Universidade do Porto

Faculdade de Farmcia
Mestrado em Tecnologia Farmacutica



















PREPARAO, CARACTERIZAO E APLICAO DE COMPLEXOS DE
INCLUSO DE MICONAZOL COM METIL--CICLODEXTRINA: ADMINISTRAO
BUCAL





Andreza Maria Ribeiro









Porto
2008
Andreza Maria Ribeiro

















PREPARAO, CARACTERIZAO E APLICAO DE COMPLEXOS DE
INCLUSO DE MICONAZOL COM METIL--CICLODEXTRINA: ADMINISTRAO
BUCAL






Dissertao de Mestrado apresentada ao
Programa de Ps-Graduao da
Faculdade de Farmcia da Universidade
do Porto, como parte dos requisitos
necessrios obteno do ttulo de
Mestre em Tecnologia Farmacutica, sob
orientao do Prof. Dr. Delfim Fernando
Gonalves dos Santos e co-orientao do
Prof. Dr. Francisco Veiga.






Porto
2008























Aos meus pais, Jorge e Ins,
por possibilitarem a realizao
de todos meus sonhos, pelo
amor e apoio. As minhas irms
Emileine e Georgia, e ao meu
sobrinho Leonardo a meus
grandes amigos, por todas as
risadas, pelo carinho e pela
pacincia.
Dedico.
















AGRADECIMENTOS

Agradeo Deus pela presena constante;

Ao Prof. Dr. Delfim Fernando Gonalves Santos pelos conhecimentos, dedicao e
amizade, transmitidos durante toda orientao deste trabalho;

Ao Prof. Dr. Francisco Veiga, pela possvel realizao deste trabalho, pela sua
orientao e exemplo profissional, pela confiana sempre depositada em mim,
amizade e agradvel convivncia;

Ao Laboratrio de Tecnologia Farmacutica da Faculdade de Farmcia da
Universidade de Coimbra por toda a estrutura que possibilitou a realizao desse
trabalho;

Ao programa de ps-graduao do Curso de Mestrado em Tecnologia Farmacutica
em especial a Prof. Dr. Fernanda Bahia, prezada coordenadora, pela oportunidade
proporcionada viabilizando este trabalho de pesquisa;

s amigas do Laboratrio de Tecnologia Farmacutica da Faculdade de Farmcia da
Universidade de Coimbra, Rita, Claudia, Jucimara, Alexandra e Felipe, entre outros,
em especial e com muito carinho a Camile e a Cristina por momentos de distraco
entre um experimento e outro, pela amizade e orientaes;

Rita Figueiras, com muito carinho, por toda a sua ajuda desde o incio deste trabalho
cientfico, pela amizade e sua sempre disposio orientao;

A Janssen Pharmaceutica (Beerse-Blgica), pelo fornecimento do Miconazol e a
Roquettte (Lestrem, France) pelas ciclodextrinas;

A Prof. Dr. Maria Teresa Vieira do Instituto Pedro Nunes (IPN) pela assistncia
tcnica para realizao das tcnicas de RX e SEM;

Aos professores do mestrado em Tecnologia Farmacutica da Faculdade de Farmcia
da Universidade do Porto em especial a Prof. Dr Maria Helena Amaral pela sua
sempre disposio e carinho;

Aos meus queridos avs, meus tios e primos, que formam minha amada famlia, por
todo carinho e apoio;

s minhas amigas de graduao pelos momentos mais felizes da faculdade, e a todos
meus amigos pelos ptimos finais de semana;

Aos meus amigos Eloiso e Lilian pelo apoio, confiana e carinho para que este sonho
fosse realizado;

A todos que directa ou indirectamente colaboraram na execuo deste trabalho.
SUMRIO
Agradecimentos iv
Resumo vi
Abstract ix
Abreviaturas xii
ndice de Figuras xiii
ndice de Tabelas xv
ndice Geral xvi

















RESUMO
As substncias activas, na sua maioria, no possuem solubilidade suficiente
em gua e as formulaes tradicionais para frmacos insolveis envolvem uma
combinao de solventes orgnicos, tensioactivos, e condies extremas de pH, que
frequentemente podem causar irritaes ou outras reaces adversas. Sabe-se que
um frmaco tem que ter um determinado nvel de solubilidade em gua para ser
prontamente libertado na membrana celular, mas necessita ser bastante hidrofbico
para atravessar a membrana.
Uma das propriedades das ciclodextrinas a sua capacidade de promover a
libertao dos frmacos atravs das membranas biolgicas. As molculas de
ciclodextrinas so relativamente grandes e com uma superfcie exterior hidratada. Em
condies normais as molculas de ciclodextrinas permeiam as membranas biolgicas
com considervel dificuldade.
As ciclodextrinas tm sido utilizadas em formulaes semi-slidas para
aumentar a solubilidade e a estabilidade das substncias em gua, bem como
promover a libertao de frmacos em membranas biolgicas.
As membranas biolgicas por serem relativamente lipoflicas, apresentam uma
baixa afinidade para as molculas de ciclodextrinas hidroflicas e, consequentemente
estas tendem a permanecer sob a membrana, por exemplo, em bases aquosas (tais
como cremes ou geles hidrfilos) saliva ou fluido lacrimal. Os promotores de
permeao convencionais, tais como os lcoois e os cidos gordos, desorganizam as
camadas lipdicas da barreira biolgica. As ciclodextrinas, por outro lado, agem como
promotores de absoro aumentando a disponibilidade do frmaco na superfcie da
barreira biolgica.
As leveduras so fungos oportunistas responsveis pela maior parte das
infeces fngicas nos seres humanos. A Candida albicans considerada uma das
leveduras mais patognicas para o ser humano, causando um grande nmero de
infeces oportunistas. A candidiase oral muito comum em pessoas idosas que
normalmente usam prteses dentrias e em imunodeprimidos. Os agentes
antifngicos imidazlicos, como o Miconazol (MCZ) so usados nesta teraputica, e
so activos contra todos os fungos causadores de infeces superficiais de pele e
mucosas. A aco principal de um frmaco imidazlico localizada ao nvel de
membrana celular. A via citocromo P-450, dependente de C14 lanosterol dimetilase,
inibida, e esta a responsvel pela produo de ergosterol que um componente
necessrio constituio da parede celular do fungo. A maioria das micoses
superficiais mucocutneas pode ser tratada com medicamentos tpicos.
Numa primeira parte do trabalho, o objectivo foi complexar o antifngico,
miconazol, que insolvel em gua, com uma ciclodextrina modificada, Metil--
ciclodextrina (MBCD), e caracterizar os complexos obtidos.
Numa segunda parte, foi desenvolvida uma formulao semi-slida hidrfila
com uma maior adesividade, usando como promotor de libertao, uma ciclodextrina,
A formulao final destina-se ao tratamento da candidiase oral, facilitando a
administrao desse medicamento em pessoas utilizam proteses dentrias. Desta
forma avaliou-se a incluso do MCZ na -ciclodextrina modificada, as caractersticas
reolgicas do gel e a difuso do frmaco bem como a influncia da ciclodextrina como
promotora de absoro
Os complexos de incluso no estado lquido foram preparados pelo mtodo de
solubilidade de fases, segundo Higuchi & Connors, (1965). A estequiometria obtida
para o complexo de incluso formados em soluo foi de 1:1 e 1:2 e as constantes de
estabilidade calculadas foram de 124,84 M
-1
e 11,47 M
-1
, demonstrando uma
adequada associao do frmaco com a ciclodextrina escolhida, tornando-se possvel
promover a solubilizao em gua do MCZ pela incluso na cavidade da ciclodextrina
seleccionada. As tcnicas de malaxagem, co-evaporao, atomizao e liofilizao
foram utilizadas para a obteno dos complexos slidos e as tcnicas de calorimetria

diferencial de varrimento (DSC), difrao de Raio-X (RX), microscopia electrnica de
varrimento e o espectroscopia de infravermelho, permitiram a caracterizao fsico-
qumica dos complexos formados por incluso do MCZ em MBCD.
A cedncia de formulaes tpicas ou libertao in vitro pode ser determinada
por estudos em clulas de difuso equipadas com membranas sintticas. O teste
recomendado pela agncia americana, Food and Drug Administration (FDA), para
determinao de equivalncia entre duas formulaes aps mudanas especficas,
como fornecedor e equipamentos. A sua aplicao na determinao de uniformidade
entre lotes e no desenvolvimento de formulaes tambm amplamente aceite.
A quantidade de frmaco presente nas camadas da mucosa depender da
eficincia relativa dos processos de libertao do frmaco da formulao semi-slida
que o contm e de penetrao da substncia activa.
A difuso do MCZ da formulao desenvolvida e de uma formulao existente
no mercado foi avaliada in vitro, utilizando clulas de difuso de Franz modificadas.
Dos resultados obtidos, possvel concluir que o hidrogele formulado com o
complexo MCZ/MCD, atravs do mtodo de liofilizao, garante uma quantidade
semelhante de MCZ disponvel no local de aco, quando comparado com a
formulao disponvel no mercado Portugus.
ABSTRACT

Most drugs do not have sufficient solubility in water and the traditional
formulations for insoluble drugs involve a combination of organic solvents, surfactants,
and extreme conditions of pH, which often can cause irritation or other adverse
reactions. It is known that a drug needs to have a certain level of solubility in water to
be promptly released in the cell membrane and yet hydrophobic enough to cross the
membrane.
One of the most interesting properties of the cyclodextrins is their ability to
promote the release of drugs through biological membranes. The molecules of
cyclodextrins are relatively large and with an outer surface hydrated. Hence, under
normal conditions the molecules of cyclodextrins permeate the biological membranes
with considerable difficulty.
The lipophilic membrane has a relatively low affinity for the molecules of
hydrophilic cyclodextrins and therefore they are outside the membrane, for example, in
aqueous bases (such as creams or gels hydrophilics) saliva or fluid tear. Promoters of
conventional penetration, such as alcohols and fatty acids, disrupt the lipid layers of
biological barrier.
The cyclodextrins, on the other hand, act as promoters to the absorption, by
increasing the availability of the drug on the surface of the biological barrier. The
cyclodextrins have been used in semi-solid formulations to increase the solubility and
stability of the substances in water, as well as promote the release of drugs through
biological membranes.
The yeasts are opportunistic fungi responsible for most of fungal infections in
humans. A Candida albicans is considered one of the most pathogenic yeasts to
humans, causing a large number of opportunistic infections.
The oral candidiase is very common in elderly people who often use dental
prostheses and in immuno-compromised. The imidazolic antifungal agents such as
Miconazole (MCZ) are active against all fungi that cause infections of the skin and
mucosal surface. The main action of these imidazolic agents is located at the cell
membrane. Route cytochrome P-450, dependent on C14 lanosterol dimetilase is
inhibited, and this is responsible for the production of ergostero, an essential
component of the fungus cell wall. Most mycoses mucocutaneous surface can be
treated with topical medications.
In the first part of the present work, the water insoluble and antifungal drug,
miconazole was complex with a modified cyclodextrin; methyl--cyclodextrin (MBCD),
followed by the characterisation ofthe attained complex.
In the second part, a hydrophilic semi-solid formulation with a greater
adhesiveness was prepared, which incorporated the cyclodextrin as promoter.
This formulation was intended for the treatment of oral candidiase, facilitating
the administration of the miconazole to people who make use of dental prostheses.
Thus evaluate the inclusion of MCZ in -cyclodextrin modified to methyl--cyclodextrin
(MBCD), the rheological characteristics of the gel and the spread of the drug as well as
the influence of cyclodextrin as a promoter of absorption
The complexes of inclusion of MCZ in cyclodextrins were prepared by the
method of solubility of phases, according Higuchi & Connors, (1965). The stechiometry
obtained for the complex was 1:1 and 1:2 and stability constant was calculated from
124.84 M
-1
and 11.47 M
-1
, demonstrating an appropriate combination of the drug with
the chosen cyclodextrin, allowing the water solubilization of the MCZ.
The techniques of kneaded, co-evaporation, atomization and lyophilization were used
to produce the complex solid and the techniques of differential scanning calorimetry
(DSC), the X-ray diffraction (RX), and scanning electron microscopy (SEM) and fourier
transform infrared spectroscopy (FITR), allowed the characterization physic chemistry
of the inclusion complex MCZ / MBCD formed.
The drug release from topical formulations or in vitro release can be determined
through studies in diffusion cells equipped with synthetic membranes. The test is
recommended by the American agency, Food and Drug Administration (FDA) for the
determination of the equivalence between two formulations after specific changes, Its
application in the determination of the uniformity between lots and in the development
of formulations is also widely accepted.
The total amount of drug present in the mucosa layers depends on the
efficiency with which the drug is released from the semi-solid formulation and of the
penetration of the active substance.
The aim of the in vitro evaluation here used was to evaluate the MCZ diffusion
from both formulations, optimized and commercially available, using modified Franz
cells.
The results obtained with this technique showed that the gel formulated with the
complex MCZ/MCD by lyophilisation demonstrated a similar amount of available MCZ
at the target site, when compared to the commercially available formulation, containing
the non-complexed MCZ.
ABREVIATURAS
Lista de Abreviaturas e Siglas

Carb Carbopol
CD Ciclodextrina
CDs Ciclodextrinas
CGTase Ciclodextrina--glicosiltransferase
COE Co-evaporado
DIMEB Dimetil--ciclodextrina
DSC Calorimetria Diferencial de Varrimento
EHL Equilbrio hidrfilo/lipfilo
FDA - Food and Drug Administration
FTIR - Espectroscopia de Infravermelho com transformadas de Fourier (Fourier
transform infrared spectroscopy)
HIV Vrus da imunodeficincia
HPCD - Hidroxipropil--ciclodextrina
K
S
Constante de estabilidade
LF Liofilizao
MCZ Miconazol
MLX Malaxagem
MCD - Metl--ciclodextrina
P407 Polaxamero 407, (Pluronic F127)
PBS Tampo fosfato/salina
RDC Grau relativo de cristalinidade
RMCD - Randomil--ciclodextrina
RX Difraco de Raio-X
SBECD Sulfobutileter--ciclodextrina
SEM - Microscopia electrnica de varrimento (scanning electron microscopy)
SIDA Sndrome da imunodeficincia adquirida
SP Secagem por pulverizao
TRIMEB Trimetil--ciclodextrina
USP - United States Pharmacopoeia
INDICE DE FIGURAS

Figura 01 Possveis mecanismos atravs dos quais a quimioterapia agrava a candidiase
oral.
19
Figura 02 Factores locais de risco no desenvolvimento de candidiase orofaringea. 21
Figura 03 Factores sistmicos de risco no desenvolvimento de candidiase orofaringea. 21
Figura 04 Estrutura do Miconazol. 25
Figura 05 Incio do artigo de Villier em Comptes Rendus da Academia de Cincias de
1891.
29
Figura 06 A capa do livro de Friedrich Cramer Einschlussverbindungen (compostos de
incluso), publicado em Berlim em 1954, onde so descritos vrios tipos de
compostos que podem formar complexos de incluso, incluindo ciclodextrinas.
30
Figura 07 A primeira pgina das duas primeiras patentes de ciclodextrinas intitulada
Mtodos para preparao de compostos de incluso de compostos orgnicos
fisiologicamente activos. As patentes foram submetidas a 5 de Novembro de
1953 na Alemanha por Karl Freudenberg Friedrich Cramer and Hans Plieninger.
31
Figura 08 Estrutura qumica da -Cyclodextrina. 33
Figura 09 Estrutura geral da ciclodextrinas. Os derivados alfa, beta e gama so definidos
por n - 1, 2 e 3, respectivamente.
37
Figura 10 Representao esquemtica da estrutura tridimensional das CDs, mostrando as
caractersticas estruturais definidas pelo arranjo das unidades de glicose.
37
Figura 11 Diferentes dimenses da -Cyclodextrina, -Cyclodestrina e -Cyclodextrina. 38
Figura 12 Complexo de incluso frmaco--ciclodextrina. 46
Figura 13 Representao esquemtica da formao do complexo de incluso. O cido
saliclico a molcula hspede.
49
Figura 14 Permeao do frmaco atravs da membrana biolgica em veculo aquoso da
ciclodextrina (C Ciclodextrina; D Frmaco).
59
Figura 15 Representao do Diagramas de Fases. 70
Figura 16 Modelos cinticos que se estabelecem durante a formao, em soluo, de
complexos de incluso. S
0
e S
c
correspondem respectivamente a solubilidade
da molcula hspede na ausncia de CD e o limite de solubilidade do complexo
formado. K
c
representa a constante de estabilidade do complexo formado.
71
Figura 17 Eficincia de complexao de um complexo frmaco-CD de estequiomtrica
1:1.
72
Figura 18 Diagrama de solubilidade de fases do sistema MC/MCZ em gua destilada. 77
Figura 19 Diagrama de solubilidade de fases do sistema HPCD/MCZ em gua destilada. 78
Figura 20 Microscopia electrnica de varrimento: (a) MCZ; (b) MCD; (c) MF; (d) MLX; (e)
COE; (f) SP e (g) LF.
92
Figura 21 Termograma de DSC: (a) MCZ; (b) MCD; (c) MF; (d) MLX; (e) COE; (f) SP e
(g) LF.
94

14
Figura 22 Perfil do espectro de FTIR do Miconazol. 98
Figura 23 Perfil dos espectros de FTIR da (a) MCD, (b) MF; (c) MLX; (d) COE; (e) SP e
(f) LF.
99
Figura 24 Difractogramas de raio X: (a) MCZ; (b) MCD; (c) MF; (d) MLX; (e) COE; (f) SP
e (g) LF.
100
Figura 25 Solubilidade aquosa do MCZ. 103
Figura 26 Solubilidade do MCZ em PBS 6.8. 103
Figura 27 Termograma de DSC dos polmeros (a) Carbopol; (b) Pluronic; (c)
Carb0,5%Plur20%; (d) Carb1%Plur20% e (e) Carb1,5%Plur20%.
119
Figura 28 Termograma de DSC dos polmeros (a) Liofilizado; (b) Carb1%Plur20% e (e)
Mistura Carb1,0%Plur20% e Complexo Liofilizado.
120
Figura 29 Grfico da reologia dos hidrogis de (a) Carbopol 1%; (b) Pluronic 20%; (c)
Pluronic 20%:Carbopol 0,5% e (d) Pluronic 20%:Carbopol 1,0%.
121
Figura 30 Viscosidade do Hidrogele de Carbopol 1%. 122
Figura 31 Viscosidade do Hidrogele de Pluronic 20%. 122
Figura 32 Viscosidade do Hidrogele de Pluronic 20%:Carbopol 0,5%. 123
Figura 33 Viscosidade do Hidrogele de Pluronic 20%:Carbopol 1%. 123
Figura 34 Grfico da firmeza dos hidrogeles base a 25 2C. 126
Figura 35 Grfico da adesividade dos hidrogeles base a 25 2C. 126
Figura 36 Grfico da firmeza dos hidrogeles base a 37 2C. 127
Figura 37 Grfico da adesividade dos hidrogeles base a 37 2C. 127
Figura 38 Grfico da firmeza dos hidrogeles a 25 2C. 129
Figura 39 Grfico da adesividade dos hidrogeles a 25 2C. 129
Figura 40 Grfico da firmeza dos hidrogeles a 37 2C. 130
Figura 41 Grfico da adesividade dos hidrogeles a 37 2C. 130
Figura 42 Aspectos dos hidrogeles. 131
Figura 43 (A)Ilustrao esquemtica da clula de Franz; (B) compartimento dador padro,
(C) compartimento dador clula de Franz modificada.
138
Figura 44 Esquema do sistema fechado de retirada de amostra. 144
Figura 45 Perfil de Libertao in vitro dos hidrogeles em Membrana de Dilise. 148
Figura 46 Perfil de Libertao in vitro do hidrogele em Membrana de Polietersulfona 148
Figura 47 Curva de calibrao A, de miconazol em etanol/gua (1:1), a 272 nm. 156
Figura 48 Curva de calibrao B de miconazol em PBS/etanol (1:1), a 273 nm. 156
Figura 49 Grfico distribuio do erro residual, curva A. 160
Figura 50 Grfico distribuio do erro residual, curva B. 160






15
INDICE DE TABELAS

Tabela 01 Caractersticas das principais formas de candidiase. 22
Tabela 02 Especialidades farmacuticas contendo complexos de incluso frmaco -
CD.
36
Tabela 03 Caractersticas fsico qumicas da -, - e -ciclodextrina. 39
Tabela 04 Exemplos da utilizao de ciclodextrinas em transdrmicos. 56
Tabela 05 Exemplos de utilizao de derivados de ciclodextrinas em transdmicos. 59
Tabela 06 Solubilidade mxima do MCZ atingido nas solues de CDs.Parmetros
derivados dos respectivos diagramas de fases.
79
Tabela 07 Nmero de onda experimental e terica (FTIR) do miconazol. 97
Tabela 08 Intensidade dos picos e valores de RDC para os sistemas MCZ/MCD. 101
Tabela 09 Solubilidade aquosa dos complexos com MCZ a 25C 1 aps 48 horas. 103
Tabela 10 Solubilidade dos complexos, em PBS 6.8, a 25C 1 aps 48 horas. 103
Tabela 11 Formulao dos hidrogeles I. 116
Tabela 12 Formulao hidrogeles II. 117
Tabela 13 Valores comparativos de (f
1
) e (f
2
). 147
Tabela 14. Valores de Eficincia de Dissoluo. 147
Tabela 15 Dados utilizados e obtidos para a verificao da preciso do mtodo de UV
para anlise do MCZ, para curva A, (Etanol/gua).
158
Tabela 16 Dados utilizados e obtidos para a verificao da preciso do mtodo de UV
para anlise do MCZ para curva B (PBS/Etanol).
159













16
INTRODUO ........................................................................................................................................ 18
PATOLOGIA ............................................................................................................................................ 18
ANTIFNGICOS ...................................................................................................................................... 23
Mecanismo de aco ......................................................................................................................... 24
MICONAZOL ........................................................................................................................................... 25
FARMACODINMICA .............................................................................................................................. 25
Farmacocintica do gel oral de miconazol ....................................................................................... 26
CICLODEXTRINAS ................................................................................................................................... 29
Generalidades ................................................................................................................................... 32
Propriedades das Ciclodextrinas ...................................................................................................... 37
Factores que influenciam a formao do complexo de incluso ...................................................... 39
Consideraes Toxicolgicas ........................................................................................................... 42
Derivados das ciclodextrinas ............................................................................................................ 44
Derivados metilados ......................................................................................................................... 44
Formao de Complexos de Incluso ............................................................................................... 45
Formao de complexos de incluso em soluo ............................................................................. 51
Degradao, Absoro e Metabolismo das Ciclodextrinas .............................................................. 52
Ciclodextrinas na administrao drmica ........................................................................................ 53
Ciclodextrinas como promotores de absoro.................................................................................. 55
OBJECTIVO GERAL ................................................................................................................................ 60
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ........................................................................................................... 61
FORMAO DOS COMPLEXOS DE INCLUSO EM SOLUO ................................................ 69
INTRODUO ........................................................................................................................................ 69
MATERIAL E MTODOS .................................................................................................................. 75
MATERIAL .............................................................................................................................................. 75
MTODOS .............................................................................................................................................. 75
Doseamento espectrofotomtrico do MCZ ........................................................................................ 75
Diagrama de solubilidade de fases ................................................................................................... 76
Deteco no ultravioleta ................................................................................................................... 76
RESULTADOS E DISCUSSO ........................................................................................................ 77
ESTUDO DE SOLUBILIDADE DE FASES................................................................................................... 77
CONCLUSO ..................................................................................................................................... 81
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS................................................................................................ 82
PREPARAO E CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DOS COMPLEXOS DE
INCLUSO NO ESTADO SLIDO ...................................................................................................... 84
INTRODUO ........................................................................................................................................ 84
MATERIAL E MTODOS .................................................................................................................. 85
MATERIAL .............................................................................................................................................. 85
MTODOS .............................................................................................................................................. 85
Mistura fsica .................................................................................................................................... 85
Malaxagem........................................................................................................................................ 85
Co-evaporao .................................................................................................................................. 85
Secagem por pulverizao ................................................................................................................ 86
Liofilizao ....................................................................................................................................... 86
Solubilidade dos complexos de incluso ........................................................................................... 87
MTODOS DE CARACTERIZAO FSICO-QUIMICA.............................................................. 87
Microscopia electrnica de varrimento (SEM) ................................................................................. 87
Calorimetria diferencial de varrimento (DSC) ................................................................................. 88
Difraco de raios X (RX) ................................................................................................................ 88
Espectroscopia de infravermelho com transformadas de Fourier (FTIR) ........................................ 89
RESULTADOS E DISCUSSO ........................................................................................................ 89
Preparao dos complexos no estado slido .................................................................................... 89
Microscopia electrnica de varrimento (SEM) ................................................................................. 90
Calorimetria diferencial de varrimento (DSC) ................................................................................. 93
Espectroscopia de infravermelho com transformadas de Fourier (FTIR) ........................................ 95
Difraco de raios X (RX) ................................................................................................................ 99
Solubilidade aquosa dos complexos de incluso ............................................................................ 102

17
CONCLUSO ................................................................................................................................... 104
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.............................................................................................. 105
DESENVOLVIMENTO E ESTUDO REOLOGIA DE UMA FORMULAO PARA
APLICAO BUCAL ........................................................................................................................... 109
INTRODUO ...................................................................................................................................... 109
GELES .................................................................................................................................................. 111
PLURONIC ............................................................................................................................................ 113
CARBOPOL .......................................................................................................................................... 114
OBJECTIVO ...................................................................................................................................... 115
MATERIA E MTODOS .................................................................................................................. 115
Material .......................................................................................................................................... 115
Mtodos ........................................................................................................................................... 115
Preparao dos Hidrogeles ............................................................................................................ 115
Hidrogele de Carbopol (A) ............................................................................................................. 115
Hidrogele Pluronic (B) ................................................................................................................... 115
Hidrogele Pluronic-Carbopol (C1; C2; C3) ................................................................................... 116
Hidrogeles [MCZ 2% (D);MBCD (E), Mistura Fsica (F) e Complexo (G)] ................................. 116
Estudo da compatibilidade dos excipientes presentes nos hidrogeles ............................................ 117
Caracterizao da Viscosidade ...................................................................................................... 117
Anlise da Textura .......................................................................................................................... 118
Anlise estatstica ........................................................................................................................... 118
RESULTADOS E DISCUSSO ...................................................................................................... 119
Calorimetria diferencial de varrimento (DSC) ............................................................................... 119
Viscosidade ..................................................................................................................................... 120
Anlise da textura dos hidrogeles base ........................................................................................... 123
Textura dos hidrogeles .................................................................................................................... 127
Aspecto ............................................................................................................................................ 130
CONCLUSO ................................................................................................................................... 133
REFERENCIAS BIBLIOGRFICAS.............................................................................................. 134
ESTUDO DE LIBERTAO ............................................................................................................... 136
INTRODUO .................................................................................................................................. 136
OBJECTIVO ...................................................................................................................................... 141
MATERIAL ........................................................................................................................................ 141
MTODOS ......................................................................................................................................... 142
LIBERTAO IN VITRO ATRAVS DE MEMBRANA SINTTICA .............................................................. 142
Meio receptor .................................................................................................................................. 142
Curva de Calibrao....................................................................................................................... 142
Preparao das membranas sintticas ........................................................................................... 143
Membrana de dilise Visking ...................................................................................................... 143
Membrana de polieterssulfona........................................................................................................ 143
Montagem das clulas de difuso de Franz .................................................................................... 143
Anlise dos dados da libertao ..................................................................................................... 144
RESULTADOS E DISCUSSO ...................................................................................................... 145
CONCLUSO ................................................................................................................................... 149
REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS.............................................................................................. 150
ANEXO I ................................................................................................................................................. 155
ANEXO II ............................................................................................................................................ 161
ANEXO III .............................................................................................................................................. 165
ANEXO IV .......................................................................................................................................... 168
Introduo
18
INTRODUO

Patologia

As leveduras so fungos oportunistas, que se apresentam sob a forma unicelular,
responsveis pela maior parte das infeces fngicas nos seres humanos. Durante as
ltimas dcadas, emergiram gerando um aumento da incidncia de mortes,
especialmente em doentes com o sistema imunitrio comprometido como o caso dos
doentes com SIDA, doentes espera de um transplante e que esto passando por
algum tipo de quimioterapia com anti-tumorais (Chang, 2003).
Os factores de risco (Figuras 01, 02 e 03) que predispem os doentes a este tipo
de infeces incluem a diabetes mellitus, o uso de antibiticos de largo espectro e os
frmacos psicotrpicos, os tratamentos de quimioterapia de durao prolongada, o uso
crnico de corticoterapia por inalao oral, a imunossupresso do sistema imunitrio
seguido de um transplante de rgos, os procedimentos cirrgicos resultantes de
tratamentos hospitalares intensivos e prolongados, a hemodilise e a dilise
interperitoneal em doentes imunocomprometidos.
A infeco por leveduras tem tambm estado associada utilizao de
dispositivos mdicos tais como implantes, cateteres vasculares, prteses dentrias,
lentes de contacto, bypasses para o corao, ligaes artificiais, discos intervertebrais,
entre outros (Brajtburg, 2003).
Autpsias efectuadas em doentes imunocomprometidos revelaram que pelo
menos metade, estavam infectados com espcies de Cndida sp. Das leveduras mais
patognicas a Candida albicans considerada a mais crtica para o ser humano,
causando um grande nmero de infeces oportunistas que em doentes
imunocomprometidos podem ser fatais. A candidase oral uma das mais comuns e
tratveis das infeces da mucosa oral observadas em pessoas com infeces
humanas pelo Vrus da imunodeficincia (HIV) ou infeco da Sndrome de
Introduo
19
imunodeficincia adquirida (SIDA) e pode ser uma fonte significativa de frequente
desconforto oral, dor, perda do paladar, e averso aos alimentos (Patton, 2001).
Esta levedura um organismo comensal estando presente no ser humano sem
causar infeces, coexistindo com o hospedeiro. Normalmente atinge os extremos da
faixa etria (crianas e idosos). Pode colonizar o tracto intestinal, oral, vaginal,
respiratrio, urinrio, sanguneo, entre outros. Contudo, num paciente
imunocomprometido, esta levedura pode causar srias infeces nas mucosas, que
incluem candidiases vaginais e infeces orais ou sistmicas (O'Sullivan, 2000).

















Figura 01. Possveis mecanismos atravs das quais a quimioterapia agrava a candidiase
oral (Adaptado: Samaranayake, 1990).


Doena
maligna

Quimioterapia

Medula ssea

Mucosa Oral

Antibioterapia

Neutropenia
Proliferao
celular
Reduo da
flora normal

Atrofia celular

Candidiase
Inflamao e ou
ulcerao da mucosa
Susceptilidade Candidiase
Introduo
20
A candidiase representa a condio patolgica mais frequente, dentro do grupo de
leses brancas da mucosa oral (Goodman e Gilman, 1996). A candidiase oral muito
comum tambm em pessoas idosas que normalmente usam prteses dentrias. Num
estudo realizado na Dinamarca demonstrou-se que, cerca de 60% dos indivduos com
mais de 60 anos portadores de placas dentrias sofriam de estomatites dentrias
associadas a candidiase oral (Ellepola, 1998). Estas leses brancas na orofaringe e
esofaringe, conhecidas popularmente como sapinho, podem ser acompanhadas da
queilite angular e glossite oral (Budtz-Jorgensen, 1990a).
A queilite angular uma variante da candidase que atinge as comissuras
labiais. frequente em pacientes idosos que fazem uso de prtese dentria por perda
da dimenso vertical dos lbios. Caracteriza-se clinicamente por presena de reas de
atrofia e hiperemia das comissuras labiais, s vezes acompanhadas de dor ardor e
sangramento local. O tratamento feito com antifngicos de uso tpico, como o
miconazol em gel, e pela correco da dimenso vertical bucal com melhor adaptao
da prtese dentria (Epstein, 1990).
Os recm nascidos so mais susceptveis a candidiase orofarngea em virtude do
seu sistema imunitrio ser ainda imaturo. A infeco geralmente adquirida durante o
parto pela me que pode estar com candidase vaginal, manifestando-se na primeira
semana aps o nascimento. A exposio Candida albicans pelos recm nascidos
pode tambm ocorrer devido a biberons infectados pela pele das enfermeiras ou da
me levando assim a obteno da candidiase orofaringea. Essa infeco geralmente
benigna e, em geral, pode ser tratada de forma eficaz com agentes tpicos (Epstein,
1998).
Clinicamente pode apresentar-se nas formas pseudomembranosa, forma mais
comum, atrfica aguda e crnica e hiperplsica. A candidase mucocutnea manifesta-
se como a forma pseudomembranosa com caracterstica familiar autossmica
recessiva. A tabela 1 caracteriza as principais formas de candidase.

Introduo
21


Figura 02. Factores locais de risco no desenvolvimento de candidiase orofaringea (Adaptado
Budtz-Jorgensen, 1990b)


Figura 03. Factores sistmicos de risco no desenvolvimento de candidiase orofaringea
(Adaptado Budtz-Jorgensen, 1990b)



FACTORES LOCAIS
Xerostomia por:Radioterapia; Quimioterapia e
Sndrome de Sjogrens
Antibioterapia de largo espectro
e esterides

Dieta com alto teores de hidratos de carbono

LeucoplasiaCancro oral

Prteses dentrias

Tabagismo

FACTORES SISTMICOS
Recm nascidos
Idade avanada
Leucemia
Agranulocitose
Imunosupresso (Sndrome da Imunodeficincia
Adquirida, uso de esterides)

Deficincia nutricional (vitamina B12, folato, ferro)

Diabetes
Introduo
22
Diversos agentes sistmicos e no-sistmicos (tpicos) esto disponveis para
tratar candidase orofargea. Agentes tpicos so o principal elemento da terapia,
especialmente em casos simples. Sempre que possvel as preparaes tpicas devem
ser utilizadas antes dos frmacos antifungicos sistmicos (Datry, 1993).

Tabela 01: Caractersticas das principais formas de candidiase (Adaptado: Goodman e Gilman,
1996).
Tipo de Leso Aspectos clnicos Factores associados
Pseudomembranosa Placas brancas e aderentes sobre a
mucosa, destacveis, deixando o leito
com sangue. Ocorrem principalmente
em mucosa de cavidade oral, orofaringe
e poro lateral do dorso da lngua.
Raramente dolorosa.
Factores locais e
sistmicos
Atrfica aguda Eritema local ou difuso, doloroso. reas
de despapilao e desqueratinizao
em dorso da lngua, deixando-a
dolorosa, edemaciada e eritematosa.


Antibioterapia
Atrfica crnica Eritema difuso com superfcie
aveludada, associada forma
pseudomembranosa, ou como queilite
angular.
Afecta 65% da populao
geritrica com prtese
dentria.

Hiperplsica Infeco crnica, aspecto leucoplsico,
espessado, no destacvel em mucosa
oral, palato e lngua (principalmente)
No apresentam factores
associados






Introduo
23
Antifngicos

Os agentes antifngicos eram pouco conhecidos at 1970, e apresentavam
muitas restries relativamente ao seu uso, devido toxicidade, estreito espectro de
actividade, baixa actividade farmacolgica e dificuldades na administrao parenteral.
Os imidazlicos, uma nova classe de agentes antifngicos, foi introduzida na
teraputica, pela sua versatilidade de administrao, baixa toxicidade e abrangente
espectro de actividade, sendo pouco frequente, a resistncia desenvolvida pelos
fungos a estes agentes (Fitzpatrick et al., 1997).
Os agentes imidazlicos possuem actividade e espectro similar, so activos
contra todos os fungos causadores de infeces superficiais de pele e mucosas. So
muito eficazes, poucos txicos e com baixos nveis de resistncia (Fuchs, 1998).
A aco principal de um frmaco imidazlico localizada ao nvel de
membrana celular. A via citocromo P-450, dependente de C14 lanosterol dimetilase,
inibida, e esta a responsvel pela produo de ergosterol que componente
necessrio na constituio da parede celular do fungo (Vanden, 1985).
A terapia com frmacos imidazlicos est comercialmente disponvel para uma
variedade de vias de administrao: parenteral, intravenosa, oral ou tpica.
Os vrios imidazis e vias de administrao, apresentam no entanto diferentes
indicaes e toxicidades, dependendo da severidade e do tipo de dermatfito. A
maioria das micoses superficiais mucocutneas pode ser tratadas com medicamentos
tpicos, sendo necessrios produtos sistmicos, apenas em algumas situaes
(Pershing, 1994).
Actualmente existem vrios tipos de imidazis tais como o tiabendazol,
miconazol, clotrimazol, econazol, sulconazol e o cetoconazol (Martindale, 1993).
O antifngico miconazol mostrou-se ser eficaz em pacientes com candidiases
orofarngea e esofarngea (Goldstein, 1993). Quando os agentes tpicos no podem
controlar eficazmente a candidase orofarngea, combina-se a terapia tpica com um
Introduo
24
agente sistmico, assegurando uma dose mais baixa e menor tempo de tratamento
(Epstein, 1990).
Os compostos imidazlicos, so os mais preferidos nas micoses cutneas e de
mucosas, mas, uma efectiva terapia requer que a substncia activa seja libertada no
stio de infeco numa adequada concentrao para produzir um efeito farmacolgico
eficaz (Fuchs, 1998).
Mecanismo de aco

Os azis tm como alvo a membrana celular dos fungos. Os polienos ligam-se a
uma poro esterol, basicamente o ergosterol, presente na membrana de fungos
sensveis, formando poros ou canais. O resultado um aumento na permeabilidade da
membrana que permite o extravasamento de diversas molculas pequenas, levando
morte celular. Os azis so compostos totalmente sintticos. O mecanismo de aco
destes frmacos baseia-se na inibio da esterol-14--desmetilase, um sistema
enzimtico microssomal dependente do citocromo P450, prejudicando a sntese do
ergosterol na membrana citoplasmtica e levando a uma acumulao de 14--
metilesteris. Esses metilesteris no possuem a mesma forma e propriedades fsicas
que o ergosterol e levam formao da membrana com propriedades alteradas, que
no desempenha as funes bsicas necessrias ao desenvolvimento do fungo. Os
azis causam menos reaces adversas que a anfotericina B, mas so menos
potentes que esta. Podem ter aco fungisttica ou fungicida. O uso excessivo dos
azis levou ao aparecimento de resistncia em espcies susceptveis. Alm disso, os
azis ainda apresentam a desvantagem da resistncia cruzada (Goodman e Gilman,
1996; Williams e Lemke, 2002).



Introduo
25
Miconazol

O Miconazol (MCZ) apresenta-se como um p branco cristalino, muito pouco
solvel na gua e muito solvel no clorofrmio, com ponto de fuso entre 83 a 87
(British Pharmacopoeia, 1998). Possui forma molecular C
18
H
14
Cl
4
N
2
0 e peso molecular
de 416,13 g/mol (Merck Index, 2001). O grupo imidazlico presente na sua estrutura
est sujeito a protonao, com pka de aproximadamente 6,7. A sua estrutura est
representada na Figura 04.


Figura 04.Estrutura do Miconazol

A designao comum do miconazol 1-[2-(2,4-Diclorofenil)-2-[(2,4-diclorofenil)-
metoxi]-etil]-1H-imidazol (Merck ndex, 2001).

Farmacodinmica
O Miconazol possui atividade antifngica contra os dermatfitos e leveduras
comuns assim como actividade antibacteriana contra certos bacilos e cocos gram-
positivos.
Introduo
26
A sua actividade traduzida pel inibio da biossntese de ergosterol nos
fungos e na mudana da composio dos componentes lipdicos das membranas,
resultando em necrose da clula fngica.
Farmacocintica do gel oral de miconazol
Absoro
O miconazol possui absoro sistmica aps administrao sob a forma de gel
oral. A administrao da dose de 60 mg de miconazol em gel oral resulta em pico de
concentrao plasmtica de 31 a 49 ng/mL, ocorrendo aproximadamente duas horas
aps a aplicao.
Distribuio
O miconazol absorvido liga-se s protenas plasmticas (88,2%),
principalmente albumina srica e clulas vermelhas (10,6%).
Metabolismo e eliminao
A poro absorvida de miconazol extensivamente metabolizada; menos de
1% da dose administrada excretada na urina inalterada. A semi-vida final de
miconazol no plasma de 20 - 25 horas na maioria dos pacientes. A semi-vida de
eliminao similar nos pacientes com insuficincia renal. A concentrao plasmtica
de miconazol reduzida moderadamente (aproximadamente 50%) durante a
hemodilise.
Interaces medicamentosas
O Miconazol pode inibir o metabolismo de frmacos metabolizados pelo
sistema de enzimas CYP3A4 e CYP2C9 podendo resultar num aumento e/ou
prolongamento dos seus efeitos, incluindo efeitos adversos.
Introduo
27
O Miconazol utilizado por via oral contra-indicado em co-administrao com as
seguintes drogas que so metabolizadas pelo CYP3A4:
- Substncias que prolongam o intervalo QT: astemizol, bepridil, cisaprida, dofetilida,
halofantrina, mizolastina, pimozida, quinidina, sertindola e terfenadina;
- Alcalides de ergot; - inibidores de HMG-CoA redutase como sinvastatina e
lovastatina; - triazolam e midazolam oral.
Quando o Miconazol por via oral co-administrado com os seguintes medicamentos,
deve-se ter cuidado com um possvel aumento ou prolongamento dos efeitos
teraputicos e/ou efeitos adversos. Se necessrio, as doses devem ser reduzidas e,
se apropriado, os nveis plasmticos monitorados:
- Produtos sujeitos ao metabolismo do CYP2C9
- Anticoagulantes orais, como varfarina;
- Hipoglicemiantes orais, como sulfonilurias;
- Fenitona.
- Outros medicamentos sujeitos ao metabolismo pelo CYP3A4:
- Inibidores da protease do HIV, como saquinavir,
- Certos agentes antineoplsicos, como alcalides da vinca, busulfan e docetaxel;
- Certos bloqueadores de canal de clcio, como diidropiridinas e verapamil;
- Certos agentes imunossupressores: ciclosporina, tacrolimus e sirolimus (rapamicina);
Introduo
28
- Outros: alfentanila, alprazolam, brotizolam, buspirona, carbamazepina, cilostasol,
disopiramida, ebastina, metilprednisolona, midazolam IV, reboxetina, rifabutina,
sildenafil e trimetrexato (Bulrio E. Anvisa, 2008)
O miconazol administrado tambm por via vaginal, sistmica, drmica e
quando oral para tratamento das infeces do tracto gastrintestinal. Possui semi-vida
plasmtica curta e deve ser administrado de oito em oito horas. Atinge concentraes
teraputicas nos ossos, nas articulaes e no tecido pulmonar, mas no no sistema
nervoso central. inactivado pelo fgado. Os efeitos adversos so relativamente raros,
e os mais comuns consistem em distrbios gastrintestinais.


















Introduo
29
Ciclodextrinas

A primeira descrio relacionada com o isolamento de substncias hoje
conhecidas por ciclodextrinas (CDs) de que h memria data de 1891, tendo sido
realizada por Villiers (Villiers, 1891), (Figura 05. Este investigador francs isolou uma
pequena quantidade de um composto cristalino, a partir de um meio de cultura de
Bacillus amylobacter contendo amido, o qual designou por cellullosine devido a forte
semelhana desta substncia isolada com a celulose.


Figura 05. Incio do artigo de Villier em Comptes Rendus da Academia de Cincias de 1891
(Fonte: Loftsson e Duchne, 2007)

Quinze anos mais tarde, um microbiologista austraco, Franz Schardinger,
(Schardinger, 1903) deu um impulso no desenvolvimento das ciclodextrinas, ao
caracterizar a substncia cristalina isolada por Villier como sendo uma mistura de dois
oligossacardeos cclicos, os quais designou por -dextrina cristalina e -dextrina
cristalina, e foi ainda responsvel pela primeira descrio detalhada da preparao e
isolamento destes oligossacardeos cclicos. Por essa mesma razo, as CDs so
tambm conhecidas por dextrinas de Schardinger, cicloamiloses ou cicloglucanos
(Bekers et al., 1991;Mosher e Thompson, 2002).
Havia que esperar pela metade da dcada de trinta para que Freudenberg e
seus colaboradores descrevessem a estrutura cclica das ciclodextrinas isoladas por
Schardinger (Freudenberg e Cramer, 1948).
Introduo
30
No incio da dcada de 50 dois grupos liderados por French e Cramer
comeam a trabalhar intensamente na produo enzimtica das ciclodextrinas, no
fraccionamento e na caracterizao das suas propriedades fsicas e qumicas.
French (French, 1957) descobriu a existncia de ciclodextrinas compostas por
um maior nmero de oligossacardeos, enquanto o grupo de Cramer (Cramer, 1954)
se centrou nos estudos da capacidade de complexao.
No livro Einschlussverbindungen (Figura 06), Cramer descreve a estrutura
bsica e as caractersticas fsico-qumicas da -, -, e - ciclodextrina, incluindo a
estrutura qumica, tamanho da cavidade, solubilidade, reactividade, capacidade de
complexao e o efeito da estabilidade qumica da molcula hspede (Loftsson,
Duchene, 2007).

Figura 06. A capa do livro de Friedrich Cramer Einschlussverbindungen (compostos de
incluso), publicado em Berlim em 1954, onde so descritos vrios tipos de compostos que
podem formar complexos de incluso, incluindo ciclodextrinas (Fonte: Loftsson e Duchne,
2007).

Freudenberg, Cramer e Plininger apresentam o composto em 1953. Esta
patente (Figura 07) engloba praticamente os aspectos mais importantes da aplicao
Introduo
31
das ciclodextrinas na formulao de medicamentos (Freudenberg et al, 1953). Atravs
de vrios exemplos, mostraram que mediante a complexao era possvel proteger
substncias da oxidao, aumentar a solubilidade de frmacos insolveis e reduzir o
peso de substncias volteis.


Figura 07. A primeira pagina das duas primeiras patentes de ciclodextrinas intitulada Mtodos
para a preparao de compostos de incluso de compostos orgnicos fisiologicamente
activos. As patentes foram submetidas a 5 de Novembro de 1953 na Alemanha por Karl
Freudenberg Friedrich Cramer and Hans Plieninger (Fonte: Loftsson e Duchne, 2007).

Contudo, at 1970 as CDs apenas eram produzidas, com um baixo grau de
pureza, em quantidades muito reduzidas e os elevados custos de produo destas
molculas inibiam a sua aplicao generalizada ao nvel industrial. Porm, os avanos
biotecnolgicos das ltimas dcadas resultaram numa melhoria significativa na
obteno de CDs naturais e dos seus derivados, em larga escala, com um elevado
Introduo
32
grau de pureza e a preos competitivos, fomentando uma forte expanso da sua
utilizao no sector farmacutico (Szejtli, 1998).
No final da dcada de 70 os mtodos de preparao das ciclodextrinas em
escala de laboratorial, a sua estrutura, as propriedades fsicas e qumicas, assim como
as caractersticas da complexao j haviam sido elucidados.
Depois dos estudos toxicolgicos adequados provou-se que a toxicidade
atribuda s ciclodextrinas deriva das impurezas arrastadas durante o processo de
elaborao, de uma inadequa forma de administrao e do emprego de doses
extremamente altas. Desde ento o nmero de publicaes relativas as ciclodextrinas
teve um aumento acentuado.
Depois de mais de um sculo aps a sua descoberta e de toda a pesquisa
cientfica que lhes inerente, as ciclodextrinas existem em formulaes farmacuticas
nos mercados dos mais diversos pases, tais como o Japo, os Estados Unidos, o
Brasil, a Argentina, a Alemanha, a Itlia, a Frana, a Blgica, a Holanda, a Suia, a
Sucia, a Dinamarca, a Islndia, a Espanha, Portugal, entre outros (Mosher e
Thompson, 2002). As CDs apresentam actualmente uma boa aceitao e grandes
potencialidades como excipientes nas mais variadas formas farmacuticas (Loftsson,
1998a).

Generalidades

As ciclodextrinas (CDs) so oligossacardeos cclicos (Figura 08), constitudos
por um nmero varivel de unidades de glucose e que se obtm por aco da enzima
ciclodextrina--glicosiltransferase (CGTase) sobre o amido (Szejtli, 1994). As
ciclodextrinas so conhecidas por permitirem a encapsulao molecular de frmacos
com caractersticas hidrofbicas, alterando-lhes a solubilidade, aumentando a
estabilidade e, em alguns casos, melhorando a biodisponibilidade.
Introduo
33

Figura 08. Estrutura qumica da -Cyclodextrina (Adaptado de Szejtli, 1994).

A encapsulao molecular de frmacos pelas ciclodextrinas apresenta-se muito
vantajosa sob o ponto de vista tecnolgico e biolgico na medida em que modifica as
propriedades fsicas, qumicas e biofarmacuticas dos frmacos, sendo facilmente
conseguida e menos dispendiosa do que a encapsulao de frmacos por outros
mtodos. Apesar das variadas aplicaes das ciclodextrinas, aqui sero revistas as
suas aplicaes e as vantagens da sua utilizao em tecnologia farmacutica, em
cosmtica, na indstria qumica e alimentar.
As ciclodextrinas tm sido reconhecidas como um novo grupo de excipientes
farmacuticos teis (Loftsson e Brewster, 1996). As ciclodextrinas e os seus
complexos de incluso podem ser utilizados na preparao de formas farmacuticas
slidas, lquidas e semi-slidas com aplicao nas vias de administrao oral,
parentrica, pulmonar, nasal, bucal, sublingual, rectal, ocular e drmica (Mosher e
Thompson, 2002).



Introduo
34
Formas farmacuticas slidas
Aumento da velocidade e extenso de dissoluo dos frmacos quando
complexados com CDs hidrfilas em consequncia do aumento da sua
solubilidade, molhabilidade e alterao do seu estado cristalino.
Atenuao de sabores e odores desagradveis dos frmacos.

Formas farmacuticas lquidas
Aumento da estabilidade fsica das emulses e suspenses. As CDs presentes
em sistemas termodinamicamente instveis como as suspenses permitem a
diminuio da velocidade de sedimentao das partculas e inibem a
recristalizao de frmacos em cristais polimrficos de menor solubilidade.
Esto, portanto, na origem de um aumento da estabilidade termodinmica
destes sistemas e exercem tambm efeitos positivos na deliquescncia de
substncias higroscpicas, fotlise, volatilidade, etc.
Controlo da natureza tixotrpica de suspenses.

Formas farmacuticas semi-slidas
Modificao das propriedades reolgicas, tais como a consistncia das
pomadas.
Aumento da biodisponibilidade tpica atravs do aumento da libertao do
frmaco a partir da formulao.
Aumento da capacidade absorvente de gua das bases oleosas e emulses do
tipo A/O por CDs hidrfilas.
Modificao da capacidade de intumescimento dos geles.

Formas farmacuticas injectveis
Introduo
35
Reduo da irritao muscular e hemlise induzida por determinados
frmacos.
Obteno de produtos solveis pela preparao de complexos de incluso por
liofilizao. O aumento de solubilidade dos frmacos induzido directamente
pelo aumento da sua solubilidade intrnseca, por consequncia da sua
complexao bem como pela alterao do seu estado cristalino.
Preparao de suspenses para utilizao parentrica com reduo do
tamanho de partcula dos frmacos no complexo de incluso, nomeadamente
pela utilizao de tcnicas de preparao dos complexos como por exemplo a
secagem por pulverizao.

A viabilidade comercial das formulaes farmacuticas de facto inegvel.
Existem numerosas especialidades farmacuticas contendo complexos frmaco-
ciclodextrina nos mercados dos Estados Unidos, Japo e Europa (Tabela 02). Para
alm disso, muitos estudos clnicos esto presentemente em curso, envolvendo
produtos farmacuticos que contm complexos frmaco-ciclodextrina, pelo que se
espera num futuro prximo que o nmero de formulaes farmacuticas contendo CDs
seja ainda francamente superior (Mosher e Thompson, 2002).
Apesar da complexao com CDs resultar geralmente num aumento da
estabilidade fsica e qumica dos frmacos complexados, existem situaes
particulares em que as CDs potenciam a degradao dos frmacos complexados.
Assim, alguns autores demonstraram que as CDs podem potenciar reaces de
hidrlise de determinados frmacos se os grupos sensveis da molcula hspede
sofrerem ataque nucleoflico pelos grupos hidroxlicos da CD (Loftsson e Brewster,
1996).




Introduo
36
Tabela 02. Especialidades farmacuticas contendo complexos de incluso frmaco-CD.
(Adaptada de Brewster e Thompson, 2007; Brewster e Loftsson, 2007).
Complexo frmaco/CD Nome comercial Forma farmacutica Laboratrio/Pas
Alprostadil/CD Caverject Dual Soluo I.V. Pfsier, Europa
PGE1/CD Prostavastin Soluo I.V. Ono, Japo
PG2/CD Prostamon E Comprimido sublingual Ono, Japo
OP-1206/CD Opalmon Comprimido Schwartz, Alemanha
Piroxicam/CD Brexin, Flogene,
Cicladon,..
Comprimido, soluo,
granulado, supositrio
Chiesi, Itlia; Ache, Brasil
Benexate/CD Ulgut Cpsula Teikoky, Japo
Meloxicam/ CD Mobitil Comprimido, supositrio Union Medical
Pharmaceuticals, Egito
Omeprazol/ CD Omebeta Comprimido Betafarm, Europa
Iodine/CD Mena-Gargle Soluo Teikoky, Japo
Dexametasona/CD Glymesason Pomada Fulinaga, Japo
Nitroglicerina/CD Nitropen Comprimido sublingual Nihon kayaku, Japo
Cefotrima-hexetil/CD Pansporin T Comprimido Takeda, Japo
Cefalosporina/CD Meiact Comprimido Meiji, Seika, Japo
cido tiaprofnico/CD Surgamyl Comprimido Roussel-maestrelli, Itlia
Difenidramina/CD Stada-Travel Comprimido Stada, Alemanha
Cloro-diazepxido/CD Trasillium Comprimido Gador, Argentina
Hidrocortisona/HPCD Dexocort Soluo Delta, Islndia
Itraconazol/HPCD Sporanox Soluo Janssen, Blgica
Omeprazol/CD Omebeta Comprimido Betapharm, Alemanha
Indometacina/HPCD Indocollyre Soluo oftlmica Chauvin, Frana
Nimesulide/CD Mesulid Fast,
Aulin Beta,
Supositrio, granulado,
comprimido
Italfarmaco, Boehringer
Mannheim, Itlia,
Aprostadil/CD Rigidur Soluo I.V. Ferring, Dinamarca
Nicotina/CD Nicorette Comprimido sublingual Pharmacia&Upjohn, Sucia
leo grlico/CD Xund, Tegra Drageia Biphax, Hermes, Alemanha
Dextrometorfano/CD Rynathisol Xarope Synthelabo, Itlia
Cetirizina/CD Cetirizin Comprimido LosanPharma, Alemanha
Mitomicina/HPCD MitoExtra Soluo I.V. Novartis, Suia
Cloranfenicol/RMCD Clorocil Soluo oftlmica Oftalder, Portugal
Tc-99 Teobroximeo Cardio Tec Soluo I.V. Bracco (USA)
Diclofenac/HPCD Voltaren Ophatalmic Soluo oftlmica Ciba Vision, Suia
17-estradiol/RMCD Aerodiol Spray nasal Servier, Frana
Cisapride/HPCD Prepulsid Supositrio Janssen, Blgica
Aripiprazol/SBEC Abilitify Soluo Bristol-Myers Squibb (USA);
Otsuka Pharm. (USA)
Maropitant Cerenia Soluo I.V. Pfiser Animal Health (USA)
Ziprasidone/SBECD Geodon Soluo I.M. Pfizer, (USA)
Voriconazole/SBECD VFend Soluo I.V. Pfizer, (USA)

Introduo
37
Propriedades das Ciclodextrinas

As ciclodextrinas so um grupo de sacardeos estruturalmente relacionados,
que so produzidos pela ciclizao enzimtica do amido, catalizada pela enzima
ciclodextrina-glicosil-transferase, formando uma espiral helicoidal de unidades de
glicose unidas por ligaes (1,4) (Szejtli, 1988a). Devido falta de rotao livre
volta das pontes de ligao das unidades de glicose, as CDs no so molculas
cilndricas, adquirindo a forma tronco-cnica (Figura 09 e 10).
Em consequncia da conformao em cadeira das unidades de glicopiranose,
todos os grupos hidroxlicos esto orientados para o exterior da molcula, com os
grupos hidroxilo primrios localizados no lado mais estreito e os secundrios no lado
mais largo da estrutura, conferindo-lhe hidrofilia (Loftsson e Brewster, 1996; Salto e
Veiga, 2001).
A cavidade apresenta caractersticas hidrofbas devido ao carcter apolar
determinado pelos dois anis dos grupos C-H e pelo anel de tomos de oxignio
includos nas ligaes glicosdicas. Esta estrutura molecular invulgar confere as
ciclodextrinas propriedades nicas.

Figura 09. Estrutura geral da ciclodextrinas. Os derivados alfa, beta e gama so definidos por n
- 1, 2 e 3, respectivamente. Figura 10. Representao esquemtica da estrutura tridimensional
das ciclodextrinas, mostrando as caractersticas estruturais definidas pelo arranjo das unidades
de glicose. (Adaptado de Gerbras, 2007).
Introduo
38
As ciclodextrinas naturais mais comuns so a -ciclodextrina (ciclomato-
hexanose), a -ciclodextrina (ciclomato-heptanose), a -ciclodextrina (ciclomalto-
octanose), contendo respectivamente 6, 7 e 8 unidades de ligaes glicopiranose -
1,4 (Figura 11). Destes trs derivados, a -ciclodextrina (-CD) parece ser a mais
vantajosa para utilizao farmacutica como agente complexante, devido, entre outras
propriedades, ao tamanho da sua cavidade, disponibilidade e baixo custo (Thompson,
1997).
A complexao ocorre quando uma molcula hspede preenche totalmente ou
em parte a cavidade interna da ciclodextrina. O interior da cavidade das ciclodextrinas
relativamente apolar quando comparado com a gua, o que propicia s
ciclodextrinas a facilidade em formar complexos de incluso com compostos orgnicos
(Hodi, 1991).
Segundo Pszczola (1988), devido sua estrutura, as ciclodextrinas facilmente
formam complexos com compostos slidos, lquidos e gasosos. Um dos critrios para
complexao o tamanho da molcula a ser encapsulada, que deve ser compatvel
com a cavidade da ciclodextrina. Outro critrio a polaridade da molcula
encapsulada e a sua competio com os restantes compostos presentes no meio. Os
complexos de incluso so relativamente estveis e facilmente separados das
solues devido sua cristalinidade (Pszczola, 1988).

Figura 11. Diferentes dimenses da -Cyclodextrina, -Cyclodestrina e -Cyclodextrina.
(Adaptado de Uyar, 2005)
Introduo
39
Os trs tipos de ciclodextrinas so produzidos industrialmente como
substncias cristalinas homogneas (Rendleman Jr., 1992). De entre as ciclodextrinas,
a -ciclodextrina a que apresenta menor solubilidade em gua. A solubilidade das
ciclodextrinas varia com a adio das mais diversas misturas de gua e solventes
orgnicos (Delbourg, 1991). Os solventes orgnicos foram a primeira alternativa usada
para aumentar a solubilidade das ciclodextrinas, mas no podem ser empregues na
indstria alimentar ou farmacutica (Saenger, 1980).
Tabela 03: Caractersticas fsico qumicas da , e -ciclodextrina. (Adaptado de Mosher e
Thompson, 2002).










Factores que influenciam a formao do complexo de incluso

A formao dos complexos de incluso frmaco-ciclodextrina est
condicionada em grande parte com a estrutura e propriedades fsico-qumicas do

Nmero de unidades de glicose 6 7 8
Peso molecular 972 1135 1297
Dimetro da cavidade, 4,7 5,3 6,0 6,5 7,5 8,3
Solubilidade a 25C (g/100mL):
gua 14,5 1,85 23,2
Metanol i I >0,1
Metanol soluo 50% 0,3 0,3 208
Etanol I i >0,1
Etanol soluo 50% >0,1 1,3 2,1
2-Propanol i I >0,1
Dimetilsulfoxide 2 35
Propilenoglicol 1 2
Glicerina I 4,3
Solubilidade em gua (g/100g):
20C 0,90 1,64 1,85
25C 1,27 1,88 2,56
30C 1,65 2,28 3,20
35C 2,04 2,83 3,20
40C 2,42 3,49 3,90
45C 2,85 4,40 4,60
50C 3,47 5,27 5,85
55C 6,05
Introduo
40
frmaco e da prpria ciclodextrina (Loftsson e Brewster, 1997). Para que um complexo
de incluso se forme, a molcula de frmaco tem que se ajustar total ou parcialmente
ao interior hidrofbico da cavidade da ciclodextrina. Alguns factores podem intervir no
processo de complexao, como o tamanho da cavidade da ciclodextrina. Para que
ocorra a complexao, o tamanho da cavidade da CD deve ser apropriado para
acomodar uma molcula de frmaco de tamanho particular. A -CD apresenta uma
cavidade demasiado pequena para a incluso de molculas com anis aromticos
como o naftaleno, enquanto que a -CD pode acomodar molculas com estruturas de
tamanho comparvel do antraceno. Logo, a -CD pode ter aplicao para complexar
molculas de tamanho reduzido ou cadeias laterais de molculas volumosas, como
o caso das prostaglandinas. Por sua vez, a -CD muito til na complexao de
molculas que possuam pelo menos um anel aromtico. As CDs formadas por mais de
oito unidades glucopiransidicas, tm menor capacidade complexante que a -CD e,
portanto, menor interesse do ponto de vista farmacutico. (Loftsson e Brewster, 1997).
Nos ltimos anos foram desenvolvidos diferentes derivados qumicos de
ciclodextrinas naturais, mediante a substituio de algumas ligaes de hidrognio que
formam os grupos hidroxlicos, melhorando assim as propriedades das ciclodextrinas
naturais como a solubilidade, a actividade hemoltica e a nefrotoxicidade.
Entre os derivados hidroflicos das ciclodextrinas naturais podemos distinguir
dois grupos: as ciclodextrinas neutras (como a HPCD) e as ionizadas (como a
SBECD). De uma forma geral, a eficcia de complexao maior para as
ciclodextrinas derivadas, relativamente s naturais. As derivadas com menor grau de
substituio apresentam um maior efeito solubilizante e os derivados ionizados podem
ser bons agentes solubilizantes se a carga da molcula estiver na posio mais
afastada da cavidade hidrofbica (Loftsson e Brewster, 1996).
Comparando com as CDs neutras, a complexao pode ser melhor quando a
CD e o frmaco carregam cargas opostas, mas pode diminuir quando carregam a
mesma carga. Para muitos frmacos cidos que do origem a anies, (2-hidroxi-3-
Introduo
41
[trimetilamnio] propil) --CD catinica agiu como um excelente solubilizante (Loftsson
e Brewster, 1996). No caso de frmacos ionizveis, a presena da carga pode ter um
papel significativo na complexao de frmacos/CD e uma mudana de pH na soluo
pode variar a constante de complexao. Em geral, os frmacos na forma inica
formam complexos mais fracos do que na forma no-inica.
As mudanas de temperatura podem afectar a complexao do frmaco/CD.
Na maioria dos casos, aumentar a temperatura diminui o valor da constante aparente
de estabilidade do complexo, e este efeito foi relatado como sendo um possvel
resultado da reduo das foras de interaco frmaco/CD, tais como as Van der
Waals e as foras hidrofbicas provocada pelo aumento da temperatura. Entretanto,
mudanas de temperatura podem ter um efeito insignificante quando a interaco
frmaco/CD est predominantemente associada a uma entropia dirigida. O mtodo de
preparao, pode afectar a complexao do frmaco/CD. A eficcia de um mtodo
depende da natureza do frmaco e em muitos casos, a secagem por pulverizao, e a
liofilizao demonstraram ser os mais eficazes para o complexao de frmacos.
Os polmeros ou os agentes inicos emparelhados devido sua participao
directa na complexao do frmaco melhoram as propriedades farmacuticas e
biolgicas dos complexos frmaco/CD, independente das propriedades fsico-qumicas
do frmaco.

Determinados aditivos podem competir com as molculas do frmaco para
cavidades da CD e assim diminuir a constante de estabilidade aparente do complexo.
Com relao ao grau de substituio sabe-se que as propriedades fsico-
qumicas das CDs, incluindo a sua habilidade de complexao, podem ser
extremamente afectadas pelo tipo, pelo nmero e pela posio dos substituintes na
molcula de CD. O grau de substituio por si mesmo no caracteriza
excepcionalmente um derivado da -CD tal como a HP--CD. Quando produzidas sob
diferentes condies, as propriedades fsico-qumicas de amostras de HP--CD com o
mesmo grau de substituio tambm so distintas devido ocupao possvel de
grupos hidroxipropil em diferentes posies na molcula da CD (Rajeswari, 2005).
Introduo
42
Consideraes Toxicolgicas

O perfil de segurana das trs mais comuns ciclodextrinas naturais e alguns
dos seus derivados tem sido recentemente revisto. Em geral, as ciclodextrinas naturais
e os seus derivados hidroflicos, podem somente permear membranas biolgicas
lipoflicas, tais como a crnea do olho, com considervel dificuldade. Mesmo tendo um
carcter lipoflico a -ciclodextrina metilada aleatoriamente no permeia membranas
lipoflicas embora interaja mais prontamente com membranas do que os outros
derivados de ciclodextrinas hidroflicas. Todos os estudos de toxicidade tm
demonstrado que as ciclodextrinas administradas oralmente so praticamente atxicas
devido a no absoro pelo trato gastrintestinal. Alm disso, um nmero de avaliaes
de segurana tm demostrado que a -ciclodextrina, a 2-hidroxipropil--ciclodextrina, a
sulfobutileter -ciclodextrina, o sulfato -ciclodextrina e a maltosil -ciclodextrina
apresentam segurana mesmo quando administradas pela via parenteral. Entretanto,
os estudos toxicolgicos tm mostrado que a e a -ciclodextrina e -ciclodextrina
metilada no so apropriadas para administrao parenteral (Del Valle, 2004).

Ciclodextrina

Trata-se de uma ciclodextrina relativamente irritante por administrao
intramuscular. Liga-se a alguns lpidos e origina uma ligeira irritao ocular. Foi
absorvida entre 2 3 % de uma dose oral administrada em ratos, no sofrendo
metabolizao no tracto intestinal superior, sofrendo hidrlise somente pela flora
intestinal do ceco e clon. A excreo depois da administrao oral em ratos foi de:
60% como CO
2
(no se determinou o CO
2
exalado em animais criados em ambientes
estreis), 26 33% como metablitos incorporados e 7 -14% como metablitos em
fezes e urina. Aps administrao intravenosa excreta-se principalmente por via renal
Introduo
43
inalterada com t
1/2 ratos
=25min, DL
50 oral ratos
> 10.000mg/Kg, DL
50 iv,ratos
= 500-700 mg/Kg
(Del Valle, 2004).

Ciclodextrina

menos irritante que as -ciclodextrinas por administrao intramuscular. Liga-
se ao colesterol e apresenta uma absoro muito reduzida (1-2%) no tracto intestinal
superior aps administrao oral. No sofre metabolismo no tracto intestinal superior,
e metabolizada por bactrias do ceco e do clon. Actualmente, a ciclodextrina mais
empregada em formulaes farmacuticas assim como a mais estudada em humanos.
O emprego de doses altas pode ser txico e no aconselhvel. A degradao
bacteriana e a fermentao que sofrem ao nvel intestinal pode originar a produo de
gases e diarreia, DL
50 oral,ratos
> 5000mg/Kg; DL
50 iv,ratos
= 450-790 mg/Kg (Del
Valle,2004).

Ciclodextrina

No apresenta irritao aps administrao intramuscular. A glucose degrada-
se rapida e completamente pelas enzimas do tracto intestinal superior (mesmo quando
se administram doses dirias altas, por exemplo, 10-20g/Kg); a absoro oral situa-se
em torno de 0,1% da dose administrada. Praticamente no sofre metabolizao aps
administrao intravenosa. provavelmente a menos txica das trs ciclodextrinas
naturais. usada em aditivos alimentares. A sua capacidade complexante , no
entanto, geralmente inferior a da -ciclodextrina e seus derivados solveis em gua.
Os seus complexos apresentam normalmente solubilidade limitada em soluo aquosa
e tendem a formar agregados, o que origina solues opacas. DL
50 oral, ratos
>> 8000
mg/Kg; DL
50 iv, ratos
= 4000 mg/kg (Del Valle, 2004)

Introduo
44
Derivados das ciclodextrinas

As caractersticas das ciclodextrinas naturais tem limitado a sua aplicao
enquanto veculos de frmacos, quer devido sua baixa solubilidade aquosa e em
solventes orgnicos, quer devido toxicidade que apresentam quando utilizadas em
preparaes parenterais (Fernandes, 1999).
As modificaes alm de aumentarem a segurana para aplicao das CDs no
consumo humano, podem melhorar ou alterar as caractersticas de aplicao, como
ocorre para qualquer amido modificado. As potenciais modificaes so semelhantes
quelas realizadas com amidos tradicionais, embora na prtica poucas delas sejam
usadas comercialmente. As modificaes ocorrem mais frequentemente nos hidroxilos
internos e externos das ciclodextrinas.
Algumas CDs tm sido modificadas com o objectivo de aumentar a sua
hidrofobicidade, a solubilidade ou o reconhecimento e o modo de complexao com as
molculas encapsuladas. As CDs podem ser modificadas quimicamente atravs da
substituio dos seus grupos hidroxilo. Muitas CDs modificadas j so produzidas
industrialmente, outras foram desenvolvidas apenas em laboratrio. O preo das CDs
modificadas mais alto que o das CDs naturais, dificultando o uso desses derivados
(Cereda, 2003).
Uekama e Irie, (Uekama e Irie, 1990) classificaram os derivados das
ciclodextrinas em hidrfilos, hidrfobos e ionizveis, classificao que tambm foi
utilizada para descrever as suas propriedades fsico qumicas.
Derivados metilados

As CDs metiladas so as mais comuns e a sua solubilidade aumenta com o
grau de metilao, sendo consideravelmente elevada quando comparada com a das
CDs no modificadas. As principais -CDs metiladas so a DIMEB e a TRIMEB
(dimetil--CD e trimetil--CD), sendo tambm conhecidas por heptakis (2,6-di-O-
Introduo
45
metil) e heptakis (2,3,6, -tri-O-metil), respectivamente. So obtidas atravs da
metilao selectiva de todos os C
2
secundrios e de todos os hidroxilos dos C
6

primrios, enquanto os hidroxilos dos C
3
permanecem inalterados. A primeira patente
dedicada ao uso de CDs modificadas em frmacos descreve a preparao de um
componente de baixa solubilidade com DIMEB. A DIMEB pode aumentar a
solubilizao de esteris, da progesterona, da hidrocortisona, da vitamina D
3
, da fenil
atropina, da prostaglandina e do diazepam, entre outros compostos largamente
empregados na indstria farmacutica, alm de estabilizar compostos instveis em
solues aquosas. Neste caso, a metilao com a -CD mais efectiva para se obter
um derivado solubilizante que com a ou a -CD. A estabilidade de complexos
formados com derivados de CDs, como a DIMEB, geralmente maior que a dos
complexos formados com CDs no modificadas. Os estudos efectuados com TRIMEB
so mais escassos (Bertolini, 1995).
As CDs metiladas, carboximetiladas e modificadas com epicloridrina do
origem a derivados adequados para a solubilizao de compostos lipoflicos presentes
em sistemas biolgicos, eliminando assim o inconveniente da toxicidade causada
pelos solventes orgnicos (Saenger, 1980).
A Metil--ciclodextrina um ciclodextrina modificada, com carcter lipoflico,
tem uma solubilidade em soluo aquosa (> 2000 mg / mL), temperatura ambiente o
que significativamente mais elevado do que a natural -ciclodextrina (18,5 mg / ML)
(Charoenchaitrakool, 2002).
Formao de Complexos de Incluso

As CDs so capazes de formar complexos de incluso (Figura 12) com muitos
frmacos, com tamanho e forma apropriados, encapsulando total ou parcialmente as
molculas hspedes. A cavidade das CDs tem afinidade preferencial para a forma
neutra de um determinado substrato, sendo capazes de complexar e solubilizar
compostos no polares. A complexao pode ser condicionada, entre outros factores,
Introduo
46
pela composio do esqueleto do composto, pela fraca solubilidade em gua (inferior
a 10 mg/mL), pelo estado de ionizao, pela temperatura e solventes utilizados, pelo
ponto de fuso inferior a 250 C (ponto de fuso superior significa que as foras
coesivas entre as molculas so muito fortes) e pela massa molecular compreendida
entre 100 e 400 Daltons. Contudo, pode ocorrer a formao de complexos com
molculas muito grandes, desde que contenham cadeias laterais apropriadas para a
incluso parcial, originando compostos com solubilidade e estabilidade modificadas
(Szejtli, 1991; Thompson, 1997).


Figura 12. Complexo de incluso frmaco--ciclodextrina (Adaptado de Nakagava,
2000).

A formao dos complexos frmaco-CD altamente condicionada pela
estrutura e propriedades fsico-qumicas dos frmacos e CDs. (Loftsson e Brewster,
1997). Para um complexo de incluso ser formado, a molcula do frmaco tem que
ajustar-se total ou parcialmente no interior hidrofbico da cavidade da CD. Os factores
que influenciam todo o processo de formao dos complexos de incluso frmaco-CD
so:
Tamanho da cavidade da CD: A -CD apresenta uma cavidade demasiado
pequena, que permita a incluso de molculas com estrutura semelhante ao
Introduo
47
naftaleno enquanto que a -CD pode acomodar molculas com estrutura
comparvel ao antraceno. Logo, a -CD pode ter aplicaes para a incluso de
molculas de tamanho reduzido ou cadeias laterais de molculas volumosas,
como o caso das prostaglandinas. Por sua vez, a -CD muito til na
complexao de molculas que possuam pelo menos um anel aromtico e a -CD
para molculas de tamanho considervel, como e o caso dos antibiticos
macrlidos. (Loftsson e Brewster, 1997).
Derivados das CDs naturais: As propriedades das CDs naturais so fortemente
alteradas pela sua derivatizao. Por exemplo, no caso de algumas CDs metiladas
e do derivado sulfobutilo-ter da CD (DMCD e SBECD), as efici-
ncias de complexao so em regra superiores s da CD devido ao
prolongamento do espao hidrofbico da cavidade da CD promovida pela
introduo dos substituintes (Mosher e Thompson, 2002).
Substituio molar dos derivados das CDs: O nmero mdio de grupos
substituintes existentes por unidade de glucose condiciona as propriedades
complexantes das CDs. Geralmente, os derivados que apresentam menor grau de
substituio molar so melhores agentes complexantes (Szente e Szejtli, 1999).
Solubilidade intrnseca dos frmacos Quanto menor a solubilidade intrnseca
de uma frmaco, maior ser o aumento relativo de solubilidade promovido pela
complexao com CDs. Assim, os frmacos que apresentem valores de
solubilidade na ordem dos g/ml tero um aumento de solubilidade muito superior
aos frmacos cuja solubilidade na ordem dos mg/ml (Loftsson e O Fee, 2003).
Frmacos hidroflicos com solubilidade aquosa limitada: os frmacos de
carcter anfotrico e outros frmacos polares com solubilidade aquosa limitada,
podem apresentar boas propriedades complexantes. Neste caso, a origem da
reduzida solubilidade destes frmacos relaciona-se com a elevada energia dos
seus cristais e no com a sua lipofilia. Uma vez em soluo, as molculas de
frmaco hidratadas tm uma reduzida tendncia para serem includas na cavidade
Introduo
48
das CDs. Contudo, estes frmacos, quando ionizados, podero formar complexos
de incluso, sendo desta forma possvel aumentar a sua solubilidade por um
correcto ajuste do pH associado complexao com CDs (Loftsson e Petersen,
1998).
Os mecanismos pelos quais se processa a formao de complexos de incluso
so diversos, contudo, todos tm em comum o fato de no ocorrer formao nem
quebra de ligaes covalentes. Considera-se que a principal fora de ligao para a
formao de complexo a libertao de entalpia das molculas de gua da cavidade
das CDs, uma vez que estas no conseguem satisfazer a sua necessidade de ligao
aos potenciais de hidrognio, tendo, portanto, elevada entalpia. A energia do sistema
diminui quando estas molculas so substitudas por molculas-hspedes, que so
menos polares do que a gua. O fato de no se formarem ligaes covalentes entre a
CD e as molculas-hspedes faz com que os complexos em condies fisiolgicas
sejam facilmente dissociveis (Cabral-Marques, 1994a). Na formao do complexo
podem tambm participar a libertao de foras do anel, interaces Van der Waals,
ligaes de hidrognio, interaces hidrofbicas e alteraes na tenso superficial do
solvente (Loftsson e Olafsson, 1998).
Em soluo aquosa, (Figura 13) os complexos dissociam-se, encontrando-se
em equilbrio as molculas livres com as molculas ligadas na cavidade da CD. Este
um processo dinmico, no qual a molcula-hspede se associa e dissocia
constantemente da molcula-hospedeira. Nesta conformidade, o complexo ser
constitudo por uma famlia de espcies em propores mdias variveis, sendo a
espcie de complexo a que apresenta maior tempo de existncia (Loftsson e Brewster,
1996; Stella et al., 1999; Szejtli, 1991).
Introduo
49

Figura 13: Representao esquemtica da formao do complexo de incluso. O cido
saliclico a molcula hspede (Fonte: Uyar, 2005).

Os principais factores que afectam a extenso e o grau de complexao
incluem o tamanho e a geometria da molcula-hspede, a energia conformacional, a
fora das interaces Van der Waals e outras foras electrostticas. Adicionalmente, a
solubilidade relativa da molcula-hspede no ambiente circundante e a solubilidade do
complexo contribuem para definir o equilbrio final. A temperatura, o pH e outras
molculas-hspedes competidoras podem, tambm, afectar o equilbrio (Cabral
Marques, 1994b).
A extenso da complexao em meio aquoso, ou seja, a estabilidade do
complexo formado, caracterizada pela constante de estabilidade, tambm chamada
de associao (Ka) ou dissociao (KD), e depende de como a molcula-hspede (F)
se encaixa na cavidade da CD. A razo entre a constante de velocidade de
recombinao (KR) e a constante de velocidade de dissociao (KD) traduz a
magnitude da estabilidade do complexo, Ke = Ka:b = KR / KD =FaCDb / [F]a x [CD]b,
em que a:b representa a razo molar de F includo na CD. Quanto maior esta razo,
maior a estabilidade do complexo (Cabral Marques, 1994a; Stella et al, 1999; Veiga,
1996).
A dissociao de molculas da cavidade das ciclodextrinas ocorre
rapidamente, com um tempo de semi-vida das molculas na cavidade da ciclodextrina
Introduo
50
em torno de mili a micro segundos ou menor, independentemente da molcula e da
sua constante de estabilidade. A libertao de molculas da cavidade da ciclodextrina
no deve ser um factor limitante (Stella et al, 1999).
Cramer e colaboladores (Cramer, 1967), descreveram o mecanismo de
formao dos complexos de incluso entre um corante e a -ciclodextrina em soluo
aquosa, segundo vrias etapas:
1. Aproximao da molcula hspede molcula de CD.
2. Quebra da estrutura da gua existente no interior da cavidade da CD e
remoo de algumas das molculas de gua da cavidade.
3. Quebra da estrutura da gua em volta da parte da molcula hspede que vai
ser includa na CD e transporte de algumas molculas de gua para a soluo.
4. Interaces dos grupos substituintes da molcula hspede com os grupos
existentes na superfcie ou no interior das CDs.
5.Possvel formao de ligaes de hidrognio entre a molcula hspede e a
CD (a formao de ligaes de hidrognio um processo extremamente rpido, e
como tal, no pode ser considerado como uma fase determinante para a reaco de
incluso).
6. Reconstituio da estrutura da gua em volta das partes expostas da
molcula hspede, aps o processo de incluso.
As etapas 2, 3 e 6 esto relacionadas com a estrutura da gua que envolve os
componentes da reaco de complexao.
Nas etapas 1, 4 e 5 esto envolvidos factores estereoqumicos: a estabilidade
ou a velocidade de formao dos complexos poder estar dependente da geometria
das molculas, ou seja, poder ser observada inibio estereoqumica. Dentro da
mesma classe de molculas hspede, as etapas 1, 2 e 6 podero no ser a fase
determinante da velocidade de reaco; no entanto, quando existe uma especificidade
cintica dos substituintes, as etapas 3 e 4 e possivelmente a 5 podem ser
determinantes no processo.
Introduo
51
No existe um modelo nico de mecanismo de complexao, nem to pouco
uma completa definio sobre qual o passo determinante da velocidade de
complexao (Veiga, 2006).
Formao de complexos de incluso em soluo

A formao de complexos de incluso em soluo define-se como um equilbrio
termodinmico ou cintico entre o complexo formado e os respectivos componentes
no estado livre, representado por:

mS + nCD --- SCD
(a-mx) (b-nx) x

em que S,CD, SCD, representam respectivamente, a molcula hspede (substrato), a
ciclodextrina e o complexo de incluso, x a concentrao molar do complexo e a e b
so as concentraes iniciais da molcula hospede e da ciclodextrina,
respectivamente, m representa a quantidade hospede e n a quantidade de
ciclodextrina.
Estes parmetros so significativamente afectados pelas condies do meio,
tais como a diluio, a concentrao, as alteraes de temperatura, o pH e a
polaridade do solvente.
Este equilbrio pode ser quantitativamente descrito atravs da constante de
estabilidade (Km:n), definida pela seguinte equao:

Km:n = x/(a-mx)
m
. (b-nx)
n


Todos os mtodos utilizados para calcular as constantes de estabilidade de um
complexo baseiam-se na determinao da variao de certas propriedades fsicas e
qumicas da molcula-hspede quando se encontra na presena de diferentes
Introduo
52
concentraes de ciclodextrinas (Uekama e Otagiri, 1987; Hirayama e Uekama, 1987).
Degradao, Absoro e Metabolismo das Ciclodextrinas

As ciclodextrinas tm a particularidade de serem bastante resistentes s
enzimas que hidrolisam o amido. So totalmente resistentes s -amilases, uma vez
que no possuem grupos terminais livres susceptveis de serem atacados por esta
enzima. No entanto, as -amilases, que no necessitam de grupos terminais livres,
so capazes de as hidrolisar, provocando a clivagem das molculas.
A velocidade de degradao das ciclodextrinas varivel, sendo a mais lenta a
da -ciclodextrina e a mais rpida a da -ciclodextrina, uma vez que, quanto maior for
o tamanho da cavidade da ciclodextrina, mais fcil o ataque da enzima s ligaes
glicosdicas (Szejtli, 1987).
Contrariamente s molculas hspede que so rpida e extensamente
absorvidas, as molculas de ciclodextrina, devido ao seu elevado tamanho, e a sua
superfcie externa fortemente hidroflica, so absorvidas na forma intacta numa
quantidade insignificante (Szejtli, 1984).
As ciclodextrinas so metabolizadas principalmente pela flora do clon e os
seus produtos de degradao (maltodextrinas lineares, maltose e glicose) so
posteriormente metabolizados e absorvidos, como os do amido, e, finalmente
excretados sob a forma de dixido de carbono e gua. A principal diferena entre o
metabolismo do amido e o das ciclodextrinas que o amido degradado no intestino
delgado, enquanto que as ciclodextrinas so degradadas no clon;
consequentemente, os mximos de intensidade da degradao so verificados,
respectivamente a cerca de 1 a 2 horas (amido) e de 6 a 8 horas (ciclodextrinas), aps
sua ingesto (Gerloczy, 1986).
As ciclodextrinas metiladas apresentam a particularidade de serem resistentes
s amilases bacterianas do tracto gastrintestinal, sendo eliminadas, sob a forma no
degradada, pelas fezes (Duchne, 1990b).
Introduo
53
Estes factos foram concludos aps a realizao de vrios estudos.
Experincias realizadas com ratos alimentados com -ciclodextrina, amido ou glicose
marcadas com
14
C, mostraram que quantidades mximas de
14
CO
2
libertadas pelos
animais que ingeriram amido ou glicose foram detectadas ao fim de 2 horas, enquanto
o mximo obtido para o grupo que ingeriu -ciclodextrina foi conseguido no fim de
cerca de 9 horas. Aps a administrao de glicose, ceca de 8% da radioactividade
absorvida foi detectada no sangue ao fim de 10 minutos. Quando a -ciclodextrina foi
administrada, menos de 2% da radioactividade absorvida foi determinada no sangue
ao fim de 6 a 12 horas (Gerloczy, 1982). Como a absoro das ciclodextrinas no
degradadas muito limitada, a origem da radioactividade atribuda glicose que se
forma a partir das ciclodextrinas, por aco das amilases da microflora bacteriana do
clon. As amilases pancreticas e salivares so tambm capazes de hidrolisar as
ciclodextrinas (Marshall, 1981).
A absoro e o metabolismo da dimetil -ciclodextrina em ratos foram
igualmente estudados aps a administrao de ciclodextrina marcada com
14
C. Na
dose de 1g/kg, menos de 10% de radioactividade foi absorvida, o nvel de
radioactividade no sangue foi muito baixo e tambm no se detectou, sob a forma de
14
CO
2
, no ar expelido pelos animais (Szejtli, 1987).
Muitas das estirpes bacterianas (24 de 30) isoladas do clon humano foram
capazes de degradar as ciclodextrinas, o que indica que as bactrias do clon podem
ter um papel importante na sua hidrlise. Os produtos da hidrlise das ciclodextrinas
incluem glicose e malto-oligassacardeos que, como sabido, so fermentveis pelos
anaerbios do clon originando, entre outros produtos, cidos gordos e gases
flatulentos (Szejtli, 1990).
Ciclodextrinas na administrao drmica

A principal barreira cutnea na administrao de frmacos o estrato crneo.
Os promotores de absoro clssicos usados em administrao drmica, tais como os
Introduo
54
cidos gordos e os lcoois, permeam o estrato crneo e reduzem temporariamente as
propriedades de barreira do mesmo. No entanto, as ciclodextrinas conseguem chegar
ao estrato crneo apenas em quantidades insignificantes (Rajewski e Stella, 1996).
Como as ciclodextrinas aumentam a permeao de frmacos, aumentando a
quantidade dos mesmos disponveis no estrato crneo, e os promotores de absoro
clssicos reduzem a funo de barreira do estrato crneo, ambos podiam empregar-se
para obter um efeito sinrgico.
Estudou-se em ratos o efeito sobre a administrao transdrmica de
testosterona que proporcionava o emprego conjunto de ciclodextrinas e de um
promotor clssico de absoro (extracto de glicerol monoster). Observou-se um
aumento do fluxo de testosterona de 60% quando se adicionou ao creme O/A a
ciclodextrina e um aumento de 40% quando se adicionou o extracto. O emprego
conjunto de ambos, extracto e ciclodextrina, permitiu obter um aumento de 80% no
fluxo de testosterona (Adachi et al, 1993).
Em geral, as ciclodextrinas no aumentam a velocidade de libertao de
frmacos incorporados em veculos no aquosos. Por exemplo, foi comprovado que
tanto a -CD como a 2-HPCD reduzem a quantidade de hidrocortisona libertada de
emulses hidrfobas, mas aumentam a libertao das mesmas em emulses hidrfilas
e geles hidrfilos (Preiss, 1995).
As ciclodextrinas tambm so empregues para reduzir a permeao de
componentes atravs da pele. Por exemplo, a adio de um excesso de 2-HPCD a
veculos que incorporam oxibenzona (um filtro solar) reduz significativamente a
permeao transdrmica do filtro solar, melhorando o efeito fotoprotector da
formulao (Felton et al, 2002).
No entanto, apesar das CDs apresentarem a capacidade de, sob determinadas
condies especficas, extrarem componentes lipfilos das membranas biolgicas,
improvvel que a ruptura da barreira biolgica constitua o principal mecanismo
responsvel pelo aumento da libertao transdrmica (Loftsson e Masson, 2001).
Introduo
55
Ciclodextrinas como promotores de absoro

As ciclodextrinas tm sido utilizadas para optimizar a libertao transdrmica
de frmacos, por via local ou sistmica.
Exemplos representativos de ciclodextrinas e seus derivados utilizados em
transdrmicos esto apresentados nas Tabelas 07 e 08.
As ciclodextrinas e os seus derivados hidroflicos aumentam a solubilidade e a
estabilidade de frmacos em preparaes drmicas tais como solues aquosas e
emulses. Alm disso, as ciclodextrinas e especialmente os seus derivados
hidrofbicos podem modificar a permeabilidade dos frmacos atravs da pele, a
bioconverso de frmacos nos tecidos alvo e a irritao tpica causada por alguns
frmacos (Martins, 2002).
Existem diversos trabalhos que referem que a libertao de frmacos pelo
veculo melhorada com a complexao destes com ciclodextrinas. Os exemplos
mais representativos so os corticides drmicos e anti-inflamatrios no-esterides.
(Otagiri et al, 1984). Assim, de prever que os efeitos de solubilizao das
ciclodextrinas possam estar relacionados com estas na libertao de frmacos pelo
veculo. Por isso, provvel que os efeitos promotores de absoro de frmaco na
pele pelas ciclodextrinas possam ser atribudos ao incremento de libertao de
frmacos pelo veculo (Martins, 2002).
Contudo, no simplesmente uma adio de ciclodextrinas formulao
farmacutica que ir automaticamente resultar em promoo da permeao do
frmaco atravs da membrana. Frequentemente, surgem trabalhos em que os
complexos frmacos-ciclodextrinas resultam num decrscimo da biodisponibilidade do
frmaco. importante usar apenas a quantidade de ciclodextrinas suficiente para
solubilizar o frmaco no veculo aquoso. Uma pequena quantidade de ciclodextrinas
em excesso resulta em decrscimo da biodisponibilidade ptima do frmaco (Loftsson
et al, 1998c).
Introduo
56
Tabela 04: Exemplos da utilizao de ciclodextrinas em transdrmicos (Adaptado de Matsuda
e Arima, 1999).
CDs Abreviatura Promoo Frmaco
-Ciclodextrina -CD Libertao ou permeao Miconazol
-Ciclodextrina -CD Estabilidade Tixoxortol 17-butirato 21-
propionato
Libertao ou permeao Betametasona
Libertao ou permeao cido 4-bifenilactico
Libertao ou permeao Cloranfenicol
Libertao ou permeao Ciprofloxacina
Libertao ou permeao Acetato de etil 4-bifenilil
Libertao ou permeao Flurbiprofeno
Libertao ou permeao Hidrocortisona
Libertao ou permeao Indometacina
Libertao ou permeao Nitroglicerina
Libertao ou permeao Norfloxacino
Libertao ou permeao Piroxicam
Libertao ou permeao Prednisolona
Libertao ou permeao Prostaglandina EI
Libertao ou permeao cido sulfanlico
Irritao local Cloreto de cloropromazina
Irritao local Tretinona
-Ciclodextrina -CD Libertao ou permeao Dipropionato de
beclometazona
Libertao ou permeao Betametasona
Libertao ou permeao Menadiona
Libertao ou permeao Prednisolona

H autores que defendem que os diferentes resultados obtidos indicam que o
tipo de veculo afecta significativamente os efeitos promotores das ciclodextrinas na
libertao dos frmacos. Assim, poder-se- afirmar que, por exemplo, as ciclodextrinas
hidroflicas podem aumentar significativamente a liberao de corticides e anti-
inflamatrios no-esterides, apenas quando um veculo hidroflico usado.
importante por isso referir o tipo de veculo utilizado (Matsuda e Arima, 1999).
O efeito das ciclodextrinas na velocidade de permeao de frmacos atravs
da pele pode ser determinado pela actividade termodinmica do frmaco no veculo e
pelo coeficiente de partilha entre a membrana e o veculo. O conceito de actividade
termodinmica representa a tendncia que o frmaco tem em libertar-se do veculo.
Introduo
57
Supe-se que o aumento dessa actividade leva a um aumento da velocidade de
permeao do frmaco atravs da pele. A actividade termodinmica directamente
proporcional solubilidade do frmaco no veculo e mxima quando se tem uma
soluo saturada (Martins, 2002).
Os resultados encontrados por Loftsson sustentam estas hipteses (Loftsson et
al, 1998c). Quando a concentrao de hidrocortisona foi mantida constante e a
concentrao de randomil--ciclodextrina (RM--CD) foi gradualmente aumentada, o
fluxo atravs da pele de ratos depilada foi incrementado at um certo ponto, enquanto
todas as molculas de hidrocortisona estavam em soluo. Depois o fluxo comeou a
decrescer com o incremento de concentrao de ciclodextrina. O fluxo mximo foi
obtido quando apenas a quantidade suficiente de RM--CD foi adicionada para
dissolver todo o frmaco no veculo aquoso.
Estes resultados esto de acordo com o conceito de actividade termodinmica
em suspenso (Matsuda e Arima, 1999). Apesar da actividade termodinmica do
frmaco em soluo ser constante acima da concentrao de saturao, uma
concentrao de RM--CD acima da concentrao ideal faz decrescer a libertao de
hidrocortisona. Este facto pode ser explicado pela formao no veculo de maior
quantidade de complexo no absorvvel.
As ciclodextrinas promovem a permeao de frmacos lipoflicos, tais como
corticides e antiflamatrios no-esteroides atravs da membrana, por incremento da
actividade termodinmica do frmaco nos veculos aquosos. No entanto, uma
quantidade adicional de ciclodextrina faz diminuir a velocidade de permeao de
frmacos lipoflicos, devido formao de uma quantidade adicional de complexos
que no so absorvidos. Alm disso, deve-se ter em considerao a possibilidade de
outros compostos adicionados em simultneo poderem afectar os efeitos de promoo
das ciclodextrinas no desenvolvimento de frmacos transdrmicos (Martins, 2002).
As ciclodextrinas podem, ainda, desempenhar papel de co-promotores em
transdrmicos. Legendre e colaboladores, (Legendre et al, 1995) verificaram que a
Introduo
58
combinao entre o cido olico, um promotor de permeao e a RM--CD aumenta
significativamente, para cerca de 30 vezes, o fluxo de cloreto de S-9977, talvez devido
a um incremento da difuso do cido oleico no estrato crneo. Assim, a combinao
de ciclodextrinas e promotores de permeao pode ser muito til no desenvolvimento
de frmacos hidrfilos por via transdrmica (Matsuda e Arima, 1999).
O promotor de permeao convencional (que aumenta a permeao de
frmaco por reduo da funo de barreira da pele) e a CD operando por diferentes
mecanismos promovem o aumento da permeabilidade (Martins, 2002).
Em relao ao mecanismo de libertao do frmaco pelo complexo na
membrana, sabe-se que as ciclodextrinas so molculas relativamente volumosas
(com massa molecular de 1000 at 1500Da) pelo que, em condies normais,
permeam as membranas biolgicas com considervel dificuldade (Loftsson et al,
1998c).
Sugere-se que as ciclodextrinas actuem como transportadores, captando as
molculas de frmaco hidrofbico em soluo e distribuindo-o superfcie das
membranas biolgicas, como a pele, mucosas ou crnea, onde o frmaco partilhado
com a membrana. A membrana relativamente lipoflica tem baixa afinidade pelas
molculas de ciclodextrinas hidroflicas (Krzysztof, 2007).
Por esta razo, elas permanecem na fase hidroflica da membrana, isto , no
veculo aquoso (creme leo/gua ou hidrogele) (Loftsson, 1998b).
Assim, as ciclodextrinas hidroflicas e os seus complexos dificilmente so
absorvidos atravs da pele, isto , apenas a fraco livre de frmaco vai sendo
absorvida. Existe equilbrio dinmico entre o frmaco ligado e o frmaco em soluo,
tal como esquematizado na Figura 14 (Martins et al, 2002).




Introduo
59
Tabela 05: Exemplos de utilizao de derivados de ciclodextrinas em transdmicos (Adaptado
de Matsuda, e Arima, 1999).
CDs Abreviatura Promoo Frmaco



Dimetil--
ciclodextrina



DM--CD
Libertao e ou permeao cido 4-bifenilactico
Libertao e ou permeao Acetato de etil 4 bifenilil
Libertao e ou permeao Indometacina
Libertao e ou permeao Prednisolona
Libertao e ou permeao cido sulfanlico
Irritao local Clorpromazina

Randomil metil -
-ciclodextrina

RM--CD
Libertao e ou permeao Acitretina
Libertao e ou permeao Hidrocortisona
Libertao e ou permeao Piribedila S-9977



Hidroxipropil - -
ciclodextrina



HP--CD
Libertao e ou permeao cido 4-bifenilactico
Libertao e ou permeao Dexametasona
Libertao e ou permeao 17 -estradiol
Libertao e ou permeao Acetato de etil 4-bifenilil
Libertao e ou permeao Hidrocortisona
Libertao e ou permeao Liarosol
Libertao e ou permeao Miconazol
Maltosil--
ciclodextrina
G2--CD Libertao e ou permeao Hidrocortisona

Polmero
-ciclodextrina

Polmero
-CD
Libertao e ou permeao Tolmaftato
Libertao e ou permeao Indometacina
Dietil--CD DE--CD Libertao e ou permeao Nitroglicerina
Carboximeti l- -
ciclodextrina
CM--CD Libertao e ou permeao Hidrocortisona
Carboximetil-etil-
-ciclodextrina
CME--CD Libertao e ou permeao Prostaglandina EI



Figura 14. Permeao do frmaco atravs da membrana biolgica em veculo aquoso da
ciclodextrina (C Ciclodextrina; D Frmaco) (Rajeswari, 2005).
Introduo
60
Objectivo geral

Este estudo teve como objectivo a formao de complexos de incluso entre
um antifngico, o miconazol, frmaco insolvel em gua e uma ciclodextrina
modificada, metil--ciclodextrina.
Em primeiro lugar foram realizados estudos de solubilidade de fases para
estabelecer a estequiometria dos complexos com duas ciclodextrinas modificadas. A
formao dos complexos foi realizada no estado slido utilizando os mtodos de
malaxagem, co-evaporao, secagem por pulverizao e liofilizao.
Posteriormente, os complexos formados foram caracterizados por diversas
tcnicas tais como a anlise trmica, difraco de raios X, espectroscopia de
Infravermelho de Fourier e ainda pela microscopia electrnica de varrimento.
De seguida, procedeu-se ao desenvolvimento de uma forma farmacutica
semi-slida, um hidrogele, o qual deveria apresentar as seguintes caractersticas:
maior adesividade e aumento da disponibilidade do frmaco, pelo aumento da sua
solubilidade. Foi igualmente elaborado um estudo reolgico da formulao base
desenvolvida.
Por ltimo, foi avaliada e comparada a libertao in vitro do frmaco, da
formulao desenvolvida contendo o frmaco e, contendo o complexo, com a
formulao disponvel no mercado Portugus, bem como a influncia da ciclodextrina
em termos de promoo da absoro







Introduo
61
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Capitulo I
69
FORMAO DOS COMPLEXOS DE INCLUSO EM SOLUO

INTRODUO

O mtodo de solubilidade de fases, descrito em 1965 por Higushi e Connors
habitualmente utilizado como primeira verificao da formao de complexos de
incluso em soluo (Higushi e Connors, 1965). Este mtodo fundamenta-se na
monitorizao das alteraes de solubilidade das molculas hspedes induzidas pela
adio de ciclodextrinas. A molcula hspede adicionada, em excesso, a vrias
solues de ciclodextrina de concentraes crescentes. As diferentes amostras so
submetidas agitao e, aps ter sido alcanado o equilbrio, so filtradas de modo a
determinar a concentrao da molcula-hspede em soluo (Higushi e Connors,
1965). A capacidade de solubilizao das ciclodextrinas ento quantativamente
avaliada por intermdio de diagramas de solubilidade de fases, que no so mais do
que representaes grficas das variaes de solubilidade das molculas hspedes
em funo do aumento da concentrao das ciclodextrinas. Os diagramas de
solubilidade de fases so dependentes do modelo de equilbrio que se estabelece
durante a formao dos complexos de incluso, estando classificados basicamente em
dois tipos, A e B, que apresentam por sua vez diferentes subtipos (Higushi e Connors,
1965) tal como se encontra representado nas Figuras 15 e 16.
Aos diagramas de tipo A corresponde a formao de complexos solveis e,
portanto, um aumento da solubilidade da molcula hspede em funo do aumento da
concentrao de ciclodextrina. Dependendo da natureza dos complexos formados, os
diagramas podero ser lineares A
L
, ou apresentarem uma curvatura positiva, A
P
, ou
negativa, A
N
. Os diagramas lineares resultam da formao de complexos de primeira
ordem relativamente ciclodextrina e de ordem 1 ou maior que 1 relativamente
molcula hspede. Se o declive destes diagramas for superior a um, significa que
ocorreu a formao de complexos de ordem superior relativamente molcula
Capitulo I
70
hspede. No caso do declive ser inferior a 1, apesar de no se excluir a possvel
presena de complexos de ordem superior, geralmente assumida uma
estequiometria 1:1.
Quando mais de uma molcula de CD intervm para a formao do complexo
de incluso, resulta um diagrama do tipo A
P
, ou seja o complexo de ordem 2 ou
superior a 2 no que diz respeito CD, e de ordem 1 em relao molcula hspede.
Os diagramas do tipo A
N
no so muito comuns mas podem resultar da auto-
agregao dos complexos em soluo ou do facto de estarem presentes no meio de
complexao elevadas concentraes dos agentes complexantes que podem causar
alteraes na natureza do solvente (Fromming e Szejtli, 1994; Mosher e Thompson,
2002).


Figura 15. Representao do Diagramas de Fases (Adaptado de Fromming e Szejtli, 1994)

Em oposio, os diagramas do tipo B correspondem a formao de complexos
insolveis ou de solubilidade limitada e inferior da ciclodextrina. Na figura 15, o
segmento S
0
-A da curva B
S
demonstra a formao de um complexo que responsvel
pelo aumento da solubilidade da molcula hspede, a que corresponde um fenmeno
semelhante ao que ocorre no diagrama A
L
. Porm, a partir do ponto A, atinge-se o
Capitulo I
71
valor limite de solubilidade da molcula hspede. A adio de mais CD resulta na
formao de mais complexo com consequente precipitao e a concentrao do
hspede no complexado mantida constante pela solubilizao de hspede slido.
No ponto B, todo o frmaco slido foi consumido e a adio de mais frmaco resulta
na depleo deste para a soluo por formao de complexo e pela concomitante
precipitao do complexo insolvel. Este fenmeno origina uma diminuio da
solubilidade da molcula hspede para um valor constante correspondente
solubilidade do composto de incluso (S
C
). No caso do composto de incluso
responsvel pelo aumento inicial da solubilidade ser o mesmo que posteriormente
precipita, o aumento da solubilidade da molcula hspede de S
0
at ao ponto A dever
ser idntico a S
C
. Nem sempre esta situao verificada devido formao de
compostos de incluso de ordem molecular superior na presena de elevadas
concentraes de ciclodextrina.
O diagrama de solubilidade de tipo B
i
interpretado de uma forma similar ao
do tipo B
S
, com a diferena do complexo formado ser de tal forma insolvel que o
aumento inicial da concentrao de frmaco no detectvel (Mosher e Thompson,
2002).


Figura 16. Modelos cinticos que se estabelecem durante a formao, em soluo, de
complexos de incluso. S
0
e S
c
correspondem respectivamente a solubilidade da molcula
hspede na ausncia de CD e o limite de solubilidade do complexo formado. K
c
representa a
constante de estabilidade do complexo formado. (Adaptado de Fromming e Szejtli, 1994).

Capitulo I
72
Tendo por base a informao resultante dos diagramas de solubilidade de
fases, podem ser determinados dois parmetros de elevado interesse, associados
formao dos complexos de incluso e que caracterizam o grau de interaco
molecular entre os diversos componentes do complexo: estequiometria dos complexos
e respectivo valor da constante de estabilidade (Kc).
A estequiometria, o valor de K
C
dos complexos formados e a consequente
eficincia de complexao podem ser facilmente determinados a partir do segmento
ascendente linear dos diagramas de solubilidade de fases, caso estes sejam do tipo
A
L
, A
P
ou B
S
. Perante um segmento linear obtido nestes diagramas assumida a
formao de complexos de estequiometria 1:1 (Figura 17).

Figura 17. Eficincia de complexao de um complexo frmaco-CD de estequiomtrica 1:1
(Adaptado de Loftsson et al., 1999).

Se a este segmento corresponder um declive equivalente a 1, teremos uma
situao em que uma mole de molculas de hspede complexada por uma mole de
molculas de ciclodextrina e portanto uma eficincia de complexao ser igual a
100%. Porm, esta situao raramente acontece. Na grande maioria dos casos, o
declive observado para o fragmento linear dos diagramas de solubilidade de fases
apresenta um valor inferior a 1 e a eficincia de complexao resultante inferior a
100%. Assumindo a formao de um complexo de estequiometria 1:1, ou seja, de
primeira ordem relativamente ciclodextrina (n=1) e de ordem 1 relativamente
molcula hspede (m=1), ter-se- a situao representada pelo seguinte equilbrio:

K
C

M Hspede +n CD Hspede
m
-CD

Capitulo I
73
Sendo o valor de K
C
determinado pela seguinte equao:

K
c
= [Hospede
m
-CD
n
]/[hspede ]
m
[CD]
n
(Eq. 1)

Nesta situao a solubilidade total da molcula hspede poder ser calculada a
partir das seguintes expresses (Loftsson et al, 2004):

S
t
= S
0
+m x [Hspede
m
-CD
n
] (Eq. 2)

onde S
t
corresponde solubilidade da molcula hspede livre e sob forma
complexada, S
0
solubilidade intrnseca da molcula hspede, [Hspede
m
-CD
n
] ao
complexo de estequiometria 1:1 (m e n so iguais a 1) e K
C
ao valor da constante de
estabilidade do complexo hspede-CD.
Uma vez que a representao grfica de S
t
em funo da concentrao de
ciclodextrina uma recta cuja ordenada na origem igual a S
0
e o declive igual a
(K
C
x S
0
)/(1 +K
C
x S
0
), a constante de estabilidade pode ser facilmente deduzia a partir
do declive e da ordenada na origem do segmento linear ascendente a partir da
seguinte equao, vulgarmente conhecida por equao de Higushi e Connors (Higushi
e Connors, 1965):

K
C
= declive/ S
0
x (1- declive) (Eq. 3)

No caso do complexo formado ser de ordem 2 ou superior a 2 no que diz
respeito a CD (n2), e de ordem 1 em relao molcula hspede (m=1), situao
correspondente a um diagrama de solubilidade do tipo A
P
, a solubilidade total da
molcula hspede poder ser calculada a partir das seguintes expresses, assumindo
a formao de complexos de estequiometria 1:1 e 1:2 (Loftsson et al, 2004):
Capitulo I
74

S
t
= S
0
+ [Hospede-CD ] + 2 x [Hospede-CD
2
] (Eq.4)

= S
0
+ (K
c(1:1)
x S
0
x [CD]) + (K
c(1:1)
x K
(1: 2)
x S
0
x [CD]
2
) (Eq. 5)

Onde K
C(1:1)
e K
C(1:2)
correspondem respectivamente s constantes de
estabilidade dos complexos de estequiometria 1:1 e 1:2, e [Hospede-CD] e [Hspede-
CD
2
] aos complexos de estequiometria 1:1 e 1:2. O valor de K
C (1:1)
determinado a
partir da equao 5, sendo ento possvel a determinao de K
C (1:2).
No caso dos diagramas do tipo A
N
, o valor de K
C
no pode ser calculado
devido s interaces complicadas estabelecidas entre soluto/soluto e soluto/solvente
(Veiga et al, 1996;Uekama et al, 1998).
A determinao da constante de estabilidade do diagrama do tipo B
s
pode
ainda ser efectuada recorrendo parte descendente da curva, segundo a equao:

K
1:2
= SB/(SX-SB)(CDX-2SB)
2
(Eq. 6)



em que SB a solubilidade molar do complexo e SX e CDX as concentraes molares
totais da molcula hspede e da ciclodextrina, respectivamente, para um determinado
ponto descendente da curva de solubilidade.
Num sistema tipo B
s
possvel determinar a estequiometria do complexo
precipitado a partir da frao da curva de solubilidade em forma de plat, segundo a
equao:
Razo molar = (M
T
- M
A
)/CD
(A-B)
(Eq. 7)

onde M
T
representa a quantidade total de molcula-hspede adicionada, M
A
a
quantidade da molcula-hpede dissolvida no incio do plat (ponto A) e CD
(A-B)
a
quantidade de ciclodextrina correspondente frao da curva em plat (entre o ponto
Capitulo I
75
A e B). A estequiometria calculada por esta tcnica pode ser confirmada atravs da
anlise qumica do complexo de incluso isolado.
Muitos outros mtodos utilizados nos estudos de complexao em soluo tm
sido utilizados, como o mtodo de espectroscopia de ultravioleta, a ressonncia
magntica nuclear, a modelagem molecular e ainda, o dicroismo circular, a
fluorescncia, a potenciometria, a cromatografia em gel, a cromatografia lquida de alta
eficincia, o coeficiente de partilha e o mtodo cintico (Fernandes, 1999).

MATERIAL E MTODOS

Material
Miconazol (Lote: 00478343; Massa Molar = 416,13 g/mol) foi gentilmente cedido pela
Janssen Pharmaceutica (Beerse-Belgica) a Metil--ciclodextrina (Lote: 781144; Massa
Molar = 1190 g/mol, com grau mdio de substituio de 0,5) e a HPBCD (Lote:
E812M; Massa Molar = 1480 g/mol, com grau de substituio de 0,63) = pela
Roquettte (Lestrem, France). As solues foram preparadas com gua destilada.
Todos os reagentes usados foram de grau analtico.
Mtodos
Doseamento espectrofotomtrico do MCZ

Pesaram-se rigorosamente 100 mg de MCZ o qual foi dissolvido em 100ml de
uma soluo hidroalcolica (1:1) etanol: gua, num balo volumtrico graduado. A
partir da soluo anterior (1mg/ml) preparam-se 8 solues padro com concentraes
de 0,1 a 0,8 mg/ml numa mistura etanol/gua (1:1). Estas solues foram preparadas
3 vezes de igual modo em 3 dias diferentes. A curva de calibrao foi construda com
absorvncias lidas a 272 nm (Cavrini, 1989) versus concentraes e validada
conforme em anexo.

Capitulo I
76
Diagrama de solubilidade de fases

O estudo de solubilidade de fases foi realizado de acordo com o descrito por
Higuchi e Connors (1965). Pesaram-se quantidades de MCZ em excesso em frascos
mbar, de 50ml, aos quais se adicionaram 30mL de solues de ciclodextrinas de
concentraes crescentes (0 0,12M e 0 0,2M de Metil--CD e HP--CD,
respectivamente). Os frascos foram fechados e sujeitos a agitao temperatura
ambiente (cerca 25 2C) durante 6 dias. Este perodo de tempo foi estabelecido com
base em estudos preliminares, cujos resultados indicaram que ao fim daquele perodo,
a solubilidade do MCZ se mantinha constante.
Aps ter sido alcanado o equilbrio, o contedo de cada frasco foi filtrado
atravs de um filtro de 0,45 m (Millipore). As solues filtradas foram diludas
adequadamente com etanol e o teor de MCZ dissolvido foi determinado
espectrofotometricamente a 272 nm (Shimadzu UV 160). As leituras foram feitas 3
vezes para cada soluo.
Deteco no ultravioleta

As leituras espectrofotomtricas foram realizadas, recorrendo a um
espectrofotmetro (Shimadzu UV-Visible 1603). A absoro mxima do miconazol
de 272 nm no solvente escolhido, etanol/gua (1:1), sendo este valor confirmado
atravs aquisio de um espectro percorrendo toda a regio espectral
electromagntica. As leituras das absorvncias foram feitas 3 vezes para cada
soluo.





Capitulo I
77
RESULTADOS E DISCUSSO

Estudo de solubilidade de fases

Segundo a classificao de Higuchi e Connors (1965) os diagramas de
solubilidade de fases da formao de complexos entre o MCZ e as ciclodextrinas em
soluo aquosa, so diagramas do tipo A
p
para a Metil--CD e a HP--CD (Figuras 18
e 19), indicando que no h precipitao do complexo (Pedersen, 1993). Este tipo de
diagrama demonstra a formao de complexos solveis na gama de concentraes
das ciclodextrinas estudadas.
A estequiometria do complexo de incluso foi analisada com base no grfico de
solubilidade de fases. As constantes de estabilidade (Kc) foram determinadas a partir
das rectas iniciais e lineares dos diagramas de solubilidade de fases, considerando
que se formam complexos de incluso com estequiometria (1:1) e (1:2), (sendo o
declive da recta menor que 1 para ambas ciclodextrinas).

-0.02 0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10 0.12 0.14
0.0000
0.0005
0.0010
0.0015
0.0020
0.0025
0.0030
C
o
n
c
.

M
C
Z

(
M
)
Conc. MBCD (M)

Figura 18: Diagrama de solubilidade de fases do sistema MBC/MCZ em gua destilada.
Valores de desvio padro para n=3.
Capitulo I
78
0.00 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25
0.0000
0.0005
0.0010
0.0015
0.0020
0.0025
0.0030
C
o
n
c
.

M
C
Z

(
M
)
Conc.HPBCD (M)

Figura 19: O clculo de Kc foi obtido de acordo com a equao desenvolvida por
Higuchi e Connors (1965):

Kc = Declive/[S
0
(1- Declive)] (Eq.8)

onde S
0
representa a interseco da curva, e para a Kc (1:2) pela equao:

= S
0
+ (K
c(1:1)
x S
0
x [CD]) + (K
c(1:1)
x K
(1: 2)
x S
0
x [CD]
2
) (Eq. 9)

Os resultados de eficincia de solubilizao e os valores das constantes de
estabilidade dos complexos MCZ/Metil--CD e MCZ/HP--CD esto indicados na
tabela 6.




Capitulo I
79
Tabela 06: Solubilidade mxima do MCZ atingido nas solues de CDs.Parmetros
derivados dos respectivos diagramas de fases.
Complexo
binrio
[MCZ] mxima
(10
-3
M)
a

Tipo do
diagrama
Eficincia de
solubilizao
b

Kc (1:1) Kc (1:2)
MCZ-HPCD 2,94 0,008 A
P
45,18 126,944,4M
-1
2,20 0,4M
-1

MCZ-MCD 2,94 0,02 A
P
45,10 145,69 4,1M
-1
11,110,5M
-1

Valores de Desvio Padro para n=3
a
Solubilidade do MCZ na concentrao mxima de CD testada;
b
Parmetro calculado pelo coeficiente dos valores de solubilidade mxima do MCZ nas
solues de CDs e o valor da sua solubilidade intrnsica (27,10g/ml).

Como se pode constatar, as constantes de estabilidade (Kc) dos complexos de
MCZ com HP--CD tm valores muito prximo das obtidas com a MCD. No entanto o
dobro de concentraes de HPCD foi utilizado para se obter valores muito prximos
aos obtidos com a MCD.
Os valores relativamente baixos das constantes de estabilidade indicam que as
interaces existentes entre o frmaco e ciclodextrina no so muito fortes, embora
aqueles valores estejam dentro ou prximo dos limites considerados por Pitha (Pitha et
al., 1983), ao estabelecer que os complexos de incluso com aplicao prtica
devero apresentar valores Ks entre 200 e 5000 M
-1
. Com Ks inferiores, o frmaco
rapidamente libertado, reduzindo o efeito que a complexao tem na dissoluo,
enquanto que com Ks superiores, os complexos libertam muito lentamente a
substncia activa.
Contudo, se atendermos aos resultados obtidos com complexos de incluso de
outros frmacos e que apresentavam constantes de estabilidade mais baixas do que
as obtidas neste trabalho, podem os complexos MCZ/MCD e MCZ/HPCD contribuir
para o aumento da solubilidade e consequentemente para a melhoria da
biodisponibilidade do miconazol.
J foi demonstrado na literatura que CD, CD, HPCD e SBE
7
-CD foram
capazes de formar complexos de incluso com o miconazol e de aumentar a sua
solubilidade aquosa (Van Doorne, 1988; Mura, 1992; Pedersen, 1993a,b; Pedersen,
1994; Bononi 1995, Piel, 1998).
Capitulo I
80
Piel e colaboladores concluram que com a mesma concentrao de
ciclodextrina (10mM), o aumento da solubilidade do miconazol foi de 9, 29 e 68 vezes
com a HPCD, CD e SBE
7
-CD (Piel, 1998).
A adio das CDs permitiu um aumento de solubilidade do MCZ cerca de 45
vezes superior sua solubilidade intrnseca. Este resultado foi o mesmo para as duas
CDs testadas. No entanto, a escolha da MCD para a sequncia do estudo dos
complexos no estado slido, levou-se em considerao que, o uso de uma menor
concentrao da MCD proporciona melhores resultados.




















Capitulo I
81
CONCLUSO

Os estudos de solubilidade de fases demonstraram serem diagramas do tipo
A
P.
Nestes foi observado um desvio positivo da linearidade, indicando a formao de
complexos de incluso com uma maior ordem molecular igual ou superior a um, ou
seja, mais do que uma molcula de ciclodextrina complexada com a molcula do
miconazol.
A estequiometria dos complexos de incluso calculados para as duas
ciclodextrinas, HPCD e MCD, so de 1:1 e 1:2.
Com o valor estabelecidos das constantes de estabilidade (Kc) dos complexos
com o MCZ, considerou-se que a MCD seria mais aplicvel para a continuao dos
estudos, visto que a mesma tambm est relacionada com estudos de promoo de
absoro.















Capitulo I
82
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Capitulo II
84
PREPARAO E CARACTERIZAO FSICO-QUMICA DOS COMPLEXOS
DE INCLUSO NO ESTADO SLIDO

INTRODUO

Na tecnologia farmacutica a formao de complexos de incluso com
ciclodextrinas, tem vindo a evidenciar uma grande aplicabilidade na solubilizao e
estabilizao de frmacos, constituindo hoje uma das tcnicas muito utilizadas. Os
complexos slidos so espcies qumicas estticas, com uma estequiometria
constante (Uekama e Otagiri, 1987). Alm disso, a existncia de um complexo de
incluso em soluo no garante a existncia do mesmo complexo no estado slido
(Szejtli, 1985).
importante salientar que no existe um mtodo universal de preparao de
complexos de incluso. Cada molcula a complexar um caso particular, sendo a
metodologia de preparao seleccionada em funo de vrios parmetros como: o
tamanho, a geometria e a solubilidade da substncia-hspede. So considerados
critrios, tecnicamente complementares, mas determinantes na escolha do mtodo de
preparao: o rendimento, a simplicidade, a rapidez, os custos e a facilidade de
transposio de escala (Mura et al, 1999). O mtodo de preparao de complexos de
incluso pode influenciar algumas caractersticas do produto final.
Atendendo a que o tipo de diagrama de solubilidade de fases do complexo
formado entre o MCZ e a MCD do tipo A
P
e, desprezando os pequenos valores de
K
(1:2),
foram preparados complexos com estequiometria 1:1, utilizando os mtodos de
malaxagem, co-evaporao, secagem por pulverizao e liofilizao.
A escolha do mtodo mais adequado para preparao do complexo de incluso
atendeu as caractersticas fsico-qumicas do MCZ. A caracterizao fsico-qumica
dos complexos de incluso no estado slido foi efectuada por calorimetria diferencial
de varrimento difraco de raios X, espectroscopia de infravermelho com
transformadas de Fourier e ainda pela microscopia electrnica de varrimento.
Capitulo II
85
MATERIAL E MTODOS

Material
Miconazol (Lote: 00478343;Massa Molar = 416,13 g/mol) foi gentilmente cedido pela
Janssen Pharmaceutica (Beerse- Belgica) e Metil--ciclodextrina (Lote: 781144; Massa
Molar = 1190 g/mol, com grau mdio de substituio de 0,5) pela Roquettte (Lestrem,
France). Os outros reagentes usados foram de grau analtico.
Mtodos
Mistura fsica

A mistura fsica de MCZ/MCD (1:1) foi preparada por mistura simples,
utilizando a tcnica de diluio geomtrica. Os ps foram previamente tamisados e a
seguir a mistura final em tamis (Retsch) de 125 m. Esta mistura serviu de referncia
para comparao nos estudos de caracterizao dos complexos de incluso.
Malaxagem

Quantidades estequiomtricas de MCZ e MBCD (1:1) foram malaxadas com
uma mistura de etanol/gua (1:3) equivalente a 60% das massas total dos ps.
A pasta obtida foi malaxada durante 45 minutos, adicionando-se, durante o
processo, pequenas pores da mistura etanol/gua de forma a manter-se a
consistncia inicial. Posteriormente, a pasta foi deixada em estufa 25C durante 48
horas, pulverizada a p fino e tamisada.
Co-evaporao

Quantidades estequiomtricas de MCZ e MBCD (1:1) correspondentes a 1,25g
de frmaco foram dissolvidos respectivamente em 250 ml de etanol e em uma soluo
Capitulo II
86
250 ml de etanol/gua (1:5). Uma vez obtidas as solues anteriores, foram
misturadas (soluo alcolica na aquosa) sob agitao enrgica durante 24 horas.
Posteriormente, procedeu-se eliminao dos solventes da soluo lmpida
por evaporao sob vcuo a 50C em evaporador rotativo (Heidolph, Laborota 4001).
Os resultantes resduos slidos foram secos at peso constante em estufa a
40C, e convenientemente pulverizados e tamisados.
Secagem por pulverizao

Pesaram-se 2 g de MCZ e 5,72 g de MBCD e dissolveram-se em 500mL de
etanol e em 500mL de gua destilada, respectivamente. Uma vez obtidas as solues
anteriores, foram misturadas (soluo alcolica na aquosa) sob agitao enrgica
durante 24 horas.
Posteriormente, procedeu-se eliminao dos solventes, pulverizando a
soluo num spray-dryer (Labplant SD05), sob as seguintes condies: velocidade de
fluxo da soluo varivel 450 600 ml/h; temperatura de entrada entre 150-160C;
temperatura de sada varivel entre 77 - 85C; presso de ar de pulverizao: 1,2 bar
e velocidade de fluxo de ar: 60 m
3
/hora.
Os resultantes produtos slidos recuperados foram calibrados por tamisao,
recolhendo-se a fraco granulomtria de 125 m.
Liofilizao

Quantidades estequiomtricas de MCZ e MBCD (1:1) correspondentes a 2g de
frmaco foram dissolvidos em 1000 mL de gua destilada e acidificado com uma
soluo 0,1M de cido clordrico, at obter uma mistura lmpida. A mistura manteve-se
sob agitao durante 24 horas, a soluo foi filtrada por filtros (Millipore) de 0,45m. A
soluo obtida foi distribuda em volume de 200 ml em frascos de capacidade de 1 L, e
submetida a congelao por imerso em banho de etanol (Freezone

modelo 79490,
Capitulo II
87
Labconco) a -40C durante 1 hora at completa congelao. A soluo congelada foi
liofilizada em liofilizador (Lyph-lock 6, Labconco) durante 48 horas.
Os resultantes produtos slidos recuperados foram calibrados por tamisao,
recolhendo-se a fraco granulomtria de 125 m.
O acondicionamento e a conservao de todos os sistemas binrios descritos
foram realizados em frascos de vidro com tampas de borracha em excicador
temperatura ambiente e ao abrigo da luz.
Solubilidade dos complexos de incluso

A solubilidade aquosa de MCZ e seus complexos de incluso foi determinada a
25 1 C. Uma quantidade em excesso correspondente a 15mg de frmaco foi
adicionada a 10 ml de gua, e em 10 ml de PBS (pH 6.8) agitadas em vrtex e
deixados em ultra-som por 30 min (Jun, 2007). Posteriormente as solues foram
colocadas sob agitao com ajuda de uma barra magntica, para cada frasco, durante
48 horas. Aps este perodo as amostras foram filtradas por membrana de 0,45 m
(Millipore) e adequadamente diludas em etanol. A quantificao do MCZ nos filtrados
foi efectuada por espectroscopia de UV a 272 nm
MTODOS DE CARACTERIZAO FSICO-QUIMICA

Microscopia electrnica de varrimento (SEM)


A morfologia do MCZ, MBCD e os sistemas binrios foram examinados atravs
de um microscpio electrnico de varrimento (Jeol, modelo JSM 5310. Tokio, Japo).
Para a observao ser exequvel, as amostras, sob forma de ps, foram
fixadas numa dupla fita adesiva e revestidas, sob vcuo, com uma fina pelcula de
ouro, de aproximadamente 300 de espessura, de modo a torn-las electricamente
condutoras. As amostras foram observadas com um potencial elctrico de excitao
Capitulo II
88
de 20 kV, com ampliaes de 500 a 3500 vezes, tendo o registo das mesmas sido
feito por uma mquina fotogrfica Pentax, modelo MZ-10.
Calorimetria diferencial de varrimento (DSC)

As determinaes de anlise trmica dos vrios compostos foram realizadas,
utilizando a tcnica de calorimetria diferencial de varrimento (DSC- differential
scanning calorimetry) num calormetro Shimadzu, modelo 50, associada a um
analisador trmico, com ligao a um sistema informtico TA-50WS/PC.
As amostras de massas compreendidas entre 1 -2 mg, colocadas em cpsulas
de alumnio abertas, foram aquecidas velocidade de 10C/min de 30 a 250C sob um
fluxo de azoto de20 ml/min. Como referncia, utilizaram-se cpsulas de alumnio
vazias.
A calibrao da temperatura do aparelho foi periodicamente avaliada no
decorrer destes ensaios, utilizando-se como padro o ndio (99,98%, ponto de fuso
de 156,65C, Aldrich).
Difraco de raios X (RX)

Os perfis de difraco, do MCZ, MBCD e os sistemas binrios foram realizadas
atravs de um difractmetro automatizado Philips X'Pert modelo PW 3040/00, com
geometria Bragg - Brentano e uma fonte de raios X de Colbalto, utilizando um
potencial elctrico de 40 kV e uma intensidade de corrente de 35 mA. Os
difractogramas foram obtidos no intervalo de ngulo 2 de 5 a 60, nas seguintes
condies: amplitude do intervalo de varrimento de 0,025 (2), velocidade angular de
varrimento de 0.5s e tempo total de 30 min.
O grau relativo de cristalinidade (RDC) foi determinado utilizando-se a seguinte
equao:
REF
SA
I
I
RDC = ) ( Eq.10
Capitulo II
89
onde o I
SA
o pico encontrado da amostra, no mesmo ngulo da referncia e o I
REF
a
altura do pico de maior intensidade da referncia. O MCZ foi utilizado como referncia
(Ribeiro 2000 e Veiga e Diaz 1998).
Espectroscopia de infravermelho com transformadas de Fourier (FTIR)

Os espectros de FTIR dos componentes singulares e dos sistemas binrios
foram obtidos num espectrmetro Nicolet Magna IR-750. A obteno dos espectros foi
realizada directamente nas amostras em p, atravs do programa adaptado ao
espectrofotometro Ominic E.S.P., aplicando transformao de Fourier de 64
varrimentos, na regio espectral de 4000 a 600 cm
-1
.
RESULTADOS E DISCUSSO

Preparao dos complexos no estado slido

So muitos os processos pelos quais se obtm complexos de incluso no
estado slido. No entanto no se pode eleger um mtodo de preparao como sendo
o melhor, uma vez que cada processo tem de ser desenvolvido em funo do frmaco
a complexar, CDs e outros agentes co-complexantes utilizados. A seleco dos
mtodos de preparao dos complexos em estado slido muitas vezes feita em
funo do equipamento disponvel para o efeito, da simplicidade do mtodo, do
rendimento final do produto obtido e ainda da facilidade de transposio de escala
laboratorial para industrial. Outros factores intrnsecos relacionados com os mtodos
de preparao, que devero ser optimizados para garantir a produo de complexos
de incluso slidos de elevada qualidade e com maior rendimento possvel, so a
temperatura e volumes de gua, o tempo de mistura e as condies e tempos de
secagem utilizados (Hedges, 1998).
Aps os estudos em soluo pelo mtodo de solubilidade de fases,
evidenciaram-se diagramas de solubilidade de fases do tipo A
P
e, portanto, estes
Capitulo II
90
complexos apresentaram-se solveis. Com estes dados e com a disponibilidade dos
equipamentos, seleccionaram-se diferentes mtodos de preparao, nomeadamente
malaxagem, co-evaporao, liofilizao e secagem por pulverizao para a produo
e estudo dos complexos no estado slido.
Microscopia electrnica de varrimento (SEM)

A microscopia electrnica de varrimento (SEM) frequentemente utilizada para
a observao dos aspectos morfolgicos microscpicos dos componentes singulares,
isto , frmaco, CD, bem como dos produtos resultantes da sua manipulao
(Duchene, 1987), neste caso MF e complexos binrios por MLX, COE, SP e LF.
O estado cristalino dos complexos, por ser diferente do obtido pela simples
mistura da molcula hspede com a ciclodextrina, permite conhecer o estado cristalino
resultante do processo de complexao. As alteraes do estado cristalino verificadas
servem de suporte para um melhor conhecimento do fenmeno de complexao
(Moyano, 1995).
As fotografias de microscopia electrnica de varrimento obtidas esto
apresentadas na Figura 20.
A observao destas fotografias revelou a presena de cristais de MCZ com
tamanho varivel e partculas em forma de paralelogramas. As partculas de MCD
so compostas por partculas esfricas com carcter amorfo (Charoenchaitrakool,
2002).
Por sua vez, a observao microscpica da MF evidenciou a presena de cada
um dos constituintes, com manuteno da sua morfologia original, sendo facilmente
observada a presena de cristais de MCZ superfcie das partculas de CD, mas no
revelou, aparentemente, interaces entre os constituintes.
Na microscopia do complexo MLX observou-se alterao da morfologia original
das partculas de MCZ e CD. Apresentam uma forma irregular com tendncia a formar
agregados. No entanto, observou-se que existem partculas de frmaco h superfcie
Capitulo II
91
da CD e mesmo partculas de CD na sua forma original, sugerindo apenas uma
complexao parcial.
Pelo contrrio, observou-se uma drstica alterao da morfologia original das
partculas de MCZ e MCD em todos os complexos COE, SP e LF. No processo de
COE, apenas h um tipo de partculas indiferenciadas, com tendncia para formao
de agregados, manifestamente distintas das partculas originais de MCZ e MCD. O
processo de secagem por pulverizao mostra partculas homogeneamente amorfas e
esfricas, tendo um aspecto caracterstico deste tipo de processo (Sinha, 2005). Por
fim, o processo de liofilizao deu origem a agregados amorfos, de aspecto lamelar e
irregular.
Apesar dos estudos de SEM serem insuficientes para a confirmao de
complexos de incluso, as alteraes drsticas na forma das partculas, no seu
aspecto e tamanho apontam para a existncia de novas fases slidas nos produtos de
COE, SP e LF. Estas novas fases slidas podero estar simplesmente relacionadas
com alteraes no estado cristalino destes produtos, ou ainda constiturem uma forte
indicao para a formao de complexos de incluso (Fernandes et al., 2002). Porm,
estes resultados precisam de posterior confirmao por meio de tcnicas fsico-
qumicas de caracterizao mais especficas, como o caso da calorimetria de
diferencial de varrimento e difraco de raios X.
Capitulo II
92


Figura 20. Microscopia electrnica de varrimento: (a) MCZ; (b) MCD; (c) MF; (d) MLX; (e)
COE; (f) SP e (g) LF.

g)
a) b)
c) d)
e) f)
g)
Capitulo II
93
Calorimetria diferencial de varrimento (DSC)

A calorimetria diferencial de varrimento (DSC) representa o mtodo analtico de
primeira escolha para a caracterizao fsico-qumica dos sistemas frmaco-CD no
estado slido. Por esse facto, o DSC utilizado como um mtodo de rotina para
investigaes qualitativas preliminares e rpidas, por avaliao do comportamento
trmico dos componentes isolados, MF e respectivos complexos preparados pelos
mais variados mtodos de preparao (Giordano et al., 2001).
A calorimetria diferencial de varrimento (DSC) permite determinar o calor
absorvido ou libertado pela amostra a uma temperatura programada. Estas variaes
de calor resultam das alteraes que se produzem num composto e que desaparecem
quando est includo numa ciclodextrina.
A incluso de uma molcula hspede na cavidade da ciclodextrina ou na rede
cristalina, leva a que os seus pontos de fuso, de ebulio, de sublimao ou de
degradao sejam deslocados para uma temperatura mais elevada ou no se
observem at temperatura limite de decomposio da ciclodextrina (250-300C)
(Szejtli, 1988a).
A finalidade da utilizao desta metodologia analtica consiste na comparao
dos perfis trmicos resultantes das misturas fsicas de frmaco e CD com perfis
resultantes dos respectivos complexos, para que seja evidenciada ou no a ocorrncia
de incluso do frmaco na cavidade da CD. Na ausncia de qualquer tipo de
interaco entre o frmaco e CD, as curvas de DSC resultantes devero corresponder
ao somatrio das curvas de DSC dos componentes individuais. Na eventualidade da
ocorrncia de interaces entre o frmaco e a CD nos produtos obtidos pelas vrias
manipulaes, as curvas de DSC devero apresentar um perfil no coincidente com o
somatrio dos efeitos observados nos termogramas dos componentes isolados. Isto
porque quando uma molcula hspede includa na cavidade de uma CD, os seus
pontos de fuso, ebulio ou sublimao sofrem um deslocamento para temperaturas
Capitulo II
94
diferentes ou desaparecerem do intervalo de temperaturas anterior decomposio da
respectiva CD (Cabral Marques, 1990).
Os termogramas dos componentes singulares e sistemas binrios esto
representados na Figura 21.

50 100 150 200 250
Temperature (C)
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
(g)

Figura 21: Termograma de DSC: (a) MCZ; (b) MCD; (c) MF; (d) MLX; (e) COE; (f) SP
e (g) LF.

O termograma do MCZ observado pela tcnica de DSC mostrou-se anidro e
cristalino, e apresentando seu pico endotrmico intenso e bem definido a 85,2C, o
que corresponde temperatura de fuso do frmaco (Pederson, 1993). A curva de
DSC da MCD apresenta um efeito endotrmico mais alargado por volta dos 40 a
100C que se deve libertao de gua de cristalizao da CD (Figueiras et al, 2007).
Visualiza-se na MF ambos os picos endotrmicos do MCZ (pico de fuso) e da
MCD (desidratao), sendo o termograma resultante da sobreposio dos
termogramas dos componentes individuais, sem qualquer desvio de temperatura de
fuso do MCZ. possvel portanto considerar a ausncia de interaco entre frmaco
Capitulo II
95
e a CD
No sistema MLX, observou-se um pico de pequena intensidade alargado,
sobreposto na regio do pico endotrmico de desidratao da MCD. Apesar de sua
tnue intensidade e do desvio para uma temperatura mais baixa 83,35C, este pico
corresponde ao efeito endotrmico resultante da fuso do MCZ, e sugere que neste
sistema, existe a formao de complexos de incluso parcial. Porm, tendo em
considerao os resultados obtidos com as fotografias de SEM para estes produtos,
onde parece perceptvel a presena de molculas de CD e a presena de cristais de
MCZ, pode-se pressupor ter ocorrido um rearranjo molecular do frmaco, a possvel
disperso dos cristais de MCZ no produto slido.
Com os resultados obtidos por DSC e SEM e a sua interpretao, evidencia-se
a no formao de um verdadeiro complexo de incluso pelo mtodo de malaxagem.
As curvas de DSC dos produtos COE, LF e SP indicaram o desaparecimento
completo do pico endotrmico correspondente transio slido-lquido do MCZ,
sendo a nica diferena visvel respeitante ao fenmeno de desidratao manifestado
no termograma destes sistemas. A pequena expresso das bandas endotrmicas
destes complexos de incluso, respeitantes desidratao das ciclodextrinas est
relacionada com o tipo de mtodos utilizados (COE, LF e SP) que utilizam tcnicas
muito eficazes de extraco dos solventes, originando produtos finais com um teor de
humidade muito baixo. O desaparecimento do pico endotrmico do MCZ atribudo ao
estado amorfo ou formao de complexos de incluso ou ainda a ambas as
situaes (Cabral et al., 1990). Estes resultados sugerem que estes sistemas podem
ser considerados como verdadeiros complexos de incluso. Porm, estes resultados
necessitam de confirmao atravs da aplicao de outros mtodos analticos de
caracterizao fsico-qumica no estado slido.
Espectroscopia de infravermelho com transformadas de Fourier (FTIR)

A espectroscopia de Infravermelho com transformadas de Fourier (FTIR)
Capitulo II
96
usada para avaliar as interaces que se estabelecem entre a molcula hspede e a
ciclodextrina no estado slido (Fernandes, 1999).
Esta tcnica nem sempre a mais adequada para a deteco da formao do
complexo de incluso. Esta situao acontece quando, por um lado, a formao do
complexo origina apenas um pequeno deslocamento das bandas da ciclodextrina e,
por outro, quando a fraco da molcula hspede pode ser camuflada pelas das
ciclodextrinas, bem como pela presena da gua de cristalizao (Szejtli, 1988). As
bandas de absoro caractersticas da CD, que representam a maioria das bandas de
absoro dos complexos, so muito pouco influenciadas pela complexao. Por sua
vez as bandas de absoro dos frmacos apresentam desvios para maiores ou
menores valores, acompanhadas de uma diminuio de intensidade, mas a proporo
de frmaco raramente excede os 15% da massa dos complexos, pelo que estas
alteraes so frequentemente pouco perceptveis (Szejtli, 1994). Por isso, as
alteraes verificadas nos espectros de FTIR requerem uma interpretao cuidadosa
(Hedges, 1998).
No entanto, esta tcnica pode ser aplicada com bons resultados, quando as
molculas hspedes tm algumas bandas de absoro caractersticas, como sejam as
dos grupos carbonilo (Uekama e Otagiri, 1987), que geralmente se apresentam
separadas das bandas caractersticas das CDs e sofrem facilmente desvios devido
complexao (Szejtli, 1994).
O perfil do espectro de FTIR do Miconazol est representado na Figura 22. As
bandas de espectroscopia de infravermelho do MCZ no so muito citadas. O
Miconazol formado por 39 atomos que podem originar 111 estados vibracionais.
Numa faixa de comprimento de onda pode observar-se algumas bandas
caractersticas do MCZ (Barillaro, 2007) que podem ser verificadas na Tabela 07.



Capitulo II
97
Tabela 07. Nmero de onda experimental e terica (FTIR) do miconazol. (Adaptado: *Barillaro,
2007)
Banda Miconazol Experimental Miconazol Terico* Descrio aproximada
1 1589 cm
-1
1589 cm
-1
Elongao CC
2 1561 cm
-1
1562 cm
-1
Elongao CC
3 1510 cm
-1
1510 cm
-1
Elongao CC + toro CH (anel
imidazlico) e C6
4 1468 cm
-1
1470 cm
-1
Toro CH e C17 e C6


Relativamente ao frmaco, o espectro, exibiu bandas intensas e bem definidas.
A banda, com maior intensidade, aparece na regio 1091 cm
-1
.
O perfil do espectro de FTIR dos sistemas binrios est representado na Figura
23. Verifica-se que a MCD possui uma banda que muito expressiva entre 1021 e
1155 cm
-1
, e pode sobrepor-se a banda mais expressiva do MCZ. Observa-se que nos
espectros (Figura 23) dos sistemas estudados, no apareceram novas bandas de
absoro, o que indica no se ter estabelecido ligaes qumicas do tipo covalente,
entre o MCZ e CD, nos novos produtos formados (Ammar et al., 1999). Observou-se
ainda uma forte diminuio das principais bandas nos sistemas binrios MLX, COE,
SP e LF. Os espectros nas regies de 600 900 cm
-1
e 1400 1600 cm
-1
do MCZ e
das respectivas misturas binrias, no estado slido, foram registados e estudados.
Verificou-se que as bandas com frequncia de 657, 732, 816, 861, 962, 1232, 1468,
1510, 1562 e 1589 cm
-1
esto presentes na MF e no MLX.
O espectro da MF corresponde ao simples resultado da adio do espectro do
frmaco e da ciclodextrina. O espectro do MLX, apresenta alguns picos caractersticos
do MCZ, com uma diminuio da intensidade das bandas. Tal situao aponta para a
no ocorrncia de uma nova estrutura.
O espectro por FTIR dos produtos obtidos por COE, SP e LF, por outro lado,
demonstram forte reduo ou completo desaparecimento da bandas caractersticas do
MCZ, sendo indicativo de uma forte interaco frmaco-ciclodextrina e, possivelmente,
a incluso por complexao do frmaco, confirmando os resultados obtidos
Capitulo II
98
anteriormente pelas tcnicas de DSC e SEM. No LF pode observar-se uma
amorfizao dos picos tornando a estrutura muito similar a MCD. O pico em 1589 cm
-
1
referente ao MCZ parece visvel, embora com uma pequena intensidade.
As alteraes observadas nos espectros FTIR das vrias amostras, tais como
os desvios de picos, ou a sua reduo na intensidade at ao desaparecimento quase
total, mostrou-se dependente do mtodo de preparao, sugerindo diferentes graus de
interao e amorfizao nos diferentes produtos.
2400 2200 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600
Wavenumbers (cm
-1
)
1091
1468
1510
1589
1232
816
861
732
962
657
1053
1340
1277
1562

Figura 22. Perfil do espectro de FTIR do Miconazol.
Capitulo II
99
2400 2200 2000 1800 1600 1400 1200 1000 800 600
Wavernumbers (cm
-1
)
(a)
(b)
(c)
(d)
(e)
(f)
1510
1469
1081
1021
964
756
702
852
1155
1589
1232
657
733
816
861
1589

Figura 23: Perfil dos espectros de FTIR da (a) MCD, (b) MF; (c) MLX; (d) COE; (e) SP e (f) LF.
Difraco de raios X (RX)

A anlise de difraco de raio-X constitui um dos melhores mtodos para
investigao dos complexos no estado slido: permite no s detectar a formao do
complexo, como tambm conhecer a sua estrutura, as interaces que se
estabelecem entre a molcula hspede e a ciclodextrina. No entanto, esta tcnica
por vezes complicada e de difcil aplicao como mtodo de rotina (Saenger, 1980).
A anlise de difraco de raio-X de ps frequentemente usada nos estudos
de complexao dos compostos em p (amorfos ou no estado microcristalino). Se
ocorrer a formao de complexo, o difractograma do complexo de incluso
completamente diferente da sobreposio dos difractogramas dos componentes
isolados (Uekama et al, 1982).
Os difractogramas dos componentes singulares e dos sistemas binrios
encontram-se representados na Figura 24.
Capitulo II
100
10 20 30 40 50 60
2
(a)
(c)
(d)
(f)
(g)
(e)
(b)

Figura 24: Difractogramas de raio X: (a) MCZ; (b) MCD; (c) MF; (d) MLX; (e) COE; (f) SP e (g)
LF.

O perfil de difraco do MCZ evidencia o seu carcter cristalino, demonstrando
numerosos picos de difraco de elevada intensidade cujas posies encontradas
foram 13.2, 14.7, 22.3, 24.4, 29.5, 30.0, 30.5 e 31.6 para os picos mais
representativos. O difractograma da MCD mostrou-se totalmente difuso indicando a
natureza amorfa deste composto (Figueiras, 2006).
No perfil de difraco da MF, podemos observar que este sistema possui os
principais picos de difraco do MCZ e corresponde apenas sobreposio de cada
um dos componentes presentes, com uma significativa diminuio da intensidade dos
picos do MCZ por efeito de diluio nos componentes amorfos. No produto obtido por
MLX o perfil de difraco semelhante ao da MF e no produto COE o perfil de
difraco observado demonstra menor grau de cristalinidade, mas no entanto alguns
picos caractersticos do MCZ so detectveis, sugerindo a formao de complexo de
incluso parcial.
Atendendo ao facto da amorfizao do MCZ poder ser consequente ao
Capitulo II
101
processo de secagem por pulverizao e liofilizao, os resultados de difraco de
raios X no podem descriminar se os produtos so ou no verdadeiros complexos de
incluso ou somente misturas homogneas dispersas de componentes amorfos
(Redenti et al., 1996). Contudo, tendo presentes os resultados de SEM e DSC
previamente analisados, bem como o desaparecimento de alguns dos mais
representativos picos de difraco no sistema COE e a perda de cristalinidade pode-se
invocar a formao de novas fases slidas que podem ser imputadas formao de
complexos de incluso, no qual o MCZ se encontra pelo menos parcialmente
incorporado na cavidade da CD (Charoenchaitrakool et al., 2002).
A total amorfizao do frmaco foi induzida pela SP e LF, sendo detectado nos
difractogramas dos produtos a reduo integral da cristalinidade, sendo visvel apenas
um perfil difuso. A magnitude do grau de amorfizao foi claramente dependente do
mtodo de preparao dos complexos.
A Tabela 08 mostra o grau relativo de cristalinidade (RDC) para os vrios
sistemas binrios. A diminuio da relao de cristalinidade de todos os sistemas foi
observada. A diminuio da RDC, na maioria dos casos, segue o mesmo padro: PM>
MLX> COE> SP> LF. Estas observaes esto de acordo com o resultado dos
difractogramas. Os resultados obtidos por DSC, FTIR e SEM, e o desaparecimento
dos picos de difrao do MCZ nos sistemas de SP e LF indicam novamente a possvel
formao de complexos incluso entre MCZ e a CD nestes sistemas.
Tabela 08. Intensidade dos picos e valores de RDC para os sistemas MCZ:MCD.


2

MCZ

MF

MLX


COE


SP

LF
IP
a
IP RDC IP RDC IP RDC IP RDC IP RDC
14.738 146 126 0.863 88 0.602 91 0.623 79 0.541 60 0.410
24.438 276 128 0.463 139 0.503 83 0.300 71 0.257 68 0.246
29.537 159 145 0.911 109 0.685 81 0.509 77 0.484 59 0.371
30.563 151 106 0.701 102 0.675 63 0.417 49 0.324 56 0.370
31.662 137 95 0.693 72 0.525 71 0.518 53 0.386 41 0.299
a
IP Intensidade dos Picos

Capitulo II
102
Em concluso, os estudos de difraco de raios X e o clculo de RDC
permitiram avaliar a cristalinidade dos diferentes produtos formados por diferentes
mtodos e obter evidncias adicionais acerca da formao de complexos de incluso
MCZ-MBCD, uma vez que foi confirmada a formao de novas fases slidas muito
provavelmente associadas formao de verdadeiros complexos de incluso no
estado slido.
Solubilidade aquosa dos complexos de incluso

A solubilidade de uma molcula hspede pode ser alterada por complexao
com CDs. Muitos autores tm citado o aumento da solubilidade aquosa do MCZ com o
uso das ciclodextrinas. Van Doorne e colaboladores concluram que a presena da -
ciclodextrina (18mg/ml) aumentou em 5 vezes a solubilidade aquosa do nitrato de
miconazol (Van Doorne, 1988). Os resultados, em percentagem, do ensaio de
solubilidade do frmaco isolado e dos sistemas binrios, obtidos aps 48h de agitao
25C1, esto indicados nas Tabela 09 e 10. As Figuras 25 e 26 demonstram os
valores calculados em funo da concentrao do frmaco solubilizado. A solubilidade
aquosa do MCZ em gua e PBS pH 6.8, calculada, por este mtodo, foi de 15,13
g/mL e 7,2 g/ml respectivamente.
A MF induziu um aumento da solubilidade do MCZ, o que pode ser explicado
pela provvel incluso formada em soluo. Isto pode ser atribudo ao processo de
mistura entre os componentes e a uma certa perda de cristalinidade e pureza dos
mesmos (Holgado, 1995). O aumento de solubilidade induzido pelo MLX foi pouco
superior a MF.
O maior aumento de solubilidade, em meio aquoso, foi verificado no complexo
liofilizado, quando comparado com os outros sistemas binrios. Entretanto Verifica-se
que a nova fase slida preparada por secagem por pulverizao, tem aspecto muito
fofo e com pouca molhabilidade, ficando o p muitas vezes agarrado ao vidro.
Fazendo com que a percentagem de solubilizao realizada por esta tcnica, seja
Capitulo II
103
menor.
Tabela 09. Solubilidade aquosa dos complexos com MCZ a 25C1 aps 48 horas.
Sistemas binrios Solubilidade
aquosa (g/ml)
Solubilidade
aquosa (%)
MCZ (Mistura Fsica) 29,01 1,93%
MCZ (Malaxado) 35,08 2,38%
MCZ (Coevaporado) 69,30 4,62%
MCZ (Secagem por pulverizao) 37,92 2,52%
MCZ (Liofilizao) 1,504(10
3
) 10,26%

Solubilidade aquosa MCZ
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
1600
Mic MF MLX COE SP LF Srie7

Figura 25. Solubilidade aquosa do MCZ. (Desvio Padro n=3)
Tabela 10. Solubilidade dos complexos, em PBS 6.8, a 25C1 aps 48 horas.
Sistemas binrios Solubilidade em
PBS 6.8 (g/ml)
Solubilidade em
PBS 6.8 (%)
MCZ (Mistura Fsica) 24,38 0,162%
MCZ (Malaxado) 31,52 0,210%
MCZ (Coevaporado) 117,29 0,781%
MCZ (Secagem por pulverizao) 35,15 0,234%
MCZ (Liofilizao) 127,93 0,852%

Solubilidade do MCZ em PBS 6.8
0
20
40
60
80
100
120
140
C
o
n
c
e
n
t
r
a

o

d
o

M
C
Z

(
m
c
g
/
m
l
)
MCZ MF MLX COE SP LF

Figura 26. Solubilidade do MCZ em PBS 6.8. (Desvio Padro n=3)
Capitulo II
104
CONCLUSO

A aplicao de diferentes metodologias analticas permitiu caracterizar os
sistemas obtidos no estado slido. Todos os complexos demonstraram diferenas
morfolgicas, trmicas, estruturais e perfis espectroscpicos distintos das molculas
livres de MCZ e CD e da MF, resultante da simples combinao destes componentes.
Assim, com base na caracterizao fsico-qumica efectuada, confirmou-se a formao
de complexos binrios no estado slido entre o MCZ e MCD.
A utilizao da microscopia electrnica de varrimento, da calorimetria
diferencial de varrimento, da difraco de raios X e da espectroscopia de
infravermelho com transformadas de Fourier possibilitou a elucidao das interaces
ocorridas no estado slido entre os diferentes sistemas binrios de complexao
preparados por diferentes tcnicas e sugeriu a formao de novas fases slidas
amorfas. Estas observaes apontam para uma forte evidncia da formao de
verdadeiros complexos de incluso MCZ/MCD preparados no estado slido por SP e
LF.
Verificou-se tambm a influncia do mtodo de preparao utilizado na
formao dos respectivos complexos de incluso.
O maior aumento de solubilidade aquosa e em PBS do MCZ foi manifestado
pelo complexo preparado pela tcnica de liofilizao.














Capitulo II
105
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Capitulo III
109
DESENVOLVIMENTO E ESTUDO REOLOGIA DE UMA FORMULAO
PARA APLICAO BUCAL
INTRODUO

A administrao bucal apresenta algumas vantagens em relao aos mtodos
tradicionais. A entrada directa do medicamento para a circulao sistmica faz com
que o efeito de primeira passagem heptica seja evitado. Alm disso, o frmaco pode
ser facilmente administrado e, se necessrio, removido do local da aplicao. Em
contrapartida, algumas desvantagens devem ser tidas em conta quando uma forma
farmacutica proposta para administrao bucal. Entre elas, est a necessidade da
formulao se manter na sua posio por horas, mesmo com o movimento bucal e
fluxo salivar. Registe-se ainda, o facto do fluxo salivar ser responsvel por uma
eventual dissoluo parte relevante do frmaco e, portanto, reduzir a absoro pela
mucosa. Consequentemente, uma boa formulao requer propriedades adesivas e
deve evidenciar um controlo eficiente do frmaco libertado. Isto pode ser feito usando
excipientes com caractersticas adequadas. Numerosos polmeros bio-adesivos foram
investigados para fins de administrao bucal (Cafaggi, 2004)
muito difcil aplicar pomadas, solues, cremes e loes sobre a mucosa
bucal, e esperar que os seus efeitos persistam por um perodo significativo de tempo,
j que so muito facilmente removidos pela salivao, temperatura, os movimentos da
lngua e a deglutio. Portanto, ser necessrio que as novas formulaes tenham
aderncia adequada ou maior tempo de adeso e mostram libertao sustentada por
um certo perodo de tempo. Mas, a principal limitao para cedncia bucal a baixa
permeao atravs do tecido, resultando em uma baixa biodisponibilidade. A utilizao
de potenciadores de penetrao utilizada para aumentar a permeao dos frmacos
em todo o epitlio (SHIN, 2000).
Os hidrogeles so redes polimricas tridimensionais, hidroflicas, capazes de
absorver grandes quantidades de gua ou fluidos biolgicos (Gupta et al, 2002). As
Capitulo III
110
redes so compostas por homopolmeros ou copolmeros, e so insolveis devido
presena de produtos qumicos ou fsicos. Os hidrogeles exibem uma termodinmica
compativel com a gua que lhes permite inchar em meio aquoso. Existem inmeras
aplicaes, em particular na rea da sade (Peppas, 2000). Mais especificamente, os
hidrogeles tm sido usados com sucesso na cedncia de agentes teraputicos,
atravs da cavidade oral (Jones et al 2002).
Estudos recentes por Jones e colaboladores, (2002) sugerem que formulaes
bioadesivas concebidas para aplicao bucal devem mostrar adequadas propriedades
reolgicas e mecnicas, nomeadamente comportamento pseudoplstico ou plstico
com tixotropia, ser de fcil aplicao, apresentar boa espalhabilidade, dureza
adequada, e prolongada permanncia de tempo na cavidade bucal. Estas
propriedades podem afectar o desempenho final das formulaes e a sua aceitao
pelos pacientes.
P407, polxamero tambm conhecido como Pluronic F127, um tribloco de
copolmero, polioxietileno-polioxipropilene-polioxietileno, constitudo por 70% de
unidades de polioxietileno. Tem a capacidade de formar um gel lmpido em meio
aquoso numa concentrao de aproximadamente 20% (w / w) ou mais, e exibe a
propriedade nica de gelificao reversvel trmica; que atingido em temperaturas
como temperatura corporal e reversvel em baixas temperaturas como de um
frigorfico, produzindo assim uma soluo de baixa viscosidade. Alm disso, P407 tem
baixa toxicidade, alta capacidade de solubilizao, e excelentes caractersticas na
libertao de frmacos (Cafaggi, 2005).
Sistemas contendo ambos, polxamero 407 e ciclodextrinas tm grande
interesse devido propriedade termosensvel do polaxamero e a capacidade
promotora de absoro da ciclodextrina (Bonacucina, 2007). Torna-se necessrio
desenvolver novas formulaes com adequada bio-adeso ou maior tempo de adeso,
e proporcionar uma libertao bucal por um maior perodo de tempo (Shin, 2000).
Capitulo III
111
P407 tambm foi utilizado em associao com Carbopol para obter geles
mucoadesivos (Cafaggi, 2005). O Carbopol um polmero hidroflico preparado
atravs da polimerizao dos monmeros, principalmente constitudos pelo cido
acrlico e usados para preparar geles para formulaes de administrao tpica,
devido sua viscosidade e boa bioadesividade em baixas concentraes. Em alguns
estudos, o Carbopol e o polaxamero foram usados como agentes formadores de geles
bioadesivos. Simovic e colaboradores, (1999) e Lin e Sung (2000) analisaram o
comportamento reolgico de disperses de Carbopol / Pluronic F-127 e demonstraram
que o Carbopol melhorou significativamente o comportamento reolgico do Pluronic.

Geles

Segundo a Farmacopeia Portuguesa consideram-se geles ou pomadas-gelias
as que so constitudas por geles minerais ou orgnicos.
Os excipientes utilizados nestes veculos so de vrios tipos, tendo como
caracterstica comum as suas propriedades coloidais, originando, em contacto com a
gua, geles mais ou menos espessos, de consistncia pastosa, que permitem a
incorporao de substncias nas suas malhas.
Os geles classificam-se em hidrfobos ou oleogeles e hidrfilos ou hidrogeles.
No primeiro caso os seus excipientes so gordurosos, como a parafina lquida e leos
diversos. A geleificao destes produtos consegue-se por adio de polietileno,
anidrido, silcios, sabo de alumnio ou de zinco, etc. j os geles hidrfilos tm como
excipiente a gua ou diversos glicis, como a glicerina e o propilenoglicol. Estes
lquidos so geilificados por intermdio de vrias substncias, tais como a goma
adragante, a goma de caraia, o amido, derivados de celulose, silicatos de alumnio e
magnsio, pectinas, alginatos, carbopis, lcool polivinlico, etc.
Os geles hidrfilos so os mais utilizados. Tm em geral um efeito emoliente e
refrescante, mas a sua rpida secagem transforma-os muitas vezes, numa pelcula
Capitulo III
112
quebradia quando aplicados na epiderme.
No apresentam poder de penetrao cutnea, j que seus excipientes,
formados por grandes molculas coloidais, no podem atravessar a epiderme intacta
e, tambm, no mostram qualquer espcie de afinidade para as protenas da pele, no
originando absoro bioqumica. Entretanto alguns geles, como os que contm
carbopol, so dotados de boa penetrabilidade cutnea. Por outro lado, pode-se
incrementar a penetrao desde que se adicione substncias como a trietanolamina,
lcool isoproplico, propilenoglicol e polietilenoglicol (Prista, 1995).
O tipo de polmero empregado na formulao de gele pode influenciar o
comportamento reolgico e, a estabilidade fsica do produto e at mesmo, afectar a
aceitabilidade deste.
Geralmente, as substncias formadoras de geles so polmeros que quando
dispersos em meio aquoso conferem viscosidade preparao (Maia Campos et al,
1999). Logo, pode-se definir o gele como uma preparao semi-slida composta por
partculas coloidais que no se sedimentam (ficam dispersas).
Polmero uma palavra derivada do grego onde polys significa muitos e meros
significa partes. Portanto, os polmeros so basicamente substncias de alto peso
molecular, tambm chamadas de macromolculas. Estas substncias so
provenientes do encadeamento de molculas menores. Apesar do estudo cientfico
das macromolculas se ter iniciado h pouco tempo (cerca de 50 anos), o seu
desenvolvimento tem sido vertiginoso. Vrios polmeros vm sendo usados nas
formulaes de geles de aplicao farmacutica (Martin, 1993).
De acordo com as caractersticas dos polmeros, os geles podem apresentar
natureza inica ou no-inica. Os geles de natureza no-inica possuem estabilidade
numa ampla faixa de pH, tornando-se possvel a veiculao de substncias de
carcter cido, como os alfa-hidroxicidos. J os de carcter aninico so pH
dependentes, ou seja apresentam-se estveis em pH neutro ou prximo do neutro

(Maia Campos et al, 1999).
Capitulo III
113
Pluronic

Trata-se de copolimeros de polioxietileno-polioxipropileno (POE-POP) que tm
tido larga utilizao como excipientes de pomadas.
Possui um ncleo central hidrfobo (polioxipropileno) ligado ou envolvido por
cadeias hidrfilas (polioxitileno). Quimicamente so polisteres e a sua frmula geral
pode ser assim representada: HO(C
2
H
4
O)
a
(C
3
H
6
O)
b
(C
2
H
4
O)
a
H em que a(xido de
etileno=OE) varia de 2 a 130 e b (xido de propileno =OP) e varia de 15 a 67.
Alguns destes pluronics contm etilenodiamina que, sendo hidrossolvel,
exerce funes semelhantes ao etilenoglicol ou proplilenoglicol.
Os poloxameros so tensioactivos, classificando-se actualmente por meio de
nmeros que, em regra, aumentam consoante o seu peso molecular. Assim, por
exemplo, o n 101 (P.M.1100) apresenta um EHL (equilbrio hidrfilo lipoflico) de 12-
18, o n184 (P.M.2900) tem EHL de 12-18 e o 188 (P.M.8400) tem EHL maior que 24.
Muito pouco txicos e pouco irritantes para pele e olhos, podem originar geles,
com concentraes de gua bem definidas: 184 e 188 formam geles com 50-60% de
gua; 234 (P.M.4200) e 238 (P.M.11400) geleficam com 40 % de gua; 333 a 338
(P.M.14000) formam geles com 25% de gua. (Prista, 1995)
A preparao do gele de P 407 no apresenta dificuldade. A preparao de
uma formulao termosensvel a frio mostra-se mais vantajosa. Este mtodo facilita a
dissoluo do poloxamero e limita possveis alteraes. O P 407 misturado em 4-5C
com outros componentes (por exemplo um frmaco) e com a gua, que dever estar
previamente fria, at obter uma soluo homognea (Dumortier, 2006)
A esterilizao em autoclave (120.C, por 15 min, 1 bar) compatvel e no
altera significativamente as caractersticas da viscosidade da formulao. No entanto
nenhum estudo foi realizado para especificar a possvel degradao deste polmero
durante a autoclavao. (Dumortier, 2006)

Capitulo III
114
Carbopol

O Carbopol um polmero hidroflico obtido atravs da polimerizao dos
monmeros, principalmente constitudos pelo cido acrlico. Este exerce uma funo
de agente gelificante, devendo estar presente numa percentagem de 0,5-1,5%.
Excipiente incuo para a pele, no provoca irritao, alergia e sensibilizaes,
pelo que se podem utilizar na preparao de pomadas-geleias. Entretanto, no se
recomenda o seu emprego em pomadas oftlmicas, dado que se tm revelado
irritantes para a crnea. (Prista, 1995)
Uma vantagem de utilizao do Carbopol resulta do facto de no sofrer
alteraes significativas de viscosidade em funo da temperatura. Em presena da
gua os polmeros de Carbopol intumescem at cerca de 1000 vezes o seu volume
original, formando geles quando o pH do meio adequado (Singla, 2000).
Quando dispersos em gua formam solues coloidais cidas de baixa
viscosidade. A neutralizao das solues aquosas coloidais de Carbopol promove a
geleificao, conduzindo a obteno de geles lmpidos (Prista, 1995).
Durante a preparao do gele a agitao deve ser lenta de modo a evitar a
incorporao de bolhas de ar que podem promover a sua oxidao na presena de luz
As bolhas de ar eventualmente existentes nos geles devem ser removidas antes da
adio do agente neutralizante recorrendo a ultrassons ou simplesmente deixando a
preparao em repouso (Allen, 2007).
A viscosidade dos geles reduzida quando o pH inferior a 3 ou superior a 12
e na presena de electrlitos. Apresentam maior viscosidade a valores de pH entre 6 e
11. A necessidade de ajustar o pH a valores compreendidos entre 6,5 e 7,0 est
relacionada com a consistncia e com a estabilidade dos hidrogeles (Allen, 2007).



Capitulo III
115
OBJECTIVO

Formular um hidrogele, com caractersticas bioadesivas, para uso bucal.
Demonstrar a influncia da ciclodextrina, no hidrogele, em relao s suas
caractersticas reolgicas.

MATERIA E MTODOS

Material
Carbopol 71G foi fornecido pela Noveon, Inc (Cleveland, OH), Pluronic 127 foi
fornecido pela Sigma-Aldrich (Saint Louis, USA). Miconazol (Lote: 00478343;Massa
Molar = 416,13 g/mol) foi gentilmente cedido pela Janssen Pharmaceutica (Bersee-
Belgica) e a Metil--ciclodextrina (Lote: 781144; Massa Molar = 1190 g/mol, com grau
mdio de substituio de 0,5) doado pela Roquettte (Lestrem, France). Utilizou-se
gua destilada, e os outros reagentes foram de grau analtico.
Mtodos

Preparao dos Hidrogeles
Hidrogele de Carbopol (A)

Dispersou-se o polmero (Tabela 12) sobre a gua destilada sob agitao, a 900 rpm,
utilizando agitador mecnico (Eurostar power control-visc IKa- Werke, Staufen,
Germany) provido de uma hlice marinha de 3 lminas com 4,0 cm de dimetro,
durante 120 minutos. O pH do hidrogele foi ajustado entre 5,5 e 6,5 utilizando-se uma
soluo de NaOH 10% (p:v).
Hidrogele Pluronic (B)

O hidrogele foi preparado pelo mtodo a frio (Durmortier, 2006). O polmero foi
adicionado sobre a gua previamente fria (3-5C), sob contnua agitao, 900 rpm,
Capitulo III
116
utilizando um agitador mecnico Eurostar, durante 120 minutos, at obter uma soluo
homognea. O hidrogel foi deixado sob refrigerao a 4C at se obter uma soluo
lmpida, aproximadamente 12 horas. Esta soluo requer um tempo sob refrigerao
para total solubilizao (Dumortier, 2006).
Hidrogele Pluronic-Carbopol (C1; C2; C3)

Os hidrogeles de Pluronic-Carbopol (Tabela 11) foram preparados pelo mtodo a frio
(Durmortier, 2006). Os polmeros nas suas devidas propores foram pesados e
adicionados em 70% de gua, previamente arrefecida (3-5C). Primeiramente foi
adicionado o Carbopol e posteriormente o Pluronic e, mantidos sob agitao a 900
rpm, utilizando um agitador mecnico Eurostar, durante 60 minutos, obtendo-se uma
soluo homognea. Depois adicionou-se a gua restante sob contnua agitao. O
hidrogele foi deixado sob arrefecimento a 4C at se obter uma soluo lmpida. No
dia seguinte as preparaes foram neutralizadas a pH entre 5,5 e 6,5, utilizando-se
uma soluo de NaOH 10% (p:v).

Tabela 11. Formulao dos hidrogeles I.
Hidrogele Carbopol
1% (p:p)
(A)
Pluronic
20% (p:p)
(B)
Pluronic/Carb
20:0,5% (p:p)
(C1)
Pluronic/Carb
20:1,0%(p:p)
(C2)
Pluronic/Carb
20:1,5% (p:p)
(C3)
Carbopol
1g - 0,5g 1g 1,5g
Pluronic
- 20g 20g 20g 20g
gua
99g 80g 79,5g 79g 78,5g
Hidrogeles [MCZ 2% (D);MBCD (E), Mistura Fsica (F) e Complexo (G)]

Os hidrogeles (Tabela 12) foram preparados pelo mtodo a frio (Durmortier, 2006). Os
polmeros foram adicionados em 70% da gua previamente arrefecida (3 - 5C) e
deixados sob contnua agitao a 900 rpm, utilizando um agitador mecnico Eurostar,
por 60 minutos, obtendo se uma soluo homognea. Adicionou-se ento o frmaco,
MCD, mistura fsica ou complexo, perfazendo uma concentrao de 2% de frmaco,
excepto para o hidrogele com a MCD. Em seguida adicionou-se a gua restante, sob
Capitulo III
117
contnua agitao por mais 60 minutos O hidrogel foi deixado sob refrigerao 4C
at se obter uma soluo lmpida, aproximadamente 12 horas. No dia seguinte as
preparaes foram ajustadas a pH entre 5,5 e 6,5, utilizando-se uma soluo de NaOH
10% (p:v).
Tabela 12. Formulao hidrogeles II.

Hidrogele
Miconazol
(2%, p/p)
(D)

M CD
(E)
Mistura Fsica
(2%miconazol)
(F)
Complexo
(2% miconazol)
(G)
Carbopol 1g 1g 1g 1g
Pluronic 20g 20g 20g 20g
Miconazol 2g - - -
Mistura Fsica - - 7,72g -
Complexo - - - 7,79g
MBCD - 5,72 - -
gua 77g 73,28 71,28g 71,20g
Estudo da compatibilidade dos excipientes presentes nos hidrogeles

Determinaes de DSC foram realizadas num equipamento Shimadzu DSC-50
com um Sistema DSC provido de uma estao de dados informatizada TA-50WS/PC.
O comportamento trmico foi estudado pelo aquecimento, entre 25 C a 250 C, das
amostras numa cpsula de alumnio selada, a uma taxa de 10 C / Min e sob um fluxo
de azoto, de 20 C cm
3
/min.
A calibrao da temperatura do aparelho foi periodicamente avaliada no
decorrer destes ensaios, utilizando-se como padro o ndio (99,98%, ponto de fuso
de 156,65C, Aldrich).
Caracterizao da Viscosidade

As determinaes reolgicas foram realizadas num viscosmetro (Viscotester
VT 550, Thermo Electron, Alemanha) equipado com cilindros com geometria coaxial
(SVDIN, Thermo Electron, Alemanha). O fluxo de medio foi realizado a 37 C com
Capitulo III
118
taxas de corte no intervalo de 0,1 a 250 s
-1
, com perodos de 60s entre cada medio.
Os hidrogeles estiveram em repouso durante 30 minutos antes de iniciar as medies.
Anlise da Textura

A anlise da textura foi realizada por compresso num texturometro (Stable
Micro Systems TA-XT Plus, UK), atravs da realizao de um teste de penetrao
usando uma sonda cilndrica de 10 mm de dimetro, com uma penetrao de
profundidade de 5 mm, a uma velocidade de 3 mm / s. Depois de penetrar a amostra,
a sonda retorna para uma posio 40 mm acima da superfcie da plataforma. As
medies foram realizadas em temperaturas de 25 2C e 372C. O grfico fora vs
distncia foi obtido, os parmetros, fora mxima (correlacionada com a firmeza) e
rea negativa (correlacionada com a adesividade) foram calculadas.
Os hidrogeles foram mantidos durante 12 horas a 25C2C e 372C, e
realizando posteriormente as respectivas medies.
Todas as amostras foram analisadas num prazo de 72 h aps preparao, e
centrifugadas a 3000 rpm durante 15 minutos, para garantir a remoo de bolhas de
ar, antes de todas as anlises. As medies foram realizadas em triplicado.
Anlise estatstica

A anlise estatsta dos resultados de textura foi feita utilizando o programa
informtico SPSS (verso 14.0). A comparao entre duas variveis foi realizada
atravs de Test T-Student e com grau de significncia p <0.05. A comparao com
mais de duas variveis fez-se com One-Way ANOVA. Quando os mtodos de anlises
anteriores dectectaram diferenas estatsticas com um grau de significncia p <0.05,
foi realizado um Post-hoc test (Scheffe test) para identificar essas diferenas.


Capitulo III
119
RESULTADOS E DISCUSSO

Calorimetria diferencial de varrimento (DSC)

O termograma dos polmeros e das misturas pode ser observado na Figura 27.
O termograma correspondente ao carbopol apresenta 2 picos: um a 100 105 C
referente transio vtrea e outro a 250C devido ao processo de decomposio
trmica (Barreiro-Iglesias, 2002). A temperatura de transio vtrea do Carbopol em
cerca de 133C relatada por Kannis e colaboladores, (2000), no foi visualizada O
perfil de DSC do Pluronic mostra um ponto de fuso de 57,30 C. Observa-se nos
termogramas das misturas que a presena de concentraes crescentes de Carbopol,
alteram a transio vitrea do Pluronic. Este resultado indica, uma provavel interaco
entre ambos os polmeros na mistura.
0 50 100 150 200 250
Temperature (C)
(a)
(d)
(b)
(c)
(e)

Figura 27. Termograma de DSC dos polmeros (a) Carbopol; (b) Pluronic; (c)
Carb0,5%Plur20%; (d) Carb1%Plur20% e (e) Carb1,5%Plur20%.

A Figura 28 demonstra o perfil do termograma de DSC dos polmeros. No perfil
de DSC da mistura fsica dos componentes do hidrogele formulado, nomeadamente,
Pluronic, Carbopol e Complexo liofilizado observa-se o pico caracterstico do Pluronic.
A simples mistura fsica dos componentes, quando analisada pela tcnica de DSC,
Capitulo III
120
teve uma pequena alterao na transio vitrea da mistura Pluronic/Carbopol,
influenciada pela presena do complexo MCZ/MCD preparado pelo mtodo de
liofilizao.


50 100 150 200 250
Temperatura C
(c)
(b)
(a)

Figura 28. Termograma de DSC do: (a) Complexo Liofilizado; (b) Mistura Carb1%Plur20% e (e)
Mistura Carb1,0%Plur20% e Complexo Liofilizado.

Viscosidade

A caracterizao reolgica de formulaes semi-slidas importante uma vez
que fornece informaes to fundamentais quanto necessrias para a avaliao de
algumas das propriedades finais do produto como a consistncia, qualidade e
estabilidade de armazenamento (Shawesh, 2002). O tipo de polmero empregado na
formulao do gele pode influenciar o comportamento reolgico deste e portanto, pode
influenciar a estabilidade fsica do produto, assim como, no seu comportamento sobre
a pele (libertao da substncia activa pelo veculo e formao de filme na pele).
Mediante os dados obtidos possvel traar a curva de tenso de corte versus
velocidade de corte (curva do fluxo) e a curva de viscosidade versus velocidade de
Capitulo III
121
corte (curva da viscosidade), permitindo assim fazer uma anlise comparativa entre as
amostras dos comportamentos dependente do tempo, assim como do comportamento
no dependente do tempo. Na curva do fluxo representado pela Figura 29, observou-
se o comportamento reolgico dos hidrogeles demonstrando um fluido de
comportamento tipo pseudoplstico para o hidrogele de carbopol 1%, enquanto que os
outros hidrogeles demonstram um comportamento plstico, havendo uma tenso de
corte mnima para se iniciar o escoamento.
0 50 100 150 200
10
100
1000
T
e
n
s

o

d
e

c
o
r
t
e

(
P
a
)
Velocidade de corte (s
-1
)
(a)
(b)
(d)
(c)

Figura 29. Grfico da reologia dos hidrogis de (a) Carbopol 1%; (b) Pluronic 20%; (c) Pluronic
20%:Carbopol 0,5% e (d) Pluronic 20%:Carbopol 1,0%.

Viscosidade uma expresso de resistncia do fluido ao fluxo: quanto maior a
viscosidade, maior a resistncia (Almeida, Bahia, 2003).
A viscosidade dos hidrogeles est demonstrada nas figuras 30 a 33. Observou-
se que todos hidrogeles, exibiram um comportamento no-Newtoniano, ocorrendo
uma diminuio da viscosidade com o aumento da velocidade de corte. O hidrogele da
mistura Pluronic 20% com Carbopol 0,5 e 1%, revela uma histerese entre a curva de
descida e subida mostrando um modesto comportamento tixotrpico.
Capitulo III
122
Considerando que o Pluronic foi escolhido devido a sua propriedade de
geleificao termo-sensvel (Kim et al., 2002), e que a temperaturas baixas, se torna
menos viscoso podendo causar incovenientes durante a sua utilizao, a adio de
alguns outros agentes gelificantes podem aumentar a sua viscosidade, no
comprometendo a capacidade de geilificao in situ (Hongyi, 2006). O Carbopol foi
utilizado com essa finalidade e demonstrou aumentar a viscosidade dos hidrogeles e,
ainda, que ao duplicar a concentrao deste polmero a viscosidade aparente no
aumentou de forma proporcional.
Carbopol 1%
0,000
2,000
4,000
6,000
8,000
10,000
12,000
14,000
16,000
0 50 100 150 200 250
Velocidade de corte(s
-1
)
V
i
s
c
o
s
i
d
a
d
e

(
P
a
.
s
)

Figura 30.Viscosidade do Hidrogele de Carbopol 1%.
Pluronic 20%
0,000
50,000
100,000
150,000
200,000
250,000
300,000
350,000
0 50 100 150 200 250
Velocidade de corte(s
-1
)
V
i
s
c
o
s
i
d
a
d
e

(
P
a
.
s
)

Figura 31.Viscosidade do Hidrogele de Pluronic 20%.
Capitulo III
123
Pluronic20%Carbopol0,5%
0,000
100,000
200,000
300,000
400,000
500,000
600,000
700,000
800,000
0 50 100 150 200 250
Velocidade de corte (s
-1
)
V
i
s
c
o
s
i
d
a
d
e

(
P
a
.
s
)

Figura 32.Viscosidade do Hidrogele de Pluronic 20%:Carbopol 0,5%.

Pluronic20%Carbopol1,0%
0,000
100,000
200,000
300,000
400,000
500,000
600,000
0 50 100 150 200 250
Velocidade de corte (s
-1
)
V
i
s
c
o
s
i
d
a
d
e

(
P
a
.
s
)

Figura 33.Viscosidade do Hidrogele de Pluronic 20%:Carbopol 1%.

Anlise da textura dos hidrogeles base

A anlise do perfil da textura tem sido usada para caracterizar as propriedades
mecnicas de sistemas farmacuticos semi-slidos como os hidrogeles. Esta simples
e rpida tcnica pode fornecer informaes relacionadas com parmetros mecnicos
do hidrogele, tais como dureza, adesividade, compressibilidade, e coesividade.
Idealmente, formulaes concebidas para a aplicao bucal de frmacos, deveriam ter
Capitulo III
124
baixa firmeza, e ainda, elevada adesividade. Um hidrogele com baixa firmeza ir
garantir que o trabalho necessrio para ser retirado do recipiente de acondionamento
seja mnimo e simultaneamente uma maior facilidade de aplicao no epitlio da
mucosa oral. Valores de adesividade elevados asseguram uma prolongada adeso do
hidrogele na mucosa oral e uma completa recuperao estrutural do hidrogele aps a
aplicao. Pelas razes expostas, uma adesividade adequada ir garantir uma melhor
eficcia clnica (TAN, 2000). As figuras 34 e 35 representam a firmeza e adesividade
dos hidrogeles de Pluronic e das Misturas Pluronic/Carbopol obtidas temperatura de
25C. E as figuras 36 e 37 representam a firmeza e adesividade dos mesmos
hidrogeles a 37C.
No foi possvel avaliar a textura do hidrogele de Carbopol 1%, com os
mesmos parmetros tcnicos utilizados para o estudo dos restantes hidrogeles, j que
este apresenta uma consistncia mais fluida, oferecendo menor resistncia
penetrao da sonda com os parmetros seleccionados, condicionando a
sensibilidade da sonda.
A adio de concentraes crescentes de Carbopol ao hidrogele de Pluronic
20% alterou significativamente o seu valor de firmeza. A anlise estatstica dos
resultados de firmeza revelou diferenas significativas entre a firmeza dos vrios
hidrogeles (F= 173,273, p < 0,001).O hidrogele de Pluronic 20% apresentou o valor
mais baixo de firmeza relativamente aos hidrogeles de Pluronic/Carbopol.
Quando as concentraes de Carbopol so 0,5% ou 1,0% os valores de
firmeza so comparveis. No entanto quando a concentrao de Carbopol foi
aumentada para 1,5% o valor de firmeza foi maior, e significativamente diferente dos
valores de firmeza dos restantes hidrogeles (Ver anexo II, Test post-hoc).
Um aumento de temperatura traduziu-se num aumento significativo do valor de
firmeza de todos os hidrogeles (ver anexo III para resultados do T-test entre os valores
de firmeza dos hidrogeles a 25 e 37C).
Capitulo III
125
A 37C a firmeza dos hidrogeles contendo 1,0% e 1,5% de Carbopol
comparvel, sugerindo que uma quantidade de 1 % de Carbopol suficiente para
obter um hidrogele com uma firmeza adequada.

Relativamente adesividade dos vrios hidrogeles a 25C foram detectadas
diferenas estatisticamente significantivas (F=35,823; p <0,001). Este efeito foi
igualmente observado quando a temperatura do teste foi de 37C (F= 101,42; p
<0,001). Independentemente da temperatura a que o teste foi realizado, a adio de
concentraes crescentes de Carbopol fez aumentar o valor de adesividade dos
hidrogeles. A adesividade do hidrogeles com 1,0% e 1,5% de Carbopol so
semelhantes, e por isso uma concentrao superior a 1% no se traduz em resultados
melhores de adesividade.
Em suma, todos os hidrogeles mostraram uma forte adesividade em especial a
temperaturas mais elevadas. Por outro lado, a adio de Carbopol permitiu aumentar
consideravelmente o efeito adesivo e controlar a propriedade de geilificao trmica
reversvel do Pluronic, tal como anteriormente descrito por Dumortier (Dumortier,
2006).
De acordo com os resultados obtidos, os hidrogeles com a mistura de Pluronic
20% e Carbopol 1% (p / p) apresentam o melhor compromisso entre firmeza e
adesividade.
Pelo motivo acima referido, escolheu-se este hidrogele para a continuao do
estudo.
Capitulo III
126
Firmeza a 25C
0.0
0.2
0.4
0.6
0.8
1.0
1.2
F
o
r

a

(
N
)
Pluronic 20% Plur/Carb (20/0,5%)
Plur/Carb (20/1%) Plu/Carb (20/1,5%)

Figura 34. Grfico da firmeza dos hidrogeles base a 25 2C.

Adesividade a 25C
0
1
1
2
2
3
3
4
4
A
d
e
s
i
v
i
d
a
d
e

(
m
J
)
Pluronic 20% Plur/Carb (20/0,5%)
Plur/Carb (20/1,0%) Plur/Carb (20/1,5%)

Figura 35. Grfico da adesividade dos hidrogeles base a 25 2C.

Capitulo III
127
Firmeza a 37C
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
F
o
r

a

(
N
)
Pluronic 20% Plur/Carb (20/0,5%)
Plur/Carb (20/1,0%) Plur/Carb (20/1,5%)

Figura 36. Grfico da firmeza dos hidrogeles base a 37 2C.

Adesividade a 37C
0
1
1
2
2
3
3
4
4
A
d
e
s
i
v
i
d
a
d
e

(
m
J
)
Pluronic 20% Plur/Carb (20/0,5%)
Plur/Carb (20/1,0%) Plur/Carb (20/1,5%)

Figura 37. Grfico da adesividade dos hidrogeles base a 37 2C.

Textura dos hidrogeles

As Figuras 38 e 39 representam a firmeza e adesividade dos hidrogeles de
Pluronic/Carbopol 20/1,0%, e do mesmo contendo MCZ, MCD, MF ou Complexo,
obtidas a temperatura de 25C. E as figuras 40 e 41 representam a firmeza e
adesividade dos mesmos hidrogeles a 37C.
Capitulo III
128
Os valores de firmeza dos vrios hidrogeles so estatisticamente diferentes a
25C (F= 395,666; p <0,001) e a 37C (F= 186,416; p <0,001); (Ver anexo IV).
Uma diminuio da firmeza, em relao ao hidrogele de Pluronic/Carbopol 1%,
foi verificado quando se incorporou a ciclodextrina, a mistura fsica, o Miconazol e o
Complexo. O valor de firmeza dos vrios hidrogeles, a 25C e 37C obedece
seguinte ordem de grandeza: Pluronic/Carbopol 1% > Complexo> MCZ >MF >MBCD.
O maior efeito foi observado na presena da ciclodextrina isolada.

A adesividade dos hidrogeles foi estatisticamente diferente a 25C
(F=188,624;p <0,001) e a 37C (F=108,173; p < 0,001). Tal como anteriormente
discutido para os valores de fora, a adesividade diminuiu significativamente quando
se incorporaram os vrios constituintes, sobretudo aquando da adio da ciclodextrina.
Hongyi e colaboladores (2006), demonstraram que a adio de uma ciclodextrina,
hidroxipropil--ciclodextrina num hidrogele de Pluronic, aumentou o tempo de
geleificao, mas reduziu drasticamente a firmeza e a adesividade.
O hidrogele com o Complexo obteve o valor de adesividade e firmeza mais
prximo do hidrogele base de Pluronic/Carbopol. Pode pois concluir-se que um
hidrogele com propriedades adequadas se pode obter com um complexo MCZ/MCD.

Como o Pluronic possui a propriedade de geleificao termo-sensvel (Kim et
al., 2002) a temperatura vai constituir um importante parmetro de observao.
Quando as condies so mais prximas possveis das condies biolgicas, os
resultados demonstrados nas Figuras 38 e 39 revelam maior firmeza e adesividade. A
anlise leva concluso que existem faixas onde as respostas so maximizadas ou
minimizadas, conforme o interesse. Para optar por uma faixa ou outra, temos que
avaliar, portanto, as caractersiticas do produto, ou seja, uma menor firmeza e
adesividade quando em contacto com o frasco de armazenamento e uma firmeza
Capitulo III
129
moderada para a aplicao (espalhar sobre a mucosa com facilidade) e maior
adesividade quando em contacto com a mucosa.

Firmeza a 25C
0,0000
0,0500
0,1000
0,1500
0,2000
0,2500
0,3000
0,3500
0,4000
0,4500
0,5000
F
o
r

a

(
N
)
Plur/Carb1% Gel MCZ Gel MBCD Gel MF Gel Complexo

Figura 38. Grfico da firmeza dos hidrogeles a 25 2C.


Adesividade a 25C
0,0000
0,2000
0,4000
0,6000
0,8000
1,0000
1,2000
1,4000
1,6000
1,8000
A
d
e
s
i
v
i
d
a
d
e

(
m
J
)
Plur/Carb1% Gel MCZ Gel MBCD Gel MF Gel Complexo

Figura 39. Grfico da adesividade dos hidrogeles a 25 2C.

Capitulo III
130
Firmeza a 37C
0,0000
0,2000
0,4000
0,6000
0,8000
1,0000
1,2000
F
o
r

a

(
N
)
Plur/Carb 1% Gel MCZ Gel MBCD Gel MF Gel Complexo

Figura 40. Grfico da firmeza dos hidrogeles a 37 2C.


Adesividade a 37C
0,0000
0,5000
1,0000
1,5000
2,0000
2,5000
3,0000
3,5000
4,0000
A
d
e
s
i
v
i
d
a
d
e

(
m
J
)
Plur/Carb 1% Gel MCZ Gel MBCD Gel MF Gel Complexo

Figura 41. Grfico da adesividade dos hidrogeles a 37 2C.
Aspecto

O Pluronic 127 em concentraes superiores a 20% tem um particular
interesse j que quando em baixas temperaturas apresenta-se como uma soluo
transparente com baixa viscosidade e um hidrogele na forma semi-slida quando
temperatura do corpo (Chvez, 2006). O Carbopol permite controlar o processo de
Capitulo III
131
reversibilidade dos hidrogeles e manter um semi-slido transparente como mostra a
Figura 42.



Capitulo III
132


Figura 42. Aspectos dos hidrogeles.








Capitulo III
133
CONCLUSO

A cedncia de frmacos atravs da mucosa bucal um assunto de grande
importncia para o futuro das formulaes farmacuticas, e representa uma alternativa
administrao oral.
Com base nos dados obtidos, com relao a reologia e textura, os resultados
sugerem que o hidrogele com melhor perfil para administrao bucal de frmacos
deve conter uma mistura de Pluronic 20% e Carbopol 1% (p / p).
A Metil--ciclodextrina demonstrou influenciar a reologia do hidrogele base.
de registar, portanto a importancia da escolha do polmero, j que a partir
deste pode-se ajustar a viscosidade, fora e adesividade a fim de se obter uma
formulao semi-slida que seja fcil de se espalhar e apresente boa adesividade.















Capitulo III
134
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Capitulo IV
136
ESTUDO DE LIBERTAO

INTRODUO

Os mtodos para quantificar a libertao e absoro de frmacos atravs da
pele e mucosas podem ser divididos em duas categorias: in vivo e in vitro. Estudos in
vitro de libertao e absoro, so extremamente importantes na optimizao das
tcnicas de elaborao e da escolha adequada dos componentes das formas
farmacuticas de libertao (Chien, 2005). Actualmente, este tipo de ensaios, constitui
uma das metodologias de suporte ao desenvolvimento galnico e tecnolgico. So
muito utilizados e com certa frequncia para se verificar o comportamento de
diferentes veculos nas mais variadas formulaes (Pershing, 1993).
Algumas das vantagens dos mtodos in vitro relativamente aos in vivo so que
podem ser controladas as condies de estudo, no havendo os interferentes
biolgicos, alm de no serem dispendiosos e facilmente realizveis (Allen; Popovich;
Ansel, 2007, Chien, 2005).
Os estudos in vitro constituem uma ferramenta muito valiosa e determinante na
avaliao do comportamento de formulaes semi-slidas, diante das inmeras
variveis que comprometem o processo de produo. Atravs deles se obtm dados
que possibilitam um maior entendimento dos factos ocorridos, desde a aplicao,
libertao do frmaco da forma farmacutica, reteno e absoro (Campos, 1994,
Nokhodchil et al., 2003).
O uso do teste de dissoluo in vitro para determinar a libertao de frmacos
de slidos orais est descrito nas Farmacopeias e utilizado rotineiramente no
controlo de qualidade desses produtos, principalmente para determinao da
uniformidade de lotes e na determinao de equivalncia farmacutica (USP 28, 2005,
Siewert et al., 2003). Para formulaes no orais, como as dermatolgicas e as
transdrmicas, o termo libertao in vitro preferido. Os princpios de aplicao do
teste de dissoluo para slidos orais tambm podem ser aplicados em testes de
Capitulo IV
137
libertao in vitro, sendo o objectivo final de ambos a caracterizao biofarmacutica
do produto e o controle da sua qualidade (Siewert et al., 2003). O teste de libertao in
vitro para preparaes transdrmicas pode ser realizado com os aparelhos 5, 6 e 7 da
Farmacopia Americana (USP 28, 2005). No entanto, no existe mtodo oficial para
determinao da libertao ou cedncia de produtos semi-slidos (Shah et al., 1989).
A existncia de metodologias in vitro, relactivamente caracterizao da libertao da
substncia activa de semi-slidos funciona como um ensaio equiparvel ao ensaio de
dissoluo das formas farmacuticas slidas (Toscano, 2001).
Uma grande quantidade de artigos, assim como guidelines do FDA,
preconizam o uso de clulas de difuso como a clula de Franz, equipada com
membrana sinttica para determinar a libertao in vitro de formulaes semi-slidas,
como cremes, geles e loes, e tambm de sistemas transdrmicos (Shah et al., 1989;
U.S.FDA/CDER, 1997; Shah et al., 1999). A clula de difuso de Franz tornou-se um
mtodo popular de estudo da difuso e permeao de substncias atravs da pele e
mucosas.
A clula de difuso ou de Franz (Franz, 1975, 1978), que segue um modelo
bicompartimental, esquematizado na Figura 43, possui dois compartimentos, um
contendo o frmaco (compartimento dador) e outro contendo uma soluo onde o
frmaco solvel, separados por uma membrana natural ou sinttica. O sistema de
difuso de Franz bastante utilizado devido ao seu baixo custo, boa reprodutibilidade
dos resultados e realizao em pequeno espao de tempo, comparativamente a outras
tcnicas (Leveque et al., 2003). Neste modelo de Franz, a disposio vertical, mas
existem sistemas onde os dois compartimentos esto dispostos lado a lado (Friend,
1992).
Capitulo IV
138

Figura 43. (A)Ilustrao esquemtica da clula de Franz; (B) compartimento dador, (C)
compartimento dador clula de Franz modificada (Adaptado: Bonferoni, 1998).

Conforme a Figura 43 a formulao colocada na parte acima da membrana,
no compartimento dador e a passagem do frmaco pela membrana para o
compartimento receptor monitorizada pela anlise de amostras do lquido receptor
recolhidas em diferentes tempos. Os parmetros que podem influenciar a taxa de
libertao in vitro so as caractersticas da membrana artificial de suporte empregada
e a composio da soluo receptora adequada (Shah et al., 1999). O sistema deve
possibilitar agitao constante, temperatura controlada e facilidade de amostragens da
soluo receptora (OECD, 2004).
O grfico de quantidade de frmaco acumulado no meio receptor em funo do
tempo fornece o perfil de libertao, e o fluxo de passagem do frmaco a partir da
formulao para a soluo receptora representado pela inclinao da parte recta da
curva (Shah et al., 1989).
Capitulo IV
139
O FDA recomenda o uso desse teste para comprovao de equivalncia entre
produtos sob mudanas especficas, como mudana de equipamento, fornecedor da
matria-prima e outros (U.S.FDA/CDER, 1997). A determinao da taxa de libertao
de diferentes formulaes til durante o desenvolvimento galnico e tecnolgico de
preparaes semi-slidas, sendo um recurso importante para a optimizao de
formulaes. E a taxa de libertao de um frmaco a partir de determinada formulao
depende directamente das caractersticas fsico-qumicas do veculo e do frmaco
(Santoyo et al., 1996).
A solubilidade do frmaco no veculo representa um papel importante na taxa
de libertao in vivo. Algumas consideraes devem ser feitas em relao ao protocolo
de estudo. A soluo receptora deve ser escolhida baseada na solubilidade do
frmaco, de forma que a condio sink seja sempre obedecida. Para frmacos
hidroflicos, comum o uso de solues salinas, enquanto que para substncias
lipoflicas, o uso de aditivos que aumentem a solubilidade pode ser necessrio (Skelly
et al., 1987).
As partculas do frmaco inicialmente precisam ser solubilizadas para que
ento possam sofrer partio e se difundir passivamente para a interface
veculo/membrana biolgica (Allen; Popovich, Ansel, 2007).
O processo de difuso ocorre expontaneamente sendo acompanhado da perda
de energia livre (G) do sistema. A difuso pode ser definida como, a transferncia
expontnea de um componente de uma regio com alto potencial qumico, para uma
regio com potencial mais baixo, sendo o gradiente de concentrao a fora
conductora neste processo (Aulton, 2005).
As leis que descrevem o fenmeno de difuso, normalmente so expressas em
termos de gradientes de concentrao como, por exemplo, a primeira Lei de Fick, que
indica que a taxa de difuso proporcional ao gradiente de concentrao, conforme a
equao11:

Capitulo IV
140
J = dm/ dt = - D dC /dx Eq. (11)
Onde:
O (J) a velocidade de transporte ou a velocidade do fluxo do frmaco que
expresso pela razo da quantidade de substncia transportada (dm) em determinado
tempo (dt) atravs de um plano por unidade de rea (dC/dx) e fornece o gradiente de
concentrao (D) que o coeficiente de difuso expresso em unidades de rea por
unidade de tempo (Aulton, 2005).
A segunda Lei de Fick geralmente empregada em experincias onde se
emprega uma membrana permeante separando dois compartimentos, tendo-se num
deles a maior concentrao do frmaco (compartimento dador) e no outro
(compartimento receptor) a concentrao zero (sink conditions) mantendo assim o
gradiente de concentrao, a quantidade acumulada do frmaco (m) que passa
atravs da membrana, por unidade de rea e em funo do tempo at alcanar o
estado de equilbrio (Equao12).

(dm/dt) = DC
0
K / h (2) (Eq.12)
Onde:

C
0
a concentrao constante do frmaco na soluo doadora,
K o coeficiente de partio do soluto entre o veculo e a membrana,
h a espessura da membrana.

Quando registados em grfico, o tempo de absoro (t) e a quantidade
acumulada absorvida (m) por unidade de rea de membrana em funo do tempo, o
equilbrio verificado quando o grfico se torna linear. Os dados desta poro linear,
extrapolados, de modo a obter a intercepo da curva quando m = 0, fornecem o lag
time (tempo que leva para comear a ocorrer a absoro) (Aulton, 2005).
Capitulo IV
141
Segundo a OECD (2004), a soluo receptora deve ser compatvel com a
metodologia de anlise e elaborada com o conhecimento dos parmetros de
solubilidade e estabilidade da substncia a ser testada e no modelo esttico de clulas
de difuso, o volume recomendado entre 2-20mL. A OECD tambm preconiza para
substncias lipoflicas, a utilizao de solventes orgnicos como etanol (mistura etanol:
gua, 1:1) e 6% de polietilenoglicol 20 olel ter em gua para garantir a solubilidade
das mesmas na soluo receptora.
Tambm temos que ter em considerao que o teste de libertao in vitro,
isoladamente, no deve ser aplicado na avaliao de
biodisponibilidade/bioequivalncia de formulaes semi-slidas, como as
dermatolgicas (U.S.FDA/CDER, 1997). Na verdade, o objectivo do teste no
necessariamente mimetizar o comportamento in vivo, mas sim avaliar indicadores de
performance da formulao (Siewert et al., 2003).

OBJECTIVO

Avaliar o uso da ciclodextrina como promotora de libertao em hidrogele.
Verificar se a escolha dos excipentes da formulao do hidrogele foi adequada.
Avaliar o mtodo utilizado.

MATERIAL

Hidrogele optimizado (complexo obtido por liofilizao); Daktarin Lote:7CB5J00;
Membranas de Dilise de celulose com peso molecular de corte de 12000 a 14000
Daltons (Visking Tubing 18/32 Visking Co. Chicago, IL, USA), Membrana filtrante de
polietersulfona 0,45m (Supor-450 Pall Corporation, Ann Arbor, Michigan) Soluo
Tampo Salina de Fosfato pH 6,8 (Farmacopeia Portuguesa 4ed.), etanol.


Capitulo IV
142
MTODOS

Libertao in vitro atravs de membrana sinttica

Meio receptor

O meio utilizado foi uma mistura de PBS pH 6.8 e etanol nas propores 1:1. Verificou-
se em estudos preliminares a solubilidade do miconazol em diferentes propores
deste meio. Segundo recomendao do FDA (U.S. FDA/CDER, 1997), misturas
hidroalcolicas podem ser utilizadas como meio receptor em estudos de libertao in
vitro, quando o frmaco for lipossolvel. Com a verificao da solubilidade conseguiu-
se obter dados para que a concentrao do miconazol utilizado obedea s condies
sink, e assim no ocorra a proximidade da saturao na soluo receptora do frmaco.
A soluo receptora foi preparada, filtrada e desgaseificada por sonicao em
ultrason.

Curva de Calibrao

Pesou-se rigorosamente 100mg de miconazol e dissolveu-se para 100mL de uma
soluo PBS/etanol (1:1). A partir da soluo anterior (1mg/ml) preparou-se 8 solues
padro com concentraes de 0,1 0,8 mg/ml, numa mistura PBS/etanol. A curva de
calibrao foi construda com as absorvncias lidas a 273 nm versus concentraes. A
absoro mxima do miconazol de 273 nm no solvente escolhido, PBS/etanol (1:1),
sendo este valor confirmado pela obteno de um espectro percorrendo toda a regio
espectral electromagntica. O mtodo foi validado com os parmetros de linearidade,
preciso (ensaios de repetibilidade e de reprodutibilidade) e exactido assim como no
capitulo I (ANEXO I).




Capitulo IV
143
Preparao das membranas sintticas

Membrana de dilise Visking
Cortaram-se segmentos de aproximadamente 3 cm da membrana de dilise,
(Fitzpatrick, 2006) e emergiram-se em alguns mililitros da soluo receptora, por 30
minutos antes de iniciar o ensaio.
Membrana de polieterssulfona
Cortaram-se segmentos de aproximadamente 3 cm de dimetro e emergiram-se em
alguns mililitros de soluo receptora, por de 30 minutos antes de iniciar o ensaio.
Montagem das clulas de difuso de Franz

Os ensaios de libertao in vitro realizaram-se em clulas de Franz. Estas
clulas possuem uma rea de difuso de 1,327 cm
2
e um volume nominal do
compartimento receptor aproximadamente de 11 mL. Nas clulas de Franz, 6 no total
em cada ensaio, foram colocadas membranas de dilise e ou politersulfona entre os
compartimentos, receptor e dador. O compartimento receptor foi preenchido com o
meio previamente filtrado e desgaseificado. A membrana foi disposta na clula,
evitando a formao de bolhas. Em cima da membrana colocou-se o compartimento
dador, que teve sua abertura preenchida por 200mg da amostra, com o auxlio de
seringas, procurando manter uma maior uniformidade nas aplicaes. O sistema foi
fechado com uma garra metlica e tapado com parafilme. A agitao foi mantida por
meio de uma pequena barra magntica. As clulas foram mantidas em banho,
temperatura de 37C.
A retirada da amostra e a entrada da mesma foi feita a partir do brao lateral
das clulas de Franz por mangueiras ligadas ao espectofotmetro, conforme Figura
44. As leituras foram obtidas a cada 5 minutos num total de 3 horas.
Capitulo IV
144

Figura 44. Sistema de retirada de amostra.
A concentrao do frmaco, foi calculada, considerando o volume total de cada
clula.
Anlise dos dados da libertao

Realizou-se uma comparao matemtica, atravs da aplicao das equaes de (f
1
),
factor de diferenciao (Equao 13) e (f
2
) factor de sememelhana, (Equao 14). De
acordo com a orientao do FDA os valores de f1 entre 0 e 15, e f2 entre 50 e 100
asseguram a equivalncia do perfil de libertao. O fator de diferenciao (f
1
) calcula a
diferena percentual entre as duas curvas a cada tempo de leitura e uma medida do
erro relativo entre as duas curvas onde n o nmero de recolhas, R a quantidade
dissolvida do produto de referncia no tempo j e T a quantidade dissolvida do
produto em estudo no mesmo tempo. O fator de semelhana (f
2
) como definido pela
FDA e pela EMEA o logaritmo do recproco da raiz quadrada de um mais o quadrado
mdio da diferena da percentagem de frmaco dissolvida entre os produtos teste e
de referncia:

100
1

|
|
|
|

\
|

=

=
=
n
i j
j
n
i j
j j
R
T R
f
Eq.(13)
( )

(
(
(
(
(

+
=

=
100
1
1
1
log 50
2
1
2
n
j
j j
T R
n
f
Eq.(14)

Capitulo IV
145
RESULTADOS E DISCUSSO


A cedncia ou libertao in vitro um parmetro fundamental no
desenvolvimento das formulaes (Franz, 1965). Na avaliao da libertao in vitro de
formas farmacuticas contendo frmacos lipossolveis, solues receptoras contendo
tensoactivos ou solventes orgnicos podem ser necessrios para garantir a
solubilidade adequada para manuteno das condies sink. Misturas hidroalcolicas
so recomendadas pelo FDA como solues receptoras em sistemas de clulas
bicompartimentais (U.S.FDA/CDER, 1997).
Ainda no desenvolvimento deste tipo de metodologia, um dos passos
fundamentais reside na seleco da membrana artificial de suporte formulao. Esta
deve constituir um suporte inerte relativamente fase receptora, ao frmaco e
formulao, permitindo que a substncia activa se difunda livremente para a fase
receptora, ou seja, que a velocidade de passagem atravs da membrana seja superior
velocidade com que a substncia libertada pela matriz (Higuchi, 1960, 1963).
As Figuras 45 e 46 representam a quantidade, em percentagem, de MCZ
libertado ao longo do tempo de ensaio para cada formulao, tendo como suporte a
membrana de dilise e de polietersulfona, respectivamente.
Verificou-se que o tipo de membrana teve um papel significativo na difuso do
frmaco para o meio receptor. Como se pode observar, a membrana de dilise
apresentou-se como um factor limitante e influenciou o processo de difuso do
frmaco.
Os factores (f
1
) e (f
2
) foram calculados de acordo com a literatura e podem ser
consultados na Tabela 13. Os resultados obtidos indicaram semelhanas entre ambas
formulaes, igualmente demonstrado atravs da anlise estatstica, utilizando o teste
T-student (p > 0.05).
A Eficincia de Dissoluo foi calculada a partir dos valores obtidos de rea
sob a curva (ASC) do perfil de libertao do MCZ no intervalo de tempo (t), atravs do
Capitulo IV
146
mtodo dos trapezides (Khan, Rhodes, 1975), e na Tabela 14 esto os valores
calculados da Eficincia de Dissoluo do MCZ num tempo de 180 minutos.
O MCZ pertence classe 2 na classificao biofarmacutica (Loftsson e
Masson, 2004), e de realar o facto de que a dissoluo in vivo a etapa limitante
da absoro, podendo ser varivel devido aos factores relacionados s formulaes.
Pode-se considerar, entretanto, que as caractersticas dos excipientes da
formulao semi-slida influenciam a libertao do frmaco. Sabe-se que os
excipientes, como os tensioactivos e promotores de absoro, so elementos da
frmula que podem modificar significativamente a sua biodisponibilidade e velocidade
de penetrao de um frmaco.
Tendo na formulao comercial, como excipientes, agentes solubilizantes
polissorbato (tensioactivo no-inico) e lcool, e sabendo-se que o uso de solventes,
tais como o lcool e tensioactivos podem alterar o contedo lipdico da membrana, a
utilizao de CDs pode ser uma alternativa em formulaes semi-slidas.
A MCD uma ciclodextrina modificada que pode ser usada em formulaes
semi-slidas como os hidrogeles, solubilizando frmacos lipoflicos, devido formao
de um complexo e ao aumento da penetrao, resultante da melhoria da
disponibilidade do frmaco no local de aco (Loftsson e Masson, 2001).
A libertao do hidrogele com o complexo MCZ/MCD, segundo (f
1
) e (f
2
),
revelou ser semelhante ao produto comercial e se esse mesmo comportamento
ocorrer in vivo, pode-se extrapolar que uma maior quantidade de MCZ estar
disponvel para a penetrao na mucosa bucal em tempo reduzido. Ventura e
colaboladores, (2006a, 2006b) nos seus estudos de permeao utilizaram uma mistura
hidroalclica (50/50 v/v), o que poder ser testado em estudos futuros.
Procurou-se utilizar, na formulao desenvolvida, matrias-primas capazes de
aumentar a dissoluo, como a ciclodextrina. Alm da preocupao em usar
substncias que partida promovem a maior absoro, tambm a CD tem papel
importante na estabilidade da formulao, podendo vir a causar menor irritabilidade in
Capitulo IV
147
vivo. Da poder considerar-se um excipiente alternativo para o aumento da dissoluo
de frmacos pouco solveis. O uso do complexo formado pelo MCZ/CD tem interesse
no tratamento especialmente da candidase oral, j que os sais solveis de nitratos
tm mau sabor (Pedersen, 1994). Todos estes factores foram considerados aquando
da seleo da ciclodextrina como um dos excipientes da formulao capazes de
promover a absoro.

Tabela 13. Valores de comparao de f
1
e f
2
.
Comparao f
1
Membrana Dilise
f
1
Membrana

Polietersulfona
f
2
Membrana Dilise
f
2
Membrana
Polietersulfona
R/Complexo 1,75 6,65 91,99 81,63
R/R 1,78 7,11 - -
R a referncia (Formulao farmacutica comercial Daktarin )


Tabela 14. Valores de Eficincia de Dissoluo.
ED
Membrana Dilise
ED
Membrana Polietersulfona
Hidrogele Complexo 49.97% 72,52%
Daktarin 49,07% 71,33%








Capitulo IV
148
Libertao in vitro em Membrana de Dilise
0
10
20
30
40
50
60
70
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
Tempo (min)
C
o
n
c
e
n
t
r
a

o

(
%
)
Hidrogele Complexo Daktarin

Figura 45. Perfil de Libertao in vitro dos hidrogeles em Membrana de Dilise


Libertao in vitro em Membrana de Polietersulfona
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
0 20 40 60 80 100 120 140 160 180
Tempo (min)
C
o
n
c
e
n
t
r
a

o

(
%
)
Hidrogele Complexo Daktarin

Figura 46. Perfil de Libertao in vitro dos hidrogeles em Membrana de Polietersulfona.
Capitulo IV
149
CONCLUSO

A metodologia in vitro contribui consideravelmente para a tecnologia farmacutica,
porque representa um procedimento prctico, rpido e de baixo custo, que permite
antever o comportamento apresentado pela formulao como um todo.
A determinao do perfil de libertao in vitro utilizando clulas modificadas de Franz
equipada com membrana sinttica mostrou constituir um mtodo adequado para
avaliao das formulaes.
O hidrogele com o complexo, apresentou semelhana no perfil de libertao do MCZ
quando comparado com a formulao comercial.
E a MCD pode ser considerada uma alternativa para melhorar a biodisponibilidade do
miconazol, j que promotores como o lcool agem reduzindo a funo barreira das
membranas.








Capitulo IV
150
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Capitulo IV
153
Perspectivas futuras
Estudo de sistemas ternrios.
Estudo de estabilidade dos complexos
Estudo de estabilidade da formulao final.
Estudos de permeao in vitro e in vivo do hidrogele com o complexo.
Estudos da actividade antifngica dos complexos.






















Capitulo IV
154
Concluses Gerais

Durante as vrias fases da investigao sobre a influncia das CDs nas
caractersticas fsico qumicas e na disponibilidade do MCZ, pde concluir-se que:
Nos estudos de solubilidade de fases, e a partir do diagrama de fases
conseguiu-se estabelecer o tipo do grfico, como sendo do tipo A
P
, e a estequiometria
dos complexos de incluso do MCZ/MCD e MCZ/HPC como sendo 1:1e 1:2.
Relativamente aos complexos de incluso no estado slido de MCZ estes
foram obtidos pelos mtodos de liofilizao e secagem por pulverizao. O mtodo de
malaxagem e de co-evaporao produziu complexos de incluso parcial; e aps
estudo da sua solubilidade aquosa, demonstraram ser superior da simples mistura
fsica.
Se o interesse for uma maior escala de produo deve ter-se em considerao
que o mtodo de secagem por pulverizao tem baixos rendimentos, sendo mais
utilizado entretanto em escala laboratorial, ao contrrio do mtodo de liofilizao que
tem interesse em escala industrial por ser um mtodo eficaz, fcil e com alto
rendimento.
Pode verificar-se que o comportamento reolgico e a textura das formulaes,
foram influenciadas pelo tipo do polmero, pela concentrao usada e pela
temperatura. Pde observar-se ainda que o tipo de polmero, assim como a
concentrao deste na formulao, teve influncia na caracterstica tixotrpica do
produto final.
Sabemos que uma substncia lipossolvel tem boa permeabilidade atravs das
membranas, mas a sua disponibilidade nos fluidos biolgicos seria nula, visto que,
para que ela acontessesse seria nescessrio que se dissolvesse, ou que pelo menos
se dispersasse completamente, no meio aquoso fisiolgico, logo o uso das CDs se
mostra interessante para aumentar a promoo da absoro de frmacos pouco
solveis.
Anexo
155
ANEXO I

Validao da curva de calibrao

Validar estabelecer evidncias documentadas que garantam que um
determinado procedimento ir reproduzir resultados de acordo com especificaes
pr-determinadas (FDA, 2000). A validao um processo necessrio para justificar a
qualidade e a segurana dos resultados em todos os mtodos analticos. o
processo que fornece uma evidncia documentada de que o mtodo realiza aquilo
para o qual indicado para fazer segundo a Farmacopeia Americana (USP29/NF24,
2006). O mtodo foi validado com os parmetros de linearidade, preciso e exactido.
A linearidade foi determinada a partir do coeficiente de correlao da curva de
calibrao A (Etanol/gua) (Figura 47) e curva de calibrao B (PBS/Etanol) (Figura
48), cujo valor encontrado do r foi de 0,999, para ambas as curvas, o que indica uma
boa linearidade entre a absorvncia e a concentrao. A linearidade avaliada no s
pelo coeficiente de correlao mas ainda pelo coeficiente de variao dos factores de
resposta. O clculo deste parmetro necessita do factor resposta, sendo este a
relao entre a absorvncia medida e a concentrao conhecida. A razo percentual
entre o seu desvio padro e a sua mdia permitem calcular ento o coeficiente de
variao dos factores resposta. O coeficiente de variao dos factores obtido foi de
1,754%, para A e 1,794% para B, o que inferior ao valor mximo indicado de 2%.
Anexo
156
Curva Calibrao Etanol/gua (1:1)
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9
Conc.(mg/ml)
A
b
s
.
(
n
m
)
Figura 47. Curva de calibrao A, de miconazol em etanol/gua (1:1), a 272 nm.

Curva Calibrao PBS/Etanol (1:1)
0,0
0,2
0,4
0,6
0,8
1,0
1,2
1,4
0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 0,7 0,8 0,9
Conc.(mg/ml)
A
b
s
.

(
n
m
)

Figura 48. Curva de calibrao B de miconazol em PBS/etanol (1:1), a 273 nm.

A exactido de um mtodo analtico indica a capacidade do mtodo analtico
proporcionar resultados o mais prximo possvel do valor aceite como verdadeiro. A
exactido de um mtodo analtico a proximidade dos resultados obtidos pelo mtodo
em estudo em relao ao valor verdadeiro ou um valor aceite como referncia. Deve
Anexo
157
ser expressa como porcentagem de recuperao, sendo calculada a partir da equao
(15):

FR= (x
m
/)x100 (Eq.15)

em que x
m
o valor experimental para a concentrao, ou seja o valor calculado a
partir da curva de calibrao obtida e o o valor aceite como verdadeiro ou terico.
Os valores obtidos para a percentagem de recuperao foram de 99,65% e
100,07% e estando dentro dos limites estabelecidos de 98 - 102 (USP/2006), prova a
exactido do mtodo experimental.
A comparao entre valores obtidos a partir de um conjunto de resultados com
um valor verdadeiro ou outro conjunto de dados, permite determinar se o mtodo
analtico foi exacto (ICH, 1995). Um mtodo que pode ser utilizado o teste t de
student. Calcula-se o valor de t experimental e compara-se com um valor terico
tabelado, como indicado na equao (16):

T
exp
= (100 mdia )x n
0,5
/ CV%R (Eq.16)

nesta equao n o nmero de valores experimentais que se utiliza no clculo da
recta, aqui utilizou-se 8 concentraes para A e 8 concentraes para B. Os valores
calculados para o t experimental foram de 0,563 e de -0,1254. Pela tabela temos os
valores de t, com nvel de confiana 95% para n=8 graus de liberdade, como sendo de
1,717. Como o t experimental menor que o valor tabelado (Fisher, 1925), podemos
concluir que no h diferena significativa, entre os valores experimentais calculados a
partir da recta de calibrao e os valores tericos.
A preciso a avaliao da proximidade dos resultados obtidos em uma srie
de medidas de uma amostragem mltipla de uma mesma amostra. Podendo ser
Anexo
158
expressa como desvio padro ou desvio padro relativo (DPR) ou coeficiente de
variao (CV%) de uma srie de medidas. No admitisse valores superiores a 5 %.
A preciso o grau de concordncia entre os diferentes resultados obtidos em
vrias determinaes efectuadas sobre uma srie repetida de ensaios analticos numa
dada amostra homognea sob condies definidas (ICH, 1995). Pode ser considerada
a partir da: repetibilidade, preciso intermediria e reprodutibilidade (ICH, 1995). A
repetibilidade diz respeito preciso obtida quando todas as medidas so feitas pelo
mesmo analista durante um curto perodo de tempo, usando as mesmas solues e
equipamento. J a reprodutibilidade, a preciso obtida por um conjunto de condies
incluindo diferentes analistas, diferentes laboratrios e diferentes solues (ICH,
1995). E a preciso intermediria deve ser estabelecida de acordo com a aplicao do
mtodo, podendo haver variaes de analista, dias, equipamento entre outras.
Avaliou-se a preciso intermediria do mtodo, onde as fontes de variabilidade foram
a anlise de amostras em replicado e o intervalo de tempo em que foram medidas, 3
dias diferentes.
A preciso foi avaliada tendo em conta os valores de desvio padro e do
coeficiente de variao das 9 leituras de absorvncias medidas a parir das 8 solues
padro (Tabela 15 e 16).

Tabela 15. Dados utilizados e obtidos para a verificao da preciso do mtodo de UV para
anlise do MCZ, para curva A, (Etanol/gua)

Concentrao
(mg/ml) Mdia de Abs. Desvio Padro
Coeficiente de
Variao
0,1 0,1500 0,005341 3,561274
0,2 0,2984 0,002450 0,821011
0,3 0,4516 0,010856 2,403828
0,4 0,5989 0,005624 0,939064
0,5 0,7438 0,015515 2,085974
0,6 0,8958 0,018750 2,093026
0,7 1,0420 0,015093 1,448526
0,8 1,1862 0,016525 1,393034
Anexo
159
Tabela 16. Dados utilizados e obtidos para a verificao da preciso do mtodo de UV para
anlise do MCZ para curva B (PBS/Etanol).

Concentrao
(mg/ml) Mdia de Abs. Desvio Padro
Coeficiente de
Variao
0,1
0,1665
0,00194 1,166609
0,2 0,3202 0,00728 2,273807
0,3 0,4805 0,00795 1,655363
0,4 0,6421 0,00098 0,153321
0,5 0,7947 0,00390 0,490369
0,6 0,9525 0,00187 0,196062
0,7 1,1175 0,00995 0,890625
0,8 1,2673 0,00770 0,607522


Os resultados apresentados para o coeficiente de variao encontram-se
abaixo do valor de 5,0%, provando assim a preciso do mtodo.
O limite de deteco (LD) a menor quantidade do analto presente em uma
amostra que pode ser detectado, porm no necessariamente quantificado. O limite de
quantificao (LQ) a menor quantidade do analto que pode ser determinada com
preciso e exactido aceitveis. Estes parmetros foram calculados de acordo com as
seguintes equaes 17 e 18:

LD = 3x3x/S (Eq.17) e LQ = 10x/S (Eq. 18)

onde o desvio padro residual da regresso linear (ICH, 1995) e S o
declive da curva de calibrao. Obtendo valores de LD de 0,0149 mg/ml e de LQ de
0,016 mg/ml para a curva A e LD 0,017mg/ml e LQ 0,019mg/ml para a curva B,
para a deteco do miconazol pelo mtodo utilizado.
Para avaliar a validade do modelo com o qual as medies foram feitas, ter de
se avaliar a regresso linear calculada. Para essa avaliao preciso calcular e
representar graficamente o erro residual para cada valor de concentrao. O erro
Anexo
160
residual definido como, a diferena entre um valor experimental e um valor calculado
a partir da equao da regresso linear. Para cada soluo padro de calibrao o
erro residual, ri = yi-y, onde yi a mdia das leituras obtidas experimentalmente para
uma dada concentrao padro e y a mdia das leituras calculadas a partir da curva
de calibrao (ICH, 1995).
Conclui-se que o modelo utilizado vlido, j que os grficos representados
pelas Figuras 50 e 51 demonstram o erro residual distribudo ao acaso com valor
mdio zero.


-0,004
-0,002
0
0,002
0,004
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
Concentrao (mg/ml)
E
r
r
o

r
e
s
i
d
u
a
l

Figura 50.:Grfico distribuio do erro residual, curva A.
-0,004
-0,002
0
0,002
0,004
0,006
0 0,2 0,4 0,6 0,8 1
Concentrao (mg/ml)
E
r
r
o

r
e
s
i
d
u
a
l

Figura 51.: Grfico distribuio do erro residual, curva B.
Anexo
161
ANEXO II

Estudo estatstico da fora e adesividade dos hidrogeles base.


TEMPERATURA=25C


FORA
ANOVA

Fora

Soma dos
quadrados df
Mdia ao
quadrado F Sig.
Entre grupos
,271 3 ,090 173,273 ,000
Mesmo Grupo
,004 8 ,001
Total
,275 11

Comparaes multiplas

Varivel dependente: Fora
Scheffe
(I) TIPO DO
HIDROGELE (J) Tipo do hidrogele
Diferena
Mdia (I-J)
Erro
pado Sig.
95% Intervalo de
Confiana
Limite
Inferior
Limite
Superior
PLURONIC PLURONIC/CARB0.5% -,2193667(*) ,0186467 ,000 -,284493 -,154240
PLURONIC/CARB1%
-,2542667(*) ,0186467 ,000 -,319393 -,189140
PLURONIC/CARB1.5%
-,4221333(*) ,0186467 ,000 -,487260 -,357007
PLURONIC/CARB0.5% PLURONIC
,2193667(*) ,0186467 ,000 ,154240 ,284493
PLURONIC/CARB1%
-,0349000 ,0186467 ,381 -,100026 ,030226
PLURONIC/CARB1.5% -,2027667(*) ,0186467 ,000 -,267893 -,137640
PLURONIC/CARB1% PLURONIC ,2542667(*) ,0186467 ,000 ,189140 ,319393
PLURONIC/CARB0.5%
,0349000 ,0186467 ,381 -,030226 ,100026
PLURONIC/CARB1.5%
-,1678667(*) ,0186467 ,000 -,232993 -,102740
PLURONIC/CARB1.5% PLURONIC
,4221333(*) ,0186467 ,000 ,357007 ,487260
PLURONIC/CARB0.5% ,2027667(*) ,0186467 ,000 ,137640 ,267893
PLURONIC/CARB1%
,1678667(*) ,0186467 ,000 ,102740 ,232993
* Diferena significativa para intervalo de confiana de 95%.


Fora

Scheffe
TiIPO DO
HIDROGELE N
Subset for alpha = .05
1 2 3
PLURONIC
3 ,167900
PLURONIC/CARB0.5
%
3 ,387267
PLURONIC/CARB1%
3 ,422167
PLURONIC/CARB1.5
%
3 ,590033
Sig.
1,000 ,381 1,000
Mdias para grupos em subgrupos homogeneos so exibidos.
a Mdia harmonica do tamanho da amostra = 3,000.
Anexo
162
TEMPERATURA =37C

FORA ANOVA

Fora

Somas dos
quadrados df
Mdia ao
quadrado F Sig.
Entre grupos
,357 3 ,119 225,281 ,000
Mesmo Grupo
,004 8 ,001
Total
,362 11

Comparaes multiplas

Varivel dependente: Fora

* Diferena significativa para intervalo de confiana de 95%

Fora

Scheffe
TIPO DE
HIDROGELE N
Subgrupo para = .05
1 2 3
PLURONIC
3 ,370233
PLURONIC/CARB0.5
%
3 ,583467
PLURONIC/CARB1%
3 ,761567
PLURONIC/CARB1.5
%
3 ,809400
Sig.
1,000 1,000 ,170
Mdias para grupos em subgrupos homogeneos so exibidos.
a Mdia harmonica do tamanho da amostra = 3,000.



(I) TIPO DO
HIDROGELE (J) Tipo do hidrogele
Diferena
Mdia (I-J)
Erro
pado Sig.
95% Intervalo de
Confiana
Limite
Inferior
Limite
Superior
PLURONIC PLURONIC/CARB0.5% -
,2132333(*)
,0187762 ,000
-
,278812
-
,147655
PLURONIC/CARB1% -
,3913333(*)
,0187762 ,000
-
,456912
-
,325755
PLURONIC/CARB1.5% -
,4391667(*)
,0187762 ,000
-
,504745
-
,373588
PLURONIC/CARB0.5% PLURONIC ,2132333(*) ,0187762 ,000 ,147655 ,278812
PLURONIC/CARB1% -
,1781000(*)
,0187762 ,000
-
,243678
-
,112522
PLURONIC/CARB1.5% -
,2259333(*)
,0187762 ,000
-
,291512
-
,160355
PLURONIC/CARB1% PLURONIC ,3913333(*) ,0187762 ,000 ,325755 ,456912
PLURONIC/CARB0.5% ,1781000(*) ,0187762 ,000 ,112522 ,243678
PLURONIC/CARB1.5%
-,0478333 ,0187762 ,170
-
,113412
,017745
PLURONIC/CARB1.5% PLURONIC ,4391667(*) ,0187762 ,000 ,373588 ,504745
PLURONIC/CARB0.5% ,2259333(*) ,0187762 ,000 ,160355 ,291512
PLURONIC/CARB1%
,0478333 ,0187762 ,170
-
,017745
,113412
Anexo
163
ADESIVIDADE 25C


ANOVA

ADESIVIDADE
Somas dos quadrados df
Mdia ao
quadrado F Sig.
Entre grupos
2,405 3 ,802 35,823 ,000
Mesmo Grupo ,179 8 ,022
Total
2,584 11

Comparaes multiplas

Varivel dependente: ADESIVIDADE
Scheffe
* Diferena significativa para intervalo de confiana de 95%.


ADESIVIDADE

Scheffe
TIPO DO
HIDROGELE N
Subgrupo para = .05
1 2 3
PLURONIC
3 ,708000
PLURONIC/CARB0.5
%
3 1,217667
PLURONIC/CARB1%
3 1,585000 1,585000
PLURONIC/CARB1.5
%
3 1,913000
Sig.
1,000 ,094 ,143
Mdias para grupos em subgrupos homogeneos so exibidos.
a Mdia harmonica do tamanho da amostra = 3,000.



(I) TIPO DO
HIDROGELE
(J) TIPO DO
HIDROGELE
Diferena
Mdia (I-J)
Erro
pado Sig.
95% Intervalo de
Confiana
Limite
inferior
Limite
superior
PLURONIC PLURONIC/CARB0.5% -,5096667(*) ,1221484 ,021 -,936287 -,083046
PLURONIC/CARB1%
-,8770000(*) ,1221484 ,001
-
1,303620
-,450380
PLURONIC/CARB1.5% -
1,2050000(*)
,1221484 ,000
-
1,631620
-,778380
PLURONIC/CARB0.5% PLURONIC
,5096667(*) ,1221484 ,021 ,083046 ,936287
PLURONIC/CARB1%
-,3673333 ,1221484 ,094 -,793954 ,059287
PLURONIC/CARB1.5%
-,6953333(*) ,1221484 ,003
-
1,121954
-,268713
PLURONIC/CARB1% PLURONIC
,8770000(*) ,1221484 ,001 ,450380 1,303620
PLURONIC/CARB0.5%
,3673333 ,1221484 ,094 -,059287 ,793954
PLURONIC/CARB1.5%
-,3280000 ,1221484 ,143 -,754620 ,098620
PLURONIC/CARB1.5% PLURONIC
1,2050000(*) ,1221484 ,000 ,778380 1,631620
PLURONIC/CARB0.5% ,6953333(*) ,1221484 ,003 ,268713 1,121954
PLURONIC/CARB1%
,3280000 ,1221484 ,143 -,098620 ,754620
Anexo
164


ADESIVIDADE 37C


ANOVA

ADESIVIDADE

Somas dos
quadrados df
Mdia ao
quadrado F Sig.
Entre grupos
6,042 3 2,014 101,042 ,000
Mesmo Grupo
,159 8 ,020
Total
6,201 11

Comparaes multiplas

Varivel dependente: ADESIVIDADE
Scheffe
* Diferena significativa para intervalo de confiana de 95%.

ADESIVIDADE

Scheffe
TIPO DO
HIDROGELE N
Subgrupo para = .05
1 2 3
PLURONIC
3 1,570667
PLURONIC/CARB0.5
%
3 2,756000
PLURONIC/CARB1% 3 3,307333
PLURONIC/CARB1.5
%
3 3,309667
Sig.
1,000 1,000 1,000
Mdias para grupos em subgrupos homogeneos so exibidos.
a Mdia harmonica do tamanho da amostra = 3,000.


(I) TIPO DO
HIDROGELE
(J) TIPO DO
HIDROGELE
Diferena
Mdia (I-J)
Erro
pado Sig.
95% Intervalo de
Confiana
Lower
Bound
Upper
Bound
PLURONIC PLURONIC/CARB0.5% -
1,1853333(*)
,1152721 ,000
-
1,587938
-,782729
PLURONIC/CARB1% -
1,7366667(*)
,1152721 ,000
-
2,139271
-
1,334062
PLURONIC/CARB1.5% -
1,7390000(*)
,1152721 ,000
-
2,141604
-
1,336396
PLURONIC/CARB0.5% PLURONIC
1,1853333(*) ,1152721 ,000 ,782729 1,587938
PLURONIC/CARB1%
-,5513333(*) ,1152721 ,010 -,953938 -,148729
PLURONIC/CARB1.5% -,5536667(*) ,1152721 ,010 -,956271 -,151062
PLURONIC/CARB1% PLURONIC
1,7366667(*) ,1152721 ,000 1,334062 2,139271
PLURONIC/CARB0.5% ,5513333(*) ,1152721 ,010 ,148729 ,953938
PLURONIC/CARB1.5%
-,0023333 ,1152721 1,000 -,404938 ,400271
PLURONIC/CARB1.5% PLURONIC
1,7390000(*) ,1152721 ,000 1,336396 2,141604
PLURONIC/CARB0.5% ,5536667(*) ,1152721 ,010 ,151062 ,956271
PLURONIC/CARB1%
,0023333 ,1152721 1,000 -,400271 ,404938
Anexo
165
ANEXO III

Teste t-student para estudo da firmeza dos hidrogeles base nas temperaturas de 25C
e 37C.

T test hidrogele=Pluronic 20%

Teste para amostras independentes

Teste Levene para
varincias iguais T-test para igualdade das mdias
F Sig. t df
Sig. (2-
calda)
Diferenci
a mdia
Erro
Padro
Intervalo de
confiana 95%
Inferior Superior
F
o
r

a

Assume
Varincias
iguais
,534 ,506 -35,489 4 ,000
-
,2023333
,0057013
-
,218162
6
-
,186504
1
No assume
varincias
iguais
-35,489 3,744 ,000
-
,2023333
,0057013
-
,218598
5
-
,186068
1


T test hidrogele= Pluronic/Carb.0,5%

Teste para amostras independentes


T test hidrogele= Pluronic/Carb.1,0%

Teste para amostras independentes


Teste Levene para
varincias iguais T-test para igualdade das mdias
F Sig. t df
Sig. (2-
calda)
Diferen
a Mdia
Erro
Padro
Intervalo de
confiana 95%
Inferior Superior
F
o
r

a

Assume
Varincias
iguais
2,847 ,167 -11,447 4 ,000
-
,1962000
,0171393
-
,243786
3
-
,148613
7
No assume
varincias
iguais
-11,447 2,210 ,005
-
,1962000
,0171393
-
,263629
2
-
,128770
8

Teste Levene para
varincias iguais T-test para igualdade das mdias
F Sig. t df
Sig. (2-
calda)
Diferen
a Mdia
Erro
Padro
Intervalo de
confiana 95%
Inferior Superior
F
o
r

a

Assume
Varincias
iguais
2,429 ,194 -18,289 4 ,000
-
,3394000
,0185574
-
,390923
5
-
,287876
5
No assume
varincias
iguais
-18,289 2,695 ,001
-
,3394000
,0185574
-
,402425
1
-
,276374
9
Anexo
166

T test hidrogele= Pluronic/Carb.1,5%

Teste para amostras independentes


Teste t-student para estudo da adesividade dos hidrogeles base para as
temperaturas de 25C e 37C.


T test hidrogele= Pluronic 20%

Teste para amostras independentes


Teste Levene para
varincias iguais T-test para igualdade das mdias
F Sig. t df
Sig. (2-
calda)
Diferen
a Mdia
Erro
Padro
Intervalo de
confiana 95%
Inferior Superior
A
d
e
s
i
v
i
d
a
d
e

Assume
Varincias
iguais
2,168 ,215 -19,145 4 ,000
-
,8626667
,0450605
-
,987774
5
-
,737558
8
No assume
varincias
iguais
-19,145 3,095 ,000
-
,8626667
,0450605
-
1,00360
52
-
,721728
1


T test hidrogele= Pluronic/Carb.0,5%

Teste para amostras independentes

Teste Levene para
varincias iguais T-test para igualdade das mdias
F Sig. t df
Sig. (2-
calda)
Diferen
a Mdia
Erro
Padro
Intervalo de
confiana 95%
Inferior Superior
A
d
e
s
i
v
i
d
a
d
e
Assume
Varincias
iguais
,006 ,942 -11,158 4 ,000
-
1,538333
3
,1378723
-
,1,9211
283
-
1,15553
84
No assume
varincias
iguais
-11,158 3,935 ,000
-
1,538333
3
,1378723
-
,1,9211
283
-
1,15303
65



Teste Levene para
varincias iguais T-test para igualdade das mdias
F Sig. t df
Sig. (2-
calda)
Diferen
a Mdia
Erro
Padro
Intervalo de
confiana 95%
Inferior Superior
F
o
r

a

Assume
Varincias
iguais
1,012 ,371 -8,120 4 ,001
-
,2193667
,0270158
-
,294374
6
-
,144358
7
No assume
varincias
iguais
-8,120 2,712 ,006
-
,2193667
,0270158
-
,310737
9
-
,127995
4
Anexo
167
T test hidrogele= Pluronic/Carb.1,0%

Teste para amostras independentes


Teste Levene para
varincias iguais T-test para igualdade das mdias
F Sig. t df
Sig. (2-
calda)
Diferen
a Mdia
Erro
Padro
Intervalo de
confiana 95%
Inferior Superior
A
d
e
s
i
v
i
d
a
d
e
Assume
Varincias
iguais
1,467 ,293 -15,760 4 ,000
-
1,722333
3
,1092876
-
2,02576
43
-
1,41890
23
No assume
varincias
iguais
-15,760 2,956 ,001
-
1,722333
3
,1092876
-
2,07309
80
-
1,37156
87


T test hidrogele= Pluronic/Carb.1,5%

Teste para amostras independentes


Teste Levene para
varincias iguais T-test para igualdade das mdias
F Sig. t df
Sig. (2-
calda)
Diferen
a Mdia
Erro
Padro
Intervalo de
confiana 95%
Inferior Superior
A
d
e
s
i
v
i
d
a
d
e

Assume
Varincias
iguais
,252 ,642 -9,124 4 ,001
-
1,396666
7
,1530777
-
1,82167
85
-
,971654
9
No assume
varincias
iguais
-9,124 3,484 ,001
-
1,396666
7
,1530777
-
1,84771
20
-
,945621
3




















Anexo
168
ANEXO IV

Hidrogeles com Miconazol, MCD e Sistemas binrios.

FIRMEZA a 25C


ANOVA

Firmeza

Soma dos
quadrados df
Mdia ao
quadrado F Sig.
Entre grupos
,235 4 ,059 395,666 ,000
Mesmo Grupo
,001 10 ,000
Total
,236 14

Comparaes Mltiplas

Varivel dependente: Fora
Scheffe
(I) TIPO DO
HIDROGELE
(J) TIPO DO
HIDROGELE
Diferena
Mdia (I-J)
Erro
pado Sig.
95% Intervalo de
Confiana
Limite
Inferior
Limite
Superior
PLURONIC/CARB1% MCZ ,1918667(*) ,0099474 ,000 ,154764 ,228970
MCD ,3663333(*) ,0099474 ,000 ,329230 ,403436
MF ,1922667(*) ,0099474 ,000 ,155164 ,229370
COMPLEXO ,0697000(*) ,0099474 ,001 ,032597 ,106803
MCZ PLURONIC/CARB1% -,1918667(*) ,0099474 ,000 -,228970 -,154764
MCD ,1744667(*) ,0099474 ,000 ,137364 ,211570
MF ,0004000 ,0099474 1,000 -,036703 ,037503
COMPLEXO -,1221667(*) ,0099474 ,000 -,159270 -,085064
MCD PLURONIC/CARB1% -,3663333(*) ,0099474 ,000 -,403436 -,329230
MCZ -,1744667(*) ,0099474 ,000 -,211570 -,137364
MF -,1740667(*) ,0099474 ,000 -,211170 -,136964
COMPLEXO -,2966333(*) ,0099474 ,000 -,333736 -,259530
MF PLURONIC/CARB1% -,1922667(*) ,0099474 ,000 -,229370 -,155164
MCZ -,0004000 ,0099474 1,000 -,037503 ,036703
MCD ,1740667(*) ,0099474 ,000 ,136964 ,211170
COMPLEXO -,1225667(*) ,0099474 ,000 -,159670 -,085464
COMPLEXO PLURONIC/CARB1% -,0697000(*) ,0099474 ,001 -,106803 -,032597
MCZ ,1221667(*) ,0099474 ,000 ,085064 ,159270
MCD ,2966333(*) ,0099474 ,000 ,259530 ,333736
MF ,1225667(*) ,0099474 ,000 ,085464 ,159670
* Diferena significativa para intervalo de confiana de 95%.













Anexo
169
Firmeza

Scheffe
TIPO DO
HIDROGELE N
Subgrupo para = .05
1 2 3 4
MCD 3 ,055833
MF
3 ,229900
MCZ
3 ,230300
COMPLEXO
3 ,352467
PLURONIC/CARB1
%
3 ,422167
Sig.
1,000 1,000 1,000 1,000
Mdias para grupos em subgrupos homogeneos so exibidos.
a Mdia harmonica do tamanho da amostra = 3,000.













































Anexo
170
FIRMEZA 37C


ANOVA
Fora

Soma dos
quadrados df
Mdia ao
quadrado F Sig.
Entre grupos
,712 4 ,178 186,416 ,000
Mesmo Grupo
,010 10 ,001
Total
,722 14

Comparaes Mltiplas

Varivel dependente: Fora
Scheffe
* Diferena significativa para intervalo de confiana de 95%.







(I) TIPO DO
HIDROGELE
(J) TIPO DO
HIDROGELE
Diferena
Mdia (I-J)
Erro
pado Sig.
95% Intervalo de
Confiana
Limite
Inferior
Limite
Superior
PLURONIC/CARB1% MCZ -
,2588000(*)
,0252327 ,000
-
,352915
-
,164685
MCD ,3937000(*) ,0252327 ,000 ,299585 ,487815
MF ,1617667(*) ,0252327 ,001 ,067651 ,255882
COMPLEXO
-,0443333 ,0252327 ,568
-
,138449
,049782
MCZ PLURONIC/CARB1% ,2588000(*) ,0252327 ,000 ,164685 ,352915
MCD ,6525000(*) ,0252327 ,000 ,558385 ,746615
MF ,4205667(*) ,0252327 ,000 ,326451 ,514682
COMPLEXO ,2144667(*) ,0252327 ,000 ,120351 ,308582
MBCD PLURONIC/CARB1% -
,3937000(*)
,0252327 ,000
-
,487815
-
,299585
MCZ -
,6525000(*)
,0252327 ,000
-
,746615
-
,558385
MF -
,2319333(*)
,0252327 ,000
-
,326049
-
,137818
COMPLEXO -
,4380333(*)
,0252327 ,000
-
,532149
-
,343918
MF PLURONIC/CARB1% -
,1617667(*)
,0252327 ,001
-
,255882
-
,067651
MCZ -
,4205667(*)
,0252327 ,000
-
,514682
-
,326451
MCD ,2319333(*) ,0252327 ,000 ,137818 ,326049
COMPLEXO -
,2061000(*)
,0252327 ,000
-
,300215
-
,111985
COMPLEXO PLURONIC/CARB1%
,0443333 ,0252327 ,568
-
,049782
,138449
MCZ -
,2144667(*)
,0252327 ,000
-
,308582
-
,120351
MCD ,4380333(*) ,0252327 ,000 ,343918 ,532149
MF ,2061000(*) ,0252327 ,000 ,111985 ,300215
Anexo
171
Firmeza

Scheffe
TIPO DO
HIDROGELE N
Subgrupo para = .05
1 2 3 4
MCD 3 ,367867
MF
3 ,599800
PLURONIC/CARB1
%
3 ,761567
COMPLEXO
3 ,805900
MCZ
3 1,020367
Sig.
1,000 1,000 ,568 1,000
Mdias para grupos em subgrupos homogeneos so exibidos.
a Mdia harmonica do tamanho da amostra = 3,000.













































Anexo
172
ADESIVIDADE 25C


ANOVA

ADESIVIDADE

Soma dos
quadrados df
Mdia ao
quadrado F Sig.
Entre grupos
4,064 4 1,016 188,624 ,000
Mesmo Grupo ,054 10 ,005
Total
4,117 14

Comparaes Mltiplas

Varivel dependente: ADESIVIDADE
Scheffe
(I) TIPO DO
HIDROGELE
(J) TIPO DO
HIDROGELE
Diferena
Mdia (I-J)
Erro
pado Sig.
95% Intervalo de
Confiana
Limite
Inferior
Limite
Superior
PLURONIC/CARB1% MCZ 1,0983333(*) ,0599211 ,000 ,874833 1,321833
MCD 1,3200000(*) ,0599211 ,000 1,096500 1,543500
MF
1,3126667(*) ,0599211 ,000 1,089167 1,536167
COMPLEXO
,4816667(*) ,0599211 ,000 ,258167 ,705167
MCZ PLURONIC/CARB1% -
1,0983333(*)
,0599211 ,000
-
1,321833
-,874833
MCD ,2216667 ,0599211 ,052 -,001833 ,445167
MF ,2143333 ,0599211 ,062 -,009167 ,437833
COMPLEXO
-,6166667(*) ,0599211 ,000 -,840167 -,393167
MBCD PLURONIC/CARB1% -
1,3200000(*)
,0599211 ,000
-
1,543500
-
1,096500
MCZ
-,2216667 ,0599211 ,052 -,445167 ,001833
MF
-,0073333 ,0599211 1,000 -,230833 ,216167
COMPLEXO
-,8383333(*) ,0599211 ,000
-
1,061833
-,614833
MF PLURONIC/CARB1% -
1,3126667(*)
,0599211 ,000
-
1,536167
-
1,089167
MCZ
-,2143333 ,0599211 ,062 -,437833 ,009167
MCD ,0073333 ,0599211 1,000 -,216167 ,230833
COMPLEXO
-,8310000(*) ,0599211 ,000
-
1,054500
-,607500
COMPLEXO PLURONIC/CARB1%
-,4816667(*) ,0599211 ,000 -,705167 -,258167
MCZ
,6166667(*) ,0599211 ,000 ,393167 ,840167
MCD ,8383333(*) ,0599211 ,000 ,614833 1,061833
MF
,8310000(*) ,0599211 ,000 ,607500 1,054500
* Diferena significativa para intervalo de confiana de 95%.










Anexo
173
ADESIVIDADE

Scheffe
TIPO DO
HIDROGELE N
Subgrupo para = .05
1 2 3
MCD 3 ,265000
MF
3 ,272333
MCZ
3 ,486667
COMPLEXO
3 1,103333
PLURONIC/CARB1
%
3 1,585000
Sig.
,052 1,000 1,000
Mdias para grupos em subgrupos homogeneos so exibidos.
a Mdia harmonica do tamanho da amostra = 3,000.













































Anexo
174
ADESIVIDADE 37C

ANOVA

ADESIVIDADE

Sum of
Squares df
Mdia ao
quadrado F Sig.
Entre grupos
8,108 4 2,027 108,173 ,000
Mesmo Grupo
,187 10 ,019
Total
8,295 14



Comparaes Mltiplas
Varivel dependente: ADESIVIDADE
Scheffe
(I) TIPO DO
HIDROGELE
(J) TIPO DO
HIDROGELE
Diferena
Mdia (I-J)
Erro
pado Sig.
95% Intervalo de
Confiana
Limite
Inferior
Limite
Superior
PLURONIC/CARB1% MCZ 1,5623333(*) ,1117690 ,000 1,145445 1,979221
MCD 2,0066667(*) ,1117690 ,000 1,589779 2,423555
MF
1,7206667(*) ,1117690 ,000 1,303779 2,137555
COMPLEXO
,7420000(*) ,1117690 ,001 ,325112 1,158888
MCZ PLURONIC/CARB1%
-1,5623333(*) ,1117690 ,000
-
1,979221
-
1,145445
MCD ,4443333(*) ,1117690 ,036 ,027445 ,861221
MF ,1583333 ,1117690 ,736 -,258555 ,575221
COMPLEXO
-,8203333(*) ,1117690 ,000
-
1,237221
-,403445
MCD PLURONIC/CARB1%
-2,0066667(*) ,1117690 ,000
-
2,423555
-
1,589779
MCZ
-,4443333(*) ,1117690 ,036 -,861221 -,027445
MF
-,2860000 ,1117690 ,240 -,702888 ,130888
COMPLEXO
-1,2646667(*) ,1117690 ,000
-
1,681555
-,847779
MF PLURONIC/CARB1%
-1,7206667(*) ,1117690 ,000
-
2,137555
-
1,303779
MCZ
-,1583333 ,1117690 ,736 -,575221 ,258555
MCD ,2860000 ,1117690 ,240 -,130888 ,702888
COMPLEXO
-,9786667(*) ,1117690 ,000
-
1,395555
-,561779
COMPLEXO PLURONIC/CARB1%
-,7420000(*) ,1117690 ,001
-
1,158888
-,325112
MCZ
,8203333(*) ,1117690 ,000 ,403445 1,237221
MCD 1,2646667(*) ,1117690 ,000 ,847779 1,681555
MF
,9786667(*) ,1117690 ,000 ,561779 1,395555
* Diferena significativa para intervalo de confiana de 95%.








Anexo
175
ADESIVIDADE

Scheffe
TIPO DO
HIDROGELE N Subgrupo para = .05
1 2 3 4
MCD 3 1,300667
MF
3 1,586667 1,586667
MCZ
3 1,745000
COMPLEXO
3 2,565333
PLURONIC/CARB1%
3 3,307333
Sig.
,240 ,736 1,000 1,000
Mdias para grupos em subgrupos homogeneos so exibidos.
a Mdia harmonica do tamanho da amostra = 3,000.