Control de la reaccin Antgeno-Anticuerpo en procesos de hipersensibilidad

Jess Gonzlez Villagmez

villagomez@us.es Control de Sistemas Biomdicos. Mster de Automtica, Robtica y Telemtica Septiembre 2012

Resumen
The human body is exposed continuously to a wide range of harmful elements, e.g. antigens, causing in specic conditions a non-controlled response which can lead to non-reversible body states, including death. The aim of the present work is to propose a dierent approach for controlling these kind of situations by analyzing the mechanisms of allergy from the point of view of classic control systems. Palabras clave : Estado de hipersensibilidad, alergia, Escherichia coli.

casos, se utilizan vacunas, como inhibidores que actan al azar, ya que se ha demostrado que no son ecaces de forma generalizada. Por qu aparece la alergia? Es difcil determinar por qu motivo el organismo humano se sensibiliza frente a unos determinados agentes qumicos. Posiblemente se deba ese proceso a una especial sensibilidad del organismo (umbral de sensibilizacin bajo) o a un potencial alrgico importante de los agentes implicados (como sucede con los plenes) debido a sus propiedades qumicas o a su presencia abundante en el ambiente. Ahora bien, los mecanismos moleculares no estn del todo aclarados hablndose de reacciones cruzadas con otras molculas o modicaciones en dichas molculas provocadas por su unin a otras o por la accin de reacciones enzimticas en el propio organismo. Se aprecia con frecuencia un umbral de sensibilizacin bajo que incluso puede variar a lo largo de la vida, justicando el hecho de que personas que no han tenido problemas de alergia, de repente comienzan a presentar sntomas en relacin con este problema. Por otro lado, es normal que la cantidad de alrgenos presentes en el ambiente inuya de forma importante. En este sentido los cambios en las condiciones climticas as como la inuencia del hombre sobre el medio que le rodea facilita que el nivel de esas molculas pueda en ocasiones aumentar de forma tan importante que supere el umbral de sensibilizacin de una cantidad cada vez mayor de personas. Por esto mismo, se habla de la importancia del consumo de determinados combustibles o la inuencia de la contaminacin ambiental fsica y qumica. Respecto a la existencia de antecedentes familiares, ste favorece la aparicin de un problema alrgico. Es una cierta predisposicin al desarrollo de los procesos alrgicos, conocida como atopia y puede tener muchas manifestaciones clnicas. Con este trabajo se propone una forma diferente de afrontar esta patologa, mediante el uso de bacterias fbrica de las sustancias o elementos que

1.

Introduccin

La alergia es un mal bastante comn, cada vez ms frecuente, sobre todo en los individuos que habitan o frecuentan ciudades. La razn? Desconocida, pero no por ello, ni porque en la mayora de los casos no ponga en peligro la integridad del individuo que la padezca, hay que menospreciar que se est convirtiendo en una patologa limitante, e incluso peligrosa para los individuos que la sufren. Los sntomas son variados y amplios: tos, rinitis aguda, asma, asxia, conjuntivitis ocular, afecciones drmicas ms o menos graves, y un sin fn de sntomas que varan en funcion del individuo y de la exposicin a determinados agentes alergnicos. Hasta ahora, el diagnostico de las alergias pasa por una exposicin en mnimas cantidades a los alergnicos ms conocidos, midiendo la respuesta en la aplicacin atpica de los mismos en funcion del dimetro que provoca en la zona de la piel donde se aplica mediante una inltracin subcutnea. Se puede considerar este proceso como una especie de pequea calibracin interna, dado que queda ligado de cierta manera exposicin al elemento nocivo con la respuesta del sistema. Una vez efectuado el diagnstico, el tratamiento es siempre el mismo: evitar, siempre que sea posible, el contacto con el alergnico reactivo, y la terapia farmacolgica con antihistamnicos durante los periodos que se consideran como de riesgo, para evitar as la sintomatologa descrita. En otros

actan como los antihistamnicos utilizados por va oral, pero que en este caso son vertidos, de manera controlada, al torrente sanguneo mediante un sistema monitorizado, evitando as la sintomatologa limitante, y los cuadros clnicos consecuentes. La informacin sobre el momento adecuado de evacuar las sustancias, la facilita el propio organismo, mediante el control de diferentes parmetros y la determinacin del umbral lmite de actuacin. As, lo que se propone es modicar ciertos aspectos que convergen en la evolucin de la respuesta inamatoria del sistema, de manera que se engae al organismo, evitando en cierta manera la propensin de la sintomatologa relacionada. En la seccin 2 se introducen los mecanismos relacionados con la alergia; posteriormente, el cuerpo de la propuesta es presentada en la seccin 3 para concluir con algunas lneas abiertas de investigacin en la seccin 4.

puede ser una protena o simplemente una partcula o caro de polvo (gura 1), por ejemplo. Los alrgenos alcanzan el interior del organismo por va respiratoria, que es de la que se va a tratar en el presente trabajo. Sin embago, la ms frecuente es por va digestiva, por contacto directo a travs de la piel o mucosas y por inyeccin mecnica (ingerido o inyectado).

2.

Trastornos alrgicos
Figura 1: Micrografa de un caro del polvo, alrgeno muy comn. Una persona alrgica es frecuentemente sensible a varios alrgenos diferentes al mismo tiempo. Aunque depende de mltiples factores (disposicin geogrca, condiciones de vida, etc.) se estima que al menos el 20 % (en algunos estudios arrojan cifras que llegan a la mitad de la poblacin) de los individuos desarrollan trastornos alrgicos bajo condiciones de vida naturales (que padecen alguna reaccin alrgica a lo largo de su vida). 2.2. Mecanismos y sus problemas

En esta seccin se propone una descripcin somera de los principales aspectos de la alergia: el mecanismo que se lleva a cabo en un indivivuo cuando se expone al primer contacto y sus consecuencias. 2.1. Introduccin

Algunas personas presentan algunas manifestaciones atpicas y exacerbadas al contacto con ciertas sustancias, que, normalmente, pero no necesariamente, son protenas1 , y que no afectan al estado general de otras personas. Por otra parte, la inmunidad es un estado, por el que gracias a un primer contacto, una persona adquiere proteccin contra un agente que en otras circunstancias le sera nocivo. La reaccin es especca para cada agente en concreto, y el benecio se deriva de la creacin de inmunidad frente a l. La alergia, o hipersensibilidad 2 es un estado de reactividad alterada del sistema inmune, en muchos casos, mal controlada. El estudio de los efectos tisulares3 de la reaccin alrgica se denomina inmunopatologa. La sustancia antignica capaz de desencadenar el estado alrgico, se denomina alrgeno. Un alrgeno
1 Las proteinas son molculas muy grandes constituidas por cadenas lineales de aminocidos, los cuales son molculas orgnicas con un grupo amino y un grupo carboxilo unidos a un carbono central. 2 Ambos trminos son normalmente utilizados queriendo signicar estados emocionales, reacciones no argicas a los alimentos, respuestas txicas a medicamentos y otros que no son inmunolgicos.Ya que se usa ms frecuentemente hipersensibilidad que alergia, algunos autores piensan que el segundo trmino tiene prioridad. El trmino alergia fue utilizado por primera vez por von Pirquet. 3 De los tejidos de los organismos o relativo a ellos.

Las reacciones alrgicas pueden dividirse en dos grandes grupos: aquellas que resultan de la presencia de algn anticuerpo humoral (esto es, reacciones de tipo inmediato) y aquellas en la que la respuesta intervienen clulas especialmente sensibilizadas. Una denicin bsica para anticuerpo humoral es una sustancia segregada por mediadores celulares como mecanismo de defensa ante la presencia de un antgeno. Sin embargo, aunque no desarrollados en este trabajo, existen otros mecanismos de defensa en la que no intervienen los anticuerpos, sino que son las clulas, especialmente diseadas, las que hacen frente al antgeno en cuestin (con lo que la respuesta es ms retardada). Se puede decir pues, sin prdida de generalidad, que los anticuerpos constituyen la primera y ms ecaz lnea de defensa natural del organismo frente a factores externos potencialmente peligrosos. A continuacin se expone un esquema general del mecanismo de

la alergia; sin embargo es necesario indicar que es bastante complejo y no est del todo determinado en la actualidad. Existe una secuencia de hechos en el desarrollo de la reaccin de hipersensibilidad inmediata, comenzando con la primera exposicin al alrgeno, que provoca la biosntesis de un anticuerpo humoral, la inmuglobulina E (IgE, gura 2). En este contexto, indicar que existen 5 grandes clases de anticuerpos, denominados por letras: IgG, IgM, IgA, IgD e IgE (Ig = Inmuno-globulina). La IgE es el anticuerpo producido en las reacciones alrgicas y en las reacciones de defensa contra infecciones parasitarias. Las personas alrgicas frecuentemente tienen niveles muchos ms altos de IgE en su sangre que los no alrgicos. Sin embargo, algunos alrgicos tienen valores normales de IgE en su sangre y puede tambin haber individuos con IgE elevada en su sangre sin ser alrgica. Como todas las inmuglobulinas, la IgE la sintetizan las clulas plasmticas (las presentes en el plasma sanguneo). Estas clulas se forman principalmente en los tejidos amigdalares, las placas de Peyer4 y en general, a lo largo de las mucosas del tracto respiratorio y digestivo.

clula que conforma tejidos) que se encuentra en mayor cantidad en los lugares de formacin de IgE, o sea, en los revestimentos del tracto respiratorio y gastroinestinal y en el tejido subcutneo. El mastocito es una clula del orden de micrometros que se reconoce por su aspecto peculiar (gura 3), y por disponer en su citoplasma (el espacio entre el ncleo y la membrana celular) de grnulos metacromticos de gran tamao y nmero, que contienen compuestos de gran poder farmacolgico, tales como la histamina (mediador qumico ms conocido de las reacciones alrgicas, causante de muchos de los sntomas de la alergia, gura 4), heparina (anticoagulante) y enzimas proteolticas (protenas degradadoras de protenas). La degranulacin de los mastocitos provoca la liberacin en los lquidos tisulares de los compuestos descritos, y puede ser desencadenada por agentes inmunes. El baslo que circula por el torrente sanguneo es parecido al mastocito, e imita sus respuestas en la alergia. Estas dos son las nicas clulas a las que se ja la IgE (el anticuerpo especco para un alrgeno concreto) y las nicas que contienen histamina.

Figura 2: Representacin esquemtica de la IgE. Hay amplias variaciones en cuanto a la formacin de este anticuerpo (es decir, que cada indivivuo las forma de cada manera), pero es altamente especco para el alrgeno que induce su formacin (para cada alrgeno hay un anticuerpo especco, es decir, la tpica estructura llave-cerradura). Tras el primer contacto, la IgE se ja a los receptores especcos de las clulas cebadas (o mastocito, clula que interviene en procesos alrgicos) y los baslos (similar a los mastocitos, con diferentes propiedades y similares funciones) sensibilizndolos. La clula cebada es una clula tisular (una
4 Las placas de Peyer son unos cmulos de tejido linftico (ndulo linftico) que recubren interiormente las mucosas como las del intestino y las vas respiratorias.

Figura 3: Micrografa de mastocito humano (baslo de sangre perifrica) al microscopio electrnico. Obsrvense las grandes masas granulares que contienen histamina y heparina. Efectuado este primer contacto, se dice que el organismo est sensibilizado. Para cuando sobreviene el segundo contacto con el mismo alrgeno, todo est dispuesto para la liberacin de estos compuestos (denidos en el prrafo anterior) con caractersticas qumicas capaces de producir las manifestaciones de la alergia de tipo inmediato. El alrgeno alcanza la clula sensibilizada (el mastocito) y se combina (gura 5) con la IgE, el anticuerpo especco, quedando bloqueado en el lugar del receptor. Dicha combinacin, producida en la supercie de la clula sensibilizada, pone en marcha un proceso a lo largo de la membrana plasmtica (se rompe la membrana) que avoca en la degranulacin, y por tanto, la liberacin de las sus-

Figura 4: Representacin y contextualizacin de la histamina tancias denidas (histaminas y otros mediadores). La IgE, anclada en la clula sensibilizada, tiene el poder de desencadenar una actividad biolgica, e incluso en muy bajas concentraciones de alergeno, pueden inducir reacciones que van desde una alergia leve hasta un shock analctico5 fatal.

Figura 6: Micrografa de microscopio de barrido del plen de Ipomoea purpurea. con animales (escamas, pelo). La mayor presencia de esas sustancias depende de la zona y de las condiciones climatolgicas previas a la poca de oracin (especialmente temperatura y humedad). Por otro lado, el viento y la lluvia empeoran o mejoran la exposicin a los plenes. La sensibilizacin a esas molculas vara de unas personas a otras, inicindose ese problema a veces por hechos fortuitos (exposicin a grandes concentraciones, actuacin de otras sustancias que potencian esa sensibilizacin). Aunque la propuesta presentada en este trabajo depende inexorablemente de cada tipo de alrgeno, a continuacin se exponen brevemente los ms comunes relacionados con los plenes. Existen tres tipos fundamentales de plenes alergnicos: gramneas, rboles, y malezas. Cada planta tiene su ciclo reproductor dependiente de ciertas condiciones climticas que no siempre se dan en primavera. Gramneas Consideradas como la primera causa de alergia en el mundo. Constituyen una familia muy extensa de hierbas anuales y perennes, con tallos cilndricos y huecos. Su distribucin abarca los ms variados lugares desde el crculo polar al ecuador. Constituyen la fuente de alimentacin animal bsica (los pastos son bsicamente gramneas) y humana (el trigo, la cebada, el centeno, el maz, la avena, el arroz, la caa de azcar, etc. son tambin gramneas). Existe una notable relacin entre la pluviosidad pre-estacional y la polinizacin de las gramneas. As, dependiendo de la zona geogrca, cuando llueve mucho durante el perodo de tiempo que va aproximadamente de octubre a marzo, es probable que en primavera la concentracin de

Figura 5: Representacin del mastocito y la IgE. El mastocito puede activarse y de esta manera producir la liberacin del contenido de los grnulos citoplasmticos a travs de diferentes estmulos.

2.3.

Agentes implicados en la aparicin de la alergia

Son muy conocidos los agentes biolgicos como los plenes y caros as como elementos relacionados
5 O analaxia, el shock analctico se dene como una hipersensibilidad sistmica que ocurre en individuos con caractersticas inmunolgicas especiales y que resulta en manifestaciones mucocutneas, cardiovasculares y respiratorias que pueden poner en riesgo la vida.

polen de gramneas sea asimismo muy elevada. Malezas En general son esas hierbas pequeas, salvajes, anuales, que no tienen valor ni son decorativas. Las tres ms representativas en nuestro medio, son la Parietaria, la familia de las compuestas cuyo polen ms representativo es el de Artemisia y el Plantago. Por su alto poder alergnico cabe destacar tambin otra planta, Salsola, que orece de mayo a noviembre. rboles El olivo es el causante ms frecuente de sntomas alrgicos despus de las gramneas. La oracin del olivo suele tener lugar en mayo-junio, y rene dos circunstancias que lleva especialmente a tenerlo en cuenta desde el punto de vista de la alergia: por una parte produce un polen con una capacidad alergnica muy alta y por otra en la proximidad de zonas de olivos o acebuches las concentraciones de polen pueden ser extremadamente elevadas. Es interesante mencionar el ciprs, est aumentando mucho el nmero de personas alrgicas a su polen porque se est usando un tipo de ciprs, el Cupressus Arizonica cada vez con ms frecuencia como seto de jardines. 2.4. Vacunas

respuesta inmunolgica humoral y celular frente al alrgeno. En algunos casos, las vacunas pueden suponer soluciones a largo plazo para la mejora de vida de las personas alrgicas. Sin embargo, en muchos casos no conllevan mejoras del paciente, considerndose as como una solucin parcial al problema.

3.

Propuesta

En la presente seccin se exponen las principales aportaciones del trabajo. Se pretende enfocar la solucin propuesta y asimilarla al comportamiento de la insulina en el organismo. Es un ejemplo simple: el pncreas no sintetiza insulina o bien la que sintetiza no es reconocida en los rganos receptores. Si la accin de control, en este caso, inyectar insulina, es superior a la adecuada, el nivel de azcar en sangre se sita por debajo de los lmites aceptables, provocando hipoglucemia y los sntomas que de ella se derivan. En el polo opuesto, si se aporta una cantidad inferior a la requerida (o nula), los niveles de glucemia se descontrolan por encima de los lmites normales (expresado en mg por decilitro), produciendo en el organismo hiperglucemia que puede derivar en un coma hiperosmolar, por poner un ejemplo. As que lo adecuado en este caso es suministrar la dosis ptima de insulina al organismo para conseguir el equilibrio en rgimen permanente. Continuando con lo expuesto en la seccin anterior, la reaccin del organismo ante antgenos o elementos externos nocivos puede convertirse en una reaccin mal controlada que puede degenerar en escenarios incompatibles con la vida. La liberacin de mediadores de un mastocito activado (histamina y otras sustancias qumicas) en los lquidos tisulares provoca en primer lugar una inamacin de los tejidos circundantes acompaada de un proceso de reclutamiento de otras clulas pro-inamatorias del torrente sanguneo para invadir otras reas. As, al reclutar clulas locales vecinas, se vuelven a liberan mediadores qumicos adicionales, incrementando la inamacin de los tejidos involucrados, producindose este proceso en cascada sin control alguno. Buscando la analoga con sistemas de control clsico, se puede determinar que el sistema anterior se ha convertido en un sistema no lineal, catico, y descontrolado. A nivel biolgico, se pueden plantear dos posibles mecanismos de actuacin: 1. Actuar sobre la degranulacin del mastocito utilizando bloqueantes de la unin antgenoanticuerpo (alrgeno IgE). 2. O bien actuar a nivel del suministro al individuo de sustancias antihistaminicas en fase

La inmunoterapia especica (ITE) con extractos alergnicos, o ms comunmente denominado, vacunas, se viene utilizando con xito en el tratamiento de las enfermedades alrgicas desde los aos 50. Numerosos estudios han puesto de maniesto la ecacia de esta terapia en el tratamiento de enfermedades respiratorias mediadas por IgE. En la actualidad se considera como el nico tratamiento disponible capaz de modicar el curso natural de la enfermedad alrgica. No obstante, el mecanismo que justica su efecto teraputico no se conoce con exactitud, aunque el avance experimentado durante la ltima dcada en el conocimiento de las bases celulares y moleculares de la respuesta alrgica ha contribuido a entender mejor el modo de actuacin. Los enfermos que reciben ITE modican especcamente su reactividad frente al alrgeno. Esto se traduce en una disminucin de la reactividad tanto en pruebas cutneas como en provocaciones nasales, bronquiales y oculares y en una mejor tolerancia del paciente a la exposicin natural con el alrgeno, modicando as resultados anteriores relacionados. Estos cambios, clnicamente se deben a las modicaciones que la IT induce a nivel de la

previa a la aparicin de los sntomas. En el primer caso, el contacto del individuo con el alrgeno no es controlable, aunque s puede ser conocido el momento aproximado de un nuevo contacto, como es el caso de las alergias a los plenes de determinadas especies vegetales. La actuacin directa sobre el alrgeno modicando su estructura molecular no es posible, por no ser controlable, pero si sera posible la actuacin sobre la reaccin antgeno-anticuerpo que provoca la destruccin de los mastocitos y la posterior liberacin de las sustancias que provocan los sntomas de la alergia. Esta actuacin podra llevarse a cabo a dos niveles posibles: en la primera se plantea la introduccin de un cambio en la estructura molecular de la IgE, lo que supondra una modicacin gentica directa en el individuo cuyas consecuencias podran ser peligrosas para el mismo y por tanto no se considera abordable para este trabajo. La otra opcin, ms viable, sera la posibilidad de sintetizar un antibloqueante especco de la reaccin AG-AC6 , de forma que el AG reconoce al AC, es decir a la IgE, y viceversa, evitando el desencadenante conocido posterior no controlable. En el segundo caso, se estara hablando de un mecanismo que permitira actuar suministrando antihistamnicos al individuo antes de que se produzcan los sntomas, y por tanto evitndolos. Sin embargo, la variabilidad de sntomas en un individuo alrgico, no se controlan con la administracin exclusiva de antihistamnicos, dado que determinadas sintomatologas precisan del suministro de otras sustancias distintas. Por lo tanto se concluye que no parece ecaz este mtodo. 3.1. Desarrollo del mecanismo

tancia bloqueante. En este punto se descartara la sntesis de estas bacterias dentro del organismo del paciente, al no ser un medio controlable y por desconocimiento de los efectos e interacciones perjudiciales para el mismo que pudieran darse. En ltimo lugar, se suministrara al individuo, mediante algun sistema robotizado, la sustancia bloqueante. En este punto, sera preciso determinar los parmetros que se van a utilizar para determinar el momento, la forma y la cantidad en que se debe suministrar el bloqueante. 3.1.1. Primer paso. Modelado

A nivel gentico, y tras el estudio de los genes que determinan la sntesis de la IgE especca para el antgeno especco, y mediante tcnicas in vitro, se puede determinar cuales son las sustancias implicadas en la "unin" AG-AC. De dicho estudio gentico, la identicacin del gen que pone en marcha la sntesis de la sustancia "pegamento", es fundamental para el desarrollo del proyecto. Ese gen, mediante tcnicas de manipulacin gentica, podra ser modicado para que la sustancia "pegamento" que produzca, contenga un "fallo" en su estructura molecular, con lo cual evitara o no permitira la reaccin AG-AC. 3.1.2. Segundo paso. Fabricacin

Siguiendo un esquema top-bottom, a continuacin se exponen los principales puntos a seguir para desarrollar la propuesta indicada en el primer punto del prrafo anterior, en su segunda alternativa. As, en primer lugar, tal y como se da en la teora del control clsico, se procedera con el estudio del mecansmo especco AG-AC y posterior identicacin del modelo, o lo que sera equivalente, del antibloqueante especco. A nivel de laboratorio esto supondra un estudio in vitro y una posterior fase de prueba. En segundo lugar, se llevara a cabo la sntesis7 de la sustancia antibloqueante mediante la utilizacin de bacterias Escherichia coli, modicadas genticamente para la "fabricacin" especca en biodigestor8 y condiciones controladas de la sus6

Ya es bien conocida la utilizacin de bacterias "fbrica" para la sntesis o produccin en grandes cantidades de sustancias de gran importancia en el tratamiento de la diabetes. Mediante complejas tcnicas de "ingeniera gentica" se consigui utilizar una bacteria comn, denominada Escherichia coli (gura 7), que se encuentra comnmente en el instentino humano, para la produccin de insulina idntica a la elaborada por el cuerpo humano. Los investigadores utilizaron una cepa9 de dicha bacteria, y remodelaron su material gentico, aadindole un gen sinttico en el que se contena el cdigo de la fabricacin de insulina de tipo humano. As la bacteria fue inducida a producir molculas de insulina y utilizada en cierto modo como una factora de esta hormona. Dicho esto, la tcnica a utilizar en este caso que nos ocupa sera idntica, determinando la cepa de la bacteria ms "adecuada", incluyendo en su cdigo gentico el gen modicado o "sinttico", mediante complicadas tcnicas de ADN recombinante, hasta conseguir que produzca la sustancia que queremos obtener en grandes cantidades. Estas sustancias actuaran "despistando" o evitando la conexin AG-AC.
el control de todos los parmetros relacionados con la humedad relativa, temperatura, y relacin aire/gas. 9 Conjunto de especies bacterianas que comparten, al menos, una caracterstica.

En adelante AG: Antgeno, AC: Anticuerpo. 7 Produccin o elaboracin. 8 Contenedor cerrado hermticamente que permite

tencin, mediante tcnicas de ingeniera gentica o ADN recombinante, se implica la participacin de un organismo que dona el gen de inters y un organismo receptor del gen que expresar la nueva caracterstica deseada. Por ejemplo, para el caso particular de la produccin de una variedad de maz que resista el ataque de insectos, el organismo dador es la bacteria del suelo denominada Bacillus thuringiensis (Bt) de la cual se extrae el gen que determina la sntesis de la protena insecticida, y el organismo receptor del gen es la planta de maz. Las etapas y tcnicas involucradas en este proceso seran: Gen codicante de la informacin de inters Figura 7: Micrografa de barrido de elctrones de la bacteria Escherichia coli. En la subseccin siguiente se presenta de manera somera los principales aspectos de la ingeniera gentica aplicables a este trabajo. 3.1.3. Tercer paso. Accin de control Cuando se encuentra una caracterstica en un organismo que resulta interesante para transferir a otro organismo, debe vericarse que es producto de un gen. Se identica el gen de inters por medio de cruzamientos a partir de una caracterstica, la cual si es atribuda a una protena (producto directo de un gen), ser ms sencillo transferir esa caracterstica a un organismo que no la tiene.

No existe un nico tratamiento para la alergia. A cada individuo alrgico se le propone un tratamiento adaptado a los sntomas que presenta. Las medidas de evitacin del alrgeno, cuando sean posibles, resultan esenciales y representan el primero de los tratamientos para evitar todo contacto con el alrgeno y evitar o disminuir la aparicin de los sntomas. Los tratamientos con antihistamnicos, corticoides, etc, no son ecaces para la eliminacin total de los sntomas, ni existe un solo medicamento que resuelva o alivie toda la sintomatologa que acompaa a una reaccin alrgica. La desensibilizacin representa el nico tratamiento preventivo hasta el momento. Denominada tambin inmunoterapia especca, constituye hoy en da el nico tratamiento que permite curar ciertas alergias. Consiste en rehabituar progresivamente al organismo al alrgeno en cuestin, administrndole dosis crecientes de una vacuna alergnica, hasta obtener una dosis ecaz. Sin embargo, no ha demostrado hasta el momento mucho xito como tratamiento denitivo en la mayora de las alergias. 3.2. Ingeniera gentica

Figura 8: Los plsmidos pueden extraerse de las bacterias e incorporarse a otras a travs del proceso de transformacin. Clonacin del gen de inters Clonar un gen signica tenerlo puro en el tubo de ensayo, o mejor an, dentro de un vector (una molcula mayor de ADN que permite guardar fragmentos de ADN en forma estable y prctica por ms tiempo). La tarea de clonar un gen involucra

Dado que la propuesta de este trabajo supone una modicacin a nivel molecular de la sustancia pegamento en la unin AG-AC, es necesario introducir de manera somera conceptos bsicos de ingeniera gentica, para la obtencin del nuevo organismo transgnico. Para ello, para dicha ob-

varias tcnicas: extraccin de ADN, bsqueda de un gen entre la mezcla de genes del ADN, secuenciacin y construccin del vector recombinante. El ADN de inters se inserta en plsmidos-vectores que son molculas de ADN lineales o circulares en las cuales se puede guardar (clonar) un fragmento de ADN. Los ms usados son los plsmidos de origen bacteriano (gura 8). El desarrollo de estas tcnicas fue posible en gran medida por el descubrimiento de las enzimas de restriccin, las cuales reconocen secuencias determinadas en el ADN. De esta manera, conociendo la secuencia de un fragmento de ADN, es posible aislarlo del genoma original para insertarlo en otra molcula de ADN (gura 9).

agregar secuencias (promotor, terminador, intrones) para que se pueda expresar en el sistema de inters. Por ejemplo: si se clona un gen Bt de una bacteria para luego ponerlo en maz, se debe agregar un promotor que funcione bien en plantas, es decir, que permita que las clulas vegetales expresen la protena Bt. El promotor es una regin fundamental del gen ya que determina cundo y dnde se expresar el gen (gura 10). Transformacin del organismo Una vez hecha la construccin gentica con el gen y promotor deseado, se elige el mtodo de transformacin ms indicado para el organismo que se desea hacer transgnico. Caracterizacin del OGM Por ltimo, una vez obtenido el OGM10 , se analiza desde el punto de vista molecular y biolgico. Para el primero se debe demostrar, entre otras cosas, si tiene una (o ms) copias del transgn, y cmo y en qu tejidos se expresa el gen. Para la caracterizacin biolgica, el OGM se analiza desde el punto de vista del objetivo (en este ejemplo, si el maz resulta efectivamente resistente a los insectos o en nuestro caso, si se consigue el efecto desacoplador AG-AC) y desde el punto de vista que sea necesario acorde al OGM en cuestin.

Figura 9: Las enzimas de restriccin reconocen secuencias de 4,6 ms bases generando extremos que sellados generan la denominada molcula recombinante.

Caracterizacin del gen de inters A partir de conocer la secuencia del gen se puede, mediante bioinformtica, comparar esta secuencia con las de genes ya conocidos para determinar a qu gen se parece, y se le asigna una posible funcin. Una vez predicha la funcin del gen clonado por medio de anlisis computacional, se debe proceder a conrmar la funcin real en vivo, o sea corroborar que en un sistema biolgico funciona acorde a lo que se prev. Para ello se suele transferir el gen a un organismo modelo, en el cual se pueda expresar el gen y medir su funcin. Modicacin del gen de inters Si as se desea se puede agregar, eliminar o mutar secuencias dentro de la regin codicante, y

Figura 10: Representacin de las posibles modicaciones permisibles en las secuencias de ADN En la actualidad existen muchas aplicaciones que han sido producidas gracias a la ingeniera gentica: vacunas contra la hepatitis B, frmacos (como la insulina o la hormona de crecimiento), enzimas utilizadas en detergentes, etc. 3.3. Otras alternativas

Otra posible implementacin de la propuesta indicada en el presente trabajo pudiera haber sido la
10

Organismo genticamente modicado

consideracin de mquinas bio-nano robticas, del orden de nanmetros. Este tipo de mquinas, bien podran aplicarse de varias maneras al problema en cuestin. As, la nanotecnologa se reere a la ciencia y procesos de ingeniera a nivel de tomos y molculas; y la aplicacin al mundo de la medicina se indica por el trmino de nanomedicina, proceso de diagnstico, tratamiento y prevencin de enfermedades y preservacin del estado utilizando herramientas y conocimiento del organismo a nivel molecular.

mente ables y consistentes como para poder ser introducidas en un organismo, sin contar con el hecho de que para la aceptacin por parte de instituciones mdicas de los pases de aplicacin es necesario un proceso de experimentacin en animales de laboratorio durante varios aos.

4.

Conclusin

En este trabajo se ha planteado la posibilidad de utilizar una terapia denitiva para resolver el problema de la alergia. Si bien cada individuo es un ser nico en si mismo, el mecanismo de actuacin es el mismo. Con el suministro a dosis ajustadas de estas sustancias bloqueantes en la reaccin AG-AC a los pacientes alrgicos, se podr evitar la aparicin de la sintomatologa que acompaa a la reacciones alrgicas, abriendose lneas de investigacin en el campo de la biomedicina no exploradas hasta el momento. Sin embargo, el hecho de la modicacin del ADN en el organismo supondra estudios exhaustivos para corroborar que este tipo de alternativas no suponen riesgo alguno para los pacientes, comprobando adems que el sistema completo permanece estable, en trminos de control, en rgimen permanente. Es decir, que los posibles efectos secundarios que la implantacin de este tipo de tcnicas pudieran tener, fueran inexistentes, para validar la aplicacin de las mismas. En ningn momento se ha introducido las posibles perturbaciones que el modelo extrapolado pudiera tener: desde la interaccin con otro tipo de clulas, hasta niveles distintos a los esperados de histamina o mediadores qumicos. El punto de vista proporcionado en el presente trabajo es meramente de aproximacin al problema y plantear su posible aplicacin conllevara estudios exhaustivos de todos los componentes qumicos involucrados en los distintos tipos de reacciones, al tiempo que tambin sera necesario calibrar el mtodo propuesto para cada tipo de antgeno en el que el organismo pudiera ser receptor.

Figura 11: Representacin simple de ejemplo de mquina bionano robtica. Una primera aproximacin pudiera ser que actuaran como bloqueante en la unin AG-AC. Diere de la anterior suposicin en que si bien se permita la unin y posteriormente se modicaba la unin, en esta alternativa se considerara a la mquina como un inhibidor de accin de la IgE, bloqueando sus receptores y permitiendo la presencia del antgeno en el organismo. As, se evitara la liberacin de las sustancias qumicas descritas anteriormente y el posterior efecto en cascada. Sin embargo, para insensibilizar al organismo utilizando esta alternativa, sera necesario un nmero ingente de estos bloqueantes articiales. Una segunda alternativa pudiera ser la aplicacin de estas mquinas en la destruccin de las sustancias qumicas liberadas en los lquidos tisulares. As, bien podran emplearse como bloqueantes de las mismas o directamente destruirlas mediante recombinaciones peridicas. El problema que pudiera derivarse es el hecho de que el entorno no es controlado, y como se ha comentado previamente, esto puede provocar una secuencia de complicaciones que empeoraran la integridad del organismo. El problema de estas alternativas es que aunque la bionanotecnologa haya experimentado un gran avance en los ltimos aos, gracias principalmente a la evolucin de las tcnicas computacionales y a una mayor comprensin a nivel molecular de las posibles interacciones en las estructuras articiales, aun no se dispone de mquinas lo suciente-

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