Prof.

Aurico Sousa Fonseca Ctedra de Microbiologa e Inmunologa

F.C.V. - U.C.V.

 + 95% Peso Seco Macroelementos

Componentes de hidratos de carbono, lpidos, protenas y cidos nucleicos
C, O, H, N, S y P

Cationes y diversas funciones

K+ Actividad enzimtica (sntesis proteica) Ca2+ Termoresistencia de las endosporas Mg2+ Cofactor enzimtico, forma complejos con ATP y estabiliza ribosomas y membranas Fe2+ Forma parte de los citocromos y es cofactor de enzimas y protenas transportadoras de electrones.

 Oligoelementos microelementos
Difcil demostrar la necesidad de un oligoelemento Las bacterias requieren cantidades tan pequeas que son suficientes contaminantes presentes en:
Agua Recipientes para cultivo Componentes habituales del medio

Parte de enzimas y cofactores, facilitan catlisis de reacciones y mantenimiento de la estructura de protenas

Mn2+ Facilita transferencia de grupos fosfato Zn2+ Centro activo de algunas enzimas Co2+ Componente de la vitamina B12 Mo2+ Necesario para fijar nitrgeno

 Clasificacin de elementos segn necesidades nutricionales bacterianas

Principales:
C, O, H, N, S y P Necesarios en cantidad de gr/L medio de cultivo

Secundarios:
K+, Ca2+, Mg2+, Fe2+ Necesarios en cantidad de mgr/L medio de cultivo

Oligoelementos:
Mn2+, Zn2+, Co2+, Mo2+, Ni y Cu Necesarios en cantidad de gr/L medio de cultivo

Elementos especiales
Bacterias de lagos salinos y ocanos [Na+]

 Necesidades de C, H y O suelen cubrirse al mismo tiempo

Aportan O e H Excepcin CO2

C Construir esqueleto de todas las molculas orgnicas Prototrofo

Auxotrofo

Precisa los mismos nutrientes que los de su especie M.O. mutado que carece de la capacidad de para sintetizar un nutriente esencial y por ello debe obtenerlo, o a su precursor, del medio Ejemplo: Necesidad de aminocido especfico

 Se obtienen de los mismos nutrientes que aportan carbono y de fuentes inorgnicas

Nitrgeno
Sintetizar aa, purinas, pirimidinas, carbohidratos, lpidos y otras sustancias
Amonio, nitrato, nitrgeno atmosfrico

Fsforo
Sintetizar cidos nucleicos, fosfolpidos, nucletidos (ATP), cofactores, protenas y componentes celulares.
Fosfato inorgnico Niveles bajos limitan el crecimiento

Azufre
Sintetizar aa cisteina y metionina, hidratos de carbono, biotina y tiamina
Sulfato y formas reducidas de azufre (cisteina)

Compuestos orgnicos que son necesarios porque son componentes celulares esenciales, o sus precursores, y no pueden sintetizarse por el organismo

 Principales clases de Fact. de Crec.

Aminocidos
Sntesis de Protenas

Purinas y pirimidinas
Sntesis de cidos nucleicos

Vitaminas
Molculas orgnicas pequeas que forman la totalidad o parte de los cofactores enzimticos Solo se requieren pequeas cantidades

Otros factores
Grupo Hemo Haemophilus influenzae Colesterol Mycoplasma spp

 Algunos microorg. requieren muchas vitaminas

Enteroccocus faecalis
8 vitaminas

Leuconostoc mesenteroides
Todos los aa, purinas y pirimidinas

Adicin de sustancias complejas y baratas que aportan prcticamente todos los fact. crecimiento
Peptona o extracto de levadura

 Utilizacin de nutrientes Captacin Mecanismos de captacin deben:

Ser especficos Transportar desde soluciones diluidas en contra de un gradiente de concentracin Atravesar la membrana plasmtica selectivamente permeable Principales mecanismos de transporte
Difusin facilitada Transporte activo Translocacin de grupos

 Las molculas se desplazan desde una regin de concentracin elevada a otra con menor concentracin, debido a una agitacin trmica aleatoria Depende de la diferencia de gradiente entre el exterior de la clula y su interior Proceso poco eficaz que requiere un gradiente de concentracin elevado

Intervienen protenas transportadoras Permeasas Une tantas molculas de soluto como sea posible Movimiento dirigido por gradiente de concentracin No necesita un aporte adicional de energa No parece importante en procariotas Transporte Glicerol
E. coli Pseudomona Bacillus, Salmonella typhimurium

 Transporte de molculas en contra de un gradiente de concentracin Efecto de saturacin del transportador en concentraciones de soluto elevadas Se diferencia de la DF:
Uso de energa metablica Capacidad de concentrar sustancias

Simporte
Transporte combinado de sustancias en la misma direccin

Antiporte
Transporte combinado en el que las sustancias se desplazan en direcciones opuestas

Las molculas son transportadas al interior celular despus de alterarse qumicamente Sistema fosfotransferasa de azcares
Enzima I, Protena termoestable de bajo peso molecular, Enzima II (a, b y c)

Sustancias o complejos de sustancias naturales o artificiales, lquidas, slidas o semislidas, que proporcionan a los microorganismos los principios nutritivos indispensables para su crecimiento y reproduccin

 Clasificacin segn su composicin

Medios sintticos o definidos Medios semi-sintticos Medios complejos

Clasificacin segn su utilidad

Medios bsicos ordinarios o simples Medios enriquecidos Medios selectivos Medios diferenciales Medios especiales Medios de enriquecimiento Medios de transporte

 Cultivo puro:
Poblacin de clulas que procede de una nica clula, para caracterizar una especie individual

Colonia:
Formacin o agrupacin macroscpicamente visible de microorganismos en un medio slido

Tamao Forma Elevacin Mrgenes Brillo Densidad Consistencia Color Cambios en el medio

 Aumento de los constituyentes celulares

Origina un incremento en nmero de clulas cuando estas se multiplican por procesos como gemacin o fisin binaria. La bacteriologa estudia el crecimiento siguiendo los cambios observados en el nmero total de la poblacin

 FASE DE LATENCIA
Sntesis de componentes estructurales
Edad del inoculo y diferencias entre medios de procedencia y destino.

FASE EXPONENCIAL
Crecen y se dividen hasta el nivel mximo posible en funcin de:
Potencial gentico Tipo de medio Condiciones en que crece

La velocidad de crecimiento es constante Divisiones a intervalos regulares Poblacin ms uniforme qumica y fisiolgicamente

 FASE ESTACIONARIA
El crecimiento de la poblacin cesa Poblacin aproximada de 109 cel/ml Nmero total de MO viables permanece constante Factores que originan la entrada de fase estacionaria

FASE DE MUERTE
Cambios ambientales perjudiciales
Privacin de nutrientes Acumulacin de residuos txicos

La muerte de una poblacin bacteriana es logaritmica

Vlido aun cuando el nmero de clulas permanece constante no se lisen despus de morir

 Para que sirve conocer la velocidad de crecimiento bacteriano durante la fase exponencial?
Investigacin bsica fisiolgica y ecolgica y solucin de problemas industriales aplicados

Cada MO se divide a intervalos constantes

Tiempo de generacin o duplicacin

Determinacin del tiempo de generacin

k = Constante de la velocidad media de crecimiento

 Formas de cuantificar el crecimiento microbiano para determinar la velocidad del crecimiento y el tiempo de generacin Se puede medir:
Nmero de clulas en la poblacin Masa celular

 Cmaras de recuento Contadores electrnicos Microscopa de fluorescencia Siembra en placa por extensin Siembra en placa en profundidad Siembra a partir de filtros

 Medicin del peso seco Medicin de turbidez Medicin de la cantidad de un componente celular

 La cantidad de masa microbiana producida a partir de un nutriente se puede expresar por el rendimiento del crecimiento (Y)
Solo se emplea parte del ATP generado en la biosntesis La mayor parte se utiliza en el transporte, movimiento y otros procesos

 Los MO se pueden cultivar en un sistema abierto en el que se aportan los nutrientes y se retiran los residuos de forma constante

 Un sistema de cultivo continuo es un sistema abierto que puede mantener una poblacin microbiana en fase logartmica Existen dos tipos:
Quimiostato Turbidostato

 El crecimiento exponencial es equilibrado

Los componentes celulares se sintetizan a una velocidad constante, unos respecto de otros

Los cambios en la condiciones de cultivo ocasiona un crecimiento desequilibrado Parte de los nutrientes disponibles se emplean para aportar la energa de mantenimiento

Solutos y actividad de agua pH Temperatura Concentracin de oxgeno Presin Radiacin

 Las bacterias poseen una pared celular rgida y son hipertnicos respecto del hbitat, debido a solutos como aminocidos, alcoholes de azcares e iones potasio La cantidad de agua realmente disponible para los microorganismos se expresa en trminos de actividad del agua (aw).

 La mayora de los microorganismos no crece bien en medios con una actividad del agua inferior a 0.98, debido a la plasmlisis y los efectos asociados Organismos osmotolerantes
Pueden sobrevivir e incluso desarrollarse intensamente en medios con valores bajos de aw

Los halfilos requieren realmente altas concentraciones de cloruro sdico para crecer.

 Cada especie de microorganismo tiene un pH ptimo de crecimiento Pueden clasificarse en acidfilos, neutrfilos o alcalfilos. Los microorganismos pueden alterar el pH de su ambiente, y la mayora de los medios de cultivo deben contener soluciones amortiguadoras para estabilizar el pH.

 Los microorganismos poseen rangos diferentes de temperatura para su crecimiento, con una mnima, una mxima (temperaturas cardinales) y una ptima Estos rangos estn determinados por los efectos de la temperatura:
Velocidad de catlisis Desnaturalizacin de las protenas Alteracin de membranas.

Existen cinco tipos principales de microorganismos respecto de las preferencias de temperatura:

Los microorganismos se pueden clasificar en al menos cinco categoras diferentes, segn su respuesta a la presencia de O2:
Aerobios obligados Anaerobios facultativos Anaerobios aerotolerantes Anaerobios estrictos u obligados Microaerfilos

 El oxgeno puede convertirse en txico por la produccin de perxido de hidrgeno y los radicales superxido e hidroxilo.

stos se destruyen por las enzimas superxido dismutasa y catalasa.

Campana de trabajo anaerbico y estufa de incubacin

Sistema anaerbico GasPak

 La mayora de los microorganismos estudiados ciclo vital sobre la tierra o en la superficie del agua
1 atmsfera de presin

Profundidades marinas 75% del volumen total de los ocanos

600 a 1100 atmsferas

En funcin a la Presin los MO pueden ser:

Barotolerantes
Toleran presiones elevadas

Barfilos
Precisan de una presin elevada para alcanzar un crecimiento ptimo.

 La radiacin de alta energa o de longitud de onda corta daa a los microorganismos de varias maneras.
La radiacin ionizante, rayos X y gamma
Ioniza molculas Destruye el DNA y otros componentes celulares.

 La radiacin ultravioleta (UV) induce la formacin de dmeros de timina y la rotura de cadenas en el DNA.
Este dao se puede reparar mediante mecanismos de fotorreactivacin o reactivacin oscura.

 Luz visible es enormemente beneficiosa porque es la fuente de energa de la fotosntesis La luz visible puede aportar energa para la formacin de oxgeno en forma de singlete, que destruye a las clulas.

Gracias por su atencin