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10/10/2009

Imunodiagnstico: Infeces Virais Diagnstico Laboratorial das Infeces Virais


Valdirene Leo Carneiro

Isolamento Viral por cultura; Deteco de Antgenos virais;


Microscopia eletrnica e IFD;

Amplificao do cido Nuclico; Tcnicas de Imunoensaios:


Deteco de Antgenos; Deteco de Anticorpos.

Aspectos Gerais e Diagnsticos das Infeces Virais Importantes em nosso meio

Origem do HIV VRUS DA IMUNODEFICINCIA HUMANA - HIV

10/10/2009

HIV
Famlia: Retroviridae Gnero: Lentivirus Tipos: HIV-1 e HIV-2
Subtipos: A a J (Grupo M) (Grupo N e O)

HIV
Cronologia:
1983: Foi descoberto 1984: Testes de ELISA 1986: Entrada atravs do CD4 1986: Outro tipo de HIV 1987: Zidovudina (transcriptase reversa) 1994: AZT diminui transmisso vertical 1995: Inibidores de proteases 1996: Entrada tambm com quimiocinas 1997: Macrfagos e Linfcitos em latncia 1998: Diminui mortalidade => doenas metablicas 1999: Cepas resistentes as novas drogas 2005: Comea a aparecer em pases pobres

AIDS ????
Conceito: Corresponde ao estgio final da infeco pelo HIV-1 e/ou HIV-2, quando as manifestaes clnicas de uma severa imunodeficincia so observadas pela incapacidade do paciente em controlar infeces oportunistas e processos neoplsicos.

10/10/2009

Figure 11-20

Figure 11-21

Ligao a Receptores

Figure 11-30

HIV - Infeco
Fase Aguda:
Manifestaes clnicas de um resfriado comum.

HIV
Vias de transmisso: Contato sexual;

Fase de Latncia:
Teste anti-HIV positivo.

Sangue e derivados; Da me infectada para a criana (intraparto, congnita, amamentao etc)

AIDS
Destruio das clulas imunes leva a falncia imunolgica.

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Risco mdio de transmisso do HIV


Tipo de Exposio Relao sexual (1 vez) Risco Mdio 0,01-1,0%

Diagnstico Laboratorial - HIV

Uso droga injetvel (1vez) 0 5-1 0% 0,5 1,0% Aleitamento materno Sangue contaminado 12% 90%

Determinao sorolgica de Acs circulantes (Anti g ( env, gag e pol); Deteco e quantificao de Ags virais (p24).

Transmisso ocupacional < 0,03%

Diagnstico Laboratorial - HIV


Pesquisa de Anticorpos (HIV I e II):
ELISA (indireto, competio) Deteco de Acs anti-HIV e Agp24 Quimioluminescncia, Eletroquimiolumin. Micropartculas de Gelatina Testes rpidos IFI Western-Blotting (Immunoblotting).

Diagnstico Laboratorial - HIV


Antgenos dos ensaios:
P24, 41 / P24 gp41 e/ou gp120 (A recombinantes 120 (Ags bi t ou peptdeos sintticos); Apenas HIV-1 ????? HIV-1 (grupo O e M) e HIV-2.

Western-Blotting - HIV

Western-Blotting ou Immunoblot- HIV

PROTENAS DO VRUS HIV 1: ENV: GP160, GP110/120 e GP41 POL: P68, P52 e P34 GAG: P55, P40, P24/25 e P18

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Western-Blotting - HIV
PADRO DE INTERPRETAO
NEGATIVO:
Ausncia de bandas especficas do vrus ou presena de P 18 apenas

Western-Blotting - HIV

POSITIVO:
2 ENV +/- GAG +/- POL

INDETERMINADO: 1 ENV +/- GAG +/- POL ou GAG + POL ou GAG (exceto P18) ou POL

WesternWestern-Blotting - HIV

Ferreira et al, 2001

Imunoensaios, Vaz et al, 2007

Acompanhamento do paciente com AIDS

Imunoensaios, Vaz et al, 2007

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Exames de Seguimento
Deteco qualitativa e quantitativa do vrus no sangue:
Carga viral: Tcnicas de amplificao do RNA viral

CITOMETRIA DE FLUXO

Nveis de clulas CD4+ e CD8+:


Concentrao de clulas CD4+ inversamente proporcional a carga viral.

PRINCPIOS BSICOS DE CITOMETRIA DE FLUXO

CITO

METRIA

FLUXO

HEPATITES VIRAIS

Clula

Medida

Movimento

Hepatites virais
Diagnstico Laboratorial:
Testes sorolgicos = Marcadores Imunolgicos; Tcnicas de Biologia Molecular = Confirmao da infeco viral em casos duvidosos; Mtodos Bioqumicos = Avaliar o tipo e o grau do comprometimento heptico, cura, cronicidade e eficcia teraputica

Caractersticas e Diagnstico Laboratorial das Hepatites (A-E)

10/10/2009

Principais caractersticas das hepatites virais


Hepatite A Agente etilgico Perodo de incubao (semanas) ( ) HAV Hepatite B HBV Hepatite C HCV Hepatite D HDV Hepatite E HEV

Principais caractersticas das hepatites virais


Vias de Hepatite A transmisso Sim Fecal-oral Hepatite B No Hepatite C No Hepatite D No Hepatite E Sim

2-7 No

6 - 16 Sim

6 - 12 Sim

2 - 16 Do HBV

2-8 Parenteral No Sexual e Vertical Formas crnica Triagem sorolgica doadores

No

Sim

Sim

Sim

No

Envelope Genoma (no. Nucleotdeos) RNA (7900) Picornaviridae DNA (3200) RNA (9400) RNA (1700) ? RNA (7600)

No

Sim

Pouco freqente Sim (70%)

No

No

Sim (5%)

No

Famlia

Hepadnaviridae

Flaviviridae

Calciviridae

No

AgHBs

Anti-HCV

No

No

Ferreira et al, 2001

Vrus da Hepatite A

Vrus da Hepatite A
Marcadores Sorolgicos: Anti-HAV G e M; Anti-HAV IgM Anti-HAV IgG patognomnico; Estudos soroepidemiolgicos;

Recuperao da doena, sem reinfeco; Metodologias utilizadas Biologia Molecular ELISA, QL, EQL

Fezes.

Vrus da Hepatite A

Vrus da Hepatite A

Ferreira et al, 2001

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Vrus da Hepatite B

Vrus da Hepatite B
Perodo de incubao: 6 a 8 semanas; Presente no sangue forma crnica; Fase aguda, convalescena e

Transmisso pelo sangue e agulhas muito eficaz; Recuperao sorolgica, bioqumica e clnica: 93%; Formas crnicas Hepatite fulminante
Resposta dos LTCs elimina o vrus

5%; 1%.

Vrus da Hepatite B
Marcadores Imunolgicos:
a) AgHBs; b) Anti-HBS; c) Anti-HBc G e M; d) AgHBe; e) Anti-HBe.

Vrus da Hepatite B

Outros marcadores a nvel de investigao


Ferreira et al, 2001

Vrus da Hepatite B
Cronologia dos marcadores imunolgicos:
Primeiro.... Segundo .... S d Terceiro ..... Quarto .......... Quinto ............ Sexto ...............

Vrus da Hepatite B
AgHBs > 6 meses forma crnica; AgHBs e AgHBe > 6 meses prognstico de maior gravidade com alta replicao viral.

10/10/2009

Vrus da Hepatite B

Vrus da Hepatite B
Biologia Molecular: C fi Confirmar casos d id duvidosos; Vrias metodologias.

Ferreira et al, 2001

Vrus da Hepatite C
Gnero Hepacivirus ; Famlia: Flaviviridae Fita nica de RNA e 9500 nucleotdeos
(Weine et al, 1991)

Vrus da Hepatite C
Recuperao Infeco Aguda Hepatite Crnica Cirrose Estvel

Estvel

Gentipos e Subtipos: 1a, 1b, 2a, 3a...


(Simmonds et al, 1994)

Mortalidade
(Cirrose, CHC)

Quasiespcies : Extensa variabilidade

2030 anos

Vrus da Hepatite C
Hepatite no-A e no-B ( 90%); Transmisso ps-transfusional, agulhas contaminadas, transplante de rgos etc; Transmisso sexual e vertical rara; Ocorre de forma espordica sem que se possa determinar a forma de infeco.

Vrus da Hepatite C Vrus da HepatiteC

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Vrus da Hepatite C
BIOLOGIA MOLECULAR A PCR o gold standard test no diagnstico da hep. C; Metodologias: Branched DNA e RFLP; Branched PCR (Qualitativo, Quantitativo e Genotipagem)

Vrus da Hepatite D

Confirmao do resultado e acompanhamento do tratamento.

Vrus da Hepatite D

Vrus da Hepatite E
Prevalncia no Brasil? Bahia? Mato Grosso? Semelhante a HAV; Gestantes pode ser perigoso; Marcadores imunolgicos: Anti-HEV G eM? IFD em hepatcitos infectados: Fase aguda.

Outras Hepatites
Hepatites no-A-E; p ( ) Hepatites no-A e no-B (90% E e C); Hepatite F? Hepatite G? (os outros 10%).

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HTLV Vrus linfotrpico humano para clulas T.

Famlia => Retroviridae;


Infecta clulas do sistema imunolgico humano denominadas linfcitos T. Existem basicamente dois tipos de HTLV, o HTLV-1 e o HTLV-2.

HTLV
HTLV - I

HTLV
HTLV - II

HTLV-I que est implicado em doena neurolgica e leucemia. HTLV-II, o tipo 2, que est pouco evidenciado como causa de doena.

Como se pega o HTLV ?


Recebendo transfuso contaminado pelo vrus; de sangue

Prevalncia do HTLV-I
Endmico no Japo, Caribe, frica, Amrica do Sul e ilhas da Melansia; Estima-se que 15 a 20 milhes de pessoas esto i f t d pelo HTLV I no mundo. t infectadas l HTLV-I d HTLV-I => presente em todas as regies brasileira; Prevalncia elevada => Bahia, Pernambuco e Par; Brasil possui o maior nmero absoluto de indivduos infectados no mundo.

Compartilhando agulhas seringas ou objetos agulhas, seringas, cortantes; Aleitamento materno; Relao sexual, no protegida.

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Prevalncia do HTLV-I

Doenas causadas pelo HTLV?


Maioria dos pacientes assintomticos; Leucemia/linfoma de clulas T do adulto; Mielopatia associada ao HTLV-1 => doena causada por uma inflamao na medula espinhal provocada pelas clulas infectadas pelo HTLV-1.

Mielopatia associada ao HTLV-I


Os sintomas mais comuns associada ao HTLV-1 so:
Fraqueza nas pernas; Rigidez, endurecimento dos msculos das pernas; Problemas para controlar a urina; Pele muito seca, boca e olhos secos; Dormncias, formigamentos, dores, sensao de queimao nos ps ou nas pernas; dores nas articulaes.

Diagnstico do HTLV-I e II
Sorolgico:
Triagem => Aglutinao em ltex, EIA (lisados virais e protenas recombinantes); Confirmatrios => Western-Blotting e IFI. Western Blotting

da

mielopatia

Molecular:
Confirmar casos indeterminados; Discriminar entre HTLV-I ou II.

Interpretao do WB
Soropositivos => Anticorpos contra antgenos do core (anti-p24) e anti-glicoprotenas do env (r21, gp46 ou gp61); Indeterminados => Padro de reao diferente do citado acima; Negativo => Ausncia de bandas.

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