Urocultivo

Qu es el Urocultivo?
El examen de Urocultivo es el cultivo de la orina que permite investigar la presencia de bacterias en la orina, su cantidad, especie, y sensibilidad a los antibiticos. La sospecha de una infeccin urinaria se da por los siguientes sntomas: dolor al orinar, micciones frecuentes, dolor suprapbico (por encima de la zona plvica), sensacin febril, y orina turbia y de mal olor. Quienes ms se realizan este examen son las mujeres adultas (principalmente embarazadas), nios menores de dos aos y adultos mayores. De haber infeccin, se debe recuperar el agente infeccioso y hacer un recuento de ste. Los principales agentes son bacterias propias del tubo digestivo, tales como Escherichia coli, Klebesiella pneumoniae, Proteus mirabilis y Enterococcus spp.

Forma en que debo prepararme

Se recomienda no ingerir lquidos en exceso las 5 6 horas previas a la obtencin de la muestra. Realizar higiene de la zona genital con agua y jabn. El paciente debe estar sin tratamiento antibitico al menos 48 horas antes.

Obtencin de muestras Orina obtenida por Chorro medio

A. MATERIAL NECESARIO. - Gasas estriles. - Jabn neutro. - Recipiente de boca ancha con tapa de rosca hermtico y estril. B. OBTENCIN DEL PRODUCTO. La muestra idnea es la primera miccin de la maana, ya que permite la multiplicacin de bacterias durante la noche. TCNICA PARA MUJERES. - Lavarse las manos cuidadosamente con agua y jabn, enjuagar con agua y secar con una toalla limpia. - Se separarn los labios mayores y menores, y los mantendr separados en todo momento hasta que se haya recogido la orina. - Con una gasa enjabonada se lava bien la vulva pasndola de delante hacia atrs, se repetir el proceso un total de 4 veces. - Enjuagar cuidadosamente con agua jabn. para eliminar los restos de

- Se indicar a la paciente que orine desechando el primer chorro (2025 primeros mililitros) tras lo cual y sin interrumpir la miccin, se recoger el resto de la orina en el recipiente, el cual se cerrar inmediatamente. - El frasco debe sujetarse para que no tome contacto con pierna, vulva o ropa del paciente. Los dedos no deben tocar el borde del frasco o su superficie interior.

TCNICA PARA HOMBRES.

- Lavado de las manos con agua y jabn. - Retraer completamente el prepucio, que se mantendr as en todo momento, hasta que se haya recogido la orina. - Limpiar el glande con jabn neutro. - Eliminar los restos de jabn enjuagndolo con agua. - Se pedir al paciente que orine desechando el primer chorro, los primeros 20-25 mililitros y sin interrumpir la miccin, recoger el resto de la orina en el recipiente estril.

OBTENCIN DE ORINA PARA UROCULTIVO EN EL PACIENTE CON SONDA VESICAL

A. MATERIAL NECESARIO. - Gasas. - Alcohol 70 o Yodo povidona 10%. - Jeringa o aguja estril. - Recipiente estril. B. OBTENCIN DE LA ORINA. 1. Si es posible realizar la toma inmediatamente luego del recambio de la sonda. 2. Pinzar la sonda a 10 cm del meato durante 1 a 2 dos horas como mximo. 3. Sin despinzar, desinfectar la sonda con Yodo povidona al 10 %, a 3-4 cm por encima de la pinza. 4. Extraer orina puncionando la sonda con jeringa y aguja. 5. Colocar la orina en frasco estril.

C. VOLUMEN MNIMO DE LA MUESTRA. Es suficiente un volumen de orina de 5-10 ml. D. TRANSPORTE. La orina debe llegar al laboratorio en el plazo de una hora. Cuando esto no sea posible debe refrigerarse a 4C durante un tiempo mximo de 12 horas. E. OBSERVACIONES. Para la bsqueda de micobacterias, la orina se recoge por tcnica de chorro medio, durante 5 das consecutivos. En este caso el volumen de orina no debe ser inferior a 300 ml por muestra. Se elegir preferentemente la primera miccin de la maana.

PUNCIN SUPRAPBICA
Es un procedimiento mdico. Indicaciones. Evidencia clnica de infeccin urinaria con recuentos bajos o nulos, neonatos, lactantes y urocultivos repetidos con dos o ms bacterias. La puncin supra pbica requiere un buen conocimiento de la tcnica y de las precauciones que hay que adoptar, con rigurosa asepsia, descartando problemas de hemostasia y con la vejiga palpable y previa desinfeccin y anestesia local; se punciona sta a 1,5 cm de la snfisis pubiana, en la lnea media, estando el paciente en decbito supino, con una jeringa de 10 ml y con aguja larga (calibre 19) se aspira el contenido vesical. En caso de orina obtenida por puncin suprapbica se enviar al laboratorio lo antes posible. Colocar la muestra en frasco estril. Se debe indicar en la hoja de pedido la tcnica empleada para su extraccin (dato importante a la hora de valorar el recuento de colonias).

RECEPCIN DE LA MUESTRA
Las muestras deben venir acompaadas de su respectiva hoja de pedido donde deben llenarse todos los datos solicitados por el laboratorio. Los datos a preguntar son los siguientes: - Nombre y apellido completo. - N de historial clnico. - Edad. - Sexo. - Servicio de procedencia y cama. - Tipo de muestra, catter, supra pbica, etc. - Recibi antibiticos en los ltimos 7 das, si es as anotar el nombre del antibitico y dosis. - Control o sospecha de algn germen anterior

RECHAZO DE LA MUESTRA
Si las solicitudes y/o las muestras no cumplen los requisitos mnimos e indispensables para su correcto procesamiento, el laboratorio deber rechazarlas. Algunos criterios a tomar en cuenta son: - Muestras que no evidencian se refrigeradas ms de 2 horas de coleccin. - Rechazar las orinas de ms de 24 horas colectadas. - Rechazar muestras de sonda de Foley. - Rechazar la orina de la bolsa de un paciente con catter. - Si ha sido inadecuadamente colectada, transportada y manipulada la muestra no ser recepcionada.

MTODOS
Mtodo de conteo en placa o recuento de colonias (mtodo de Kass), el cual consta del siguiente procedimiento: - Se homogeniza la muestra mediante agitacin. - Se diluye la muestra al 1:100, colocando 0.1ml de orina en 9.9ml de caldo tripticasa o de suero fisiolgico estril. - Se preparan diluciones de 1:1000 y 1:10000 a partir de la dilucin 1:100. - Se deposita 1ml de cada dilucin en placas Petri estriles que contienen agar tripticasa o medio CLED, mediante rotacin suave favoreciendo a la distribucin homognea de la siembra. - Se incuban todas las muestras a 37C de 24 a 48 horas. - Para calcular el nmero de colonias se eligen las placas que contengan de30 a 300 colonias. Contadas estas basta multiplicar su nmero por la dilucin respectiva para obtener la cuenta total.

Mtodo de asa calibrada

Esta estimacin cuantitativa consiste en sembrar una placa con medio de Agar Sangre o medio CLED en una muestra de orina, sin centrifugar, empleando una asa de platino calibrada (4mm de dimetro). Despus de incubar las muestras a 37C durante 24 a 48 horas se cuenta el nmero de colonias desarrolladas y el resultado se multiplica por 100, ya que el asa de platino contiene 0.01ml de orina.

LECTURA
Los resultados del estudio cuantitativo se reportan de la siguiente manera: No hubo desarrollo bacteriano. Menos de 10000 colonias por ml. Menos de 10000 y 100000 colonias por ml. Ms de 100000 colonias por ml/E.

Cuando se obtienen 2 recuentos sucesivos con ms de 100000 colonias por ml, la probabilidad de infeccin es del 80%, cifra que se eleva a un 95% si el mismo resultado se obtiene en 3 recuentos sucesivos. Por lo general las muestras contaminadas tienden a mostrar cuentas inferiores a 10000 colonias por ml, cuando el resultado revela valores intermedios, entre 10000 y 100000 colonias por ml, el examen debe repetirse.

PRACTICA DE UROCULTIVO
COMPETENCIA: Identifica la diferente flora patgena que puede desarrollarse en el tracto urinario. MATERIAL: *Asa bacteriolgica. *Porta objetos. *Cubre objetos. *Centrifuga. *Microscopio. * Incubadora. *Mechero de Fisher. * Cajas de Petri estriles. * Pipetas de 1ml estriles. * Tubos de ensayo conteniendo 9ml de agua peptonada, estriles. Sustancias: Muestra de orina tomada en frasco estril. Agar nutritivo. Agar sal y manitol. Agar sangre. Agar Mc Conkey. Agar EMB.

INTRODUCCIN Las infecciones urinarias pertenecen al grupo de los procesos infecciosos ms frecuentes de la patologa mdica. Su importancia radica en el dao que pueden ocasionar sobre la funcin renal. Las vas urinarias normalmente son estriles por encima del nivel de la uretra distal. Los microorganismos que infectan las vas urinarias altas son comensales localizados en reas vecinas. En esta colonizacin intervienen varios factores predisponentes que pueden ser de origen local o general. Los primeros incluyen la contaminacin fecal del meato urinario, el cateterismo, la patologa urinaria congnita o adquirida y el reflujo vesical. Entre los factores generales estn la diabetes mellitus, el embarazo y la terapia con frmacos de amplio espectro. Las bacterias que con mayor frecuencia se aslan de la orina de pacientes ambulatorios con infeccin urinaria son: Escherichia coli, Staphylococcus saprophyticcus, Proteus sp, Klebsiella sp, Enterococcus faecalis etc. Para lograr que el cultivo de orina realmente sea veraz, requiere que las muestras sean obtenidas en condiciones ptimas.

PROCEDIMIENTO El Urocultivo incluye: 1) Aislamiento e identificacin de microorganismos. 2) Cuenta viable. 3) Antibiograma para los grmenes patgenos aislados e identificados.

1) Aislamiento e identificacin de los microorganismos a) Mezclar perfectamente el frasco con la muestra de orina y depositar aproximadamente entre 5 y 10 ml de orina en un tubo. b) Centrifugarla durante 5 minutos a 3500 r.p.m. c) Se desecha el sobrenadante dejando solo unas gotas de orina residual para emulsionar el sedimento. d) Con la suspensin del sedimento se lleva a cabo el estudio microscpico directo, tomando una gota del sedimento que se deposita en un portaobjetos, colocndole un cubreobjetos. e) Observarlo al microscopio con el objetivo seco fuerte, e identificar lo observado. f) Mediante un asa de platino se hacen siembras por aislamiento en estras del sedimento, obtenido al centrifugar una muestra de la orina colocada en tubo estril y centrifugada. La siembra se realiza en los siguientes medios de cultivo. AS, Mc Conkey, ASM y EMB g) Los medios inoculados se incuban a 37C entre 24 y 48 horas. h) Observar las caractersticas de cultivo de las colonias desarrolladas en los diversos medios. Si es necesario, realizar pruebas bioqumicas para confirmacin de la especie bacteriana.

i) Preparar frotis para realizar una tincin de Gram para el estudio de morfologa microscpica. 2) Cuenta viable a) Realizar diluciones de la orina de la siguiente manera: riles conteniendo 9 ml. de agua peptonada. La cantidad de tubos utilizada depender de la carga bacteriana observada en el examen microscpico del sedimento urinario

y agregarlo al tubo No.1. (dil. 1:10), agitar el tubo y tomar de este 1ml. para pasarlo al tubo No.2, (dil 1:100) realizar el mismo paso las veces que sea necesario rotulando el tubo con la dilucin correspondiente. Recuerda que el nmero de diluciones depender de la carga bacteriana. b) Colocar 1ml de cada dilucin en diferentes cajas de Petri estriles y rotularlas con la correspondiente dilucin. c) Vaciar en estas cajas de 15 a 20 ml de Agar nutritivo fundido a Bao Mara previamente enfriado hasta que alcance una temperatura que soporte la piel de tu mano (debes evitar que solidifique). d) Mezclar perfectamente por rotacin suave este agar con la dilucin y dejar que solidifique. Incubar las cajas a 37C durante 24 a 48 horas e) Contar el nmero de colonias desarrolladas, para esto seleccionar para su lectura, la placa que muestre entre 30 a 300 colonias.45 f) Reportar la cuenta bacteriana de la siguiente manera: Nmero de colonias contadas X el factor de dilucin de la caja en la que se observa y cuentan las colonias bacterianas = Unidades Formadoras de Colonias por ml. (UFC/ml).

Coprocultivo
Qu es coprocultivo? Es un examen de laboratorio para encontrar organismos en las heces (materia fecal) que puedan causar enfermedad y sntomas gastrointestinales.

Razones por las que se realiza el examen Este examen se realiza cuando usted tiene malestar gastrointestinal y el mdico sospecha que la causa es una infeccin. Asimismo, se puede llevar a cabo si usted presenta diarrea severa, persistente (que no desaparece) o recurrente (que sigue reapareciendo) sin una causa conocida. Tambin se puede realizar si usted tiene diarrea y recientemente ha estado tomando antibiticos, para observar si bacterias como la C. difficile (que puede ocasionar diarrea despus de que las personas toman antibiticos) estn ahora presentes en el intestino. La indicacin de un examen coproparasitario, debe tener en cuenta las caractersticas del cuadro clnico que presenta el paciente, y debe atender al parsito que se sospecha, teniendo como premisa que esta metodologa es til para protozoarios y helmintos, cuyas formas evolutivas (trofozotos, quistes, ooquistes, huevos, larvas, adultos) se emiten con las materias fecales.

REQUISITOS PARA OBTENER UN RESULTADO SATISFACTORIO

1) Solicitud de Examen coproparasitario. 2) Preparacin del paciente. 3) Muestra correctamente obtenida. 4) Muestra seriada (3 muestras mnimas de materia fecal).

1) En la solicitud del examen, siempre debe constar adems de los datos filiatorios del paciente, los datos clnicos (sintomatologa, signologa clnica relevante, diagnstico clnico presuntivo), antecedentes personales, familiares y ambientales a destacar. Antecedentes personales de inmunodepresin, de viaje al extranjero (zonas endmicas de parasitosis exticas o de baja prevalencia para nuestro medio); antecedentes ambientales como vivienda sin agua potable, saneamiento, etc.; antecedentes familiares de parasitosis (parasitosis de grupo o parasitosis con una fuente de infeccin comn para todos los integrantes), no deben obviarse en la solicitud, ya que tienen implicancias en el procesamiento de la muestra. Es importante saber si el paciente ha recibido antidiarreicos, antiparasitarios y/o antibiticos y en tal caso cuales; se indicar el examen coproparasitario antes de iniciar tratamiento con cualquiera de los frmacos mencionados, si es posible. Todos estos datos pueden adaptar o orientar la secuencia de tcnicas diagnsticas que ejecutar el especialista en el laboratorio y son condicin imprescindible para obtener resultados fidedignos. 2) Debe indicrsele al paciente la realizacin de un rgimen alimentario 48-72 hs. antes de realizarse el estudio, libre de frutas,

verduras y grasas, dado que preparaciones con abundantes residuos o grasas, obstaculizan la visualizacin microscpica, pudiendo ser causa de falsos negativos. 3) Una muestra correcta de materia fecal para realizar un examen coproparasitario debe ser suficiente (mayor de 50 grs.), debe ser emitida recientemente pudindose conservar en heladera hasta unas 8-12 horas, debe ser enviada al laboratorio correctamente rotulada con nombre completo del paciente y fecha de emisin, en frasco de vidrio o plstico transparente, limpio, seco y de boca ancha , con tapa de rosca. La muestra debe recolectarse sin mezcla de orina, para evitar el deterioro de parsitos. 4) La muestra debe ser seriada, considerndose que muestras nicas solo permiten diagnsticos positivos en 60% de las materias fecales con parsitos; que tanto protozoarios como helmintos tienen ciclos de eliminacin de quistes y huevos, con perodos negativos. Existen diferentes esquemas sobre la secuencia de recoleccin de materias fecales para realizar un examen coproparasitario; algunos de los ms usados indican: 3 muestras en das alternos o 3 muestras separadas 1 semana entre s, teniendo siempre presentes las premisas antes mencionadas para la colecta de la muestra.

Procesamiento de la muestra una vez llega al laboratorio.

-Evitar contaminacin por material no estril. - Uso de contenedores y medios de transporte apropiados. - Etiquetar muestra adecuadamente. - Temperatura de conservacin: 4C para evitar la proliferacin bacteriana.

Examen morfolgico del crecimiento de las colonias cultivadas macroscpicamente y al microscopio.

Se comprueba su olor, consistencia, presencia de mucus, sangre, restos de alimentos sin digerir. Las caractersticas fsicas de las colonias son de gran ayuda en la identificacin. Cada microorganismo crece de manera diferente formando colonias de distinto color, forma, tamao, textura, olor, brillo, etc. Existen colonias ms o menos elevadas, con bordes enteros, estrellados, deflecados, y un largo etc. El tiempo de incubacin necesario para que aparezcan las colonias tambin puede tener valor en la identificacin. Las caractersticas de las colonias tampoco ofrecen un diagnstico por si solas, pero dirigen los esfuerzos hacia un grupo ms o menos amplio de microorganismos. Hay colonias muy caractersticas, casi exclusivas de determinadas bacterias. Es el caso de las especies de Proteus, que se extiende ampliamente por la placa formando un velo muy caracterstico.

Examen microscpico
Una vez transcurrido el tiempo necesario se procede a sacar el medio de cultivo, la placa de Petri y se obtiene una pequea muestra con la ayuda del asa de siembra y se coloca en un porta previamente humedecido con una gota de agua destilada. Para poder fijar la muestra lo podremos realizar con calor, por lo que se pasa a realizarlo con el mechero y cuidando de no quemarnos lo haremos con la ayuda de una pinza de madera. A continuacin se procede a teir la muestra. Tincin azul de metileno: El procedimiento es bastante sencillo. Primero se ha de fijar la muestra pasando el porta por el mechero varias veces. Luego se tie con el azul de metileno cubrindola entera. Pasado 5 min. Se lava con agua destilada se deja secar y se proceder a observar en el microscopio con aceite de inmersin y en el objetivo de 100x. Esto nos permite comprobar la presencia o ausencia de leucocitos. As: Presencia de leucocitos: La infeccin ha cursado con inflamacin intestinal. Se trata por tanto de microorganismos invasivos como Salmonella, Shigella. Ausencia de leucocitos: Significa que no ha habido inflamacin por lo que la infeccin puede ser debida a virus (Rotavirus) o a bacterias productoras de toxinas (Vibrio cholerae). Para realizar la tincin de Gram: Primero se realiza un frotis con la muestra en un portaobjetos.( Realizamos 3 frotis con tres colonias aisladas). Se fija la muestra en el mechero y se coloca despus en la cubeta para proceder a teirla. Se cubre la muestra con 1 minuto de cristal violeta, 1 min de lugol, 30seg y 1 min de fucsina bsica, y se lava con agua destilada entre colorante y colorante adems del alcohol y se deja secar. Esta tincin nos sirve para distinguir entre las bacterias Gram + y Gram

segn sea la composicin de su pared y apreciar visualmente su forma y organizacin.

EXAMEN MORFOLGICO DEL CRECIMIENTO DE LAS COLONIAS CULTIVADAS MACROSCPICAMENTE Y AL MICROSCOPIO

1. Agar sangre: Colonias redondas, borde entero, circular, color blanquecino. 2. Christensen: Colonias redondas, circular, convexa. 3. Kia: Se observa produccin de cido en todo el tubo, burbujas, agrietamiento e incluso desplazamiento del medio. 4. McConkey: Colonias rosas a rojas si el aislado es capaz de fermentar la Lactosa y en caso de que fueran colonias sin color sera el caso contario. 5. Hecktoen: No creci nada en este medio en 24 horas puede ser debido a un periodo de incubacin insuficiente o a la siembra con inoculo muy diluido.

TINCIONES -Con la tincin de Gram detectamos el tipo de bacteria que es, gracias a la diferenciacin de su morfologa. AGAR SANGRE - Se observan diferentes agrupaciones de cocos: cocos, diplococos, ttrada, estreptococos, estafilococos. McCONKEY - Se observa agrupaciones de bacilos teidos de azul por el azul de metileno. CHRISTENSEIN - Se observan agrupaciones de cocobacilos teidos de azul por el azul de metileno.
TINCION DE GRAM

CHRISTENSEIN - Se observan agrupaciones de cocobacilos Gram +.

McCONKEY - Se observan agrupaciones de bacilos Gram , algunos presentan puntos de color azul en la zona terminal del bacilo. Esto puede ser debido a que se estuvieran dividiendo por lo que al romperse la capa externa de peptidoglicano se pudo teir con el colorante de violeta de genciana. Tambin pueden ser restos de este mismo colorante al realizar la tincin. AGAR SANGRE - Se observan cocos gram negativos ( rosados) en su mayora, pero tambin se pueden observan algunos color azul del colorante violeta de genciana.

PRACTICA DE COPROCULTIVO
COMPETENCIA: Identifica Enterobacterias por medio del coprocultivo. MATERIAL: Asa bacteriolgica Mechero Fisher Estufa de incubacin a 37C Agares estriles de SS, EMB, Mc Conkey, Caldo tetrationato, agar sulfito bismuto Agar verde brillante. Una muestra de heces recolectada en frasco estril Hisopos estriles INTRODUCCIN Las Enterobacterias representan la mayor parte de la flora microbiana del tracto intestinal del hombre. En ella se incluyen grmenes comensales (Proteus y bacilos coliformes), as como patgenos del gnero Salmonella y Shigella. El vibrin colrico puede ser aislado de casos de clera. Durante las infecciones entricas, cuando se presentan patgenos tales como Salmonella y Shigella, el bacterilogo debe distinguir entre los habitantes normales del intestino y los agentes etiolgicos de enfermedad. Es importante destacar que las bacterias intestinales toman parte en los procesos digestivos tanto del hombre como de los animales. Ellos ayudan a la sntesis de vitaminas del complejo B y de la vitamina K. La materia fecal evacuada debe ser reciente y deben cultivarse lo ms pronto posible despus de haber sido recolectada. Las muestras

debern obtenerse al inicio del cuadro clnico, antes de iniciar el tratamiento antimicrobiano. Las muestras de heces se pueden tomar directamente en un frasco limpio de boca ancha y con tapa hermtica, de preferencia estril. Si la muestra se toma en el mismo laboratorio donde se va a realizar el aislamiento, no es necesario usar medio de transporte y hay que sembrar de inmediato. En estudios de campo o cuando el laboratorio no est cercano, la muestra se toma con un hisopo, el cual debe quedar bien impregnado de materia fecal. El hisopo se coloca en un medio de transporte como el Cary-blair. PROCEDIMIENTO 1. Introducir un hisopo estril en varios puntos de la muestra. 2. Descargar la muestra en un rea pequea de los medios de cultivo: SS, Mc Conkey y EMB y realizar el estriado. 3. Incubar las cajas a 37C durante 24 o 48 horas 4. Observar las caractersticas morfolgicas de las colonias desarrolladas indicando si existen cambios en el medio, pigmentos en la colonia etc.37 5. Tratar de identificar si existe crecimiento de Salmonella o Shigella que se manifiestan como colonias de color blanco en Mc Conkey e incoloras en EMB. 6. Al mismo tiempo que las placas, con la muestra fecal se inocula un medio de enriquecimiento como el caldo tetrationato, colocando el hisopo impregnado con la muestra en el caldo al cual se le agreg previamente 0.2 ml de yodo por gramo de materia fecal. 7. Incubar este medio de enriquecimiento por 12 o 18 horas a 37C

8. A partir del caldo tetrationato se siembran placas con medios inhibitorios como el agar verde brillante y el agar sulfito de bismuto, este ltimo si se est buscando S. typhi. Despus de incubar a 37C durante 24 horas la placa de verde brillante y 48 horas la de sulfito bismuto, se revisan cuidadosamente en busca de colonias sospechosas. En el verde brillante Salmonella crece como colonias rojas y en sulfito de bismuto como colonias negras. 9. Para mayor seguridad en la identificacin de Enterobacterias es necesario realizar pruebas bioqumicas a las cepas aisladas en los medios de cultivo.Las ms comunes son IMVIC.