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Tcnicasparalaevaluacin genotxicaenorganismos expuestosacontaminantes ambientales

RicardoGutirrezDeAguas,PhD.
rgutierr@uninorte.edu.co

ContaminantesAmbientales
Agentesfsicos Agentesbiolgicos Agentesqumicos Existenmsde70.000 sustanciasqumicas Cadaaoaparecenalrededorde 1.000sustanciasnuevas Algunasdeestassustanciasson potencialmentegenotxicas

Genotoxicidad
Basadaenelpotencialdeun agente,fsicooqumico,paraunirse amacromolculascomoelADNy provocaralgntipodemodificacin enlainformacingentica Relacinentrelaexposicina sustanciasgenotxicasyriesgode padecercncer

Genotoxicidad
IncluyeefectosdirectossobreelADNcomo: Mutacionesgnicas Mutacionescromosmicas

Genotoxicidad
IncluyeefectosindirectossobreelADNcomo: Intercambiodecromtideshermanas(ICH)

LasanomalascromosmicaseICHsepueden detectarmediantetcnicascitogenticas

Mutaciones

Mutaciones

Contaminacinambiental
Lapresenciadecontaminantesenelambientese puedemanifestarenformademutaciones, mortalidaddelosorganismosyprdidadela diversidadbiolgicaenunecosistemadeterminado.

Biomarcadorescomoindicadoresde riesgogentico
Hacereferenciaacualquiermedidaquereflejeuna interaccinentreunsistemabiolgicoyunagente medioambiental. Sepuedenutilizarparaevaluarcontaminantes ambientalesderivadosdeactividadeshumanascomo laagriculturaolaindustria. Muchoscontaminantessonmezclasdesustancias qumicasdisueltasqueproducenrespuestasvariadas enlosorganismosexpuestos,entreellasefectos genotxicos.

Biomarcadoresparaelmonitoreo ambiental
Existendiversastcnicascitogenticasymoleculares, entreellas: EnsayodeMicroncleos(MN) Ensayodelcometa(SCGE) TestdeIntercambiodeCromtidesHermanas(ICH) FragmentacindelADNenespermatozoides

EnsayodeMicroncleos
Ampliamenteutilizadoparaelmonitoreoambiental tantoenestudiosconplantascomoenanimales sensiblesalacontaminacinambiental. LosMNsonmasasdecromatinaconformade pequeosncleosqueaparecencercadelncleo principalenlasclulaseninterfase. Sepuedenoriginardeformaespontneaocomo respuestaalaaccindeagentesgenotxicosporla prdidaduranteladivisincelulardefragmentos cromosmicosy/ ocromosomasenteros.

FormacindeMicroncleos

EnsayodeMicroncleos

EnsayodeMicroncleos
Serequiereunadivisincelulardespusdeldaoparaquese formenypuedanservisualizados. Permitendetectardiferentestiposdelesionescomo: RoturasdelADNdedoblecadena. RoturasdelADNdecadenasimple,malreparadoosin reparar. Alteracionesenlasprotenasimplicadasenlasegregacin cromosmica. Diferentestiposdeaberracionescromosmicas Apoptosismediantelafrecuenciasdencleoscondensados

EnsayodeMicroncleos
Seutilizatantoenestudiosinvivocomoinvitro yseutilizan modelosanimalesdelaboratorio. ElensayodeMNeneritrocitosdemdulaseaderatnode sangreperifricaesutilizadoenlaevaluacingenotxicade productosqumicos. Presentaalgunasventajas: Esunatcnicarelativa/erpidaysencilla. Permitetrabajarcondiferentestiposcelulares:sanguneas, epiteliales,etc. Utilizaclulasinterfsicasypermiteanalizarunelevado nmerodeclulas.

MNenclulasepitelialesdela mucosabucal
Lostejidosepitelialesproliferanrpidamenteymuchosestn encontnuocontactoconelmedio. Loscambioscitogenticosenestostejidossondifcilesde estudiarportcnicascitogenticastradicionalescomoACo ICHyaquesenecesitanclulasenmetafase. Presentaalgunasventajas: Esunatcnicasencillayrpida. Lasclulasnonecesitansercultivadas. Lasclulassepuedenreconocerfcilmente. Facilidadenlarecoleccindelasmuestrasymetodologano invasiva.

MNenclulasepitelialesdela mucosabucal

ElensayodelCometa
Utilizadaampliamenteparaevaluarelpotencialgenotxico dediversassustanciasqumicas. Electroforesisengeldeclulasindividualesenmedio alcalino. Tcnicasensiblequedetectarompimientodecadenas sencillas,sitiosalcalilbilesysitiosdereparacinporescisin debasesnitrogenadas. BasadaenlamigracindefragmentosrotosdeADNdurante laelectroforesis. Permiteelanlisisdeldaogenticoaniveldeclulas individuales

ElensayodelCometa
Semezclanlinfocitos,uotrasclulas,con microgelesdeagarosaextendidasobreplacas portaobjetossumergidosensolucindelisisyluego elADNesdesnaturalizadoconNaOH. Serealizauncorridoelectroforticodespusde lisarlasclulasenelmicrogeldeagarosa. SecoloreaelADNconBromurodeEtidioyse estimaeldaomediantelavisualizacindela fluorescenciadelADNquemigra.

ElensayodelCometa

MonroyC.M.etal.Citotoxicidadygenotoxicidadenclulashumanas expuestasinvitroaglifosato.Biomdica200525:33545.

ElensayodelCometa

MonroyC.M.etal.Citotoxicidadygenotoxicidadenclulashumanas expuestasinvitroaglifosato.Biomdica200525:33545.

FormacindelCometa

FragmentacindelADNen espermatozoides

Criteriosdeclasificacin

Anlisisdeunamuestra

IntercambiodeCromtidesHermanas (ICH)
Suorigenmolecularespoco conocido Fenmemocromosmicovisible almicroscopio. Implicaelintercambiode fragmentosdeADNentrelas cromtideshermanasdelos cromosomas

IntercambiodeCromtidesHermanas (ICH)
BasadoenlareplicacindelADNenpresenciade labaseanlogaBrdUquepermiteladiferenciacin entrelasdoscromtideshermanas. Esunatcnicaaltamentesensitivaparacuantificar lamutagenicidaddeagentesmedioambientales. tilenlaevaluacindesustanciasqumicasen clulascomolinfocitosoclulasdemdulasea. Monitoreodepoblacioneshumanasexpuestasa posiblesmutgenosqumicos.

IntercambiodeCromtidesHermanas (ICH)

Conclusin
Enlosestudiosdemonitoreogenotxicoes importantecontarconbiomarcadoresdegran sensibilidadybajocostoquepermitanaplicarsea diferentestiposdemuestrasopoblaciones. Lastcnicasmencionadasseconstituyenen herramientasimportantesparaestudiarelpotencial genotxicodediferentesagentescontaminantes ambientalescongranaplicacinenlainvestigacin.