COMO ABORDAR Y RESOLVER ASPECTOS PRCTICOS DE MICROBIOLOGA

2. ENUMERACIN DE MICROORGANISMOS

Ins Arana, Maite Orruo e Isabel Barcina

Departamento Inmunologa, Microbiologa y Parasitologa Universidad del Pas Vasco/Euskal Herriko Unibertsitatea

2. ENUMERACIN DE MICROORGANISMOS
Existen diversos mtodos para enumerar microorganismos en muestras de muy diferente origen. Cada mtodo tiene sus peculiaridades a la hora de transformar los datos obtenidos en una densidad microbiana de la muestra estudiada, bien sea Unidades Formadoras de Colonias, Microorganismos Totales, etc. Un mtodo sencillo para la enumeracin de bacterias y hongos se basa en la cuantificacin de Unidades Formadoras de Colonias (UFC) por ml o g de muestra. En el captulo anterior ya se han resuelto problemas basados en el empleo de este mtodo. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que el nmero de placas sembradas por dilucin suele ser 3 5. Cuando realizamos diferentes diluciones decimales y sembramos ms de una placa por dilucin, a la hora de interpretar los resultados tenemos diferentes posibilidades. En nuestro caso utilizaremos el mtodo ms sencillo: seleccionaremos una nica dilucin, aquella que produce entre 30 y 300 colonias por placa y calcularemos la media de colonias obtenidas para la dilucin seleccionada.
A colonias enumeradas (media) UFC/ml = B ml sembrados A colonias enumeradas (media) UFC/ml = B ml sembrados X Factor de concentracin 1 X Factor de dilucin

Con las nociones adquiridas en el captulo anterior, se deben proponer soluciones para los problemas siguientes: 2.1. Calcular la densidad bacteriana expresada como UFC/ml de las tres diferentes muestras cuyos resultados y diluciones realizadas se presentan en la tabla. El volumen sembrado es 100 l/placa.
Muestra 1 Dilucin sembrada 10 10-4 10-5 10-2 10-3 10-4 100 10-1 10-2
-3

Placa 1 1816 180 16 475 45 5 335 32 5

Placa 2 1698 159 19 477 48 10 328 28 3

Placa 3 1885 186 10 480 51 4 324 29 2

2.2. Sabiendo que se siembran 100 l por placa y 3 placas por muestra, cul sera, en este caso, el lmite de deteccin de la tcnica de enumeracin de bacterias cultivables (UFC)?. Y, si se siembran 5 placas por muestra? 2.3. Un cultivo bacteriano dado tiene una densidad de 5 108 UFC/ml. Sabiendo que se sembraron 0,1 ml en la placa y tras la incubacin se enumeraron 50 colonias, cul es la dilucin que se sembr? 2.4. Se ha determinado la densidad bacteriana de una suspensin bacteriana mediante el mtodo de siembra en microgota (volumen sembrado entre 10 y 20 l y sin extensin de la gota). Los resultados y diluciones realizadas se presentan en la tabla. El volumen sembrado es 10 l.
Dilucin sembrada 10
-3

Recuento 1 180 16

Recuento 2 159 19

Recuento 3 186 10

10-4

Cul es la densidad bacteriana de la muestra? 2.5. En el caso del mtodo de la microgota, sembrando 10 l y 3 rplicas por muestra, cul es el lmite de deteccin de esta tcnica de enumeracin?

Otra tcnica de enumeracin habitual es el mtodo del Nmero Ms Probable (NMP). Se trata de un mtodo de enumeracin basado en la estadstica. Debe determinarse un nmero caracterstico que permite obtener el NMP. Resuelva los siguientes problemas utilizando la Tabla de MacGrady que se adjunta.
Tabla de MacGrady (1 ml/tubo, 3 tubos/dilucin, 3 diluciones consecutivas). Resultado expresado como bacterias/ml Nmero caracterstico 000 001 010 011 020 100 101 102 110 111 120 121 130 200 NMP 0,3 0,3 0,6 0,6 0,4 0,7 1,1 0,7 1,1 1,1 1,5 1,6 0,9 Nmero caracterstico 201 202 210 211 212 220 221 222 223 230 231 232 300 301 NMP 1,4 2,0 1,5 2,0 3,0 2,0 3,0 3,5 4,0 3,0 3,5 4,0 2,5 4,0 Nmero caracterstico 302 310 311 312 313 320 321 322 323 330 331 332 333 NMP 6,5 4,5 7,5 11,5 16,0 9,5 15,0 20,0 30,0 25,0 45,0 110,0 140,0

2.6. A partir de una muestra de agua se elaboran las diluciones 1/10 y 1/100. Paralelamente, se preparan 3 series de 3 tubos que contienen cada uno de ellos 10 ml de Caldo Nutritivo. La primera serie de tubos se inocula directamente con la muestra de agua. La segunda serie se inocula con la dilucin 1/10 y la tercera, con la dilucin 1/100. El volumen inoculado es en todos los casos de 1 ml de muestra o dilucin correspondiente por tubo de medio de cultivo. Las series inoculadas se incuban durante 48 h a 20C y al finalizar el periodo de incubacin se comprueba la presencia de turbidez, indicativa de crecimiento, en cada uno de los tubos. A partir de los resultados expresados en la tabla, Cul es la densidad bacteriana de esa muestra de agua?:
Procesamiento Muestra Dilucin 1/10 Resultado Tubos* C C C C C C C NC

NC Dilucin 1/100 *C = crecimiento = medio turbio; NC = no crecimiento = medio transparente.

2.7. Utilizando el ejemplo anterior, si no se hubiera detectado crecimiento en ninguno de los tubos inoculados, qu densidad bacteriana dara como resultado del estudio? 2.8. Para facilitar la enumeracin de microorganismos presentes en una tarta, se realiza el siguiente procedimiento: a 62,5 g de tarta se aaden 187,5 ml de agua de peptona tamponada. A partir de esta suspensin se preparan tres diluciones decimales seriadas. Paralelamente, se preparan, 4 series de 3 tubos con caldo MacConkey a razn de 10 ml de medio por tubo. Tras incubar a 44,5C, los resultados obtenidos son los siguientes:
Procesamiento 62,5 g de tarta + 187,5 ml de agua de peptona Dilucin decimal 10 Dilucin decimal 10 Dilucin decimal 10
-1 -2 -3

Resultado Tubos* A A A M A A M M A M M M

*Cada tubo se ha inoculado con 1 ml de suspensin o dilucin correspondiente. A = amarillo, M = morado.

Cul es la densidad de microorganismos presente en la tarta expresada en bacterias/g? Sabiendo que la composicin del caldo MacConkey es: peptona, 20 g; bilis de buey desecada, 5 g; lactosa, 10 g; prpura de bromocresol, 0,03 g en 1 litro de agua destilada, podra aportar ms informacin acerca del tipo de bacterias y dar una caracterstica metablica de las mismas?

Tambin podemos utilizar mtodos de enumeracin basados en la microscopia (fotnica, epifluorescencia, ) para determinar el nmero total de microorganismos.

Los microorganismos relativamente grandes tales como levaduras o protistas pueden enumerarse utilizando cmaras de recuento.

Las ecuaciones que deben utilizarse, dependiendo de si la muestra se ha diluido o concentrado son las siguientes:
N medio de microorganismos/cuadrcula Microorganismo/ml = N ml/cuadrcula* N mdio de microorganismos/cuadrcula Microorgansimos/ml = N ml/cuadrcula* X Factor de concentracin 1 X Factor de dilucin

Debe prestarse atencin a las unidades de cada uno de los factores de la ecuacin. El resultado final se expresa como N de microorganismos por volumen de muestra. *Este factor, propio de cada cmara de recuento, puede venir expresado como cuadrcula/ml o ml-1, en este caso el factor aparecer en el numerador de la ecuacin.

2.9. Se enumeran los microorganismos presentes en una suspensin densa de levaduras. Esta suspensin se diluye 1.000 veces antes de preparar la cmara de recuento. El factor de la cmara dado por el fabricante es 0,25 10-6 ml/cuadrcula. Si los resultados obtenidos son los presentados en la tabla, cul es el nmero de levaduras por ml de dicha suspensin?
Cuadrcula N 1 12 2 14 3 12 4 11 5 12 6 14 7 15 8 12 9 9 10 11 11 12 12 14 13 15 14 10 15 11 16 9 17 10 18 11 19 12 20 14

2.10. Cul sera el lmite de deteccin del mtodo de recuento de levaduras totales empleando cmara de recuento (hemocitmetro), si contamos un mximo de 20 campos en la cmara y el factor de la misma es 1,5 105/ml?

Desde hace varias dcadas la microscopia de epifluorescencia permite la enumeracin de microorganismos previamente teidos con fluorocromos. Esta tcnica es muy vlida para la cuantificacin de bacterias.

La ecuacin empleada para transformar los datos obtenidos en una densidad microbiana es:
N microorganismos/campo Microorganismo/ml = N ml/filtro El factor del microscopio se expresa como N de campos por filtro. X Factor microscopio X Factor de dilucin

2.11. Se desea estimar la densidad bacteriana de una muestra de agua. Para ello, 100 l de la muestra se tien con naranja de acridina y se filtran a travs de un filtro de membrana de 0,2 m de dimetro de poro. El filtro se monta sobre un portaobjetos y se observa utilizando un microscopio de epifluorescencia. Se cuentan 20 campos obtenindose los siguientes recuentos bacterianos por campo:
Campo N 1 15 2 12 3 11 4 9 5 21 6 16 7 13 8 13 9 15 10 20 11 22 12 13 13 14 14 12 15 18 16 17 17 9 18 22 19 18 20 18

Sabiendo que el factor de conversin del microscopio es de 30.954 campos/filtro, cul es la densidad bacteriana de la muestra? Si se hubiera filtrado 1 ml de la dilucin 10-2, utilizando los mismos recuentos, cul es la densidad bacteriana de la muestra? 2.12. Calcule la densidad de las suspensiones bacterianas que se indican en la tabla teniendo en cuenta que las cuantificaciones se han realizado empleando microscopia de epifluorescencia. Los volumenes filtrados y las diluciones empleadas, as como, el nmero de bacterias por campo se

detallan en la tabla. El factor del microscopio de epifluorescencia utilizado es 64.761,9 (N de campos/filtro).

Muestra 1 2 3 4 Volumen filtrado 1 ml 100 l 50 l 100 l Dilucin Muestra 10
0

N bacterias/campo 25/32/31/30/35/21/14/21/21/20 22/22/21/22/23/23/21/17/21/21 23/23/22/21/23/24/15/31/24/24 6/8/11/9/13/7/7/8/9/11

10-1 10-2

2.13. Cul sera el lmite de deteccin del mtodo de recuento de bacterias totales mediante microscopia de epifluorescencia, si el volumen mximo que podemos filtrar es 5 ml, F es 34.520 campos/filtro y contamos un mximo de 30 campos por filtro? 2.14. En el ro Butrn a su paso por Mungua, se recogieron muestras de agua. Ya en el laboratorio, se prepar un matraz de 1.000 ml con 500 ml de muestra no tratada. El matraz se inocul con E. coli (densidad final, aproximadamente 106 UFC/ml) y se incub durante 6 das a 20C (120 r.p.m.). Peridicamente, se tomaron alcuotas encaminadas a la enumeracin de E. coli y de protozoos flagelados. La enumeracin de UFC de E. coli se realiz en Agar EMB (Medio selectivo y diferencial en el que E. coli produce colonias verdes metlicas caractersticas). La enumeracin de protozoos flagelados se realiz mediante microscopia de epifluorescencia en alcuotas filtradas a travs de filtros de 0,8 m de dimetro de poro y teidas con DAPI (factor del microscopio de epifluorescencia utilizado, 64761,9 campos/filtro). Se obtuvieron los resultados expresados en la tabla:
Tiempo (d) 0 1 2 3 4 5 6 Dil. 10
-3

Vol. Sembrado ( l) 100 100 100 100 100 1000 1000

Colonias/placa 96/96/108 106/111/98 240/216/248 315/296/298 88/76/78 265/267/281 166/166/168

Dil. M

Vol. Filtrado (ml) 40

N flagelados/campo 4/6/6/5/4/1/1/3/4/5 6/4/4/3/1/2/1/4/4/3

10-3 10-1 M* M M M

10-1

8/7/6/7/8/8/5/5/7/8 8/7/7/5/5/7/8/3/7/5

10-1

20

3/4/3/3/0/3/4/1/4/2 0/0/2/4/3/6/7/7/6/4

10-1

40

4/4/3/4/5/0/0/3/4/3 3/2/4/4/2/1/0/6/4/2

* M = muestra. Cul es el efecto de la poblacin de protozoos flagelados sobre la supervivencia de E. coli?. 2.15. Sospechamos que la densidad de un cultivo bacteriano cuando alcanza la fase estacionaria de crecimiento es de 4 108 clulas/ml. Para confirmar la densidad del cultivo utilizaremos el mtodo de enumeracin basado en el empleo de microscopia de epifluorescencia. Sabiendo que

se recomienda enumerar unas 20-30 bacterias por campo y que el factor del microscopio utilizado es 20.000 campos/filtro, para una correcta enumeracin qu dilucin de la muestra y que volumen de dilucin recomendara filtrar? 2.16. Debemos preparar 20 ml de la dilucin 10-3 de un cultivo microbiano. Indique como la realizara. A continuacin: 5 ml de esta dilucin se filtran para cuantificar las bacterias cultivables presentes. Este filtro se coloca sobre un medio de cultivo adecuado. Tras la incubacin se cuentan 125 colonias. Qu nmero de UFC/ml tiene la muestra? Otros 10 ml se filtran por un filtro de 0,22 m de dimetro de poro y se tien con naranja de acridina. Los recuentos obtenidos mediante microscopia de epifluorescencia son: 15/14/13/20/12/10/15/17/16/17. Cul es la densidad bacteriana total si el factor del microscopio es 1.920 campos/filtro? 2.17. Cul es el porcentaje de clulas cultivables Gram negativas en un cultivo mixto? Razone la respuesta. Sabemos que: Siendo el volumen filtrado es 2 ml de la dilucin 10-2 y el factor del microscopio, 15.000 campos/filtro, los recuentos obtenidos mediante microscopia de epifluorescencia son: 22/21/20/23/22/22/23/24/25/25.. Tras sembrar 3 placas de Agar MacConkey con 0,1 ml de la dilucin 10-3, los resultados obtenidos fueron: Lactosas positivas = 170/165/182 y Lactosa negativas = 80/70/76.

Un mtodo clsico, y muy sencillo, de cuantificacin de microorganismos se basa en la medicin de la Absorbancia (a una determinada longitud de onda) de una suspensin microbiana y la transformacin de este valor en un nmero de clulas (o UFC) por ml. Obviamente, este mtodo requiere de un estudio previo en el que se preparan diferentes diluciones de la suspensin microbiana y para cada dilucin se determina el valor de Absorbancia y el N de microorganismos/ml. Con esta informacin se obtiene una ecuacin que relaciona ambos parmetros y, en estudios posteriores, nos permitir conociendo la Absorbancia determinar la densidad microbiana. 2.18. Un cultivo de Klebsiella pneumoniae en fase exponencial tiene una absorbancia = 0,2 medida a 600 nm. Al realizar un recuento en placa se contaron 40 colonias tras sembrar 0,2 ml de la dilucin 104 del cultivo. a) Calcula la densidad del cultivo. b) Calcula las UFC totales si el volumen del cultivo es de 3 ml.

c) Qu diluciones deberas realizar a partir del mismo cultivo de K. pneumoniae cuando alcanza una absorbancia = 0,5 para contar en una placa 100 colonias despus de sembrar 0,2 ml? 2.19. A partir de una suspensin densa de Escherichia coli se han preparado suspensiones diferentes en las que se han determinado Absorbancia y UFC/ml. Los resultados obtenidos se expresan en la siguiente tabla:
Suspensin 1 2 3 4 5 6 Absorbancia (550 nm) 0,020 0.052 0,102 0,164 0,213 0,264 Bacterias/ml 3,55 106 2,04 107 5,65 107 1,95 108 4,75 108 6,90 108

Cul sera la densidad de una suspensin con Absorbancia = 0,18? 2.20. Se ha obtenido la siguiente ecuacin que relaciona Absorbancia (600 nm) y Klebsiella pneumoniae/ml: N bacterias/ml = 1,032 107 Abs 2,19 105. Se toma una alcuota de un cultivo de K. pneumoniae, se diluye 10 veces y se determina la Absorbancia (600 nm) de la dilucin. El valor obtenido es 0,49. Cul es la densidad del cultivo.

PROPUESTAS DE RESOLUCIN
2.1. UFC/ml? Volumen sembrado = 100 l/placa.

Muestra 1

Dilucin sembrada 10 10-4 10-5 10-2 10-3 10-4 100 10-1 10-2
-3

Placa 1 1816 180 16 475 45 5 335 32 5

Placa 2 1698 159 19 477 48 10 328 28 3

Placa 3 1885 186 10 480 51 4 324 29 2

UFC/ml 1,75 107

4,8 105

2,97 103

2.2. Lmite deteccin del mtodo de enumeracin de UFC. Supuesto: 100 placas/muestra.

l sembrados/placa, 3

0,1 ml
Caso real (colonias enumeradas): Caso lmite para enumeracin: 0 0

0,1 ml
0 0

0,1 ml
0 1

0,33 colonias = 3,3 UFC/ml 0,1 ml inoculados

Caso Caso lmite para enumeracin: Caso real: 1 colonia/3 placas = 3,3 UFC/ml 0 colonias/3 placas = Lmite de deteccin: <3,3 UFC/ml

Lmite deteccin del mtodo de enumeracin de UFC. Supuesto: 100 l sembrados/placa, 5 placas/muestra.

Lmite de deteccin: <2 UFC/ml

2.3. Densidad = 5 108 UFC/ml. 0,1 ml/placa. 50 colonias, Dilucin sembrada?

50 colonias x D = 5 108 UFC/ml 0,1 ml inoculados D = 106

2.4. Microgota (10 l/gota). UFC/ml?

Dilucin sembrada 10
-3

Recuento 1 180 16

Recuento 2 159 19

Recuento 3 186 10

UFC/ml

10-4

1,5 103

2.5. Lmite de deteccin del mtodo de microgota: 10 l/gota, 3 rplicas/muestra (dilucin).

0,33 colonias = 33,3 UFC/ml 0,01 ml inoculados

Caso lmite para enumeracin: Caso real: 1 colonia/3 gotas = 33,3 UFC/ml 0 colonias/3 gotas = Lmite de deteccin: <33,3 UFC/ml

2.6. NMP. Densidad bacteriana?

muestra

dilucin 1/10 dilucin 1/100

Volumen inoculado = 1 ml muestra o dilucin Se incuban 48 h a 20C Se comprueba crecimiento (turbidez)

45 bacterias/ml

2.7. NMP. Lmite de deteccin?

muestra
(tubos positivos): Caso real (tubos positivos): enumeracin: Caso lmite para enumeracin: 0 1

dilucin 1/10 dilucin 1/100

0 0 0 0

0,3 bacterias/ml Lmite de deteccin <0,3 bacterias/ml

2.8. NMP. Microorganismos presentes?

Procesamiento tarta 62,5 g de tarta + 187,5 ml de agua de peptona Dilucin decimal 10-1 Dilucin decimal 10-2 Dilucin decimal 10-3

Resultado Tubos* A A A M A A M M A M M M

*M = Morado = Ausencia de crecimiento. A = Amarillo = Fermentacin de lactosa

N caracterstico = 321 = 15 microorganismos Dilucin = 62,5 / 250 = 1 / 4 bacterias NMP = 15 x 4 = 60 bacterias Gram Lac+/g

2.9. Suspensin de levaduras. Diluir 1.000 veces. Factor de la cmara = 0,25 10-6 ml/cuadrcula. N Levaduras/ml dde suspensin?

Cuadrcula N

1 2 3 4 5 6 7 8 9 12 14 12 11 12 14 15 12 9

10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 11 12 14 15 10 11 9 10 11 12 14

12 clulas/cuadrcula X 1.000 = 4,8 1010 levaduras/ml 0,25 10-6 ml/cuadrcula

2.10. Cmara de recuento. Cuadrculas contadas = 20. Factor = 1,5 106 cuadrcula/ml. Lmite de deteccin? (clulas/cuadrcula clulas/cuadrcula): Caso real (clulas/cuadrcula): Caso lmite para enumeracin: 0 1 clula en 1 cuadrcula de las 20 enumeradas

1 clula/20 cuadrculas X 1,5 106 cuadrculas/ml = 7,5 104 levaduras/ml

levaduras/ml Lmite de deteccin <7,5 104 levaduras/ml

2.11. Microscopia de epifluorescencia. Volumen filtrado = 100 l. Factor = 30.954 campos/filtro. Densidad bacteriana? Campo N 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 22 18 18

15 12 11 9

21 16 13 13 15 20 22 13 14 12 18 17 9

15,4 bacterias/campo X 30.954 campos/filtro = 4,77 106 bacterias/ml 0,1 ml/filtro

Volumen filtrado = 1 ml. Dilucin 10-2. Factor = 30.954 campos/filtro. Densidad bacteriana?

15,4 bacterias/campo X 30.954 campos/filtro X 100 = 4,77 107 bacterias/ml 1 ml/filtro

2.12. Microscopia de epifluorescencia. Factor = 64.761,9 campos/filtro. Muestra 1 2 3 4 Volumen filtrado 1 ml 100 l 50 l 100 l Dilucin Muestra 100 10-1 10-2 N bacterias/campo 25/32/31/30/35/21/14/21/21/20 22/22/21/22/23/23/21/17/21/21 23/23/22/21/23/24/15/31/24/24 6/8/11/9/13/7/7/8/9/11 N bacterias/ml 1,62 106 1,38 107 2,98 108 5,76 108

2.13. Microscopia de epifluorescencia. Volumen mximo filtrado = 5 ml. Factor = 34.520 campos/filtro. 30 campos/filtro (clulas/campo clulas/campo): Caso real (clulas/campo): 0 Caso lmite para enumeracin: 1 clula en 1 campo de los 30 enumerados

1 bacteria/30 campos X 34.520 campos/filtro = 230 bacterias/ml 5 ml/filtro

bacterias/ml Lmite de deteccin <230 bacterias/ml

2.14. Efecto de la poblacin de protozoos flagelados sobre la poblacin de E. coli. (Factor = 64761,9)
Tiempo (d) Dil. Vol. Sembrado ( l) Colonias/placa UFC/ml Dil. Vol. Filtrado (ml) 96/96/108 106 flagelados/campo Flagelados/ml

0 1 2 3 4 5 6

10-3 10-3 10-1 M* M M M

100

40

4/6/6/5/4/1/1/3/4/5 6/4/4/3/1/2/1/4/4/3

5,75 103

100 100

106/111/98 240/216/248

1,05 106 2,35 104

10-1

8/7/6/7/8/8/5/5/7/8 8/7/7/5/5/7/8/3/7/5

8,48 105

100 100

315/296/298 88/76/78

3,03 103 8,07 102

10-1

20

3/4/3/3/0/3/4/1/4/2 0/0/2/4/3/6/7/7/6/4

1,07 105

1000 1000

265/267/281 166/166/168

271 166,67

10-1

40

4/4/3/4/5/0/0/3/4/3 3/2/4/4/2/1/0/6/4/2

14,70 104

M = muestra.

7 6 5 4 3 2 1 0

log N m.o./ml

E. coli/ml Protozoos/ml

3 4 Tiempo (d)

2.15. Microscopia de epifluorescencia. Volumen filtrado? Dilucin?

25 bacterias/ campo X 20.000 campos/filtro = 4 108 bacterias/ml V ml/filtro V = 1,25 10-3 ml V = 1,25 ml D = 103

2.16. 20 ml dilucin 10-3.

Dilucin 10-1 = 1 ml Muestra + 9 ml Diluyente Dilucin 10-2 = 1 ml Muestra + 9 ml Dilucin 10-1 Dilucin 10-3 = 2 ml Muestra + 18 ml Dilucin 10-2 125 colonias X 103 = 2,5 104 UFC/ml 5 ml

UFC/ml?

N total de bacterias/ml? N medio bacterias/campo = 14,9.

14,9 bacterias/campo X 1.920 X 103 = 2,86 106 bacterias/ml 10 ml

2.17. Porcentaje de clulas Gram negativas cultivables?

22,7 bacterias/campo X 15.000 X 102 = 1,7 107 bacterias/ml 2 ml [172,33 (Lac+) + 75,33 (Lac-)] colonias X 103 = 2,48 106 UFC Gram -/ml 0,1 ml

14,59 %

2.18. Densidad del cultivo de K. pneumoniae?

40 colonias X 104 = 2 106 UFC/ml 0,2 ml

UFC totales en 3 ml? Dilucin?

2 106 UFC/ml X 3 ml = 6 106 UFC totales

0,2 Abs ____________ 2 106 UFC/ml 0,5 Abs ____________ 5 106 UFC/ml 100 colonias X D = 5 106 UFC/ml 0,2 ml D = 10-4

2.19. Densidad de una suspensin de E. coli con Absorbancia (550) = 0,18? Suspensin 1 2 3 4 5 6 Absorbancia (550 nm) 0,020 0.052 0,102 0,164 0,213 0,264 Bacterias/ml 3,55 106 2,04 107 5,65 107 1,95 108 4,75 108 6,90 108 (r = 0,97) bacterias/ml acterias Log bacterias/ml 6,55 7,31 7,75 8,29 8,68 8,84

Log bacterias/ml = 8,982 Abs + 6,683 1,994 108 bacterias/ml

2.20. Klebsiella pneumoniae. N bacterias/ml= 1,032 107 Abs 2,19 105. Densidad de um cultivo co Absorbncia = 0,49.

N bacterias/ml= 1,032 107 0,49 2,19 105 bacterias/ml 4,84 106 bacterias/ml