Practica N5 Digestin enzimtica del almidn NOMBRE: Reyes Paredes, Marjorie GRUPO: 2-2

En cada tubo de ensayo se colocaron las medidas correspondientes de sustancias como muestra el cuadro: TUBO N ALMIDON 1%; ml BUFFER FOSFATO pH 6.8:ml HCL O,3N : ml CLNa 0,9%: ml Agua dest.:ml Bao Mara 37 x 5 Amilasa Salival: ml 1 2.0 1.0 3.0 2 2.0 1.0 2.4 0.6 3 2.0 1.0 2.4 0.6 4 2.0 3.4 0.6

Luego mezclamos e incubamos en Bao Mara 37C x 20 Obtuvimos como resultados: Tubo 1: No se produce hidrlisis por no hay enzima. Tubo 2: Si hay hidrolisis porque hubo enzima y la presencia de un activador (ClNa) y un buen medio. Tubo 3: Hay menor hidrolisis porque hubo agua destilada en vez del activador de la amilasa salival (cloruro de sodio). Tubo 4: No hay hidrolisis ya que no se encuentra pH adecuado por la presencia de HCl que acidifica el medio y esto inactiva la amilasa salival que trabaja en un pH alcalino.

A. DETERMINACION EL SUSTRATO: TUBOS N DIGERIDO DEL TUBO 1: ml DIGERIDO DEL TUBO 2: ml DIGERIDO DEL TUBO 3: ml DIGERIDO DEL TUBO 4: ml HCL 0.05N : ml Sol. de Lugol: ml Dejar en reposo por 15 minutos. (660nm) 5 6 7 8 0.5 0.5 0.5 0.5 5 5 5 5 0.5 0.5 0.5 0.5 Leer al fotocolormetro con filtro rojo

TOMANDO EN CUENTA Almidn + lugol Azul Almidn + enzima + lugol Incolora

Tubo 5: Ya que el tubo 1 no hubo hidrolisis porque no haba enzima, entonces todava persiste el almidn y al mezclarse con la solucin del lugol se torna color azul precisamente por la presencia del almidn Tubo 6: En el tubo 2 si hubo hidrolisis total porque se dieron las condiciones ptimas entonces al no encontrar el almidn que pueda reaccionar con la solucin del lugol, se obtiene una muestra incolora. Tubo 7: En el tubo 3 observamos que hubo una hidrolisis parcial porque no hubo activador (cloruro de sodio) por lo que la mezcla se vio rojiza. Tubo 8: En el tubo 4 no hubo hidrolisis por la presencia de HCl, entonces el almidn persiste y reacciona con la solucin de lugol tornandose azul oscuro.

B. DETERMINACION DEL PRODUCTO TUBOS DIGERIDO DEL TUBO 1: ml DIGERIDO DEL TUBO 2: ml DIGERIDO DEL TUBO 3: ml DIGERIDO DEL TUBO 4: ml SOLUCION DE GLUCOSA 1%: ml SOLUCION BENEDICT : ml 9 0.5 2 10 0.5 2 11 0.5 2 12 0.5 2 13 0.5 2

Mezclar, Incubar en Bao Mara a 100C x 5 y enfriar en agua helada e interpretar. Tubo 9: Al no haber hidrlisis en el tubo 1 porque no haba presencia de enzima amilasa en consecuencia no hubo producto y como el almidn es una agente reductor, por lo tanto no hay reaccin con Benedict y se mantiene la coloracin turquesa inicial. Tubo 10: Aqu se encuentra el producto porque hubo hidrolisis gracias a la enzima y adems porque presenta el activador ClNa por ello el almidn se degrada al reaccionar con Benedict obtenindose un color azul verdoso y con un precipitado que se va tornando color rojo ladrillo en la base. Tubo 11: Se encuentra menor cantidad de producto porque no hay presencia del activador ClNa por lo tanto no ha ocurrido una hidrolisis total como en el caso anterior; en consecuencia se obtiene cierta cantidad de producto pero mnima obtenindose un color azul verdoso con un precipitado color rojo ladrillo en la base. Tubo 12: Al no haber hidrlisis en el tubo 4 porque el pH no fue ptimo en consecuencia no hubo producto y como el almidn es una agente reductor, por lo tanto no hay reaccin con Benedict y se mantiene la coloracin turquesa inicial. Tubo 13: Al mezclarse 0.5 mL de solucin de glucosa 1% con 2 mL de solucin de Benedicct se observa un precipitado rojo ladrillo en mayor proporcin del tubo 10 y 11 la presencia de glucosa.

1. Explique, cuales son las condiciones ptimas para una hidrlisis enzimtica del almidn soluble. Un pH ptimo alcalino, ya que a esa condicin trabaj adecuadamente la enzima, a diferencia de la pepsina que era a un pH cido. Presencia de activador ClNa ya que sin su presencia no se producira la hidrolisis. Presencia de amilasa salival ya que es la que la va a hidrolizar la sustancia. Una adecuada temperatura (37) ya que el incremento de temperatura auenta el nmero de colisiones y por lo tanto la actividad enzimtica.

2. Interprete la reaccin de Benedict. Esta reaccin es especfica para azucares reductores libres como lo es la lactosa, glucosa, maltosa en soluciones alcalinas, pueden reducir Cu+2 que tiene color azul, el cual precipita la solucin alcalina como Cu2O de color rojo naranja. La coloracin desprender de la concentracin del xido de cobre a su vez de la reduccin del cobre.