterianos pero sin matar a las bacterias. Si se elimina el agente bacteriosttico puede reanudarse el crecimiento. La fungistasia se refiere a la inhibicin del crecimiento fngico

La refrigeracin es bacteriosttica; muchos compuestos qumicos, como los colorantes, son bacteriostticos ms que bactericidas. .

Asepsia (asepsia, sin infeccin)

La ausencia de patgenos en un objeto o zona. Las tcnicas de asepsia estn diseadas para prevenir la entrada de patgenos en el organismo. La asepsia quirrgica pretende evitar todos los microorganismos, mientras que la asepsia mdica slo los responsables de enfermedades transmisibles

La filtracin del aire, la luz ultravioleta, las mascarillas, guantes y batas y la esterilizacin de instrumentos son medidas para conseguir la asepsia. .

Desgerminizacin Eliminacin pasajera de microbios de la piel mediante limpieza mecnica o el empleo de un antisptico.

En el caso de las inyecciones se utiliza con frecuencia un algodn empapado en alcohol; antes de la ciruga con frecuencia se utilizan productos qe contienen fsforo.

Higienizacin

La reduccin del nmero de patgenos que hay en un objeto hasta niveles aceptables para la salud pblica mediante lavado mecnico o con agentes qumicos

Cualquier compuesto empleado debe ser compatible con la seguridad y con los caracteres organolpticos de los alimentos.

7.2

Condiciones que afectan al control de los microorganismos

Normalmente, si queremos esterilizar un objeto, como un matraz de laboratorio, no necesitamos identificar las especies de microorganismos que hay en l. En su lugar realizamos un ataque general que sea lo suficientemente fuerte como para matar a la mayora de las formas microbianas ms resistentes que pudieran estar presentes (las endosporas). En cualquier momento el matraz puede contener una multitud de microorganismos en diferentes fases de su ciclo de crecimiento, con diferentes estados metablicos e incluso en distintos microambientes. Por ello es posible que un agente antimicrobiano no mate inmediatamente a toda la poblacin microbiana. El tiempo que se tarda en reducir o eliminar el crecimiento microbiano sobre cualquier objeto depende, en parte, del nmero y especies de microbios que se encuentren en l y tambin de muchos otros factores. 7.2.1 Temperatura

Todo el mundo est familiarizado con el uso del hielo o de la refrigeracin mecnica para controlar el crecimiento microbiano. Como todas las reacciones qumicas las reacciones bioqumicas necesarias para el crecimiento disminuyen considerablemente a bajas temperaturas.

Frecuentemente los desinfectantes qumicos son tambin inhibidos por las bajas temperaturas. Ya que su actividad est en funcin de reacciones qumicas dependientes de la temperatura, los desinfectantes trabajan mejor en soluciones templadas. Es normal que las instrucciones de los envases desinfectantes especifiquen que se utilice a una temperatura media. 7.2.2 Clases de microorganismos

Muchos desinfectantes y antispticos tienden a tener mayor efecto sobre las bacterias grampositvas como grupo que sobre las gram-negativas, aunque esta diferencia no es tan significativa como ocurre con la actividad anti-bitica. Por ejemplo, un cierto grupo de bacterias gram-negativas, pertenecientes al gnero Pseudomonas, presentan una resistencia poco comn a los agentes qumicos e incluso crecen activamente en algunos desinfectantes y antispticos. Estas bacterias son capaces de mantenerse en sustratos tan inverosmiles como una solucin salina simple y son tambin resistentes a muchos antibiticos. Esta resistencia a agentes antimicrobianos est relacionada probablemente con el tamao de las porinas (estructuras en forma de poro que hay en la pared) de Pseudomonas. Las porinas son mucho ms pequeas en este grupo de microorganismos. Las endosporas bacterianas y los quistes de los protozoos son tambin muy resistentes a los agentes qumicos, como ocurre tambin con algunos virus. Su resistencia a la desinfeccin por cloro en el tratamiento de aguas es un factor particularmente importante a considerar en las estrategias de salubridad pblica.

7.2.3

Estado fisiolgico del microorganismo

Los microorganismos que crecen activamente son ms sensibles a los agentes qumicos que las clulas viejas. Esto podra ser debido a que una clula activa metablica y reproductivamente tiene ms puntos vulnerables que una clula vieja, posiblemente latente. Cuando los microorganismos han formado endosporas stas suelen ser ms resistentes que las clulas vegetativas. Las endosporas de las cepas resistentes de Clostridium botulinum, por ejemplo, pueden soportar la ebullicin durante varias horas. 7.2.4 Medio ambiente

La materia orgnica interfiere frecuentemente en la actividad de los agentes qumicos. Las bacterias que se encuentran en los alimentos tienden a estar protegidas por la materia orgnica del mismo. Por ejemplo, en la nata las bacterias estn protegidas por protenas y grasas y pueden soportar ms calor que el que normalmente matara a las bacterias en la leche desnatada. El calor es mucho ms eficaz en condiciones acidas que a un pH neutro. Esto tambin es cierto para algunos agentes qumicos. 7.3 7.3.1 Mecanismos de accin de los agentes antimicrobianos Alteracin de la permeabilidad de la membrana

La membrana citoplasmtica, localizada bajo la pared celular, es el objetivo de muchos agentes antimicrobianos. Esta membrana controla activamente el paso de los nutrientes a la clula y la eliminacin de los deshechos. La alteracin de los lpidos o protenas de la membrana citoplasmtica por agentes antimicrobianos, como los compuestos de amonio cuaternario, provoca la salida del contenido celular al medio circundante e interfiere en el crecimiento de la clula. Varias clases de agentes qumicos, as como de antibiticos, actan de forma ms o menos similar. TABLA 7-2. Ejemplo de una cintica de muerte microbiana.

Muertes por Tiempo (minutos) 01 23456 minuto 0 900.000 90.000 9.000 900 90 9

Nmero de supervivientes 1.000.000 100.000 10.000 1.000

100 10 1 Fuente: O. Rahn, Physio. 1932. logy of Bacteria, w-Hill, Nueva McGra York,

7.3.2

Alteracin de protenas y cidos nucleicos

Se recordar que las propiedades funcionales de las protenas se deben a su morfologa tridimensional. Esta forma se mantiene por enlaces qumicos que unen porciones adyacentes de las cadenas de aminocidos a medida que se pliegan sobre s mismas. Algunos de estos enlaces son puentes de hidrgeno, susceptibles de ruptura por calor o ciertos agentes qumicos; su rotura provoca la desnaturalizacin de la protena. Los enlaces covalentes, que son ms fuertes, tambin pueden verse afectados. Por ejemplo, los puentes disulfuro, que juegan un papel importante en la estructura de la protena uniendo aminocidos con grupos sulfhidrilo expuestos (SH), pueden ser rotos por ciertos agentes qumicos o por suficiente calor. Como el DNA y RNA transportan el mensaje gentico su lesin por radiacin o agentes qumicos suele ser letal para la clula; estas lesiones impiden tanto la replicacin como el normal funcionamiento celular. ' 7.4 Cintica de muerte microbiana

Cuando las poblaciones bacterianas se exponen al calor o a los agentes qumicos antimicrobianos suelen morir siguiendo una tasa constante. Supongamos, por ejemplo, que se trata una poblacin de 1 milln de microorganismos durante un minuto, resultando destruido el 90% de la poblacin. Quedan 100.000 microorganismos. S tratamos a la poblacin durante otro minuto morir el 90 %de esos microorganismos y quedarn 10.000 supervivientes. En otras palabras, por cada minuto de tratamiento aplicado muere el 90% de la poblacin residual. Si se representa logartmicamente la curva de mortalidad se ve que la tasa de mortalidad es constante, como se deduce de la lnea recta de la figura.Obviamente cuantos ms microorganismos haya al principio ms se tardar en matarlos. Una vez comprendidos los principios bsicos del control microbiano examinaremos algunos mtodos fsicos y qumicos representativos.

Figura 7-1. Representacin logartmica de la curva de muerte microbiana. En este caso las clulas mueren con una tasa del 90% cada minuto. 7.5 7.5.1 Mtodos fsicos para el control microbiano Calor

Probablemente el mtodo ms comnmente empleado para destruir los microorganismos es el calor. Los medios de cultivo, material de vidrio e instrumentos mdicos son esterilizados normalmente por calor. El calor no slo es el agente de esterilizacin ms ampliamente utilizado y el ms eficaz sino tambin el ms econmico y el ms fcil de controlar. Aparentemente el calor mata a los microorganismos al desnatu-rak'zar-ss enzimas. En la esterilizacin por calor debe tenerse en cuenta el grado de resistencia de las bacterias a la temperatura. La resistencia al calor vara entre los diferentes microorganismos; estas diferencias pueden expresarse .a travs del concepto de punto trmico de muerte. (a)El punto de muerte trmica (PMT) es la temperatura ms baja requerida para matar a todos los microorganismos de una suspensin lquida en 10 minutos. Otro factor a considerar en la esterilizacin es el tiempo requerido para que el material quede estril. Este se expresa como (b) tiempo de muerte trmica (TMT), el menor tiempo necesario para que todas las bacterias de un cultivo lquido mueran a una temperatura determinada. Tanto el PMT como el TMT son guas tiles que indican la severidad del tratamiento requerido para matar a una poblacin dada de bacterias, (c) El tiempo de reduccin decimal (TRD o valor D) es un Tercer concepto relacionado con el grado de resistencia al calor de las bacterias. Es el tiempo, en minutos, en el que se destruye el 90% de la poblacin de bacterias a una temperatura determinada

(figura 7-1). El valor D es especialmente til en la industria de conservas enlatadas. El calor utilizado en esterilizacin se puede aplicar en forma de calor hmedo o seco. El calor seco mata por efectos de oxidacin. Una analoga sencilla es la lenta carbonizacin del papel en un horno cuando la temperatura est por debajo del punto de ignicin del papel. El calor hmedo mata a los microorganismos ms rpidamente porque el agua acelera la rotura de los puentes de hidrgeno que mantienen la estructura tridimensional de las protenas. TABLA 7-3. Relacin entre presin y temperatura del vapor al nivel del mar .
1

Presin en kilos por centmetro cuadrado (sobre la presin atmosfrica) 0 0,35 0,69 1,05 1,38 2,10 Temperatura en C 100 110 116 121 126 135

* A mayor altura mayor tendr que ser la lectura del nanmetro para una temperatura determinada.

a)

Calor hmedo

Un tipo de esterilizacin por calor hmedo es la ebullicin (100 C al nivel del mar), que mata a lasormas vegetativas de las bacterias patgenas, muchos virus y hongos y sus esporas en unos 10

minutos. El vapor fluente (sin presin) es el equivalente en temperatura al agua hirviendo. Las endosporas y algunos virus, sin embargo, no se destruyen tan fcilmente. Para esterilizar de forma eficaz mediante calor hmedo se necesitan temperaturas superiores a la ebullicin del agua. Estas altas temperaturas se consiguen normalmente mediante vapor a presin en un autoclave. Este es el mtodo preferido de esterilizacin y se utiliza a menos que

Figura 7-2. Autoclave. El vapor que entra en la cmara obliga al aire a salir por el fondo de la cmara (flechas negras). La vlvula de purgado automtico permanece abierta mientras sale la mezcla de aire y vapor hacia el desage. Cuando se ha expulsado todo el aire la temperatura ms elevada del vapor puro cierra la vlvula y la presin de la cmara aumenta.

el material a esterilizar pueda resultar daado por

el calor o la humedad. Cuanto mayor es la

presin en el autoclave mayor es la temperatura. Por ejemplo, cuando el vapor fluyente, a una temperatura de 100 C, se pone a la presin de 1 atmsfera sobre la presin a nivel del mar, esto es, alrededor de un kilo por centmetro cuadrado, la temperatura se eleva hasta 121 C. Aumentando la presin a 1,38 kilos por centmetro cuadrado la temperatura aumenta a 126 C. La relacin entre temperatura y presin se muestra en la tabla. En un autoclave el vapor a una atmsfera de sobrepresin (121 C) matar a todos los microorganismos y a sus endosporas en unos 15 minutos o un poco ms, dependiendo del tipo y volumen del material que est siendo esterilizado. El autoclave se utiliza para esterilizar medios de cultivo, instrumentos, ropas, instrumental de uso

endovenoso y externo, soluciones, jeringas, equipos de transfusin y muchos otros artculos que pueden soportar alta temperatura y presin. Los autoclaves industriales pueden ser de gran tamao, pero se utiliza el mismo principio para la olla a presin en la elaboracin de conservas caseras. El calor necesita ms tiempo para alcanzar el centro de los materiales slidos, como carnes enlatadas, en los que el calor se transmite sin las eficaces corrientes de conveccin de los lquidos. Tambin se necesita ms tiempo para el calentamiento de grandes recipientes. En la tabla La.se muestran los tiempos necesarios para los diferentes tamaos de recipiente. Es importante recordar que para esterilizar una superficie el vapor tiene que entrar realmente en contacto con ella. En los lquidos no existe este problema, pero con los recipientes de vidrio secos, apositos y similares se debe tener cuidado para asegurar que se consigue el contacto. Por ejemplo, el papel de aluminio es impenetrable para el vapor y no se debe usar para envolver; en su lugar hay que utilizar papel. Tambin se debe evitar atrapar aire en el fondo de un recipiente seco ya que el aire almacenado no ser reemplazado por el vapor, que es ms ligero que el aire. El aire atrapado es el equivalente a un pequeo horno de aire caliente que, como veremos, precisa mayor temperatura y un tiempo ms prolongado. Tales recipientes deben inclinarse de tal forma que el aire pueda ser desplazado por el vapor. Las sustancias que no permiten la penetracin del agua, como el aceite mineral o la parafina, no se esterilizan con los mismos tratamientos que esterilizaran soluciones acuosas. TABLA 7-4. Efecto del tamao del recipiente sobre el tiempo de esterilizacin de soluciones lquidas.

Volumen de Tamao del recipiente Tubo de ensayo: 18x150 mm Matraz erlenmeyer: 125 mi Matraz erlenmeyer: 2.000 1.500 mi mi Vasija de fermentador: 9.000 mi " 6.750 mi 70 30 95 mi 15 lquido 10 mi Tiempo de esterilizacin en minutos 15

* Recipientes mayores precisan de ms tiempo para alcanzar la temperatura de esterilizacin. Para un tubo de ensayo el tiempo adicional puede ser solamente de 5 minutos, pero para un frasco de 8.00 ml podra ser de 60 minutos. Los recipientes no suelen llenarse ms del 75% de su capacidad

El vapor a presin falla en la esterilizacin cuando no se extrae completamente el aire. Esto se debe habitualmente al cerrado prematuro de la vlvula automtica de purga del autoclave. Cualquiera que est familiarizado con la preparacin de conservas caseras sabe que el vapor debe salir vigorosamente por la vlvula de la tapa durante varios minutos para extraer todo el aire antes de cerrar la olla a presin. Si el aire no se ha eliminado completamente el recipiente no alcanzar la temperatura esperada para la presin elegida. b) Pasteurizacin

En el tratamiento clsico de pasteurizacin de la leche se trata a una temperatura de unos 63 C durante 30 minutos. La mayora de los procesos de pasteurizacin utilizados hoy en da emplean temperaturas mayores, al menos de 72 C, pero slo durante unos 15 segundos. Este tratamiento, conocido como pasteurizacin rpida a alta temperatura, se aplica mientras la leche fluye continuamente por un intercambiador de calor. Esta temperatura, ms alta que la necesaria para matar a los patgenos, reduce el nmero total de bacterias, de forma que la leche se mantiene mejor bajo refrigeracin. La leche tambin se puede esterilizar (algo bastante distinto de la pasteurizacin) mediante temperaturas ultraelevadas (UHT, del ingls ultra high temperature), de modo que puede ser conservada sin refrigeracin. Resulta muy til en regiones donde es difcil disponer de refrigeracin. Para no comunicar un sabor de caramelizado a la leche fue necesario desarrollar un sistema UHT en el cual la leche no entrase nunca en contacto con una superficie caliente. Para ello la leche cae formando una delgada pelcula a travs de una cmara que contiene vapor sobrecalentado y alcanza 140 C en menos de un segundo. Se mantiene en un conducto por espacio de 3 segundos y se enfra entonces en una cmara de vaco, donde se elimina el vapor. Siguiendo este sistema la temperatura de la leche pasa de 74 a 140 C y baja de nuevo a 74 C en menos de 5 segundos. c) Esterilizacin por calor seco

Uno de los mtodos ms sencillos de la esterilizacin con calor seco es el flameado. Este mtodo se utiliza muchas veces en el laboratorio de microbiologa para esterilizar asas de siembra; todo lo

que hay que hacer es calentar el alambre al rojo y la eficacia es del 100%. Un principio similar se utiliza en la incineracin, una forma eficaz de esterilizar y eliminar recipientes de cartn, bolsas y ropa. Otra forma de esterilizacin con calor seco es la esterilizacin por aire caliente. Los objetos a esterilizar por este mtodo se colocan en un horno, donde una temperatura, generalmente de unos 170 C, mantenida durante cerca de dos horas asegura la esterilizacin. Se requiere un perodo de tiempo mayor y una temperatura ms alta en comparacin con el calor hmedo, ya que el calor del agua se transfiere ms rpidamente a un cuerpo fro que el calor del aire. Imagine, por ejemplo, los efectos de meter brevemente la mano en un bao de agua hirviendo y de mantenerla en un horno a la misma temperatura (100 C) y durante el mismo tiempo. 7.5.2 Filtracin

La filtracin es el paso de un lquido o gas a travs de un material filtrante con poros lo suficientemente pequeos para retener microorganismos La filtracin se utiliza para esterilizar materiales sensibles al calor, como algunos medios de cultivo, enzimas, vacunas y soluciones de antibiticos. Los filtros de aire partculados de alta eficacia (HEPA, del ingls high-effidency particulate air filters) eliminan casi todos los microorganismos de dimetro superior a 0,3 um. En los ltimos aos los filtros de membrana, compuestos por sustancias como esteres de celulosa o polmeros plsticos, se han hecho de uso frecuente en la industria y el laboratorio. Estos filtros tienen tan slo 0,1 mm de espesor y sus poros estn muy igualados en tamao. Algunos fabricantes irradian una pelcula de plstico de modo que se graban orificios muy uniformes, por donde han pasado las partculas de la radiacin. Los poros de los filtros de membrana incluyen tamaos de 0,22 y 0,45 um, diseados para retener bacterias, y llegan hasta tan slo 0,01 um, tamao que retiene virus, e incluso a algunas molculas grandes de protenas. 7.5.3 Bajas temperaturas

El efecto de las bajas temperaturas sobre los microorganismos depende de la especie en particular y de la intensidad de su aplicacin. Por ejemplo, a la temperatura normal de refrigeracin (de O a 7 C) la actividad metablica de la mayora de los microorganismos se encuentra tan reducida que no se reproducen ni elaboran productos. En otras palabras, la refrigeracin habitual tiene un efecto bacteriosttico. Sin embargo, las especies sicrfilas (adaptadas al fro) crecen lentamente a la temperatura del refrigerador y pueden alterar la apariencia y sabor de los alimentos despus de un tiempo bastante largo.

Las temperaturas bajo cero alcanzadas rpidamente dejan latentes a los microorganismos pero no los matan necesariamente. La congelacin es ms daina para las bacterias cuando se realiza lentamente; los cristales de hielo que se forman y crecen rompen la estructura celular y molecular de las bacterias. 7.5.4 Desecacin

Los microorganismos necesitan agua para crecer y multiplicarse. En ausencia de agua, desecacin, los microorganismos no son capaces de crecer y reproducirse pero pueden mantenerse viables durante aos. Despus, cuando vuelven a disponer de agua, pueden recuperar su capacidad de crecimiento y divisin. Esta propiedad se utiliza en el laboratorio cuando se conservan los microorganismos mediante liofilizacin Las microondas no tienen mucho efecto directo sobre los microorganismos pero matan indirectamente calentando el medio, por ejemplo, alimentos.

7.6

Mtodos qumicos para el control de los microorganismos

Se utilizan los agentes qumicos para controlar los microorganismos en los tejidos vivos y objetos inanimados. Desafortunadamente son pocos los agentes qumicos que aseguran la esterilidad; la mayor parte de ellos simplemente reducen las poblaciones microbianas a niveles seguros o eliminan las formas vegetativas de patgenos. 7.6.1 a) Clases de desinfectantes Fenol y derivados fenlicos

El fenol no se utiliza ya como antisptico y rara vez como desinfectante porque irrita la piel y tiene un olor desagradable. Se emplea a veces en comprimidos para el dolor de garganta, por su efecto anestsico local, pero no tiene accin antimicrobiana a las bajas concentraciones utilizadas. En concentraciones superiores al 1 % el fenol es antibacteriano. Los derivados del fenol contiene una molcula de fenol que ha sido alterada qumicamente para reducir su capacidad irritante o aumentar su actividad antibacteriana en combinacin con un jabn o detergente. Los derivados fenlicos ejercen su actividad antimicrobiana lesionando las membranas citoplasmticas, inactivando enzimas y desnaturalizando protenas. Los derivados fenlicos se utilizan frecuentemente como desinfectantes porque mantienen su actividad en presencia de compuestos orgnicos, son estables y persisten durante largos perodos de tiempo tras su aplicacin

Uno de los grupos de derivados fenlicos ms frecuentemente empleados derivan del alquitrn y son los cresoles. Un cresol muy importante es el o-fenil-fenol, el ingrediente principal en la mayora de preparaciones de Lysol . Los cresoles son muy buenos desinfectantes ambientales. Otro derivado fenlico, mucho ms utilizado en el pasado, es el hexaclorofeno, formado por dos molculas de fenol unidas (un bis-fenol) Como agente bacteriosttico el hexaclorofeno es especialmente eficaz contra los estafilococos y estreptococos. Adems el hexaclorofeno persiste sobre la piel durante largos perodos de tiempo. b) Clorhexidina

La clorhexidina, que no es un fenol aunque su estructura y uso son parecidos a los del hexaclorofeno, se emplea frecuentemente para la desinfeccin de la piel y mucosas como alternativa al hexaclorofeno. Es tambin eficaz ante la mayora de las bacterias en su forma vegetativa pero no es esporicida. Slo algunos virus con envuelta lipdica se ven afectados por l. c) Halgenos

Los elementos halgenos, en particular el iodo y el cloro, son agentes antimicrobianos eficaces, tanto por s solos (como I2o Cl2 en solucin) como formando parte de compuestos orgnicos o inorgnicos. El iodo (I2) es uno de los antispticos ms antiguos y ms eficaces. El iodo es eficaz contra todo tipo de bacterias, muchas endosporas, diversos hongos y algunos virus. Un mecanismo de actuacin propuesto para el iodo es su combinacin con el aminocido tirosina, un componente comn de muchas enzimas y otras protenas celulares. Como resultado la funcin de las protenas microbianas resulta inhibida. El iodo reacciona tambin con otros aminocidos y aparentemente con cidos grasos de la membrana citoplasmtica. El iodo se utiliza en forma de tintura, esto es, en solucin hidroalcohlica y como iodforo. Un iodfo-ro es una combinacin de iodo y una molcula orgnica, normalmente un detergente, que libera iodo lentamente El cloro, en forma de gas o en combinacin con otras sustancias qumicas, es tambin un desinfectante muy utilizado. Su accin germicida se debe al cido hipocloroso que se forma al aadir cloro al agua:

No se conoce exactamente cmo desarrolla el cido hipocloroso su poder antimicrobiano. Es un fuerte agente oxidante que impide el funcionamiento de muchos sistemas enzimticos celulares. El cido hipocloroso es la forma ms activa del cloro por su carga elctrica neutra y porque difunde con tanta rapidez como el agua a travs de la pared celular. El ion hipoclorito (CIO ), a causa de su carga negativa, no puede entrar libremente en las clulas. El gas cloro licuado bajo presin es muy utilizado para desinfectar el agua de bebida, la de las piscinas y las aguas residuales. Varios compuestos de cloro son tambin desinfectantes eficaces. Por ejemplo, se utilizan soluciones de hipoclorito calcico [(ClO)2Ca] para desinfectar vaqueras, graneros, carniceras y utensilios de restaurantes. Otro compuesto clorado, el hipoclorito sdico (ClONa), se utiliza como desinfectante y blanqueador casero (cal), as como desinfectante en vaqueras, establecimientos de manufacturacin de alimentos y sistemas de hemodilisis. Dos de los alcoholes ms usadps son el etanol y el isopropanol. La concentracin ptima recomendada de etanol es la del 70%, pero las concentraciones entre el 60 y el 95 % parecen actuar igual de rpido (tabla 7-6). El alcohol puro es menos eficaz que las soluciones acuosas (alcohol mezclado con agua) porque la desnaturalizacin necesita agua. El isopropanol es ligeramente superior al etanol como antisptico y desinfectante. Adems es menos voltil, menos caro y ms fcil de obtener que el etanol. Otro grupo de compuestos clorados, las cloraminas, se componen de cloro y amonaco. Se utilizan como desinfectantes, antispticos o higienizantes. Las cloraminas son compuestos muy estables que liberan cloro durante largos perodos de tiempo. Son relativamente eficaces en presencia de materia orgnica pero tienen las desventajas de actuar ms lentamente y de ser menos eficaces en la depuracin que muchos otros compuestos clorados. Las cloraminas se utilizan para higienizar recipientes de vidrio y utensilios de comida, as como para tratar equipos de lecheras y de manufacturacin de alimentos. En los sistemas municipales de tratamiento de agua se suele mezclar amonaco con cloro para formar cloraminas. Esto evita problemas de olor y sabor causados por la reaccin del cloro con otros compuestos nitrogenados del agua. Como las cloraminas son menos eficaces como germicidas debe aadirse suficiente cloro para asegurar la presencia de cloro residual en forma de ClOH
-

d)

Alcoholes

Los alcoholes destruyen eficazmente bacterias y hongos pero no las endosporas y los virus desnudos. El mecanismo de accin del alcohol suele ser la desnaturalizacin de protenas, pero tambin puede alterar membranas y disolver muchos lpidos, Porcentaje de etanol 100 95 90 80 70 Varios metales pesados, como plata, 10 + Segundos 20 + 30 + 40 + 50 + -

incluyendo la parte lipdica de los virus envueltos. Los alcoholes tienen la ventaja de actuar y evaporarse con rapidez y de no dejar ningn residuo. e) Metales pesados y sus

compuestos

mercurio y cobre, pueden ser germicidas o antispticos. La capacidad de los metales pesados, especialmente plata y cobre, de mostrar actividad antimicrobiana en

cantidades muy pequeas se conoce como accin oligodinmica. TABLA 7-6. Actividad germicida de distintas concentraciones de etano! frente a Streptococcus pyogenes*.

La plata se utiliza como antisptico en una solucin al 1% de nitrato de plata. La solucin es bactericida para la mayor parte de los microorganismos. Los compuestos inorgnicos de mercurio, como el cloruro mercrico, son 40 + + + + + 60 50 + + -

* + = crece; microorganismos vivos; - = no crece Fuente: H. E. Morton, Relationchip of concentration and germicidal efficiency of ethyl alcohol, Annals of the New York Academy of Sciencs, 53: 191-196 (1950).

probablemente los desinfectantes de uso ms antiguo. muy Tienen amplio; un su espectro efecto de es

actividad

principalmente bacteriosttico. Sin embargo, su uso est actualmente limitado por su

toxicidad, corrosividad y falta de eficacia en presencia de materia orgnica. El cobre, en la forma de sulfato cprico, se utiliza principalmente para destruir las algas verdes que crecen en depsitos, piscinas y peceras (es alguicida). f) Agentes tensioactivos

Los agentes tensioactivos disminuyen la tensin superficial entre las molculas de un lquido. Entre estos agentes se incluyen los jabones y los detergentes. El jabn tiene un escaso valor como antisptico. Sin embargo, los jabones realizan una importante funcin en la eliminacin mecnica de los microorganismos mediante frotamiento. Los higienizantes tensoactivos cidos-amnicos son muy importantes en la limpieza de utensilios y equipo de las industrias lcteas. Su capacidad limpiadora se debe a la parte cargada negativamente (anin) de la molcula. Estos higienizantes actan sobre un amplio espectro de microorganismos, incluyendo las problemticas bacterias termfilas. Son atxicos, no corrosivos y de accin rpida. g) Compuestos de amonio cuaternario

Los agentes tensoactivos ms utilizados son los detergentes catinicos, especialmente los compuestos de amonio cuaternario. Su capacidad limpiadora se debe a la parte de la molcula cargada positivamente, el catin. Su nombre proviene del hecho de que son derivados del ion amonio tetravalente, NH4 . Los compuestos de amonio cuaternario son fuertemente bactericidas frente a los microorganismos gram-positivos, y algo menos eficaces contra las bacterias gramnegativas. Son tambin fungicidas, amebicidas y viricidas contra virus envueltos.
+

Dos compuestos de amonio cuaternario muy utilizados son el cloruro de benzalconio y el cloruro de cetilpiridinio. Presentan una fuerte accin antimicrobiana, son incoloros, inodoros, inspidos, estables, fcilmente solubles y atxicos, salvo a altas concentraciones. h) cidos orgnicos y sus derivados

Varios cidos orgnicos se utilizan como conservantes para controlar el crecimiento de hongos. El cido sr-bico (a menudo en forma de sal, srbalo potsico) se utiliza para inhibir el crecimiento de hongos en alimentos cidos, como el queso. El cido benzoico (o su sal, el benzoato sdico) es un antifngico eficaz a pH bajo y de amplio uso en bebidas refrescantes y otros alimentos cidos. El propionato clcico evita el crecimiento de hongos en el pan. i) Aldehidos

Los aldehidos se encuentran entre los antimicrobianos ms eficaces. Dos ejemplos son el formaldehdo y glutaraldehdo. Inactivan las protenas formando enlaces covalentes entre varios de sus grupos funcionales (NH2, OH, COOH y SH). El formaldehdo gaseoso es un excelente desinfectante. Sin embargo, se utiliza ms frecuentemente comoformol, una solucin acuosa de formaldehdo al 37% El glutaraldehdo es una sustancia qumica relacionada con el formaldehdo, que resulta menos irritante y ms agradable de manejar. El glutaraldehdo se utiliza para esterilizar instrumentos clnicos, como equipos de respiracin g) Esterilizantes qumicos gaseosos

Los esterilizantes qumicos gaseosos son sustancias qumicas que se utilizan en una cmara hermtica (similar a un autoclave). Un gas adecuado para esta tcnica es el xido de etileno. Su actividad depende de la desnaturalizacin de protenas: los hidrgenos lbiles de las protenas, como SH, COOH o OH, son reemplazados por grupos alquilo (alquilacin), como CH2CH2OH. El xido de etileno mata a todos los microorganismos y sus endosporas. Es txico y explosivo cuando est puro, por lo que normalmente se mezcla con un gas inerte como o dixido de carbono o el nitrgeno. Una de sus ventajas principales es que es altamente penetrante. k) Agentes oxidantes

Los agentes oxidantes ejercen su actividad antimicrobiana al oxidar componentes celulares de los microorganismos. Dos ejemplos de agentes oxidantes son el ozono y el perxido de hidrgeno. El ozono (O3) es una forma de oxgeno altamente reactiva, que se genera por descargas elctricas

de alto voltaje. Es el responsable del olor fresco que sigue a una ligera tormenta, en la vecindad de los relmpagos o cerca de una luz ultravioleta. Hay un inters considerable en utilizar el ozono para reemplazar el cloro en la desinfeccin del agua. Aunque el ozono es un agente antimicrobiano ms eficaz, su actividad residual es difcil de mantener en el agua y es ms caro que el cloro. El perxido de hidrgeno es un antisptico que se encuentra en la mayora de los botiquines caseros y en los hospitales. No es un buen antisptico para las heridas abiertas porque se descompone rpidamente dando agua y oxgeno gaseoso por accin de la enzima catalasa, presente en las clulas humanas. Aunque su utilidad como antisptico es limitada el perxido de hidrgeno es eficaz si se utiliza para desinfectar objetos inanimados, en cuyo caso hasta es esporicida.