Prácticas de Histología Humana

FACULTAD DE MEDICINA Y ODONTOLOGA UNIVERSIDAD DEL PAS VASCO/ EUSKAL HERRIKO UNIBERTSITATEA
PRCTICAS DE HISTOLOGA HUMANA
DEPARTAMENTO BIOLOGA CELULAR E HISTOLOGA
ISBN: 978-84-690-7712-2
Enrique Hilario
Prcticas de Histologa Humana
PRCTICAS DE HISTOLOGA HUMANA
Enrique Hilario
Dpto. Biologa Celular e Histologa Facultad de Medicina y Odontologa Universidad del Pas Vasco/Euskal Herriko Unibertsitatea
NDICE Procesamiento de Muestras para Microscopa ptica y Electrnica de Transmisin....................... 1 Mtodos de Estudio de las Muestras Histolgicas............................................................................. 11 Tejido Epitelial de Revestimiento ....................................................................................................... 19 Tejido Epitelial Glandular ................................................................................................................... 23 Tejido Conectivo y Adiposo................................................................................................................ 27 Tejido Cartilaginoso............................................................................................................................ 31 Tejido seo ........................................................................................................................................ 35 Sangre y Hematopoyesis ................................................................................................................... 39 Tejido Muscular .................................................................................................................................. 43 Sistema Nervioso I ............................................................................................................................. 47 Sistema Nervioso II ............................................................................................................................ 51 Globo Ocular ...................................................................................................................................... 55 Sistema Endocrino I ........................................................................................................................... 59 Sistema Endocrino II .......................................................................................................................... 63 Aparato circulatorio ............................................................................................................................ 67 Sistema Inmunitario............................................................................................................................ 71 Aparato Respiratorio .......................................................................................................................... 75 Aparato Digestivo I ............................................................................................................................. 79 Aparato Digestivo II ............................................................................................................................ 83 Aparato Digestivo III ........................................................................................................................... 87 Aparato Urinario ................................................................................................................................. 91 Aparato Genital Masculino ................................................................................................................. 95 Aparato Genital Femenino I ............................................................................................................... 99 Aparato Genital Femenino II .............................................................................................................. 103 Sistema Tegumentario y Mama ......................................................................................................... 107 Direcciones de Pginas Web ............................................................................................................. 111 ndice de Etiquetas............................................................................................................................. 112
PREFACIO
La Histologa en su quehacer diario es una disciplina eminentemente prctica. La docencia de la Histologa Humana se desarrolla bsicamente a travs de clases magistrales, seminarios y clases prcticas. Para la realizacin de estas ltimas el alumno dispone de un microscopio ptico y diferentes preparaciones microscopa electrnica. El programa prctico de la asignatura se desglosa a lo largo de veinticinco temas, que comienzan con la Histologa General, donde se estudian los tejidos, para dar paso a la Histologa Especial. Los temas se ordenan de forma paralela al desarrollo del programa terico de la asignatura. De esta manera el alumno adquiere los conocimientos tericos y despus los aplica a la prctica. Sin embargo, el desarrollo del curso acadmico hace que esta sincronizacin tan solo sea posible durante las primeras prcticas, y llega un momento en el que las prcticas llegan a preceder al estudio terico. Para ello, en la presente gua de Prcticas de Histologa Humana se hacen comentarios que si bien, pueden parecer algo extraos a una persona con conocimiento de la disciplina, si es cierto que se revelan muy tiles al alumno, como nos ha enseado su utilizacin en el aula prctica a lo largo de los aos. Esperar que esta publicacin sea de inters y utilidad para los alumnos; para quienes realmente se ha escrito. histolgicas, as como de fotografas de
Junio de 2007
Enrique Hilario
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Prctica n 1
Procesamiento de Muestras para Microscopa ptica y Electrnica de Transmisin

1. Que es una preparacin histolgica y como se obtiene Se denomina preparacin a la seccin o corte del espcimen biolgico que se ha "preparado" para su estudio. Sin embargo, por analoga, tambin se denomina as al conjunto que forman la muestra y el soporte donde sta est colocada. La muestra histolgica normalmente consiste en una seccin de unas 5 m de grosor que se dispone alojada entre dos cristales rectangulares: uno de cierto grosor y consistencia (portaobjetos: "porta" coloquialmente) y otro muy fino (cubreobjetos: "cubre" coloquialmente). Entre ellos la muestra preparada (deshidratada y coloreada) est lista para su observacin con el microscopio ptico. Esta es una preparacin de rutina, que el alumno utilizar en todas su prcticas de Histologa.
2. Procesamiento de muestras para microscopa ptica Para poder observar la muestra a travs del microscopio ptico est debe de ser "preparada" mediante un proceso que veremos a continuacin. Todos estos pasos se conocen como procesamiento de la muestra. Los cuatro primeros corresponden a la inclusin, el quinto a la seccin, los nmeros 6-9 a la "deshidratacin y tincin" y el resto al "montaje" de la preparacin. Cualquier tratamiento de los tejidos que sea necesario para impregnarlos de un medio slido que facilite la realizacin de secciones finas para microscopa se conoce con nombre genrico de inclusin (aunque realmente inclusin se refiere al tratamiento necesario para impregnar los tejidos de un medio slido que facilite la produccin de secciones para microscopa. Bsicamente el protocolo es el siguiente: 1) fijacin: procura que la muestra est lo ms parecida al estado vivo. 2) deshidratacin: sustituye el agua de los tejidos por alcohol o acetona. 3) aclaramiento: es la sustitucin del agente deshidratante por otro, denominado de transicin (normalmente se utiliza el Xilol) que a su vez es miscible en el medio de inclusin que proporcione a la muestra la necesaria dureza para poder ser seccionada. 4) inclusin de la muestra: se embebe en el medio que le proporcione dureza. Normalmente se utiliza la parafina, que es una cera y por lo tanto no miscible en agua. As, esta sustancia ha sustituido al agua que inicialmente estaba en las clulas y tejidos. 5) seccin de la muestra: se obtienen los cortes histolgicos de unas 5 m de grosor, que se depositan sobre los portaobjetos, donde se dejan hasta que se adhieran al cristal. 6) eliminacin de la parafina existente en las secciones: mediante su inmersin en el lquido de transicin (xilol). 7) sustitucin del xilol por alcohol del 100%. 8) sustitucin del alcohol por agua: utilizando concentraciones decrecientes. 9) tincin. Los colorantes ms utilizados en todo el mundo (hematoxilina y eosina) son acuosos, por lo que es necesario "deshacer" los pasos. 10) deshidratacin de las secciones ya teidas (concentraciones crecientes de alcoholes). 1
11) sustitucin del alcohol por el xilol. 12) montaje. en este momento se aade sobre la seccin histolgica un lquido viscoso para que la cubra (es el medio de montaje) y, a continuacin se coloca encima el cubreobjetos. El medio de montaje no es soluble en agua y tiene como virtud el permitir que la luz lo atraviese sin producir distorsiones en la imagen). Adems, en medio de montaje se solidifica en unas 24 horas, lo que permite almacenar durante muchsimos aos las preparaciones histolgicas. El portaobjetos ya est listo para colocarlo en la platina del microscopio.
3. Procesamiento de muestras para microscopa electrnica de transmisin Para poder observar una muestra a travs del microscopio electrnico de transmisin debe procederse de su inclusin mediante una serie de pasos superponibles a los que acabamos de ver para la microscopa ptica. De entrada existe una diferencia con el tamao de la muestra, que debe ser muy pequea (menos de 1 mm3). Bsicamente los pasos a seguir son los siguientes: 1) fijacin. 2) lavado de la muestra: con un tampn isosmolar fosfato o cacodilato (0.1M, pH 7,4) para retirar el fijador. 3) postfijacin: normalmente con tetraxido de osmio. 4) lavado de la muestra: con el tampn isosmolar para retirar el postfijador. 5) deshidratacin: con alcoholes (o acetonas) de concentracin creciente. 6) durante el proceso de deshidratacin es frecuente aadir sales de metales pesados que aumentan el contraste al observar la muestra al microscopio. 7) sustitucin del agente deshidratante por otro, denominado de transicin (normalmente se utiliza el xido de propileno) que a su vez es miscible en el medio de inclusin que proporcione a la muestra la necesaria dureza para poder ser seccionada. 8) inclusin de la muestra: en el medio que de proporcione dureza (normalmente se utilizan resinas de tipo epoxi (araldita, epon, etc). Ahora, esta sustancia sustituye al agua que estaba en las clulas y los tejidos. 9) seccin de la muestra. Primeramente se hacen secciones semifinas (1m) para seleccionar el rea de estudio y despus se obtienen los cortes ultrafinos de unos 60-80 nm de grosor, que se depositan sobre una rejilla de unos 3 mm, que hace el papel los portaobjetos, donde se dejan hasta que se sequen. 10) "tincin". Realmente no es una tincin, pues se utilizan metales pesados (citrato de plomo) que impregnan especficamente los elementos de la muestra. 11) lavado de la muestra con un tampn isosmolar para retirar el excedente del citrato de plomo. Las rejillas, con las muestras, se introducen en el microscopio electrnico. Los metales pesados que se han depositado sobre la muestra impiden que por esos puntos pasen ms o menos electrones.
4. Obtencin de las muestras En Medicina las muestras provienen de pacientes a los que se les extrae una porcin de tejido que se denomina biopsia. Tambin proviene de material obtenido mediante el tratamiento quirrgico (piezas quirrgicas) y como no, procedente de personas fallecidas por algn tipo de enfermedad y en los que la familia autoriza la realizacin de la autopsia (autopsia clnica). Muchos de los estudios se 2
llevan a cabo utilizando extensiones sobre portaobjetos de exudados, material aspirado o frotis, y que genricamente se conocen con el nombre de citologas y/o de extensiones. La obtencin del material debe realizarse con sumo cuidado, procurando no deformar ni estropear el tejido: se utilizar material adecuado y bien afilado.
La procedencia de las muestras determina en gran medida la "calidad" del material. Es muy importante que entre la obtencin de la muestra y su fijacin transcurra el menor tiempo posible para poder tener el mayor grado de parecido al estado "in vivo". A continuacin nos referiremos a los mtodos de estudio ms utilizados en la prctica diaria.
5. Etapas del procesamiento de las muestras. 5.1.-Fijacin. Se denomina fijacin a los procedimientos utilizados para suspender las actividades celulares que eviten la descomposicin postmorten (autolisis). Los objetivos bsicos de la fijacin son: 1) prevenir los fenmenos de autolisis y ataque bacteriano. 2) lograr que los tejidos o clulas sean lo ms parecido posible al estado vivo y que, idealmente, las pequeas molculas no se pierdan. 3) evitar que se produzcan cambios en el aspecto o volumen del material durante los procesos subsecuentes. 4) permitir la claridad de tincin de las estructuras. Aunque los efectos conservantes de algunas sustancias, tales como el mercurio y sus sales, ya se conocan desde la poca de Hipcrates, no ha sido hasta mediado el siglo diecinueve cuando se comenz de forma sistemtica su investigacin. Gracias al desarrollo industrial y al incremento de nuestros conocimientos de qumico-fsica se ha producido un importante avance en el conocimiento de nuevas sustancias y de su mecanismo de accin. Las tcnicas de fijacin podemos dividirlas en fsicas y qumicas. 5.1.1-Tcnicas fsicas Son muy accesibles y nos permiten evitar los posibles artefactos que pudiera provocar la adicin de distintas sustancias al espcimen a estudiar. No obstante, no conservan la morfologa fina adecuadamente. Son de gran utilidad en los trabajos de rutina para citologa y en los estudios de histoqumica y citoqumica. Dentro de este grupo destacaremos: 1) la desecacin. Consiste en dejar al aire el espcimen a estudiar, logrndose la evaporizacin del agua. No tiene prcticamente utilidad en el estudio de tejidos, puesto que antes de que la pieza se haya desecado totalmente ya han comenzado los procesos de autolisis. Es muy til en citologa, puesto que aunque las clulas pierden detalles de 3
su estructura fina, esta desventaja es contrarrestada por su facilidad y bajo costo. 2) la congelacin. Esta tcnica se basa en el sometimiento del espcimen a estudiar a temperaturas inferiores a cero grados. Se utiliza como mtodo de rutina en las biopsias intraoperatorias debido a su rapidez. Para estudios histoqumicos, donde es necesario conservar la actividad enzimtica, la congelacin se suele realizar en nitrgeno lquido a unos 179C bajo cero. El mayor inconveniente es la menor calidad en la estructura y en los detalles celulares, as como el riesgo de que se formen cristales de hielo que originen artefactos en el espcimen. Despus de la congelacin las muestras se seccionan directamente (sin otro paso intermedio) y se tien (ver ms abajo). 5.1.2.-Tcnicas qumicas Se basan en la utilizacin de sustancias qumicas capaces de reaccionar con los componentes celulares y evitar su degradacin. A pesar de existir numerosos fijadores, los ms utilizados ejercen su efecto reaccionando con las protenas: coagulan o precipitan las protenas. Lo ms habitual es sumergir las muestras en el lquido fijador (fijacin por inmersin), pero en determinadas ocasiones (en investigacin normalmente) las soluciones del fijador pueden introducirse por el sistema vascular del animal de experimentacin (fijacin por perfusin), lo que garantiza una mejor fijacin. Existen numerosos compuestos que en mayor o menor medida cumplen este requisito y que de forma esquemtica podemos resumir en unos pocos grupos. de sustancias: 1) aldehdos (formaldehdo, glutaraldehdo, acrolena, etc.). Establecen puentes entre molculas proteicas en un tiempo relativamente corto. Son ampliamente utilizados: de hecho el formaldehido es el fijador por excelencia en microscopa ptica, y el glutaraldehido lo es en microscopa electrnica. Sin embargo, la preservacin de la estructura morfolgica no es completa y, adems, impiden o dificultan numerosas reacciones citoqumicas. 2) agentes oxidantes (tetraxido de osmio, permanganato potsico, dicromato potsico, etc.). Este grupo de fijadores reacciona con protenas y con lpidos, no conocindose con exactitud su mecanismo de accin. El tetraxido de osmio se utiliza de rutina como postfijador despus del glutaraldehido en microscopa electrnica convencional (de transmisin y de barrido). 3) agentes desnaturalizantes de protenas (alcohol etlico, alcohol metlico, cido actico, etc.). Conservan de modo aceptable las protenas, pero arrastran los lpidos durante la fijacin. Su uso es bastante restringido. No obstante, su utilizacin es habitual en el proceso de deshidratacin subsiguiente a la fijacin. 4) agentes de mecanismo desconocido (cido pcrico, cloruro de mercurio). Tienen una utilidad muy restringida. 5) mezclas fijadoras Los ms populares son el lquido de Bouin (solucin acuosa saturada de cido pcrico + formol al 25% y cido actico glacuial al 5%) para microscopa ptica y la solucin de Karnovsky (formaldehido al 2% y glutaraldehido al 1-2%) para microscopa electrnica. 5.2.-Deshidratacin. La deshidratacin pretende sustituir toda el agua existen el los tejidos por alcoholes. Se procura hacerlo de la forma ms delicada posible, para evitar artefactos en la muestra, por lo que se utilizan concentraciones crecientes de alcoholes.
5.3.-Aclaramiento. Este paso tiene como objeto utilizar un lquido que sea soluble en los alcoholes (o acetonas) pero que tambin lo sea en el medio de inclusin (parafina en microscopa ptica y xido de propileno en electrnica de transmisin). Los criterios para la eleccin del aclarador son: 1) velocidad para remover el alcohol 2) fcil de eliminar por el agente embebedor 3) inflamabilidad 4) coste 5) toxicidad 6) no ser cancergeno. Adems de estas dos sustancias aclarantes hay otras muchas (benzol, cloroformo, tolueno, tetracloruro de carbono, benzoato de metilo, etc.) pero todas son muy voltiles y txicas; y en ocasiones cancergenas. En microscopa electrnica a veces se "salta" este paso, procedindose a utilizar mezclas variables de alcohol y resina (3:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:3) antes de sumergir las muestras resina pura, todo ello a temperatura ambiente. 5.4.-Inclusin. El medio de inclusin ms universalmente empleado en microscopa ptica es la parafina, que se utiliza liquida (a unos 55-60C) para poderse intercambiar con el medio aclarante. Despus de un cierto tiempo las muestras se sacan del bao de parafina y con parafina nueva (limpia) se hacen los moldes (bloques) donde se colocan las muestras para ser seccionadas. El conjunto se deja a temperatura ambiente (o en placas enfriadas) de tal manera que la parafina se enfra y solidifica. Estos bloques permiten almacenar las muestras durante dcadas.
En microscopa electrnica normalmente se utilizan resinas de tipo epoxi, siendo las ms populares el Araldit y el Epon. Estas resinas en realidad se suministran en frascos que contienen distintos componentes lquidos (el polmero, el plastificante, el endurecedor y el acelerador, o catalizador, de la reaccin). Una vez mezclados se procede a sustituir el agente aclarante por la resina. Despus se hacen los moldes y se introducen en una estufa (60C) para que la resina polimerize durante unas 48 horas. Entre los factores que afecta a la inclusin se encuentran. 1) agitacin 2) calor 3) viscosidad 4) ultrasonidos 5) vaco
5.5.-Seccin. El bloque ya endurecido se sita sobre un dispositivo capaz de realizar secciones muy finas y consecutivas, que se denomina microtomo en el caso de la microscopa ptica y ultramicrotomo en la electrnica.
El grosor de las secciones que se han embebido en parafina es rutinariamente de unas 5 m (4-6 m), siendo difcil poder hacerlas de menor grosor). En casos especiales interesan cortes ms gruesos (20, 50 y hasta 100 m) para por ejemplo poder observar neuronas enteras con sus ramificaciones en distintos planos. Otra opcin es realizar cortes seriados (consecutivos)
En el caso de las muestras incluidas en resina para microscopa electrnica, al ser la resina muchsimo ms dura que la parafina, es posible obtener secciones de menor grosor. Primeramente se hacen secciones denominadas semifinas (de 1 m de grosor). Estas secciones (que se observan con el microscopio ptico) se tien con Azul de Toluidina y, adems de utilizarse para el estudio morfolgico (con mayor calidad que las muestras procedentes de parafina), sirven para seleccionar que parte de la muestra es la que interesa estudiar, procedindose a recortar (tallar) la ya de por si escasa muestra. Esta muestra tallada es la que se corta en secciones ultrafinas de unos 60-80 nm de grosor y que son las que se teirn con metales pesados y se observarn con el microscopio electrnico.
Las secciones obtenidas se trasladan al correspondiente soporte. En el caso de microscopa ptica se utilizan cristales rectangulares de 7,5x2,5 cm, y que tienen un espesor de 1 mm. En el caso de las secciones incluidas para microscopa electrnica las secciones (una media docena) se colocan sobre una rejilla de cobre de 3 mm de dimetro, que previamente puede cubrirse con una fina pelcula de un material plstico (formvar) para proporcionar mejor soporte a las secciones (puesto que la rejilla es hueca o perforada, para poder permitir que los electrones la atraviesen). 5.6.-Tincin. La mayora de los tejidos son incoloros, lo que dificulta u observacin al microscopio. Por ello se introdujeron mtodos para la coloracin, que se efecta usando mezclas de sustancias llamadas colorantes. Los colorantes son compuestos qumicos naturales o artificiales que se caracterizan por tener uno o ms grupos atmicos generadores de color (cromforos), as como uno o ms grupos con afinidad qumica hacia sustratos coloreables (auxocromos). En algunos casos el auxocromo no reacciona directamente con el sustrato coloreable sino que lo hace con una sustancia intermediaria que tiene doble afinidad: por el colorante y por el sustrato y que se denomina mordiente. Un colorante colorea debido a que los cromfobos que poseen son capaces de absorber cierta porcin o banda especfica de radiacin dentro de la regin visible del espectro electromagntico (longitud de
onda entre 400 y 750 nm). El trmino afinidad mide la tendencia de un colorante a transferirse desde la solucin de tincin a la seccin del tejido.
Las secciones histolgicas de rutina se tien con dos colorantes: la hematoxilina y la eosina. La hematoxilina, que se encuentra en un rbol (en el extracto medular del palo de Campeche: Hematoxylon Campechianum), intrnsecamente no es un colorante, sino que lo es su producto de oxidacin: la hemateina (de color rojo vinoso). La eosina es un colorante artificial derivado del xanteno y existen varios tipos comerciales, tiendo con diferentes matices de rojo y rosa.
Ambos son colorantes denominados panpticos: aquellos que tien de forma general, y no especfica, todos los componentes celulares. La ms popular de estas tinciones es la tincin doble de hematoxilina-eosina, siendo la ms popular debido a su capacidad de teir un enorme nmero de diferentes estructuras tisulares, a su simplicidad y a su aplicabilidad a diferentes tejidos de procedencias diferentes. La hematoxilina es un contraste bsico y por lo tanto se unir a las estructuras cidas (cidos nucleicos, por ejemplo). La eosina es un colorante cido y se unir a las estructuras bsicas (proteinas bsicas, por ejemplo). Aquellas estructuras con un pH intermedio se teirn con ambos colorantes. Esencialmente la hematoxilina tie los ncleos de color azulnegruzco, con buen detalle intracelular, mientras que loa eosina tie el citoplasma celular y la mayora de las fibras del tejido conectivo con distintas tonalidades de rosa, naranja y rojo.
Al menos un par de palabras para comentar un curioso fenmeno: la metacromasia: es la tincin de una sustancia con color distinto al del colorante, sin que medie alteracin qumica de este. Se produce cuando se utilizan anilinas, que tienen grupos reaccionables muy prximos que favorecen la el alargamiento de los cromforos, con desvo de la tonalidad. Un ejemplo tpico es el que ocurre con el Azul de Toluidina: su monmero es azul pero con polianiones como las mucinas y mucopolisacridos sulfatados, cidos silicos y RNA se condensan sus molculas siendo sus dmeros y trmeros violceo-purpreos y los polmeros rojos.
Como ya hemos comentado en la microscopa electrnica las muestras no se tien sino que se procede a impregnar los elementos tisulares con sales de metales pesados, que desvan a los electrones, frente a las zonas no impregnadas que permiten su paso. Ello da lugar a una imagen en "blanco y negro" con distintas densidades de grises. Los metales pesados mas empleados son el citrato de plomo, el acetato de uranilo y el permanganato potsico (este ltimo tiene un uso ms limitado).
5.7.-Montaje de la preparacin Despus de la tincin a la muestra se le superpone un vidrio (cubreobjetos) para proteger el corte. Es tambin de vidrio pero extremadamente delgado (su espesor es de 0,17 mm). Si se usa un "cubre" debe interponerse entre este y el "porta" una sustancia fluida cuyo ndice de refraccin es 7
igual al de las lminas d vidrio: es el medio de montaje. Si este medio no se solidifica espontneamente (agua, glicerina, etc) el montaje es temporal. Si se endurece se queda como un fuerte pegamento (entelln, blsamo de Canad, etc.) y el montaje es permanente.
6. Procesamiento de las muestras fijadas por congelacin: Como ya hemos comentado, la fijacin fsica no respeta excesivamente la estructura, siendo la calidad morfolgica inferior a la de las muestras fijadas con agentes qumicos. Sin embargo, este mtodo es empleado de rutina en los hospitales debido a su rapidez para dar un diagnstico intraoperatorio que orientar el curso de la intervencin quirrgica. El cirujano, ante la duda de la naturaleza de la patologa ante la que se encuentra (muchas veces de manera sorpresiva) extirpa una pequea porcin del tejido en cuestin (toma una biopsia intraoperatoria) y la enva al Servicio de Anatoma Patolgica. Mientras el cirujano espera, el patlogo emite un diagnstico que determinar la actitud del cirujano y del curso de la intervencin. Todo ello requiere la mxima rapidez (a veces 10-15 minutos), aunque la calidad se resienta. La fijacin por fri tambin es necesaria en aquellas situaciones en los que la fijacin qumica deteriore las molculas a estudiar, como ocurre en los estudios citoqumicos en los que se pretende poner de manifiesto reacciones enzimticas o determinantes antignicos, por ejemplo. El procesamiento consiste en enfriar rpidamente la muestra (temperaturas de -20C en las biopsias intraoperatorias y de unos -179C en trabajos de investigacin), para a continuacin aadir una sustancia que "har masa" con la muestra para permitir ponerla en el microtomo y cortarla en secciones (5-6 m de grosor). Posteriormente la seccin se tie con hematoxilina-eosina, se deshidrata y se monta con entellan. En microscopa electrnica tambin es posible realizar inclusiones por congelacin: criotcnicas, que, aunque bsicamente mantienen los mismos principios, son extremadamente delicadas y difciles. Hay que pensar en la altsima resolucin de estos aparatos y que las prdidas de calidad "tolerables" en microscopa ptica son autnticas alteraciones que anulan la posibilidad de su interpretacin. Las ventajas de la fijacin por fro son: 1) extremada rapidez 2) rpida detencin de las reacciones celulares 3) no difusin de los elementos solubles 4) no se introducen elementos extraos a la muestra. 5) es conveniente que las muestras sean pequeas para que el fro penetre fcilmente 6) para microscopa electrnica deben utilizarse agentes crioprotectores que eviten la formacin de cristales de hielo
7.- Extensiones citolgicas. En este caso, al tratarse de una muestra lquida a partir de una gota de fluido (sangre, exudado, aspirado de cualquier procedencia, etc.) o por deposito en una citologa exfoliativa (cuello uterino y vagina), las clulas se reparten homogneamente por todo el portaobjetos. Una vez que las muestra se ha adherido al porta se procede a su fijacin y posterior tincin. En el caso de las muestras de sangre se suele utilizar tinciones panpticas como la de MayGrnwald-Giemsa y la de Wright. Las citologas exfoliativas para frotis vaginales se tien segn el mtodo de Papanicolaou. 8.- Problemas en la interpretacin de los cortes de tejido: artefactos. El vocablo artefacto significa producto artificial y denomina "los fenmenos en el preparado no existentes en el tejido, que han sido creados artificialmente durante el procesamiento". Los ms frecuentes son: 1) rotura del tejido. Consecuencia de una inadecuada obtencin del material biolgico (roturas, desgarros, compresiones, etc.) 2) fijacin defectuosa. Si no hay una buena fijacin la preservacin estructural no es la ms adecuada y consecuentemente la calidad de las secciones no es satisfactoria. 3) retraccin. Es el ms frecuente, y puede deberse por ejemplo a la fijacin con alcohol u otros medios deshidratantes (aunque a veces estos agentes sean necesarios) o por haber realizado una deshidratacin demasiado rpida. La retraccin se presenta en el tejido como grietas u orificios sin estructura biolgica alguna ("agujeros"). 4) cuchilla del microtomo estropeada. Las imperfecciones o melladuras en la cuchilla del microtomo (o ultramicrotomo) producen un defecto en el corte que se observa como una lnea recta a travs de las estructuras biolgicas, donde el tejido est desgarrado. 5) variaciones en el espesor del corte. Suelen ser consecuencia de un mal ajuste del microtomo, de la cuchilla (algn tornillo mal apretado, etc.) o de un mal encaje del bloque en su mordaza. Se aprecia como una imagen en persiana. 6) pliegues o arrugas. Los pliegues o arrugas en las secciones pueden producirse al cortar las secciones o al colocarlas extendidas sobre el portaobjetos (o sobre la rejilla). 7) precipitado de colorantes. A veces se observan sobre el corte histolgico cristales coloreados que corresponden a colorantes que han precipitado, o que no han sido "suficientemente lavados". 9.- Interpretacin tridimensional de los cortes. A la hora de observar los cortes histolgicos al microscopio y si queremos llevar acabo una interpretacin adecuada de las imgenes hay que tener en cuenta que lo que vemos es una seccin fina, y en principio bidimensional de un objeto tridimensional. Cortes del mismo objeto pueden presenta una apariencia totalmente diferente. As, las estructuras histolgicas con forma de tubo pueden presentar apariencias muy diferentes. Para determinara la forma tridimensional correcta de un rgano o estructura grande suele emplearse en corte seriado, por lo que se realizan cortes consecutivos de toda la estructura o del rgano. Un anlisis cuidadoso de las relaciones entre corte y corte en toda la serie no dar un esquema de la configuracin espacial (eventualmente construyendo un modelo basado en la serie de cortes: reconstruccin tridimensional). 9
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Prctica n 2
Mtodos de Estudio de las Muestras Histolgicas
1. Introduccin El ojo humano tiene una capacidad de discriminacin (resolucin) de 0,2 mm, lo que significa que no podemos diferenciar como separados y diferentes dos puntos que estn separados menos de 0,2 mm (200m). Para poder "ver" a un nivel ms all del de la simple vista deberemos utilizar instrumentos que tengan mayor resolucin como son los microscopios (de ah el trmino de estructura microscpica) que nos obliga a preparar las muestras sujeto de estudio. La Histologa es la ciencia que se encarga del estudio de la estructura microscpica de los seres vivos, y en nuestro caso se circunscribe fundamentalmente al ser humano (histo: tejido, logia: conocimiento). El conocimiento de la estructura microscpica del cuerpo humano ha suscitado gran inters desde siempre. En un primer momento el estudio se centr en la forma, tamao y peculiaridades de las distintas clulas, as como en las organizaciones que constituyen para formar los diferentes tejidos y rganos. Desde un punto de vista general podemos considerar que hay dos grandes grupos de mtodos aplicables al estudio de las clulas y tejidos: 1) aquellos cuya aplicacin no daa a las muestras y por lo tanto se denominan mtodos vitales. 2) los que las matan, que se denominan mtodos no vitales. Ambos grupos nos permiten estudiar tanto aspectos morfolgicos como funcionales, pero, mientras que los vitales nos permiten la observacin sin prcticamente manipulaciones previas, los no vitales requieren de una preparacin tendente a suspender las actividades celulares sin que las clulas y tejidos sufran transformaciones morfolgicas importantes.
2.-Mtodos de estudio celular De forma genrica podemos decir que los mtodos de estudios se dividen en: 1) mtodos vitales: aquellos que permiten estudiar a las clulas o agrupaciones celulares (test conductuales, explantes, cultivos organotpicos, etc) sin matar al espcimen. 2) mtodos no vitales: aquellos en los que es necesario matar las clulas. Los mtodos vitales evitan la posibilidad de que la fijacin o la tincin pueda eliminar o distorsionar algunos componentes celulares, lo que ha motivado que estas se hayan estudiado mediante diversas tcnicas a fin de garantizar que las imgenes que se observan no son artefactos. Evidentemente, el mtodo ms seguro es la observacin de las clulas al microscopio mientras estn vivas. Esto requiere unos sistemas pticos especiales, diseados para aprovechar las 11
propiedades de difraccin de las clulas. Cuando la luz pasa a travs de una clula viva, la fase de la onda luminosa se altera: la luz que pasa a travs de una parte relativamente gruesa o densa de la clula, como por ejemplo el ncleo se retarda y su fase queda desplazada de forma correspondiente en relacin con la de la luz que ha pasado a travs de una regin adyacente ms fina del citoplasma. Este efecto de interferencia de las ondas es aprovechado por diferentes microscopios. Los mtodos no vitales son los ms utilizados en la prctica diaria. Se fundamentan en la paralizacin de las actividades celulares en un momento determinado a fin de poder determinar la estructura o el estado funcional de las clulas, tejidos o de los rganos. Antes de la utilizacin de estos mtodos es necesario, como ya apuntbamos anteriormente, el fijar y procesar las muestras. Este hecho vara de forma significativa segn cual sea el mtodo final de observacin de las clulas. A grandes rasgos podemos considerar que se basa en la detencin rpida y no artefactante de las actividades celulares y, tras una deshidratacin del espcimen en soluciones crecientes de alcohol o de acetona, se incluye en substancias no miscibles en soluciones acuosas, que nos permitan una perfecta observacin de los detalles citolgicos.
3.-Tcnicas de estudio Para poder observar los seres visos ms all de la resolucin de nuestro ojo deberemos recurrir a instrumentos que nos proporcionen imgenes fiables y que nos aporten la mayor informacin posible, cosa que ningunos de los instrumentos disponibles hacen por si solos. Se utilizan diferentes tipos de microscopios, que pueden clasificarse en dos grandes grupos segn el tipo de onda energtica que incide sobre la preparacin: microscopios pticos o fotnicos, que utilizan luz de diferentes longitudes de onda, y microscopios electrnicos, que utilizan haces de electrones. El microscopio ptico posee un sistema de lentes (condensador, objetivos y oculares) a travs de los cuales se amplifica y dirige la imagen de los objetos. La calidad de imagen que proporciona depende del lmite de resolucin. Su valor depende, fundamentalmente, de la longitud de onda de la luz y de la apertura numrica del objetivo. En los microscopios pticos actuales, el lmite de resolucin es de 0.2 m cuando se utiliza luz blanca. En los microscopios electrnicos se utiliza una fuente de electrones (filamento) que sometidos a una diferencia de potencial de unos 60-80 Kw., se vuelven incandescentes y proporcionan un haz de electrones que, "canalizado" a travs de un estrecho conducto gracias a la accin de varios condensadores (lentes condensadoras, objetivo, etc.), atraviesa la muestra. La muestra ha sido previamente "teida" con metales pesados (acetato de uranilo y citrato de plomo fundamentalmente), de tal manera que los electrones chocan con los metales que estn situados sobre determinadas estructuras ("que han teido esas estructuras") y se dispersan dando en una pantalla fosforescente "imagen negativa". En los microscopios electrnicos de transmisin, el lmite de resolucin es de unos 3 angstroms) y en los microscopios electrnicos de barrido es de unos 3-20 nm. 12
3.1.-Microscopa de campo claro El mtodo ms simple de observacin lo constituyen la transmisin directa de la luz a travs de la clula. Este mtodo vital es muy simple pero, desgraciadamente, no permite visualizar detalles celulares y tan slo podemos distinguir los contornos de la membrana celular y del ncleo, constituyendo el resto de la clula una sombra griscea. 3.2.-Microscopa de contraste de fases Este mtodo se basa en el hecho de que cuando la luz pasa a travs de una clula viva, la fase de la onda luminosa varia. La combinacin de ambos tipos de ondas es utilizada por este tipo de microscopio para permitir visualizar numerosos detalles de la estructura y del aspecto de las clulas sin necesidad de su muerte. 3.3.-Microscopa de campo oscuro Una manera ms sencilla de observar los detalles de una clula viva no teida consiste en utilizar la luz dispersada por los diversos componentes celulares. El microscopio de campo oscuro utiliza un haz de luz dirigido desde la parte lateral, por lo que slo la luz dispersada penetra en las lentes del microscopio y, por consiguiente, la clula aparece como un objeto luminoso sobre un fondo negro. 3.4.-Microscopa de fluorescencia Tambin se puede estudiar en clulas vivas la captacin por las mismas de una sustancia aadida al medio de cultivo a la cual se ha conjugado una molcula fluorescente, de tal manera que podemos examinar si la partcula ha sido captada por la clula y cual es su destino final. Este mtodo, tambin se puede utilizar con clulas previamente fijadas, como es el caso del estudio de las bandas de los cromosomas. 3.5.-Microscopa ptica convencional Se basa en la observacin directa de estructuras a travs de microscopios de luz transmitida que atraviesa el material objeto de estudio. Es el mtodo utilizado de forma ms generalizada (prcticamente todos los diagnsticos en los Servicios de Anatoma Patolgica utilizan este mtodo) Para poder visualizarlo es necesario recurrir a la coloracin del mismo. Aunque hay numeros tipos podemos englobarlas en: 1) tinciones panpticas. Se basan en la coloracin inespecfica de todas las estructuras celulares gracias a la utilizacin conjunta de colorantes cidos y de colorantes bsicos. Entre los ms empleados se encuentran la tincin de Hematoxilina-Eosina (para histologa y anatoma patolgica), la de May-Grnwald-Giemsa y la de Wright (estas ltimas para la sangre y el tejido hematopoytico). Se utilizan de forma rutinaria para estudiar la forma, tamao y las caractersticas morfolgicas. 2) tinciones especificas. Los colorantes utilizados tienen afinidad por alguna de las molculas presentes en las clulas. Se utilizan para demostrar la existencia o no de determinadas sustancias. Dentro de este vasto grupo de tinciones destacaremos las de lpidos, carbohidratos, protenas, cidos nucleicos, pigmentos y minerales, y las empleadas para 13
poner de manifiesto e identificar a distintos microorganismos. 3.6.-Citoqumica enzimtica e inmunocitoqumica La citoqumica enzimtica tiene por objeto poner de manifiesto la existencia de determinados enzimas en el interior de las clulas, los cuales, adems, son susceptibles de ser cuantificados. No permitir, por lo tanto, conocer el estado de numerosos procesos metablicos celulares. Entre las reacciones citoqumicas ms utilizadas se encuentran las de la Succino-deshidrogenasa, la Lcticodeshidrogenasa, la Glucosa 6-fosfato deshidrogenasa, la peroxidasa, la ATPasa, y la de la monoaminooxidasa. La inmunocitoqumica nos permite identificar sustancias especficas que no pueden serIo mediante tinciones especficas. Esta tcnica se basa en la deteccin de molculas a travs de sus correspondientes anticuerpos. El primer mtodo, y an ms utilizado, consiste en la unin de una molcula fluorescente al anticuerpo, denominndose inmunofluorescencia. La limitacin de la inmunofluorescencia permiti el desarrollo de la inmunocitoqumica, que se basa en la sustitucin de la molcula fluorescente por un marcador enzimtico (peroxidasa) que posteriormente se pone de manifiesto por mtodos citoqumicos. La inmunocitoqumica permite, adems de una mayor vida del marcador, el poder teir posteriormente las clulas y cotejar la localizacin del cromforo con la morfologa. 3.7.-Autorradiografa La autorradiografa se define como un mtodo para localizar material radiactivo sobre material biolgico. Existen muchos mtodos para realizar las autorradiografas, pero el ms comn consiste en incubar las clulas o inyector los tejidos con un precursor metablico marcado radiactivamente, como es el caso de la timidina (la cual se administra tritiada). Posteriormente, las muestras se extienden en un portaobjetos (bien limpio), sobre el cual se coloca en ntimo contacto una emulsin fotogrfica. Esta emulsin (que consiste en una suspensin de cristales de haluro de plata en un soporte de gelatina) es activada por la radiacin de las molculas radiactivas, de tal manera que cuando se revela fotogrficamente la emulsin, los cristales de plata activados se transforman en plata metlica. Durante el proceso de fijacin, la plata metlica permanece, adoptando la forma de pequeos granos de plata, mientras que los cristales del haluro argntico no impresionados son eliminados. La autorradiografa puede realizarse tanto sobre especimenes observables es a microscopa ptica como a microscopa electrnica de transmisin. Esta tcnica nos permite poner de manifiesto la tasa de incorporacin de molculas a las clulas, gracias a la cual podremos, por ejemplo, conocer el ndice de proliferacin celular, o la naturaleza y distribucin de sustancias difusibles cuya fijacin mediante mtodos convencionales plantea problemas especiales. Desde la aparicin de los fluorocromos es una tcnica prcticamente en desuso, puesto que entre sus inconvenientes queremos destacar algunos tales como los problemas de radiacin existentes, su lentitud y lo delicada que resulta. 14
3.8.-Microscopa Confocal Bsicamente el microscopio lser confocal es un microscopio ptico que utiliza como fuente de luz un lser, y para la captacin de las imgenes un sistema electrnico. Gracias a ello este instrumento consigue un aumento considerable en la resolucin de imgenes de secciones pticas extremadamente finas, eliminando la interferencia que produce la luz que llega de diferentes campos pticos (o planos de enfoque) de todo el grosor de la muestra que se est observando. De esta forma se consigue que el enfoque se realice sobre un nico plano, de ah el trmino confocal. As, en la microscopa confocal se reconocen estructuras en las que la luz emitida o reflejada por una muestra se concentra en un solo plano focal y se superpone a toda luz que no procede de dicho plano. Esto produce un barrido por planos que nos permite tener una imagen en los tres ejes y, por tanto, tridimensional Gracias tambin a que las imgenes obtenidas son digitales, se pueden obtener grandes aumentos hasta ahora muy difciles de conseguir para la microscopa ptica. 3.9.-Citometra de flujo La citometra de flujo (CMF), es una tcnica de anlisis multiparamtrico que nos permite cuantificar cualquier parmetro celular, al que se le ha asociado la emisin de fluorescencia. Esta emisin de fluorescencia puede ser de forma natural o espontnea debida a la naturaleza qumica del propio parmetro (por ejemplo, vitamina A, cidos nucleicos, clorofila, hemoglobina, etc.), y en ese caso, hablamos de parmetros intrnsecos. Pero la emisin de fluorescencia, tambin puede ser debida a la asociacin del parmetro celular que nos interesa con un colorante, en este caso llamado fluorocromo. Este tipo de parmetros se denominan entonces extrnsecos, y para nosotros son los ms interesentes, ya que mediante ellos podemos cuantificar desde la cantidad de ADN, actividades enzimticas, o presencia de antgenos, hasta la concentracin de iones como por ejemplo el Calcio. De cualquiera de las dos formas, la cuantificacin de la fluorescencia emitida por la clula es la base de los anlisis mediante la Citometra de Flujo. Para realizar esta tcnica de anlisis, las clulas tienen que estar necesariamente en suspensin; as son arrastradas por un flujo continuo de un lquido isotnico con ellas. Para que se realice la emisin de la fluorescencia, las clulas desfilan de una en una y a una gran velocidad delante de un haz puntual de luz lser. La emisin de fluorescencia as producida es cuantificada mediante unos fotomultipicadores (clulas fotoelctricas), que transforman la luz en un impulso elctrico. La cuantificacin de este ltimo mediante un potencimetro nos da un cdigo numrico correspondiente a la cuantificacin de la fluorescencia por cada clula analizada, y que son representados en forma de histogramas. Los descriptores de los histogramas (media, moda y mediana) son los que nos proporcionan la informacin necesaria para el anlisis poblacional de la muestra, ya que esta tcnica nos permite cuantificar la fluorescencia de hasta 32.000 clulas por segundo.
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3.10.-Microscopa electrnica de transmisin (TEM) La microscopa electrnica de transmisin nos permite visualizar, con gran resolucin la ultraestructura celular gracias a la realizacin de secciones ultrafinas que son teidas con metales pesados tales como el plomo y el acetato de uranilo, entre otros. El fundamento bsico del procesamiento del espcimen es el mismo que el referido en la introduccin referente a la fijacin, deshidratacin e imbibicin de la muestra en un medio que nos permita realizar secciones de la misma. Las diferencia esenciales consisten por un lado en la fijacin, (que debe preservar extremadamente la estructura celular, puesto que cualquier alteracin de la misma ser muy llamativa y nos dificultar la correcta interpretacin de las imgenes obtenidas), y por otro lado en el medio de imbibicin (el cual debe aportar la suficiente dureza para que nos permita realizar secciones muy finas con ayuda de un microtomo especial denominado ultramicrotomo). Con el microscopio electrnico de transmisin, adems de estudiar la morfologa, tambin podemos utilizar tcnicas especiales para la demostracin de determinadas molculas, as como tcnicas de citoqumica y de inmunocitoqumica, entre otras. 3.11.-Microscopa electrnica de barrido (SEM) A diferencia de la anterior, la microscopa electrnica de barrido no permite observar secciones de las muestras, sino estudiar su superficie externa fragmentada, o directamente la superficie externa. Para ello las muestras se fijan y deshidratan de forma similar a como se hace para el MET. Finalizada la deshidratacin (acetona 100%) se procede, mediante la tcnica del "punto crtico", a sustituir la acetona por anhdrido carbnico y despus a sublimar ste, de tal manera que la pieza quede totalmente desecada. Se procede a fracturar la muestra y la superficie fracturada es espolvoreada con molculas de oro quedando recubierta con una finsima capa que permite el bombardeo de la pieza por los electrones y la consecuente formacin de la imagen. Este mtodo es extremadamente til para ver estructuras tridimensionales, para estudiar la capacidad de las clulas para infiltrar e invadir sustratos, para valorar las agrupaciones espaciales de las clulas y su relacin con sistemas vasculares, y para estudiar la locomocin celular. 3.12.-Otros tipos de microscopa electrnica 3.12.1.-Microscopa electrnica STEM Son unos microscopios relativamente recientes (dcada de los 70) que suelen asociarse a un microscopio electrnico de transmisin ampliando enormemente sus ventajas (MET/STEM). En ellos se conjugan las posibilidades de un microscopio electrnico de barrido con las de uno de transmisin.
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Por un lado se utiliza un haz electrnico de barrido extremadamente fino con lo que aumenta notablemente la resolucin de las imgenes en muestras opacas pequeas. Tambin pueden observarse las muestras de forma transparente, causando un dao mnimo a la muestra y obteniendo un contraste mejor y la posibilidad de llevar a cabo determinaciones analticas. 3.12.2.-Microscopa electrnica de barrido tipo tnel (STM) Es un tipo de microscopa de barrido que implica el uso de la mecnica cuntica. No utiliza partculas libres (y por lo tanto no hace falta ningn tipo de fuente de emisin ni lentes condensadoras) sino lo que rastrea la superficie del espcimen, realizando una delineacin de la topografa atmica de la superficie. Se fundamenta en el hecho de que en la superficie de los cuerpos slidos los electrones no tienen una posicin rgida sino que cada electrn se comporta como una onda, y por tanto su posicin no est bien definida, se difumina. Este movimiento de los electrones se conoce como efecto tnel ya que parece que los electrones cavan tneles ms all de su posicin. Una punta muy afilada es la encargada de rastrear los contornos de la superficie de la muestra. Si dos slidos estn tan prximos que sus distribuciones electrnicas se solapen, entre ellos fluir una corriente en el caso de que se les aplique un potencial elctrico. La magnitud de la corriente tnel depende de forma muy sensible y exponencial del espacio existente entre los dos slidos (variaciones en el espacio tan pequeas como lo puede ser un dimetro atmico hacen que la magnitud de la corriente cambie en tres veces su valor). La corriente generada proporciona la seal que nos permite imaginar la posicin relativa de los tomos individuales en las superficies de la muestra estudiada. Su aplicacin comprende campos tales como la fsica (estudio de superconductores), la qumica (composicin de reacciones qumicas) y la biologa (mtodo directo no destructivo de visualizar muestras biolgicas). 3.12.3.-Microscopa electrnica de barrido de fuerza atmica (AFM) Es una variante del microscopio de efecto tnel. Produce imgenes mucho ms prximas a la topografa que el tnel y, adems, puede explorar superficies no conductoras. Este microscopio recoge las fuerzas interatmicas existentes entre el apex de un fino punzn y los tomos de una muestra, a medida que el punzn va barriendo la muestra. 3.12.4.-Microscopa electrnica de barrido acstica (SAM) Tambin apareci en la dcada de los 70 del siglo pasado. Emplea la tecnologa de formacin ultrasnica de imgenes: las ondas de los ultrasonidos se disipan rpidamente en el aire, pero en medios lquidos pueden propagarse y utilizarse para la formacin de imgenes, aunque no para la comunicacin. Sus ondas ultrasnicas tienen frecuencias prximas a un gigahertzio (mil millones de oscilaciones por segundo), cuando la voz humana tiene una frecuencia menor de 20.000 hertzios. 17
Para su funcionamiento utiliza una lente acstica semiesfrica para enfocar la emisin acstica desde un transductor ultrasnico sobre una pequea regin de la muestra, a travs de un medio de unin como es el agua. Su resolucin depende de la longitud de la longitud de la onda acstica en el espcimen. Este tipo de microscopa nos permite estudiar con muy alto contraste elementos celulares no teidos, de tal forma que se pueden observar directamente los cambios en la viscosidad. Es muy til para el estudio de tejidos vivos sobre todo para ver la contraccin de las fibras musculares y los procesos de movilidad celular. 3.12.5.-Otras tcnicas La adicin de otros tipos de detectores (por ejemplo para EELS, rayos X, electrones transmitidos no dispersados, etc.) y la introduccin de microprocesadores han ampliado y facilitado notablemente las aplicaciones de la microscopa electrnica actual. Igualmente, la utilizacin de gonimetros, mtodos de difraccin ptica con laser, estereologa y tcnicas de anlisis de imagen computerizadas han revolucionado tambin en los ltimos aos la interpretacin puramente morfolgica a nivel ultraestructural. 3.13.-Criofractura Esta tcnica consiste en fracturar un espcimen congelado mediante una cuchilla a baja temperatura. Para ello se procede de la siguiente manera: 1) estabilizacin del objeto por congelacin brusca. 2) produccin de una fractura a travs de la preparacin congelada. 3) confeccin de una rplica del objeto mediante evaporacin-condensacin de un metal pesado y carbono. Las ventajas de este mtodo radican en la naturaleza puramente fsica de la preparacin del espcimen, por la cual este queda inalterado y libre de los artefactos que provienen no solo de la fijacin, sino tambien de los derivados de los procesos postmorten y de la deshidratacin. Las imgenes obtenidas por este mtodo permiten la observacin de orgnulos sin seccionar (ncleos, membranas, vacuolas, etc.), as como fracturados, pudiendo apreciarse en este caso su estructura interna. Las limitaciones de este mtodo radican en no poder aplicarle las tcnicas de autorradiografa e inmunocitoqumicas, as como la dificultad de interpretacin de algunas estructuras, obre todo en el caso de no mostrarse fracturadas.
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Prctica n 3
Tejido Epitelial de Revestimiento

Objetivo de la prctica. Conocer las formas bsicas de los epitelios de revestimiento. Identificar algunos tipos de epitelio de revestimiento de fcil distincin. Para ello hemos elegido algunas estructuras donde pensamos que pueden resultar fciles de encontrar al alumno an no familiarizado con la histologa.
RIN. (etiqueta 1, 1a y 63)

Objetivos a identificar:
Epitelio plano simple Epitelio cbico simple
Deberemos buscar los corpsculos renales, que slo se localizan en la corteza del rin. Se reconocen fcilmente con el objetivo pequeo (x4) como estructuras ms o menos redondeadas (esfricas) situadas en la zona convexa del corte histolgico. Consisten en una zona densa (glomrulo) rodeada de un margen claro, espacio vaco (espacio urinario), que est revestido en su lmite externo por un epitelio plano simple (cpsula de Bowman). Con el uso de mayores aumentos (x10, x40) podremos percibir mejor el epitelio, aunque al ser tan fino, los detalles citolgicos pasan casi desapercibidos a estos aumentos. Entre los corpsculos se disponen (x10) numerosos tubos cortados ms o menos perpendicularmente. Estas estructuras, que se denominan tbulos contorneados (proximales y distales), estn tapizadas (x40) por un epitelio cbico simple y dejan un hueco o luz en su porcin central. Sus ncleos son redondeados y se disponen en una posicin central.
CUELLO UTERINO (etiqueta 2) y ESFAGO (etiqueta 3)

Epitelio plano estratificado no queratinizado Epitelio cilndrico simple Clula mucosa de polo cerrado El epitelio plano estratificado no queratinizado lo encontramos con facilidad en la superficie interna del esfago. Tambin es posible observarlo en la porcin del cuello uterino (cervix uterino) que se orienta hacia la vagina (exocervix), que aunque es ms difcil que en el caso anterior, slo es necesario seguir los lmites libres de la preparacin. En l pueden distinguirse diversas capas de clulas (estratificado), siendo planas cbicas e inmaduras las ms profundas (sobre la membrana basal) y planas las ms superficiales. Para ver el epitelio cilndrico mucoso, hemos de seguir recorriendo la superficie del cuello uterino y, descubriremos como en un momento dado, el epitelio escamoso que acabamos de ver se 19
sustituye por otro que es cilndrico simple (nos encontramos en el endocervix, la porcin que comunica la vagina con la cavidad del tero). El endocervix aparece tapizado por una banda de clulas altas (cilndricas) de citoplasma claro, cuyos ncleos se sitan en el tercio basal de la clula, todos dispuestos a la misma altura, constituyendo una nica hilera: son clulas mucosas de polo cerrado. Debajo del epitelio vemos estructuras redondeadas revestidas por el mismo tipo de epitelio, y que parecen glndulas, pero no lo son sino que son secciones transversales de los numerosos hundimientos y pliegues del epitelio.
PIEL (etiqueta 4)
Epitelio plano estratificado queratinizado El epitelio que reviste la piel, denominado epidermis, es un epitelio escamoso queratinizado. En l pueden distinguirse diversas capas de clulas, relacionadas con su grado de maduracin:
1) en los estratos ms profundos, es decir, ms prximos a la membrana basal, los ncleos estn ms juntos porque las clulas son menores y, adems, su citoplasma es basfilo. 2) en las capas intermedias, los ncleos estn ms separados y sus lmites son bien perceptibles. Adems, la retraccin de las clulas durante el procesamiento revela los desmosomas, dando a esta capa un "aspecto espinoso", de donde deriva su nombre. 3) las clulas ms superficiales se cargan de grnulos de queratohialina (granos intracelulares intensamente basfilos), para que posteriormente la muerte de la clula y la desaparicin de los ncleos se forme el estrato corneo o capa cornea, que no es sino queratina. TRQUEA (etiqueta 5)
Epitelio pseudoestratificado ciliado Clulas caliciformes (mucosas de polo cerrado) Cilios La seccin transversal de la traquea constituye un anillo, en el que destaca una estructura de color azul intenso que es el cartlago situado en su pared. La parte externa de la traquea consiste en tejido conectivo, mientras que su superficie interna esta tapizada por un epitelio cilndrico pseudoestratificado ciliado. Este tipo de epitelio sufre rpida histolisis postmorten, y por lo tanto descubriremos amplias zonas donde no veremos ms que una fina capa de clulas.
Este epitelio traqueal al ser tpico del aparato respiratorio tambin se denomina epitelio respiratorio. El epitelio es alto, pues los ncleos no conservan la disposicin en una sola hilera sino que se sitan a varias alturas. A pesar de esta aparente estratificacin todas las clulas contactan 20
con la basal, de ah que se denomine pseudoestratificado. En este epitelio destacan (x10) dos tipos de clulas:
1) clulas altas, de citoplasma eosinfilo y ncleos a distintas alturas: son las clulas ciliadas. Se caracterizan por poseer numerosos cilios en su superficie (x40). 2) clulas claras, dispersas a lo largo del epitelio. Son las clulas caliciformes. Su ncleo se dispone basalmente y su citoplasma se ve como espacios claros o de contenido espumoso, de perfil oval recordando a una copa o cliz, de donde le viene su nombre. Dada la aparente apertura de su borde apical se las conoce como clulas mucosas de polo abierto. VEJIGA URINARIA (etiqueta 6)
Epitelio de transicin La vejiga urinaria est revestida por un epitelio denominado epitelio de transicin o urotelio, que se caracteriza por ofrecer un aspecto estratificado (x4) al presentar un nmero variable de capas que oscila entre tres y siete. A pesar de presentar varias capas de clulas no existe maduracin celular y por lo tanto todas las clulas presentan ncleos similares. Debajo del epitelio suelen existir abundantes vasos sanguneos, dando la impresin en ocasiones de estar dentro del mismo. A medianos (x10), y sobre todo a grandes aumentos (x40), se advierte que las clulas ms superficiales son mayores y estn abombadas, proyectndose hacia la luz. Adems, el borde apical de las clulas est engrosado.
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Prctica n 4
Tejido Epitelial Glandular

Objetivo de la prctica. Adquirir la capacidad de identificar la disposicin glandular de los elementos epiteliales. Para ello estudiaremos desde una glndula tpica exocrina, como puede ser la glndula salival, hasta el tiroides como glndula endocrina pero cuyo producto de secrecin se almacena extracelularmente. En el intestino grueso veremos una glndula tubular simple y su relacin con las otras capas del rgano. El hgado presenta cordones de clulas que veremos intercalados entre capilares sanguneos. Tambin no fijaremos en la mama para poder comprender la estructura de un lobulillo glandular: unidad morfofuncional.
GLNDULA SALIVAL (etiqueta 7 y 7a)

Acino seroso Acino mucoso Acino mixto semiluna de Gianuzzi Conducto estriado Estroma Observamos una glndula exocrina (x4), cuya unidad secretora est constituida por los acinos (x10), denominados as por la disposicin en racimos que adoptan las clulas secretoras. Los acinos serosos presentan clulas de tincin marcada (x10, x40), mientras que los acinos mucosos, constituidos por clulas mucosas, tienen un citoplasma claro (x10, x40). Los acinos que contienen clulas serosas y clulas mucosas se denominan acinos mixtos (x10). En estos acinos mixtos, las clulas serosas se ven situadas por fuera de las mucosas, adquiriendo un aspecto de media luna: esta imagen (que realmente es un artefacto que aparece durante el procesamiento de las muestras) se denomina semiluna de Gianuzzi (x40). Entre los acinos se sitan pequeos conductos excretores, formados por una hilera de clulas cbicas, de citoplasma eosinfilo denominados conductos intercalares (x10). Loa acinos se disponen en grupos bastante bien delimitados que se denominan lobulillos (x4). Dentro del lobulillo los acinos estn inmersos en un tejido conectivo ms o menos laxo (x10). Este conectivo se hace ms denso (con ms colgena y ms firme) cuando se dispone entre los diferentes lobulillos (denominndose interlobulillar). Es a este nivel donde podemos encontrar los conductos secretores de mayor calibre.
INTESTINO GRUESO (etiqueta 8 y 68)

Mucosa intestinal Glndula tubular simple clulas absorbentes clulas mucosas de polo abierto (caliciformes)
El epitelio cilndrico simple que reviste la mucosa intestinal es de tipo glandular (x4). El epitelio se invagina en el espesor de la mucosa formando glndulas tubulares. Las glndulas estn revestidas por un epitelio cilndrico simple (x10) formado principalmente por clulas absorbentes (de 23
citoplasma eosinfilo y ncleo basal) y por clulas mucosas que presentan un citoplasma claro, con forma de capa o cliz, y en el que no se delimita con gran nitidez la membrana apical: Son las denominadas clulas mucosas de polo abierto, tambin denominadas clulas caliciformes (x40). Deberemos reparar en que las glndulas son tan slo parte de la mucosa del intestino grueso, que a su vez es solamente una de sus cuatro capas.
GLNDULA MAMARIA (etiqueta 9)

Objetivos a identificar
Lobulillo epitelio estroma intralobulillar Estroma interlobulillar La glndula mamaria est constituida (x4) por un elemento epitelial de tipo glandular (parnquima) inmerso en una matriz de tejido conectivo (estroma). El elemento epitelial se dispone a modo de racimos (x10) confluyentes unos con otros. Estos racimos (de carcter secretor) forman unidades relativamente grandes (lbulos) y estn separados unos de otros (x4) por tejido conectivo denso (estroma interlobulillar). En los lbulos, a su vez, hay unidades secretoras pequeas (lobulillos) cuyo tejido conectivo es menos denso que el anterior (estroma intralobulillar). En el interior del lobulillo podemos ver el componente epitelial de la mama, que condiciones de reposo (en mamas no gestantes ni lactantes) aparece como pequeos conductillos (conductillos terminales).
HGADO (etiqueta 10)

Cordn heptico Capilar vascular: sinusoide
La observacin a pequeos aumentos (x4) de un hgado pone de manifiesto que est formado por cordones eosinfilos (cordones de hepatocitos) que constituyen el parnquima heptico. Los cordones estn anastomosados unos con otros (x10) dando un aspecto un tanto irregular. Los cordones celulares estn flanqueados (x10) por vasos sanguneos muy finos que se denominan capilares (de tipo sinusoidal). Esta disposicin permite que los hepatocitos intercambien, con facilidad, sustancias con la sangre.
TIROIDES (etiqueta 11)

Folculo
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La seccin histolgica del tiroides (x4) es muy caracterstica, puesto que est constituida por elementos redondeados (folculos) que consisten (x10) en una monocapa de clulas, que constituyen la pared (clulas foliculares), y en una zona interna acelular que contiene un material homogneo (coloide). Los folculos estn separados por una membrana basal del conectivo adyacente, que est ricamente vascularizado (x40). Las clulas foliculares sintetizan la tireoglobulina, que almacenan extracelularmente (coloide) en la luz folicular. Ante la demanda de hormonas tiroideas, al ser el tiroideas una glndula endocrina, porciones de coloide son recaptadas por las clulas foliculares y, a partir de la tireoglobulina, se forman las hormonas activas que se liberan a la sangre ( los capilares sanguneos situados en el estroma adyacente.
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Prctica n 5
Tejido Conectivo y Adiposo

Objetivo de la prctica. Conocer y adquirir la capacidad de identificar los principales tipos de tejido conectivo comn (laxo, denso, reticular, mucoso y elstico) y sus principales tipos celulares. Tambin estudiaremos el tejido adiposo, que es una variedad de tejido conectivo con caractersticas propias.
TEJIDO DE GRANULACIN (etiqueta 12)

Tejido conectivo laxo (visin general) Clulas fibroblasto leucocito neutrfilo linfocito Matriz extracelular El tejido de granulacin es un tejido conectivo patolgico (anmalo) producido por el organismo en respuesta a determinadas agresiones como, por ejemplo una herida (en un intento de cerrarla) pero producindose un crecimiento excesivo y exuberante. Se trata de un tejido conectivo muy celular y con pocas fibras que est ricamente vascularizado. El rasgo principal de esta variedad de tejido conectivo se lo confiere su matriz (muy hidratada y con pocas fibras y clulas). Con respecto a las clulas, destacan los fibroblastos que son los responsables de la sntesis de colgeno; aunque no por ser las clulas por excelencia del tejido conectivo, son las ms numerosas en esta preparacin. Son clulas alargadas y fusiformes, de citoplasma ligeramente basfilo y lmites poco precisos. Lo ms destacado son sus ncleos: ovalados y de bordes afilados. Es posible verlos rodeados de matriz eosinfila (colgeno) recin segregado (realmente se segrega tropocolgeno y su polimerizacin es extracelular). Cuando los fibroblastos estn inactivos aparecen como ncleos pequeos e hipercromticos de citoplasma eosinfilo atrapados en una densa matriz eosinfila. En el tejido de granulacin es frecuente ver clulas sanguneas que han salido desde los vasos sanguneos (diapedesis) y se encuentran en la matriz extracelular. Entre ellas, la ms frecuente es el leucocito neutrfilo. Es fcilmente identificable al poseer un ncleo de aspecto segmentado, aparentando tener varios ncleos pequeos (los segmentos estn unidos unos con otros y envueltos por una envoltura nuclear, as que slo tienen uno). Otra clula sangunea que podremos ver con facilidad es el linfocito, reconocible por tener un ncleo redondeado e hipercromtico con poco citoplasma alrededor, de tal manera que parece ser un ncleo aislado.
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PIEL (etiqueta 4 y 73)

Epitelio: epidermis Tejido conectivo denso Tejido conectivo reticular Tejido adiposo blanco Adipocito La piel nos permite ver abundante tejido conectivo de la variedad densa, pero tambin la variedad reticular y tejido adiposo. Lo primero que deberemos hacer es orientarnos en la preparacin. Para ello (x4) buscaremos una banda epitelial: se trata de la epidermis, que corresponde a la variedad de epitelio plano estratificado queratinizado (ya estudiada en la prctica de epitelio de revestimiento). Debajo se sita la dermis (de tejido conectivo denso) y ms abajo la hipodermis (con abundante tejido adiposo). La dermis se nos revela (x4, x10) como un tejido conectivo donde predominan las fibras de colgeno, dndole un aspecto homogneo y eosinfilo (hay variaciones territoriales que veremos cuando estudiemos la piel). Las fibras de colgeno se disponen en haces o fascculos ms o menos sinuosos, en cuyo interior reconocemos fibroblastos, normalmente inactivos. En la dermis veremos grandes estructuras seccionadas longitudinal u oblicuamente que son los folculos pilosos, y junto a ellos acmulos de clulas claras que corresponden a las glndulas sebceas. Alejados de la epidermis, tambin podremos observar espacios claros con pequeos tubos cortados transversalmente con una apariencia espiral o arremolinada. Se trata de las glndulas sudorparas, que estn inmersas en un tejido conectivo rico en fibras de reticulina: tejido conectivo reticular. La parte ms alejada de la epidermis corresponde a la hipodermis (o tejido celular subcutneo) donde abunda el tejido adiposo blanco, que al teirse poco puede inicialmente pasarnos desapercibido. Su aspecto es el de una malla o red. A mayores aumentos (x10, x40) identificamos su clula, que es el adipocito, que aparece como un espacio vaco y redondeado limitado por unos finos mrgenes (que corresponde a la membrana plasmtica y a las escasas organelas del citoplasma).
CORDN UMBILICAL (etiqueta 13)

Tejido conectivo mucoso El tejido conectivo mucoso se encuentra exclusivamente en el cordn umbilical. Es lo que se conoce como "gelatina de Wharton". A pequeo aumento (x10) podemos observar en una seccin transversal del cordn tres estructuras vasculares (una vena y dos arterias) entre las que se dispone el conectivo mucoso. Se reconoce (x10, x40) como una matriz mucopolisacridos) con pocas fibras y escasas clulas. 28 granular basfila (rica en
AORTA (etiqueta 14 y 69)

Tejido conectivo elstico Fibras elsticas El tejido conectivo elstico puede observarse en la pared de las arterias, pero especialmente en la de las arterias elsticas; como es el caso de la arteria aorta. En ella las fibras elsticas se distribuyen por la mayor parte de su pared. En tinciones de rutina (hematoxilina-eosina) las fibras elsticas se tien de color rosa (son eosinfilas) y por lo tanto muy difciles de diferenciar (x10) de las clulas musculares lisas que forman la capa media de la aorta, dando el conjunto un aspecto relativamente homogneo. Sin embargo, si cerramos ligeramente el diagrama del condensador, subimos la luz (utilizando el potencimetro hasta la posicin 7-9) y observamos con los objetivos de 10 de 40, podremos advertir la presencia de finas bandas onduladas y brillantes, con una disposicin ms o menos paralela entre s.
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Prctica n 6
Tejido Cartilaginoso
Objetivo de la prctica. Conocer y adquirir la capacidad de identificar los principales tipos de cartlago, as como los elementos estructurales y celulares que lo componen.
TRQUEA (etiqueta 5)
Variedad hialina Matriz territorial Matriz interterritorial Grupo isognico Lagunas condrales Condrocito Pericondrio Condroblasto Como ya vimos en la prctica de epitelio de revestimiento, el cartlago es fcilmente reconocible al trasluz debido a su intensa coloracin azul (basofilia). As, en la traquea se revela como anillos con forma de letra C. Con el objetivo pequeo (x4) se puede conocer la peculiaridad de este tejido, caracterizado por la homogeneidad (textura hialina) de su matriz, sembrada de espacios ms claros con clulas (condrocitos) en su interior (lagunas condrales) agrupados en nmero variable (grupo isognico). Se denomina as por proceder toda ellas de una mima clula. A medida que las clulas de grupo isognico van produciendo matriz se van separando unas de otras, siendo este mecanismo el responsable del crecimiento intersticial del cartlago. Las clulas estn situadas en un hueco o celda denominado laguna condral. La retraccin artefactual de los condrocitos hace aparecer vacas esas lagunas, que estn separadas una de otras por finos tabiques. Con el objetivo de 10, se advierte que la matriz donde estn inmersas las clulas del grupo isognico (matriz territorial) es ms basfila que la matriz que se dispone entre los grupos (matriz interterritorial. Ello se debe a la diferente composicin de las matrices (la intraterritorial es ms reciente y rica en proteoglucanos sulfatados) En los mrgenes de cada zona condral, y separndolo siempre del tejido conectivo circundante, se dispone el pericondrio. En l se diferencian dos zonas: la ms externa o perifrica, de aspecto fibroso y la ms interna, que slo se diferencia del cartlago subyacente en el menor tamao de las lagunas, donde se alojan condroblastos, un tipo de clulas menor y memos diferenciado que los condrocitos (son clulas maduras). El crecimiento del cartlago por divisin y maduracin de los condroblastos da lugar al crecimiento aposicional del cartlago.
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LARINGE (etiqueta 15 y 72)

Variedad elstica Grupo isognico Lagunas condrales Condrocito Matriz territorial Matriz interterritorial Fibras elsticas Pericondrio Condroblasto La variedad de cartlago elstico es superponible a la hialina. Los grupos isognicos, lagunas y condrocitos son superponibles a lo visto en el cartlago hialino. Quiz, los grupos isognicos se dispongan menos regularmente. La verdadera diferencia est en su matriz, la cual es muy rica en fibras elsticas, lo que le confiere un aspecto menos homogneo apareciendo menos "limpio" en las secciones teidas con hematoxilina-eosina. Cerrando ligeramente el diafragma del condensador podemos vislumbrar las fibras elsticas debido a su refringencia. Sin embargo, no es sino con tinciones especficas para fibras elsticas (orceina) como se revela toda su riqueza en fibras elsticas. El pericondrio es similar al ya estudiado.
DISCO INTERVERTEBRAL (etiqueta 16)

Variedad fibrosa Grupo isognico Lagunas condrales Condrocito Matriz territorial Matriz interterritorial Aunque bsicamente comparte la estructura estudiada anteriormente, presenta rasgos particulares que le diferencian incluso morfolgicamente. Por un lado, los grupos isognicos se componen de pocos condrocitos, los cuales son escasos y estn alojados en lagunas pequeas. Por otro, la matriz territorial puede distinguirse por su mayor basofilia que la interterritorial, que es de aspecto ms fibroso y de tincin claramente eosinfila, con densos haces de fibras de colgeno.
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Prctica n 7
Tejido seo
Objetivo de la prctica. Conocer y adquirir la capacidad de identificar los principales tipos de hueso, as como los elementos estructurales y celulares que lo componen. Tambin se pretende estudiar la placa epifisaria y correlacionar los sucesos fisiolgicos que ocurren en ella con su morfologa.
HUESO LAMINAR (etiqueta 17)

Variedad compacta canal de Havers osteona laminilla laguna sea osteocito Variedad esponjosa trabcula laminilla laguna sea osteocito endostio Pericondrio Es la forma madura del tejido seo (el hueso inmaduro no presenta laminillas). Por lo tanto, su estructura histolgica bsica es laminar, pero la disposicin de las lminas es diferente en la variedad compacta del de la esponjosa (o trabecular). La variedad compacta es tpica de la corticales seas, y por ello la veremos, en mayor o menor grado, en la periferia de los huesos. A pequeos aumentos destacan los canales de Havers, espacios claros y redondeados por donde discurren los vasos y nervios y que centran la unidad estructural del hueso compacto: la osteona (x10). La osteona es una estructura caracterizada por la disposicin concntrica de las laminillas, hecho que se pone de manifiesto cerrando ligeramente el diafragma del condensador. Cada laminilla aloja pequeas oquedades que son las lagunas seas, donde se alojan los osteocitos. Si nos desplazamos (x4) hacia las regiones ms internas del hueso (donde se aloja la mdula sea) podremos ver como el hueso compacto se proyecta hacia el interior a modo de "cordones" o trabculas. Estas trabculas aparecen como "fragmentos" aislados de hueso, o bien, como ramificaciones desde la zona cortical compacta. Corresponden a hueso maduro, y por lo tanto presentan laminillas, aunque no canales de Havers ni osteonas. Al igual que ene hueso compacto, la clula que aparece en la matriz sea es el osteocito. Las trabculas estn recubiertas por el endostio (x40).
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En los mrgenes del hueso y separndolo del tejido conectivo circundante (x10), se dispone el periostio. Al igual que en el cartlago se diferencian dos zonas: la ms externa o perifrica, de aspecto fibroso y la ms interna, que slo se diferencia del hueso subyacente en el menor tamao de las lagunas, donde se alojan osteoblastos (clulas inmaduras) y en que lgicamente no hay laminillas
FALANGE EN DESARROLLO. OSIFICACIN ENDOCONDRAL (etiqueta 18)

Objetivos a identificar
Placa epifisaria Degeneracin condral Laminillas seas inmaduras Osteocito Osteoide Osteoblasto Osteoclasto Periostio En el lmite entre la epfisis y la difisis se dispone la placa epifisaria, que se caracteriza por que en ella los condrocitos se disponen en hileras paralelas al hueso. En estas hileras los condrocitos se disponen a modo de "pila de monedas", en las que se desarrolla un progresivo incremento del tamao de las lagunas y una paulatina hinchazn y degeneracin de los condrocitos a medida que se aproximan a la diafisis. Estos cambios citolgicos se acompaan de la degeneracin de la matriz que va haciendo ms basfila y que termina calcificndose. Estos fenmenos son expresivos de degeneracin condral. A partir de aqu, el cartlago degenerado se contina con trabculas de hueso inmaduro, en cuyo seno se encuentran los osteocitos, y por fuera los osteoblastos Son clulas con gran capacidad de sntesis (citoplasma basfilo) que se disponen en hileras en los mrgenes de las trabculas, en la superficie interna de las corticales, o entre la corteza y el periostio. Intercaladas con los osteoblastos, se encuentran los osteoclastos: clula multinucleada, de tincin eosinfila y de tamao mayor que las anteriores, que pertenece al sistema monocito macrfago. Se encargan de la erosin de las trabculas pudindoselas ver, en ocasiones, en pequeas lagunas excavadas por ellas en la superficie libre de las trabculas (lagunas de Howship). Las trabculas diafisarias ms cercanas a la placa epifisaria (metfisis) presentan una matriz central muy basfila, que en muchos casos se corresponde con la matriz condral calcificada (comentada anteriormente), rodeada por una matriz sea eosinfila todava sin calcificar (osteoide). Es a este nivel donde pueden verse con mayor facilidad los osteoclastos y los osteoblastos. Las caractersticas del periostio son similares a las vistas en la preparacin anterior. Sin embargo, al existir aqu un proceso de crecimiento muy activo, las capas, sobre todo la interna o celular, es ms prominente, pudindose incluso ver osteoblastos.
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Prctica n 8
Sangre y Hematopoyesis
Objetivo de la prctica. Conocer y adquirir la capacidad de identificar el tejido hematopoytico y sus principales elementos, tanto en frotis como en secciones histolgicas. La observacin de extensiones de sangre perifrica nos permitir reconocer a los elementos sanguneos presentes. Adems se pretende que el alumno sea capaz d distinguir los frotis de mdula sea de los de sangre perifrica.
SANGRE PERIFRICA (etiqueta 30)

Eritrocito Neutrfilo Linfocito Plaqueta El estudio de un frotis sanguneo deber efectuarse en la denominada "zona de observacin". En l, fundamentalmente, se encuentran (x40) los siguientes elementos:
1) eritrocitos: clulas anucleadas de tincin eosinfila 2) granulocitos: clulas de ncleo lobulado o segmentado en cuyo citoplasma se pueden ver grnulos 3) linfocitos: clulas con gran proporcin ncleo/citoplasma, ncleo basfilo, hipercromtico, y citoplasma escaso. 4) plaquetas: son pequeas estructuras (menores de 4 m) que corresponden a porciones citoplasmticas de los megacariocitos.
EXTENSIN MDULA SEA (etiqueta 31)

Formas inmaduras granulocticas Formas Inmaduras eritroides Megacariocito Adems de las clulas maduras vistas anteriormente se pueden encontrar (x40): 1) formas inmaduras de la serie roja: son clulas de ncleo denso, basfilo en un citoplasma homogneo 2) formas inmaduras de la serie blanca: clulas grandes de ncleo indentado cuyo citoplasma presenta numerosos grnulos de secrecin 3) megacariocitos: son clulas de enorme tamao y ncleo multilobulado. Visibles fcilmente con el objetivo de 10, e incluso con el pequeo (x4).
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MDULA SEA (etiqueta 32)

Tejido hematopoytico Tejido adiposo Trabcula sea Megacariocito En una seccin de mdula sea, se pueden encontrar tres componentes principales: 1) hueso: constituido por trabculas de tejido seo esponjoso que da sostn y alberga al tejido hematopoytico 2) tejido hematopoytico: constituye el parnquima propiamente dicho. En l se distinguen clulas basfilas dispuestas en nidos (formas inmaduras de la serie blanca: serie eritroblstica), clulas ms eosinfilas dispuestas difusamente (formas inmaduras de la serie blanca) y megacariocitos que se distinguen por su gran tamao y ncleo multilobulado 3) tejido adiposo: en la proximidad de las trabculas seas y en el seno del tejido hematopoytico se disponen adipocitos, fcilmente reconocibles por su morfologa
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Prctica n 9
Tejido Muscular
Objetivo de la prctica. Conocer y adquirir la capacidad de identificar las diferentes variedades de tejido muscular. Asimismo, se pretende que el alumno se familiarice con la orientacin del corte en la seccin estudiada. En la fotografa de microscopa electrnica de transmisin no centraremos en la identificacin de la sarcmera y de sus partes.
MSCULO ESQUELTICO (etiqueta 19, 60 y 64)

Fibra muscular estriada (seccin longitudinal) Fibra muscular estriada (seccin transversal) La observacin a pequeos aumentos de una seccin longitudinal de las fibras musculares esquelticas pone de manifiesto unos haces fuertemente eosinfilos que presentan una estriacin perpendicular a su eje mximo (x10, x40). Cada fibra muscular est bien definida y posee varios ncleos que se disponen en la periferia (x10). En las secciones transversales las fibras musculares se ven redondeadas (x10), sin estriacin y con los ncleos marginados (x10, x40).
MSCULO LISO (etiqueta 20, 62 y 65)

Fascculo de msculo liso Disposicin general de los haces de un rgano muscular liso El tero tiene un gran armazn muscular (miometrio) constituido por fibras musculares lisas. Con los objetivos de 4 y 10 aumentos, podemos observar que en los fascculos musculares se entrecruzan y que tienen una tincin menos llamativa que las fibras musculares esquelticas. A mayores aumentos (x40) advertimos que las clulas no se individualizan, sino que lo que destaca es el fascculo muscular. Cada fibra muscular lisa posee un nico ncleo de bordes redondeados y disposicin central.
MSCULO CARDIACO (etiqueta 21)

Fibra muscular cardiaca (seccin transversal) Fibra muscular cardiaca (seccin longitudinal) El corazn es un rgano muscular, constituido por fibras musculares estriadas (seccin longitudinal), de caractersticas diferentes a las esquelticas, denominadas fibras musculares 43
cardiacas. Cada fibra posee un solo ncleo que se localiza en la parte central de la fibra. En esta variedad muscular, las fibras estn unidas unas con otras mediante unas estructuras especiales denominas discos intercalares, que se insinan a grandes aumentos (x40). Estos discos permiten que las fibras musculares cardiacas si dispongan formando una especie de red tridimensional. La seccin transversal, al igual que ocurre en las fibras musculares esquelticas, no permite ver la estriacin.
FOTOGRAFA DE MICROSCOPIA ELECTRNICA DE TRANSMISIN

Sarcmera Lneas Z Banda A Banda H Lnea M Banda I Mitocondrias RER Se observa una fibra muscular estriada de tipo esqueltico. La ultraestructura ofrece una imagen caracterizada por la estriacin peridica existente en el citoplasma celular. La estriacin viene dada por unas lneas oscuras (lneas Z) que delimitan la sarcmera (unidad funcional muscular). Dentro de la sarcmera hay una zona central ms electrodensa que representa la banda A. En la porcin ms central de la banda A, hay una zona ms plida que es la banda H. En la porcin media de la banda H a su vez se sita la lnea M. A cada lado de la banda A y limitadas por las lneas Z, se disponen dos semibandas I de aspecto ms plido (baja electrodensidad). En la fibra muscular tambin se observan orgnulos citoplasmticos, tales como mitocondrias y RER. Tambin se pueden observar acmulos de glucgeno.
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Prctica n 10
Sistema Nervioso I
Objetivo de la prctica. Identificar la estructura de la mdula espinal, un ganglio espinal raqudeo y de un nervio perifrico. En cada una de estas estructuras se debern reconocer sus elementos ms significativos. En la preparacin de nervio perifrico, adems, se pretende que el alumno reconozca la orientacin de la seccin histolgica y en la fotografa de microscopa electrnica de transmisin sea capaz de observar la estructura de la fibra nerviosa mielnica y amielnica
MDULA ESPINAL (etiqueta 22)

Comisura anterior y posterior Asta anterior Motoneurona Asta posterior Epndimo Los cortes transversales de la mdula espinal estn representados (x4) por una seccin redondeada con un pequeo orificio central que es el epndimo. El epndimo, es una estructura tubular que recorre el centro de la mdula espinal. Est revestido por un epitelio cbico formado por los ependimocitos. En la mdula espinal la sustancia gris (con alta densidad en cuerpos neuronales) se dispone internamente, rodeando al epndimo, presentando una imagen que recuerda las alas de una mariposa (la sustancia gris est representada por dos mitades, derecha e izquierda, simtricas). La sustancia blanca rodea y engloba a la sustancia gris. Las zonas ms anchas de la sustancia gris (asta anterior) contienen zonas neuronales donde se localizan las motoneuronas: clulas de gran tamao y aspecto piramidal con grandes ncleos y nuclolo evidente.
GANGLIO ESPINAL RAQUIDEO (etiqueta 23)

Neurona Lipofucsina Clula satlite Fibras nerviosas La observacin a pequeos aumentos de un ganglio espinal permite poner en evidencia dos constituyentes perfectamente diferenciables: 1) somas neuronales: Son clulas que destacan por presentar (x10) gran ncleo con un nuclolo prominente. En el cuerpo de estas clulas es frecuente observar (x40) la existencia de un pigmento amarillento (lipofucsina) cuya cantidad aumenta con la edad. Alrededor de los somas neuronales se pueden observar las clulas satlites. 47
2) fibras nerviosas: Representan las fibras neuronales mielnicas aferentes y eferentes al ganglio espinal. Se identifican con facilidad por la imagen ondulante que presentan. Entre las fibras se observan los ncleos de las clulas de Schwann.
NERVIO PERIFRICO (etiqueta 24)

Nervio (seccin transversal y longitudinal) Vaina perineural La seccin longitudinal de los nervios perifricos ofrece una caracterstica imagen ondulante (x4, x10), que llama la atencin gracias a la disposicin de los ncleos de las clulas de Schwann (x10). La seccin transversal permite observar los axones (x10, x40) representados por una estructura eosinfica circular, rodeada de un espacio claro, pticamente vaco, que representa la mielina que se ha disuelto con los alcoholes en el proceso de inclusin de las muestras en parafina. Por fuera de ese halo claro, en ocasiones, se ve el ncleo de una clula de Schwann. (Correlacionar esta imagen con la fotografa de microscopa electrnica de transmisin). La vaina perineural est constituida por haces de tejido conectivo (x10) que envuelven varios fascculos nerviosos (x40).
FOTOGRAFA DE MICROSCOPA ELECTRNICA DE TRANSMISIN

Fibra mielnica Ncleo de la clula de Schwann Citoplasma de la clula de Schwann Vaina de mielina Axn Fibra amielnica Membrana basal Colgeno endoneural La vaina de mielina, de constitucin espiral, destaca por su intensa electrodensidad. Por dentro de la vaina est el axn y por fuera se coloca el ncleo y el resto del citoplasma de la clula de Schwann. La fibra nerviosa se separa del conectivo circundante mediante una membrana basal. Entre distintas fibras nerviosas se disponen fibras de colgeno (colgeno endoneural) de diferente orientacin. Las fibras amielnicas se caracterizan porque una misma clula de Schwann engloba a varios axones. Por fuera de ellas tambin se dispone una membrana basal
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Prctica n 11
Sistema Nervioso II
Objetivo de la prctica. Conocer y adquirir la capacidad de reconocer el cerebro y el cerebelo. En cada uno de estos rganos se proceder a identificar sus capas, as como sus principales tipos celulares.
CEREBRO (etiqueta 25 y 27)

Sustancia gris (corteza): -capa molecular -clula piramidal Sustancia blanca: -oligodendrocito
A pequeos aumentos se distinguen fcilmente dos zonas: una externa, rica en clulas de distinto tamao y morfologa: corteza cerebral y otra de disposicin interna (sustancia blanca) donde abundan estructuras fibrilares y se reconocen clulas pequeas de ncleos densos y redondeados. La corteza cerebral tambin recibe el nombre de sustancia gris puesto que su riqueza en somas celulares le confiere un color grisceo en la observacin en fresco. Por el contrario, la sustancia blanca se denomina as porque al ser rica en mielina y tener menor densidad celular ofrece una coloracin blanquecina. En la corteza cerebral (x4), e inmediatamente por debajo de la piamadre, hay (x10) una zona pobre en ncleos: capa molecular. Debajo de la capa molecular se disponen el resto de las capas corticales con abundantes somas. Entre stas destacan (x10, x40) unas que albergan clulas de morfologa piramidal: clula piramidal. En la sustancia blanca abundan clulas con ncleos pequeos, los cuales corresponden a una variedad de glia que son los oligodendrocitos (x10, x40). Es tpica la imagen del ncleo de este tipo celular, pues alrededor del mismo se suele observar (x40) un halo claro (producto artefactual del procesamiento histolgico del tejido nervioso), que le confiere un aspecto de "huevo frito".
CEREBELO (etiqueta 26 y 28)

Sustancia gris: capa molecular capa de los granos capa de las clulas de Purkinje Sustancia blanca: oligodendrocito
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Al igual que en el cerebro, en el cerebelo, se distingue una sustancia gris (corteza cerebelosa) y una sustancia blanca. La corteza est constituida de fuera adentro por tres capas (x4): 1) capa molecular: de caractersticas morfolgicas similares a la observada en la corteza cerebral, aunque ms gruesa. 2) capa de las clulas de Purkinje: es una monocapa discontinua constituida por unas clulas piramidales de gran tamao (x4, x10), tincin eosinfila y nuclolo prominente (x40), que emiten largas prolongaciones citoplsmicas que se ramifican profusamente. 3) capa de los granos: as denominada por estar constituida por numerosos ncleos redondeados dispuestos muy densamente. A pequeos aumentos esta capa parece estar constituida por granos basfilos. Internamente a la capa de los granos se localiza la sustancia blanca del cerebelo, de caractersticas semejantes a las observadas en el cerebro y con presencia de oligodendrocitos.
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Prctica n 12
Globo Ocular
Objetivo de la prctica. Conocer la estructura del globo ocular y de sus partes. Se prestar atencin a la cornea y a la retina y sus capas.
GLOBO OCULAR (etiqueta 29)

Esclertica Coroides Retina epitelio pigmentario capa de conos y bastones capa limitante externa capa nuclear externa capa plexiforme externa capa nuclear interna capa plexiforme interna capa de clulas ganglionares capa de fibras nerviosas del nervio ptico capa limitante externa Iris esfnter pupilar del iris epitelio posterior del Iris Cuerpo Ciliar msculo ciliar epitelio del cuerpo ciliar Crnea epitelio corneal membrana de Bowman sustancia propia membrana de Descemet endotelio corneal Cristalino cpsula del cristalino epitelio anterior del cristalino La simple inspeccin al trasluz de la seccin histolgica permite orientarse tilmente sobre la disposicin de los distintos componentes que se estudian en la presente prctica. La esclertica (x4) es la capa de tejido conectivo denso que envuelve al globo ocular, excepto en su polo anterior, donde se dispone la cornea. La crnea est constituida por cinco capas: dos epitelios que asientan sobre sus respectivas basales y un estroma en la zona central. As, de fuera a dentro nos encontramos (x10) con las siguientes capas: 1) un epitelio plano estratificado no queratinizado que descansa (x40) 2) sobre una gruesa membrana basal (membrana de Bowman). 3) ms profundamente, se dispone un tejido conectivo denso, avascular, en el que las fibras de la matriz extracelular adoptan una disposicin muy regular 4) a continuacin nos encontramos con una membrana basal (membrana de Descemet),ms 55
delgada que la anterior 5) un fino epitelio (epitelio corneal posterior) que se denomina endotelio El cristalino es (x4) un cuerpo eosinfilo que, junto con su ligamento, delimita en el ojo dos espacios: uno anterior (que contiene el humor acuoso) y otro posterior (cuerpo vitro). La cara anterior del cristalino presenta (x10) el epitelio anterior del cristalino, que se caracteriza por orientar su membrana basal hacia el exterior (x40). Entre la cornea y el cristalino se dispone el iris, que es un diafragma pigmentado que separa el espacio anterior del ojo en una cmara anterior y una posterior. En la posterior se produce el humor acuoso y se reabsorbe en la anterior. La porcin anterior del iris carece de epitelio y la posterior tiene un epitelio pigmentado, con numerosos melanocitos, y fascculos musculares que constituyen el esfnter pupilar (x10, x40). En la zona posterior del globo ocular, donde no hay cornea, encontramos de fuera a dentro: 1) esclertica: de tejido conectivo denso 2) coroides: con numerosos vasos sanguneos 3) retina: separada de la coroides por una membrana basal (membrana de Bruch o vitrea). En la retina, (x40) se distinguen diez capas (x10, x40): 1) la ms externa (prxima a la coroides) est constituida por una monocapa de clulas muy pigmentadas (epitelio pigmentario). 2) inmediatamente por debajo se sita la denominada capa de conos y bastones (que est compuesta por las prolongaciones fotosensibles de los fotorreceptores) 3) a continuacin, se localiza la membrana limitante externa (equivalente a la limitante externa del tubo neural) 4) debajo se observa una agrupacin de ncleos (nuclear externa) que corresponden a los conos y los bastones 5) la presencia de prolongaciones citoplasmticas confiere a esta capa un aspecto deshilachado y su nombre de capa plexiforme externa 6) a continuacin se advierte una agrupacin nuclear (nuclear interna), donde se disponen las clulas bipolares, horizontales, amacrinas y clulas de Mller (estas ltimas son gliales) 7) seguida de otra capa plexiforme interna 8) escasos ncleos constituyen a capa de clulas ganglionares, cuyas fibras constituyen 9) la capa de las fibras nerviosas del nervio ptico 10) finalmente toda la retina est delimitada por la membrana limitante interna (equivalente a la limitante interna del tubo neural).
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Prctica n 13
Sistema Endocrino I
Objetivo de la prctica: Conocer y adquirir la capacidad de identificar la hipfisis y sus diferentes partes (adenohipfisis, pars intermedia y neurohipfisis). Nos fijaremos en los principales tipos celulares y en el aspecto fibrilar de la neurohipfisis. Tambin estudiaremos la glndula tiroides, ya vista en la prctica de epitelio glandular debido a la peculiaridad de sus folculos.
HIPFISIS (etiqueta 36)

Adenohipfisis Pars Distalis clula cromfila acidfila clula cromfila basfila clula cromofba Pars intermedia quistes de Rathke Neurohipfisis ncleos de clulas gliales (pituicitos) La visin al trasluz, y utilizando el ocular como lupa nos permite hacernos una idea muy precisa de las distintas partes de la hipfisis. La porcin ms teida y celular corresponde a la adenohipfisis, mientras que la ms plida, algo basfila y menos celular a la neurohipfis. Entre ellas suele ser posible observar pequeos quistes de la parte intermedia. Con el objetivo de pequeos aumentos volveremos a observar esas estructuras para hacer una correlacin macromicroscpica. La observacin a mayor aumento (x10, x40) de la adenohipfisis teida con hematoxilinaeosina permite clasificar las clulas epiteliales en dos grupos, uno cuyas clulas tienen mucha apetencia por los colorantes (Clulas cromfilas) y otro con escasa afinidad (Clulas cromfobas). Dentro de las clulas cromfilas nos encontramos clulas con afinidad por los colorantes cidos (acidfilas) o por los colorantes bsicos (basfilas). Las clulas cromfobas dan una imagen de citoplasma plido acrecentado por la escasez de grnulos en su citoplasma. La neurohipfisis se caracteriza por tener un aspecto fibrilar (x10), que corresponde a los axones de las neuronas situadas en los ncleos supraptico (vasopresina) y paraventricular (oxitocina) del hipotlamo. Entre los axones es posible ver (x40) ncleos celulares que corresponde a los pituicitos, que no son sino clulas gliales. Entre la pars distalis de la adeno y la neurohipfisis se encuentra la pars intermedia, de caractersticas epiteliales (x10), que se caracteriza por presentar espacios qusticos (quistes de Rathke) con un contenido homogneo eosinfilo; que son vestigios de la luz de la bolsa de Rathke.
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TIROIDES (etiqueta 11)

Folculo Coloide Clula folicular Clula parafolicular Estroma interfolicular El tiroides es una glndula exocrina que almacena su contenido en los folculos, de tal manera que no est en contacto con la sangre, sino almacenado extracelularmente, hasta tal punto que su contenido (el coloide) no es reconocido como propio, sino extrao, por el organismo. El folculo es una estructura ms o menos esfrica de diferentes tamaos, rodeada por una membrana basal y tapizada internamente por las clulas foliculares. Estn tapizados por (x10) un epitelio simple, cilndrico o cbico segn el tamao del folculo (los ms grandes acumulan mucho coloide, estn ms distendidos y sus clulas son bajas). Las clulas foliculares captan por su polo basal precursores (aminocidos y yodo, principalmente) de los capilares situados al otro lado de la membrana basal. Su producto de sntesis (tireoglobulina), que es funcionalmente inactivo, es vertido y almacenado en la luz del folculo formando el coloide. Al existir demanda de hormonas tiroideas, las clulas foliculares captan, por pinocitosis, porciones de tireoglobulina, cuyas vesculas se funden con lisosomas (fagolisosomas) dando como productos de su degradacin la tiroxina (T3) y la tetratiroxina (T4), que son hormonas funcionalmente activas, que se liberan por el polo basal a los capilares del estroma. En el interior de los folculos existe otro tipo de clulas denominado clulas parafoliculares o clulas C (x10). Estas clulas se disponen de forma aislada o en pequeos grupos, diseminadas entre las clulas foliculares. Estn incluidas dentro de la lmina basal de los folculos, pero sin que sus bordes apicales lleguen a contactar con la luz folicular. Se caracterizan por su aspecto reticular y escasa apetencia tintorial (x40).
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Prctica n 14
Sistema Endocrino II
Objetivo de la prctica: Conocer y adquirir la capacidad de identificar la paratiroides y la glndula suprarrenal. En esta estudiaremos la corteza con sus peculiares capas y la mdula; fijndonos en el carcter de paraganglio de esta ltima.
PARATIROIDES (etiqueta 37)

Clula principal Clula oxfila A pequeo aumento se advierte un tejido constituido bsicamente por parnquima glandular dispuesto en cordones anastomosados. Como glndula endocrina que es, presenta una rica red de capilares sanguneos dispuestos entre los cordones, donde las clulas liberan su secrecin. A mayor aumento (x10) distinguimos dos tipos celulares: 1) clulas principales. Tienen un ncleo central esfrico y un citoplasma claro. Son las responsables de la sntesis de paratohormona (PTH). 2) clulas oxfilas. Se caracterizan por tener un citoplasma eosinfilo homogneo (debido a su riqueza en mitocondrias). Se piensa que derivan de las principales.
GLNDULA SUPRARRENAL (etiqueta 38)

Cpsula Corteza: capa glomerular capa reticular capa fascicular Mdula: clulas medulares En la glndula suprarrenal se distinguen (x4) dos zonas: una de localizacin perifrica con clulas grandes de citoplasma eosinfilo (corteza) y otra de localizacin central (mdula). En la corteza, las clulas situadas se organizan tres capas (x4, x10): 1) una situada inmediatamente debajo de la cpsula: capa glomerular, donde las clulas se agrupan en pequeos acmulos redondeados que recuerdan a los glomrulos renales. Sus clulas segregan aldosterona. 2) una capa media donde las clulas se organizan en fascculos perpendiculares a la cpsula: capa fascicular. Sus clulas segregan corticosteroides. 3) una ms interna denominada capa reticular, donde las clulas se disponen irregularmente. Sus clulas segregan hormonas sexuales. Entre las clulas de la glndula suprarrenal, independientemente de su disposicin en glomrulos, fascculos o retculo, se dispone un desarrollado plexo capilar, debido a la condicin 63
endocrina de esta glndula. La mdula deriva de la cresta neural y se considera un paraganglio cromafin. Sus clulas son basfilas (clulas medulares) (x10) de disposicin irregular, inmersas en un estroma muy vascularizado. Sintetizan adrenalina y noradrenalina. Al ser un paraganglio, es posible observar somas neuronales.
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Prctica n 15
Aparato circulatorio
Objetivo de la prctica. Adquirir la capacidad de identificar los principales elementos del aparato cardiovascular. Bsicamente el sistema sanguneo consta de corazn y vasos, siendo estos ltimos arterias, capilares o venas. Todos ellos tienen bsicamente la misma estructura consiste en tres capas. Nos fijaremos en los rasgos distintivos entre los distintos segmentos.
CORAZN (etiqueta 21, 39 y 41)

Visin general Pared auricular Pared ventricular Vlvula aurculo-ventricular Ramas coronarias Con el objetivo pequeo se observan las tres capas de la pared cardiaca: 1) la capa ntima (endocardio) est constituida por el revestimiento endotelial que descansa sobre un escaso conectivo (se contina sin solucin de continuidad con el endotelio de los vasos que entran y salen del corazn). 2) la capa media (miocardio) representa la prctica totalidad del espesor del corazn. Est formada por clulas musculares estriadas cardiacas (fibras musculares cardiacas) que forman las aurculas y los ventrculos. Tiene un grosor variable: mayor en los ventrculos y menor en las aurculas. 3) la capa externa del corazn es el pericardio visceral. Est formado por un revestimiento mesotelial que descansa sobre una capa de tejido conectivo laxo que se refleja y forma el pericardio parietal (entre ambas hojas pericrdicas dejan una cavidad que se denomina cavidad pericrdica) El miometrio est constituido por fibras musculares cardiacas, ya estudiadas. En el lmite aurculo-ventricular (x4) existe una lengeta fibrosa tapizada por endocardio que es la vlvula aurculo-ventricular. En la unin aurculo-ventricular se pueden observar (x4, x10) arterias musculares que corresponden a las arterias coronarias
ARTERIA AORTA (etiqueta 14 y 69)

Visin general Capa ntima Capa media Capa externa La pared arterial, al igual que los dems vasos sanguneos (excepto los capilares y las 67
vnulas), est constituida (x4) por tres capas, que de la luz hacia fuera se denominan ntima, media y adventicia. La aorta es una arteria elstica, denominada as por su riqueza en fibras elsticas. La ntima est constituida (x40) por una capa endotelial que descansa entre escaso tejido conjuntivo laxo. Su elemento ms caracterstico es la riqueza en fibras elsticas, que ocupan (x10) prcticamente todo el espesor de su pared, siendo fcilmente observables en la capa media. Como ya comentamos en la prctica de tejido conectivo las fibras elsticas son eosinfilas y se confunden con el resto de la pared. Para ponerlas de manifiesto cerraremos ligeramente el diagrama del condensador y las veremos como finas fibras onduladas y brillantes, con una disposicin ms o menos paralela entre s. La capa externa del vaso o adventicia est constituida por tejido conjuntivo laxo (x10) con pequeos vasos en su seno.
TERO (etiqueta 20, 62, 65 y 70) y OVARIO (etiqueta 54)

Arteria muscular Vena de mediano tamao Para la observacin de estas estructuras podemos elegir numerosas muestras histolgicas, puesto que vamos a buscar unas estructuras de distribucin casi universal en nuestro cuerpo. Las arterias musculares se reconocen en su seccin transversal por presentar un aspecto circular (x4) con una luz redondeada. La capa ntima posee en su zona ms interna una banda de fibras elsticas (lmina limitante interna) de apariencia ondulada por la contraccin postmorten del vaso, en la que su carcter refringente se aprecia cuando se cierra ligeramente el diafragma del condensador. La capa media est constituida por fibras musculares de disposicin paralela (x10), siendo su lmite externo la lmina elstica externa (de difcil identificacin si no es con tinciones especiales para fibras elsticas). La adventicia la forma tejido conecto laxo que se contina con el tejido conectivo perivascular, con el que termina confundindose. La vena de mediano calibre, a la seccin transversal muestra una luz irregular, de aspecto colapsado (x4). La capa muscular es menos marcada que en la arteria muscular (x10).
TEJIDO CONECTIVO (etiqueta 12 y 40)

Arteriola Capilar Vnula En la seccin transversal (la ms frecuente), la arteriola se reconoce por presentar (x10) una 68
pared gruesa de fibras musculares y una luz redondeada, de escaso dimetro en comparacin con el de la pared muscular. No se reconocen (x40) las lminas elsticas que veamos en las arterias musculares. La vnula, semejante a la vena aunque de menor tamao, presenta (x10) una luz amplia en comparacin con su pared, que es muy delgada y en la que se pueden observar escasas fibras musculares lisas (x40). El capilar (x10) se reconoce por ser un anillo circular constituido (x40) por el citoplasma de una o dos clulas endoteliales que ocasionalmente pueden presentar sus ncleos a la seccin. En el interior se suele observar uno o dos hemates que ocluyen prcticamente toda la luz vascular.
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Prctica n 16
Sistema Inmunitario
Objetivo de la prctica. Ser capaces de identificar los principales rganos linfoides, familiarizndonos con sus principales rasgos morfolgicos.
TIMO (etiqueta 33)

Lobulillo Corteza linfocitos Mdula corpsculo de Hassal El timo es un rgano recubierto por una cpsula que se organiza (x4) en dos lbulos unidos entre s. La cpsula se proyecta parcialmente hacia el interior dividiendo a los lbulos en lobulillos incompletos que confluyen unos con otros. La zona ms externa del lobulillo tmico (corteza tmica) es ms oscura (x4) al estar constituida por una alta densidad de linfocitos maduros (x10). Por el contrario, la zona central del lobulillo (mdula tmica) es ms clara al contener linfocitos inmaduros y ms dispersos. En el timo, adems de los linfocitos T, tambin existen las clulas epiteliales del timo, que a nivel de la mdula tienen un citoplasma eosinfilo pudindoselas ver en distintos grados de degeneracin, llegando a veces a ser son fusiformes e incluso formar estructuras perladas (corpsculos de Hassal). Los lobulillos se fusionan unos con otros a travs de su mdula.
GANGLIO LINFTICO (etiqueta 34)

Visin general Cpsula y seno subcapsular Corteza folculos linfoides seno cortical Mdula senos medulares Hilio El ganglio linftico es una estructura ovalada o reniforme constituido por un parnquima linfoide envuelto por una cpsula fibrosa que emite hacia el interior tabiques (o trabculas) que lo dividen incompletamente. La zona perifrica del parnquima se denomina corteza y la interna mdula. Posee una doble circulacin:
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1) la circulacin sangunea: los vasos sanguneos penetran y salen por el hilio. 2) la circulacin linftica, que penetra a travs de la cpsula (vasos linfticos aferentes) por la zona convexa del ganglio, lo atraviesa y sale por el hilio (vasos linfticos eferentes), pasa dirigirse a otro ganglio linftico. Una vez que los vasos linfticos aferentes atraviesan la cpsula, la linfa se distribuye subcapsularmente por el seno subcapsular (o marginal) que consiste en un espacio revestido por clulas endoteliales. Desde este seno la linfa atraviesa el ganglio por los senos corticales, desde donde pasa a los senos medulares para finalmente abandonar el ganglio. Sin embargo, a lo largo de su recorrido por los senos, muchas clulas linfoides abandonan los senos para pasar al parnquima, mientras que otras clulas pasan desde el parnquima a los senos. En la corteza se encuentran los folculos linfoides (x4), que son acmulos, ms o menos esfricos, de linfocitos. Algunos de los folculos tienen (x10) una corona externa de linfocitos maduros (de cromatina densa y escaso citoplasma) que rodea una zona ms clara (centro germinal) constituida por linfocitos ms inmaduros (mayor tamao, ncleo menos denso y ms citoplasma). Estos folculos se denominan folculos linfoides secundarios (porque ya ha habido contacto antignico). En la mdula existen senos o canales (senos medulares) (x10) que drenan la linfa desde la corteza hasta el hilio. Estos senos son el resultado de la confluencia de los numerosos senos que atraviesan el ganglio.
BAZO (etiqueta 35)

Visin general Trabculas conectivas Pulpa blanca corpsculo de Malpighi arteriola central vaina linfoide periarteriolar Pulpa roja cordones de Bilrroth senos esplnicos El bazo, al igual que los rganos precedentes, est rodeado (x4) por una cpsula fibrosa que emite tabiques (trabculas) hacia el interior. La observacin en fresco del bazo muestra un fondo rojizo sanguneo (pulpa roja) sobre la que destacan pequeas zonas blanquecinas (pulpa blanca). La pulpa blanca constituye el parnquima esplnico y est constituida (x4, x10) por acmulos linfoides formando: 1) ndulos (corpsculos de Malpighi), que son estructuras ovaladas que se ven atravesadas por una arteriola llamada arteriola central; a pesar de no atravesar el folculo por el centro, y 72
2) vainas alrededor de las arteriolas (vainas linfoides periarteriolares: VLPA) Las VLPA se resuelven el tejido linfoide de en los ndulos cuando las arteriolas penetran en ellos para formar la arteriola central. La pulpa roja est constituida (x10) por cordones celulares (cordones de Bilrroth) entre los que se disponen senos vasculares (senos esplnicos) que corresponden a sinusoides llenos de sangre (x40). Los cordones estn formados por un citorretculo, de tal forma que en lugar de macizos son prcticamente huecos. Las arterias que penetran en el bazo terminan: 1) directamente en los sinusoides y de ah pasa al sistema venoso (circulacin cerrada) 2) en los cordones, desde donde pasa al interior de los sinusoides y luego a las venas (circulacin abierta) Al haber sangre en los cordones y en los sinusoides resulta muy difcil individualizarlos, de tal manera que la pulpa roja aparenta como un estructura informe
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Prctica n 17
Aparato Respiratorio
Objetivo de la prctica. Conocer y ser capaces de identifican los diferentes segmentos del tracto respiratorio. En la laringe nos detendremos en las cuerdas vocales observando la diferente constitucin de las mismas. En la traquea, ya vista anteriormente, estudiaremos sus diferentes capas. En el pulmn nos detendremos en las vas areas con las diferencias entre bronquio y bronquiolo, en las vas areas terminales, en los alvolos y en la pleura. Tambin prestaremos atencin a la presencia de tejido linfoide asociado a mucosas (MALT). La utilizacin de un pulmn procedente de un neonato prematuro que no lleg a respirar espontneamente (presenta artefactos procedentes de la ventilacin mecnica) nos permitir poderlo comparar con uno totalmente funcional.
LARINGE (etiqueta 15 y 72)

Epiglotis: cartlago elstico Cuerda vocal verdadera: msculo esqueltico epitelio plano estratificado Cuerda vocal falsa: glndulas seromucosas epitelio respiratorio Seno larngeo En un corte longitudinal de la laringe se puede observar a simple vista la lengeta epigltica, que est centrada por un cartlago elstico alrededor del que se encuentra glndulas seromucosas. Su revestimiento epitelial presenta zonas de epitelio respiratorio (cilndrico pseudoestratificado ciliado) y escamoso (epitelio plano estratificado).
TRQUEA (etiqueta 5)
Anillo traqueal Epitelio respiratorio Submucosa glndulas seromucosas msculo liso Cartlago hialino Adventicia La seccin transversal nos muestra un anillo en el que a simple vista lo que ms nos llama la atencin es el cartlago por su intensa basofilia. Deberemos orientar la preparacin en la pletina del microscopio y dirigirnos hacia la parte interior de la muestra donde se encuentra el epitelio respiratorio, ya estudiado. Por debajo se encuentra la lmina propia (que junto con el epitelio forma la mucosa) de conectivo laxo, que se contina con la submucosa donde encontraremos glndulas seromucosas y fascculos de msculo liso. Estos elementos son ms abundantes en la parte posterior de la traquea, 75
don del anillo de cartlago est ausente. A continuacin se sita el cartlago traqueal (de tipo hialino) y ms externamente la adventicia, que es una zona de conectivo que se continua con las estructuras circundantes a la traquea.
PULMN MADURO (etiqueta 42)

Visin general Bronquio intrapulmonar pliegues de la mucosa bronquial epitelio cartlago bronquial tejido linfoide asociado a mucosas msculo liso bronquial y bronquiolar Bronquiolo msculo liso bronquiolar Vas areas terminales Alvolos Tabiques alveolares Ramas arteriales y venosas intrapulmonares Pleura Desde los pequeos aumentos (x4) somos capaces de reconocer el pulmn: se nos muestra como una estructura area, poco compacta, con aspecto de red o malla. En ella existen zonas engrosadas, que es donde normalmente podemos localizar los bronquios de mayor tamao. Los bronquios intrapulmonares son un tramo de va area con (x10) una mucosa que forma pliegues (con un epitelio respiratorio que descansa sobre un lmina propia) debajo de la cual hay una submucosa donde podemos ver fibras musculares lisas, glndulas seromucosas y tejido linfoide (que puede extenderse hasta la lmina propia) y por fuera fragmentos de cartlago hialino (que se dispone como placas irregulares incompletas que rodean al bronquio a lo largo de todo su permetro, y por lo tanto slo se ven pequeas porciones). Cada bronquio se acompaa de arterias, venas y linfticos. De menor tamao (menores de 1 milmetro de dimetro) tambin podemos reconocer los bronquiolos. Son similares a los intrapulmonares, excepto pequeos cambios en la citologa de su epitelio (comienzan a aparecer las clulas de Clara, que van a ir sustituyendo a las caliciformes y a las ciliadas), y sobre todo porque no hay glndulas submucosas ni cartlago. Los bronquios se van ramifican en segmentos menores hasta finalmente terminar en los sacos alveolares, que son sacos ciegos constituidos por dos o ms conjuntos de alvolo. Cada alvolo es un espacio areo que tiene una pared delgada que contiene capilares finos y forma la barrera respiratoria.
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PULMN INMADURO (etiqueta 43)

Visin general Identificacin de la estructura pulmonar no expandida Bronquios y bronquiolos y vas areas terminales Alvolos Tabiques alveolares Pleura Lgicamente podremos reconocer las mismas estructuras que en el caso anterior. La diferencia ms llamativa es la falta de expansin de los sacos alveolares y alvolos. Las dilataciones irregulares que vemos son consecuencia de la ventilacin mecnica. Como los alvolos no estn expandidos se habla de patrn en "malla cerrada", pero una atenta observacin nos revelar los alvolos, que en su interior contienen material aspirado. Los tabiques alveolares, como todava no han terminado de madurar se muestran ms gruesos que los del pulmn maduro
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Prctica n 18
Aparato Digestivo I
Objetivo de la prctica. Identificar y poder identificar los principales las primeras porciones del tubo digestivo, como son la lengua, el esfago y el estmago. Abordaremos la estructura general del tubo digestivo y profundizaremos en la mucosa. En el estmago nos detendremos en las glndulas y sus tipos celulares.
LENGUA (etiqueta 44)

Mucosa lingual Papilas Msculo estriado Glndulas seromucosas La seccin de lengua presenta una zona perifrica, la mucosa, que rodea un eje central de musculatura esqueltica. La mucosa comprende un epitelio plano estratificado escasamente queratinizado apoyado sobre tejido conectivo denso (corion o lmina propia). En la regin del dorso de la lengua, podemos reconocer en el epitelio las papilas gustativas, y dentro de estas los botones gustativos. Pero lo ms llamativo de la lengua es su eje muscular, que constituye casi todo el espesor de la misma. Adems, de forma caracterstica los haces musculares se orientan en todas direcciones, lo que explica la movilidad lingual. Entre los haces musculares se dispone un tejido conectivo muy vascularizado rico en fibras nerviosas con grupos de glndulas seromucosas.
ESFAGO (etiqueta 3)
Visin general Mucosa: Epitelio Lmina propia Muscular de la mucosa Submucosa Capas musculares: Msculo liso Msculo estriado Plexo Mioentrico (o de Auerbach) Adventicia En el esfago podemos ya advertir la estructura general del tubo digestivo, que de dentro afuera consta de: mucosa, submucosa, muscular propia y serosa o adventicia. La mucosa comprende, a su vez, de tres constituyentes. epitelio, lmina propia y muscular de la mucosa. Esta 79
organizacin, que ya comienza en la faringe, la encontraremos en el esfago, estmago, intestino delgado, apndice cecal e intestino grueso. Las mayores diferencias entre los distintos segmentos se encuentran a nivel de la mucosa. La mucosa del esfago est constituida por un epitelio plano estratificado no queratinizado que asienta sobre tejido conectivo (corion) y por una banda de fibras musculares lisas que constituyen la muscular de la mucosa. Por debajo se dispone una ancha banda de tejido conectivo (submucosa) rica en estructuras vasculares, y donde se encuentra el plexo submucoso o de Meissner. A continuacin estn las capas musculares. Con el objetivo de 10 aumentos se advierten haces musculares entrelazados, unos de tincin ms viva y en las que los ncleos de las fibras musculares se disponen en la periferia (msculo estriado) y otros haces ms plidos y con ncleo central (msculo liso). La proporcin relativa de estas fibras depender del segmento del esfago del que proceda la muestra. En el tercio superior predominan los haces esquelticos, en el inferior los de msculo liso y en el tercio medio se ven ambos tipos. Los haces de msculo liso se disponen en dos capas: una interna y de disposicin circular y otra externa longitudinal. Por fuera se encuentra la adventicia, de conectivo con vasos y terminaciones nerviosas.
ESTMAGO (etiqueta 45 y 66)

Visin general de la mucosa: glndula gstrica: epitelio: clula mucosa clula parietal clula principal lmina propia muscular de la mucosa Submucosa Muscular propia Plexo mioentrico (o de Auerbach) Adventicia/serosa Con el objetivo de 4 aumentos se observa una mucosa de tipo glandular, que comprende ms de la mitad del grosor de la pared gstrica. Las glndulas se subdividen en porcin superficial, cuello y cuerpo. La porcin superficial presenta (x10) clulas mucosas de polo cerrado, la del cuello clulas mucosas, de reserva y parietales, y la del cuerpo presenta clulas parietales en las zonas ms altas y principales en la proximidad de los fondos glandulares. Las clulas parietales (secretoras de ClH) son grandes, eosinfilas y redondeadas (x40), mientras que las clulas principales (secretoras de pepsina) son prismticas y basfilas (x40). En las porciones inferiores de las glndulas tambin se encuentran las clulas enteroendocrinas 80
(productoras de gastrina, somatostaina, etc) que no son distinguibles en las secciones teidas con hematoxilina-eosina. Rodeando y envolviendo las estructuras epiteliales aparece (x10) una fina capa de tejido conectivo laxo (lmina propia). La porcin ms interna de la mucosa esta formada por fibras musculares lisas que se disponen formando la muscular de la mucosa. A continuacin aparece la submucosa (x10), e inmediatamente por debajo (x4, x10) aparecen dos capas musculares lisas de diferente orientacin: una interna circular y otra externa longitudinal (la interna suele estar reforzada por una capa oblicua ms interna). Entre las capas musculares hay ganglios parasimpticos y fibras nerviosas (x10), que constituyen el plexo mioentrico (de Auerbach). Externamente, el estmago presenta una fina banda de tejido conectivo laxo que constituye la capa adventicia.
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Prctica n 19
Aparato Digestivo II
Objetivo de la prctica. Continuamos con el conocimiento del tubo digestivo: esta vez del intestino delgado, del grueso y del apndice cecal. Nos centraremos en las caractersticas diferenciales de la capa mucosa.
INTESTINO DELGADO (etiqueta 46 y 67)

Visin general de la mucosa vlvula connivente vellosidad intestinal cripta de Lieberkhn Mucosa epitelio: clula absorbente clula caliciforme clula de Paneth lmina propia muscular de la mucosa Submucosa Muscular propia Plexo mioentrico (o de Auerbach) Adventicia/serosa La pared intestinal presenta de nuevo cuatro capas (mucosa, submucosa, muscular y serosa). El intestino delgado presenta tres sistemas para incrementar la superficie de absorcin: 1) vlvula connivente (vlvula de Kerckring). Es una evaginacin que tiene como eje la submucosa (submucosa + mucosa). Mide aproximadamente unos 10 mm de altura, unos 4 mm de espesor y unos 5-6 cm de longitud. Son exclusivas del intestino delgado (estn ausentes en la primera parte del duodeno). 2) vellosidad intestinal. Es una evaginacin que tiene como eje la lmina propia (lmina propia + epitelio). Miden entre 0,5 y 1 mm de altura y su nmero oscila entre 10 y 40 por cada mm2 de intestino. Son exclusivas del intestino delgado. 3) microvellosidad. Es una diferenciacin de la membrana celular de las clulas absorbentes (enterocitos). Son extensiones digitiformes de 1m de longitud y unas 0,5 m de anchura con un eje de 40 filamentos de actina anclados en la red terminal. Un enterocito tiene miles de microvellosidades y su presencia incrementa la superficie de absorcin unas 25 veces. La observacin al trasluz nos permite identificar las vlvulas conniventes: numerosos pliegues que se introducen en la luz intestinal y cuyo eje est constituido por la submucosa: son las vlvulas conniventes. Tanto en estas vlvulas como en el resto de la mucosa (x10) existen evaginaciones de la mucosa: ms pequeas y con un eje de lmina propia: son las vellosidades intestinales. Las vellosidades intestinales estn revestidas por un epitelio cilndrico simple (x40) con clulas mucosas caliciformes, tambin denominadas clulas mucosas de polo abierto, y clulas absorbentes (con microvellosidades en el polo apical). Entre las vellosidades intestinales (x10) se disponen las glndulas intestinales o criptas de 83
Lieberkhn, que se introducen en el espesor de la lmina propia. En su porcin ms profunda, y casi exclusivamente en el duodeno, se encuentran unas clulas de citoplasma granular e intensamente eosinfilo, denominadas clulas de Paneth (x40). El resto de las capas hacia la vertiente externa son similares al estmago, excepto la ltima capa que aqu podemos encontrarnos con una adventicia o una serosa. La serosa est formada por una fina capa de conectivo laxo tapizada por el mesotelio peritoneal.
INTESTINO GRUESO (etiqueta 8 y 68)

Visin general Mucosa epitelio: clula absorbente clula caliciforme lmina propia muscular de la mucosa Submucosa Muscular propia Plexo mioentrico (o de Auerbach) Adventicia/serosa Como ya hemos comentado, el intestino grueso carece de vellosidades. Est constituido por glndulas tubulares simples (x4) revestidas por clulas absorbentes y numerosas caliciformes, morfolgicamente similares a las vistas en el intestino delgado (x40). Tambin hay numerosas clulas enteroendocrinas (no visibles en tinciones de rutina). En la lmina propia se pueden observar (x10, x40) numerosos linfocitos, a veces organizados en folculos linfoides, alguno de los cuales presenta un centro germinativo (forman parte del MALT: tejido linfoide asociado a mucosas). Es frecuente ver zonas de la mucosa seccionadas transversalmente, de tal manera que las glndulas tambin lo son. Esto hace que veamos (x4, x10) las luces glandulares centrando el epitelio, de tal forma que las clulas mucosas asemejan los ptalos de una flor y dando al conjunto un aspecto de "margaritas", hablndose de "imagen de campo de margaritas. Las capas musculares no ofrecen peculiaridades histolgicas y entre ellas se sita un prominente plexo mioentrico (x10, x40). Por fuera la adventicia o la serosa.
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APNDICE CECAL (etiqueta 47)

Visin general Mucosa: epitelio: clula absorbente clula caliciforme lmina propia folculos linfoides muscular de la mucosa Submucosa Muscular propia Adventicia/serosa Su estructura es muy parecida a la del intestino grueso, aunque sus glndulas son ms escasas y de menor tamao. En el epitelio hay numerosas clulas enteroendocrinas, en la lmina propia: hay abundante tejido linfoide (forma folculos) y la muscular de la mucosa es muy fina. El tejido linfoide de la lmina propia tambin se puede ver extendido hacia la submucosa, incluso con interrupcin de la muscular de la mucosa. La capa muscular tambin consiste en dos capas aunque la longitudinal externa es ms delgada. Entre las capas musculares tambin es fcilmente observable el plexo mioentrico (x10, x40). La superficie externa del apndice presenta una serosa (x40).
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Prctica n 20
Aparato Digestivo III

Objetivo de la prctica. Conocer y adquirir la capacidad de identificar los principales tipos de glndulas asociadas al tubo digestivo: glndulas salivales, hgado y pncreas. En cada una de ellas deberemos ser capaces de identificar los principales elementos constituyentes, tanto estructurales como citolgicos.
GLNDULA SALIVAL (etiqueta 7 y 7a)

Visin general: lobulillos Acinos mucosos y clulas mucosas Acinos serosos y clulas serosas Acinos mixtos (semiluna de Gianuzzi) Clulas mioepiteliales Conducto estriado Conducto interlobulillar La inspeccin al trasluz de la seccin histolgica revela una organizacin de aspecto lobular, tpica de las glndulas exocrinas. Esta configuracin es tambin evidente al microscopio, con el objetivo pequeo. Los lbulos se organizan en lobulillos, la unidad secretora es el acino (x10). Unos acinos estn constituidos por clulas serosas (acinos serosos), otros por clulas mucosas (acinos mucosos), y finalmente otros acinos presentan clulas mucosas y clulas serosas situadas excntricamente (acinos mixtos) (x10, x40). En el caso de los acinos mixtos, las clulas serosas realmente se disponen intercaladas entre las mucosas, pero por un artefacto producido durante la preparacin de las muestras, ocurre que aparecen por fuera de las mucosas, a modo de casquete (esta imagen tan caracterstica recibe el nombre de semiluna de Gianuzzi). Por fuera de las clulas serosas o mucosas, y por dentro de la membrana basal, se distinguen a veces (mejor en los acinos de tipo mucoso), los ncleos de las clulas mioepiteliales. Entre los acinos se pueden observar (x10) unos conductos eosinfilos, con epitelio cbico simple, cuyas clulas presentan con un desarrollado laberinto basal, que confiere un aspecto estriado a la zona subnuclear de las clulas: es el conducto estriado (x40). Entre los lobulillos glandulares hay conductos excretores de mayor tamao que son los conductos interlobulillares (x10). En ellos se observa una estratificacin gradual a medida que se hacen mayores.
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HGADO (etiqueta 10)

Visin general: cordones y sinusoides Cordones hepatocitarios hepatocitos Sinusoides Lobulillo heptico clsico espacio portal (triada portal) arteria vena canalculo biliar Vena centrolobulillar Acino heptico A pequeos aumentos podemos ver (x4, x10) como el hgado est formado por cordones eosinfilos de hepatocitos y capilares sinusoidales interpuestos. Pero, si nos fijamos un poco empezaremos a ver (x4) que salpicados por entre los cordones y sinusoides existen unas amplias zonas triangulares de tejido conectivo (espacios porta o espacios de Kiernan). Los espacios portales se disponen (ms o menos) formando los vrtices de un hexgono, el cual es la unidad estructural del hgado: el lbulillo clsico. Cada lobulillo mide 2 x 0,7 mm. En el centro se sita la vena centrolobulillar. Los lobulillos, estn constituidos por cordones irregulares y anastomosados de hepatocitos, entre los cuales se disponen los sinusoides hepticos (x10). Los cordones celulares son las trabculas hepticas constituidas por hepatocitos ntimamente adosados (x40). En el interior de los espacios porta advertimos (x10) una vena (vena portal), una arteria (arteria portal) y unos conductos revestidos por clulas cbicas (conductos biliares). Estos tres elementos constituyen la triada portal. Los espacios portales estn conectados entre s por los espacios periportales. As, la sangre que entra en el hgado llega a los espacios portales (a travs de ramas de la arteria heptica o de la vena porta) y de ah llega tambin a los espacios periportales, desde donde fluye hacia la vena centrolobulillar circulando por sinusoides. La unidad funcional es el acino y tiene como criterio el grado de oxigenacin de los hepatocitos, existiendo un gradiente desde las zonas periportales hasta las centrolobulillares.
PNCREAS (etiqueta 48)

Visin general: componente exo y endocrino Lobulillos exocrinos Acinos serosos Conductos excretores interlobulillares Islotes de Langerhans A pequeos aumentos observamos una glndula exocrina, que con el objetivo de 10 advertimos que est constituida por lobulillos, cuyas unidades secretoras son los acinos serosos, 88
entre los que se disponen conductos excretores de diferentes tamaos. Los acinos serosos ya los hemos visto anteriormente, y no tienen mayores particularidades, a no ser la existencia de conductos intercalares, difcilmente visibles en las preparaciones de rutina. A medianos aumentos podemos ver cmo, de forma irregular, entre estos acinos serosos se disponen unas estructuras redondeadas y de tincin clara: son los islotes de Langerhans, que constituyen el pncreas endocrino. Con el objetivo de 40 aumentos vemos que los islotes estn compuestos por un grupo de clulas, perfectamente separadas del pncreas exocrino adyacente. Con la tincin de hematoxilina-eosina no se pueden distinguir los distintos tipos celulares que constituyen los islotes de Langerhans.
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Prctica n 21
Aparato Urinario
Objetivo de la prctica. Conocer y adquirir la capacidad de identificar el rin, con su corteza y mdula. En la corteza centraremos nuestra atencin en los glomrulos, con sus distintos elementos. Tambin estudiaremos los tbulos renales. En una fotografa de microscopa electrnica de transmisin profundizaremos en el estudio del glomrulo y de la barrera de filtracin.
RIN (etiqueta 1 y 63)

Cpsula Corteza Mdula Corpsculo renal cpsula de Bowman espacio urinario glomrulo podocito capilares sanguneos mesangio Arteriola glomerular Tbulo contorneado proximal Tbulo contorneado distal Tbulo colector La inspeccin al trasluz de la seccin histolgica, permite diferenciar dos regiones diferentes: una, de localizacin perifrica y aspecto granular, que es la corteza renal, y otra de aspecto radial, que es la mdula renal. Externamente a la corteza renal, se sita una banda de tejido conectivo denso (x10) que representa la cpsula renal. El aspecto granular de la corteza renal, se debe (x4) a los corpsculos renales, que son unas estructuras redondeadas (glomrulo renal) rodeadas casi totalmente de un espacio claro (espacio urinario). Los glomrulos son un ovillo vascular formado por unas 10-20 asas capilares sustentadas por el mesangio y recubiertas por la capa visceral de la cpsula de Bowman. El glomrulo est conectado con el sistema vascular renal (polo vascular) a travs de un penacho vascular por donde discurren una arteriola aferente y una arteriola eferente (arteriola glomerular), las cuales no se pueden ver en todos los glomrulos, debido a que estamos observando una seccin histolgica que, evidentemente, no puede cortar los polos vasculares de todos los glomrulos. Los capilares se interponen entre ambas arteriolas formando un sistema portal de alta presin. El ultrafiltrado glomerular "cae" al espacio urinario desde donde, por el polo urinario del corpsculo renal, pasa al tbulo contorneado proximal (la primera porcin del sistema tubular renal. En la corteza y a pequeos aumentos tambin observamos numerosos tbulos de seccin transversal situados entre los glomrulos. Con el objetivo de 10 aumentos advertimos que, aunque todos los tbulos estn revestidos por un epitelio cbico simple unos presentan un epitelio de clulas 91
con numerosas microvellosidades que "tapan" la luz (son los tbulos contorneados proximales) mientras que otros (los tbulos contorneados distales) al tener menos y menos desarrolladas microvellosidades ofrecen un borde apical ntido. En la mdula del rin, con el objetivo de 4 aumentos, confirmamos su aspecto radial, con numerosos tbulos de seccin longitudinal que se dirigen desde la corteza hacia la mdula renal. Adems, no hay glomrulos. Adems de los contorneados proximales y distales, tambien vemos porciones tubulares de pared fina (asas finas de Henle) y los tbulos y conductos colectores. Estos estn tapizados (x10) por un epitelio cbico simple.
URTER (etiqueta 49) y VEJIGA (etiqueta 6)

Urter: Epitelio de transicin Capa muscular Vejiga urinaria Epitelio de transicin Capa muscular Con el objetivo pequeo observamos la estructura general de estas estructuras, que bsicamente consisten en una mucosa debajo del cual se sitan capas musculares en diferentes orientaciones. La mucosa consiste en un epitelio de tipo transicional que descansa sobre un corion celular. Con los objetivos de 10 y 40 aumentos nos detendremos en epitelio de transicin, ya explicado en la prctica de tejido epitelial de revestimiento. Las capas musculares estn constituidas por fibras musculares lisas (x10, x40). por fuera nos encontramos con una adventicia o serosa.
FOTOGRAFA DE MICROSCOPA ELECTRNICA DE TRANSMISIN

Cpsula de Bowman Espacio urinario Glomrulo renal Vasos sanguneos (endotelio fenestrado) Podocitos Membrana basal Mesangio Se observa la ultraestructura de un glomrulo renal. Destacan los capilares con endotelio fenestrado, rodeados por una gruesa membrana basal. La membrana basal tiene una zona central ms electrodensa (lmina densa) flanqueada por sendas bandas radiolucentes (lamina rara interna y externa). En el lado opuesto de la membrana basal en donde se sitan los capilares sanguneos, se 92
observan los pies de los podocitos (son los pericelos). Estos pies, que se apoyan en la lamina rara externa, constituyen las ramificaciones terciarias de los podocitos (capa visceral glomerular). Entre los diferentes pericelos existen zonas libres (ranura de filtracin) con un fino diafragma entre ellos (membrana de la ranura de filtracin). Estos tres elementos: endotelio, membrana basal y pericelos son los elementos que constituyen la barrera de filtracin glomerular. La porcin ms interna del glumrulo, y dispuestas entre los capilares, se sitan las clulas mesanguiales.
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Prctica n 22
Aparato Genital Masculino

Objetivo de la prctica: Conocer y adquirir la capacidad de identificar el testculo, tanto prepuberal como adulto. En el adulto nos detendremos a estudiar el epitelio seminfero y su citologa. La prstata tambin ser objeto de estudio en esta prctica. Deberemos ser capaces de reconocerla a travs de sus caractersticas glndulas y de su estroma fibromuscular.
TESTCULO INFANTIL (etiqueta 53)

Albugnea Tbulos seminferos clulas de los tbulos Epiddimo
Con el objetivo pequeo vemos una densa cpsula de tejido conectivo fibroso que es la albugnea, rodeando el parnquima testicular. El parnquima testicular est constituido por numerosos tbulos (tubos seminferos) agrupados en lobulillos e inmersos en un tejido conectivo laxo (x10). Los tubos estn internamente tapizados por un epitelio germinal inmaduro que prcticamente oblitera la luz tubular. el epitelio est formado por clulas inactivas y pequeas de dos tipos: de Sertoli (la mayora) y espermatogonias, Los tubos son inmaduros y an no estn totalmente permeabilizados (x10). Dispuesto en un lado de la preparacin es posible observar el epiddimo, como un conjunto de tbulos regulares de mayor tamao que los seminferos.
TESTCULO ADULTO (etiqueta 51)

Tbulos seminferos: espermatogonias espermatocitos espermtidas espermatozoides clulas de Sertoli Clulas de Leydig Epiddimo A pequeos aumentos advertimos cmo los tubos seminferos del adulto estn permeables presentando una amplia luz. Tanto a 10 como a 40 aumentos, podemos ver el epitelio seminfero, en el cual hay unas clulas de ncleo grande e hipercrmico situadas junto a la membrana basal: son las espermatogonias. A media altura nos encontramos con los espermatocitos (primarios: de disposicin ms basal y con un ncleo grande, y secundarios: menores y ms prximos a la luz del tubo. A continuacin nos encontramos con las espermtidas, y en la porcin apical del epitelio y en la 95
luz con los espermatozoides. Hay que tener en cuenta que, a diferencia de lo que se suele ver en cualquier epitelio, la maduracin del epitelio seminfero no es posible verla en una nica seccin de tubo, sino que se produce en lo que se conoce como onda espermtica, de tal manera que slo vemos algunas asociaciones celulares. En la zona media del epitelio y dispuestas perpendicularmente a la pared del tubo, hay unas clulas de ncleo claro y escotado: son las clulas de Sertoli (representan el 10%). Alrededor de ellas se disponen las clulas germinales en distintos estadios madurativos. Entre los tbulos seminferos (x10) existe un estroma conjuntivo rico en vasos, donde se advierten solas o en grupos, clulas grandes, polidricas y eosinfilas, que son las clulas de Leydig (x40). El epiddimo se localiza (x40) junto al testculo, estando tambin rodeado de una cpsula de tejido conectivo. En su interior se observa un entramado de tubos revestidos por un epitelio cilndrico pseudoestratificado con abundantes estereocilios.
PRSTATA (etiqueta 50)

Visin general Glndulas prostticas epitelio cuerpos amilceos Estroma fibromuscular Uretra prosttica La prstata, al igual que el resto de las glndulas exocrinas, est constituida por un parnquima y un estroma. El parnquima est formado por glndulas (glndulas prostticas) tubuloalveolares de luz ms o menos amplia, dispuestas concntricamente alrededor de la uretra. En la luz podemos encontrarnos unas concreciones concntricas de amiloide: cuerpos amilceos, cuyo nmero aumenta con la edad. El estroma prosttico est compuesto por tejido conectivo denso y por fibras musculares lisas (estroma fibromuscular). En el interior de la prstata, y dependiendo del nivel de la seccin, podemos ver porciones de uretra prosttica, tapizada por epitelio transicional. Hay que tener en cuenta que la prstata esta perforada por unas 20 desembocaduras de sus glndulas (unas 40), lo que hace que veamos porciones de urotelio.
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Prctica n 23
Aparato Genital Femenino I

Objetivo de la prctica: Reconocer y adquirir la capacidad de identificar las principales partes de un ovario y de una trompa de Falopio. En el caso del ovario deberemos tener presente las variaciones que podemos observar en funcin de la edad de la mujer. Tambin nos detendremos en el estudio de un ovario con un cuerpo lteo.
OVARIO (etiqueta 54, 54a y 55)

Visin general Epitelio germinal Albugnea Corteza: folculos primordiales folculos secundarios estroma cortical cuerpo albicans Mdula Hilio: vasos Cuerpo lteo Clulas lutenicas A pequeo aumento se advierten dos zonas bien diferenciadas en el ovario: una central donde abundan las estructuras vasculares (mdula ovrica), y otra que la rodea que es la corteza ovrica, la cual est constituida por un tejido conectivo especial que es el estroma. La corteza est recubierta externamente por un epitelio cbico simple que se denomina epitelio germinal (x10, x40). Debajo del epitelio germinal hay una condensacin del estroma de la corteza que constituye la albugnea ovrica (x10). En el estroma cortical se pueden ver formaciones redondeadas de diversos tamaos (x10), que son los folculos ovricos:
1) los menores estn constituidos (x10, x40) por una capa de clulas aplanadas, que tapizan un ovocito: son los folculos primordiales. Rodeando a cada folculo se dispone una membrana basal que les separa del estroma circundante. 2) cuando los folculos se activan (desarrollo folicular), las clulas aplanadas se hacen ms altas y proliferan (clulas foliculares) denominndose al folculo primario. En ambos casos, entre el ovocito y las clulas foliculares se dispone una capa gruesa glicoproteica denominada membrana pelcida. 3) posteriormente aparece lquido entre las clulas foliculares, formndose una cavidad o antro, y el folculo se denomina folculo secundario (o antral). La zona de las clulas foliculares cargadas de lpidos se denomina capa granulosa. Alrededor del ovocito queda adherida una corona de clulas de la granulosa (corona radiata). Las clulas del estroma que rodean al folculo se activan, formando las tecas (interna y externa) que se aaden al folculo. 4) el folculo contina desarrollndose hasta que con la ovulacin se expulsa el ovocito. El folculo, que queda en el ovario, constituye el cuerpo lteo (o cuerpo amarillo), en el cual, las capas celulares que formaban la pared folicular, han proliferado constituyendo una pared visible macroscpicamente cuyas clulas (clulas lutenicas) estn totalmente 99
repletas de lpidos (x10). La porcin interna del cuerpo lteo (o cuerpo amarillo) donde estaba la cavidad antral y el ovocito ahora esta ocupada por tejido conectivo y zonas de hemorragia (x4, x10). Los folculos muy grandes que no llegan hasta el final de su desarrollo y los cuerpos lteos sufre una progresiva involucin y fibrosis y acaban estructuras irregulares de aspecto cerebriforme, formadas por tejido conectivo denso (x10), son los cuerpos albicans. Representan, por lo tanto, la etapa final de la fibrosis y cicatrizacin de los folculos ovricos atrsicos y de los cuerpos lteos. La zona central del ovario que se denomina mdula se contina con la zona del ovario por donde penetran los vasos que se observaban en la mdula, que se denomina hilio (x4).
TROMPA UTERINA (etiqueta 54 y 56)

Visin general Mucosa: fimbrias epitelio corion Capas musculares lisas Serosa/adventicia Una visin general (x4) de la trompa nos revela una estructura tubular cuyo armazn lo constituyen unas capas musculares lisas. En la porcin interna de la trompa se observa una mucosa que forma numerosos pliegues arborescentes (fimbrias) hacia la luz. Las fimbrias estn constituidas (x4) por un eje de corion, sobre el que descansa un epitelio cilndrico simple. Las capas musculares, en nmero de dos, presentan diferente orientacin espacial: circular la interna y longitudinal la externa. La trompa, externamente, est revestida por una adventicia o serosa.
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Prctica n 24
Aparato Genital Femenino II

Objetivo de la prctica: Conocer y adquirir la capacidad de identificar los elementos constitutivos del tero, tanto del cuerpo como del cuello. Adems, nos ocuparemos del estudio de la placenta. En ella nos fijaremos en las vellosidades coriales y la disposicin de los vasos sanguneos con respecto al trofoblasto.
TERO (etiqueta 20, 62 y 65)

Visin general Mucosa: endometrio glndulas endometriales porcin basal de las glndulas estroma arteriolas espirales Miometrio El tero (x4) es un rgano ms o menos piriforme que consta de una gran capa muscular (miometrio) que presenta fibras musculares lisas entrecruzadas en todas direcciones y de una capa mucosa (endometrio) que se dispone internamente. El endometrio es una mucosa (x4) que consta de glndulas y estroma. Las glndulas (x10) se dirigen desde la proximidad del miometrio (porcin basal de la glndula) donde son rectas, hasta la luz del tero donde adquieren una morfologa ms tortuosa. El aspecto de las glndulas depende del estadio funcional del endometrio. Durante la primera fase del ciclo endometrial, las glndulas son rectilneas y su epitelio presenta frecuentes mitosis (endometrio proliferativo). Despus de la ovulacin las glndulas dejan de presentar mitosis, comienzan a presentar signos de secrecin y se van haciendo cada vez ms flexuosas y con luces amplias (endometrio secretor). El epitelio (x40) es pseudoestratificado en el proliferativo y cilndrico simple en el secretor. El estroma lo compone un de tejido conectivo especializado que, al igual que las glndulas, responde a los estmulos hormonales. All por el da 23 del ciclo endometrial se pueden ver (x10) en el estroma las arterias espirales, que se reconocen por estar muy prximas varias secciones de una misma arteriola (debido a su configuracin espiral).
CUELLO UTERINO (CRVIX) (etiqueta 2)

Mucosa endocervical (endocervix) glndulas cervicales estroma cervical Mucosa exocervical (exocervix) El cuello uterino presenta (x4) un armazn de tejido conectivo denso (estroma cervical) 103
revestido en la porcin que se orienta hacia la vagina por un epitelio plano estratificado no queratinizado (mucosa exocervical) (x10), y por un epitelio de tipo glandular (mucosa endocervical) en su porcin interna (la que se orienta hacia el canal endocervical). La mucosa endocervical consiste (x4) en una zona arborescente formada por hendiduras y tbulos que se invaginan en el estroma, y que asemejan glndulas por su aspecto en las secciones histolgicas. Las glndulas (x10) estn revestidas por un epitelio cilndrico simple de clulas mucosas de polo cerrado (x40).
PLACENTA (etiqueta 57)

Visin general Vellosidades coriales citotrofoblasto sincitiotrofoblasto estroma vasos sanguneos La placenta es el rgano generado para favorecer el intercambio de sustancias entre las circulaciones sanguneas fetal y materna durante el embarazo. La placenta se fija, por un lado, a la pared uterina y, por su lado contrario, se orienta hacia la cavidad amnitica. Su tamao hace que sea difcil observar ambos extremos en una misma seccin histolgica. El amnios aparece como una fina banda homognea conectiva, sobre la que descansa (X10, x40) un epitelio cbico simple. El conectivo del amnios, se contina con el de la placa corinica, rica en vasos, que son las ramificaciones de la vena y arterias umbilicales (x4, x10). A partir de la placa corinica, y orientndose hacia el interior de la placenta, aparecen las vellosidades coriales, primero ms gruesas y que se adelgazan a medida que se van dividiendo (x10). A mayor aumentos nos detendremos sobre una vellosidad, pudiendo ve que est constituida por un eje central de tejido conectivo en el que se localizan abundantes vasos sanguneos. Rodeando la vellosidad (x40), aparecen las clulas trofoblsticas, bien individualizadas (citotrofoblasto) o formando sincitios celulares (sincitiotrofoblasto), fcilmente reconocibles por consistir en acmulos de ncleos basfilos y redondeados, distribuidos de manera ms o menos regular. Los espacios claros situados entre las vellosidades forman el espacio intervellositario, donde se ve sangre materna (x10). Con el objetivo de 4 aumentos, y dirigindonos hacia el borde opuesto al del amnios, se puede observar el lado materno de la placenta (placa basal), donde en ocasiones reconocemos endometrio.
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Prctica n 25
Sistema Tegumentario y Mama

Objetivo de la prctica. Conocer y adquirir la capacidad de identificar la piel y sus anejos. Estudiaremos la epidermis con sus capas y clulas, as como la dermis (papilar y reticular) y la hipodermis. El pelo, las glndulas sebceas, el msculo erector del pelo y las glndulas sudorparas ecrinas tambin sern objeto de nuestra atencin. La glndula mamaria es una glndula apocrina de gran importancia. Nos centraremos en el estudio y reconocimiento del lobulillo mamario (la unidad funcional) con su componente epitelial: conductillos terminales, conductillos intralobulillares y su peculiar estroma (estroma intralobulillar).Tambin abordaremos la porcin interlobulillar.
PIEL (etiqueta 4)
Visin general: epidermis, dermis e hipodermis Epidermis: estrato basal estrato espinoso estrato granuloso estrato crneo. Queratina queratinocitos Melanocitos Dermis superficial o papilar Dermis profunda o reticular fibroblastos colgeno Folculo piloso Glndula sebcea Msculo piloerector Glndula sudorpara ecrina Hipodermis adipocitos La epidermis est constituida por un epitelio plano estratificado queratinizado (x4, x10), que asienta sobre un tejido conectivo que se denomina dermis. En profundidad nos encontramos con un tejido menos fibroso y con abundantes adipocitos: la hipodermis o tejido celular subcutneo. La epidermis es un epitelio en el que se pueden distinguir varios estratos o capas, de dentro afuera son: 1) basal (donde se disponen las clulas basales), 2) espinoso (o de Malpighi, denominado as por presentar numerosos desmosomas que al retraerse las clulas parecen espinas), 3) granuloso (por su riqueza en grnulos de queratohialina) y 4) corneo (en el cual no se distinguen ncleos y consta de queratina). Las clulas que maduran en estos estratos son los queratinocitos (productores de queratina). En la capa basal tambin destaca otro tipo de clula: los melanocitos, fcilmente identificables por presentar un halo claro perinuclear. Su producto de secrecin, la melanina, la encontraremos en los queratinocitos adyacentes como un pigmento pardo-amarillento.
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La epidermis se invagina en la dermis ms superficial formando unas prolongaciones (crestas), entre las cuales la dermis se dispone formando papilas (dermis papilar). Las crestas reciben el nombre de crestas interpapilares. Esta dermis superficial o papilar es menos densa y ms celular que la dermis profunda, y en ella podemos ver numerosos capilares y terminaciones sensitivas (corpsculos de Meissner y Pacini). La dermis ms profunda (dermis profunda o reticular) est constituida por tejido conjuntivo denso con vasos de mayor calibre; y en su seno se disponen los anejos cutneos. La dermis se contina en profundidad, sin tener un lmite preciso (x4), con la hipodermis, rica en tejido adiposo. En la dermis se observan (x4) unas prominentes estructuras epiteliales que se continan con la epidermis, formando unas vainas en cuyo interior se encuentra un material semejante a la queratina: son los folculos pilosos. Su porcin inferior es ms ancha se denomina bulbo, y est penetrada en su base por tejido conectivo (papila conectiva). Asociadas a los folculos (x4), y desembocando en ellos, existen unas glndulas ovoideas constituidas (x10) por clulas claras de ncleo redondo central y citoplasma espumoso: glndulas sebceas. As mismo, y en relacin con los folculos pilosos, se observan (x10) pequeos haces de msculo liso: msculo erector del pelo. Las glndulas sudorparas ecrinas, situadas en la dermis profunda, no estn asociadas al folculo piloso y drenan directamente hacia la superficie externa de la piel. Su componente secretor es espiral, por lo que al corte lo veremos como varios tubos muy prximos (x10) inmersos en tejido conectivo reticular (x40).
MAMA (etiqueta 9)
Lobulillo conductillo terminal epitelio clulas mioepiteliales conductillo terminal intralobulillar estroma intralobulillar Conductillo terminal interlobulillar Estroma interlobulillar Tejido adiposo La mama es una glndula sudorpara apocrina modificada que se desarrolla ms en la mujer y que est sujeta a cambios hormonales. En la mama en reposo, se observan (x4) agrupaciones glandulares a modo de racimos: lobulillos mamarios. En el interior de los lobulillos el componente epitelial glandular se dispone como pequeos conductos ciegos (a modo de fondos de saco) que se denominan conductillos terminales. Estos desembocan en pequeos conductos (conductillos intralobulillares), que cuando salen del lobulillo reciben el nombre de conductillos interlobulillares. Durante la gestacin y lactancia los 108
conductillo terminales se dilatan y forman estructuras alveolares (es el lugar donde se producir la secrecin). Los conductillo estn revestidos por un epitelio cilndrico bajo rodeado por fuera por clulas mioepiteliales (reconocibles por su halo claro, y lmites difciles de percibir). Por fuera de ambos tipos celulares est la membrana basal, que les separa del estoma intralobulillar. El estroma intralobulillar es ms laxo y ms celular (linfocitos, plasmticas) que el interlobulillar. Adems, posee numerosos capilares sanguneos y responde a estmulos hormonales. Los conductos interlobulillares son de mayor tamao y estn inmersos en el estroma interlobulillar, que tambin contiene una cantidad variable de adipocitos.
PEZN (etiqueta 59)

Epitelio escamoso Glndulas sebceas no asociadas a pelo Conducto galactforo Msculo liso Terminaciones nerviosas El pezn est revestido por un epitelio escamoso queratinizado que presenta numerosas pequeas invaginaciones. El epitelio muy pigmentado tiende a formar amplias crestas interpapilares que se suelen fusionar unas con otras dando una imagen de reticular o de encaje (x10). Debajo del epitelio se disponen numerosas glndulas sebceas no asociadas a estructuras pilosas. En el pezn desembocan entre 15 a 20 conductos galactforos que estn revestidos por un epitelio cilndrico estratificado (x10, x40). Los conductos interlobulillares, desembocan en los interlobulares, y estos finalmente en los galactforos (antes de est ltima porcin se encuentra una dilatacin que se denomina seno galactforo). El estroma es de tejido conectivo denso con numerosas terminaciones nerviosas y haces de msculo liso.
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Direcciones de Pginas Web
Servicio Editorial de la Universidad del Pas Vasco/Euskal herriko Unibertsitatea http://www.ehu.es/servicios/se_az Histologa Humana http://biodidac.bio.uottawa.ca http://campus.usal.es/~histologia/ http://escuela.med.puc.cl/ http://faculty.washington.edu/kepeter/119/human_anatomy_web.htm http://histolii.ugr.es http://sciences.aum.edu/bi/BI2110/cadams/histolog.htm http://teaching.anhb.uwa.edu.au/mb140/ http://wberesford.hsc.wvu.edu/histol.htm http://www.anatomyatlases.org/MicroscopicAnatomy/MicroscopicAnatomy.shtml http://www.bio.davidson.edu/courses/immunology/hyperhuman/HHH.html http://www.ehu.es/Histologia-oral/ http://www.geocities.com/CapeCanaveral/Lab/4685/anatpat.html http://www.indigo.com/software/hh_index.html http://www.kumc.edu/instruction/medicine/anatomy/histoweb/ http://www.med.uiuc.edu/histo/atlas/slides.asp http://www.meddean.luc.edu/lumen/MedEd/Histo/frames/histo_frames.html http://www.medlib.med.utah.edu/WebPath/HISTHTML/EM/EM.html http://www.mic.ki.se/Anatomy.html http://www.udel.edu/Biology/Wags/histopage/colorpage/colorpage.htm http://www.umesci.maine.edu/ams/microsc.htm http://www.uni-mainz.de/FB/Medizin/Anatomie/workshop/EM/EMAtlas.html http://www.uv.es/histomed/ Biologa Desarrollo/Embriologa http://embryo.soad.umich.edu/ http://www.biology.arizona.edu http://www.med.uc.edu/embryology/contents.htm http://www.med.unc.edu/embryo_images/unit-welcome/welcome_htms/contents.htm http://www.pbs.org/wgbh/nova/odyssey/ http://www.ucalgary.ca/UofC/eduweb/virtualembryo/ http://www.uniovi.es/~morfologia/asignatu/biologia/embriologia/Library/Pract07.htm http://www.visembryo.com/ http://zygote.swarthmore.edu/
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Tejido Epitelial de Revestimiento

RIN. (etiqueta 1, 1a y 63)

Epitelio plano simple Epitelio cbico simple

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Tejido Epitelial Glandular

GLNDULA SALIVAL (etiqueta 7 y 7a)

INTESTINO GRUESO (etiqueta 8 y 68)

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