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Introduccin

Un bioensayo es el proceso experimental mediante el cual se determinan las caractersticas y la fuerza de una sustancia potencialmente txica o de un desecho metabolito, a travs del estudio de sus efectos sobre organismos cuidadosamente escogidos y bajo condiciones especficas de laboratorio. La dosis necesaria para producir un efecto txico particular en 50% de los animales se llama dosis txica media (DT50). Si el efecto txico causa la muerte del animal, se puede definir experimentalmente la dosis letal media (DL50). La DL50 es la dosis a la cual hay muerte en el 50% de la poblacin estudiada. Es la dosis a la cual existe el 50% de probabilidad de morir en slo individuo. (Rang 2002) Las curvas de dosis-respuesta graduales tienen ciertas limitaciones para su aplicacin en la toma de decisiones clnicas. Algunas limitaciones pueden evitarse al determinar la dosis de frmaco que se requiere para producir un efecto de magnitud especificada en un gran nmero de personas o animales experimentales. Puede elegirse el efecto cuantal especificado con base a la importancia clnica o la preservacin de la seguridad de los sujetos del experimento o puede ser un fenmeno cuantal inherente. (Katzung, 2002)

Objetivos
1.-Manejar un sistema biolgico alterno a los mamferos y roedores para la determinacin de una curva concentracin-respuesta cuantal. 2.-Realizar el clculo de la CL50 mediante el anlisis Probit.

Resultados
Resultados experimentales: [Tabla 1] concentracin (mg/mL) 0.1 0.2 0.3 0.4 0.6 0.8 1.0 ni 29 32 30 31 27 32 27 ri 0 0 2 3 3 9 20 pi 0 0 0.06 0.096 0.11 0.28 0.74 yi 3.445 3.659 3.773 4.417 5.643

(Datos no usados)

Mtodo Miller y Tainter [Tabla 2]


C (mg/mL) 0 0,5 1 1,5 2 3 4 n 0 2 3 4 9 20 26 y 30 30 30 30 30 30 30 log C -0,3 0 0,17 0,3 0,47 0,6 Yi 3,445 3,718 3,874 4,476 5,412 6,08

[Grfica 1]

Mtodo Miller y Tainter


Yi Unidades Probit 7 6 5 4 3 2 1 0 -0.4 -0.2 0 0.2 log C 0.4 0.6 0.8 y = 2.9586x + 3.8894 R = 0.8577

Y= mx + b Yi= x +

= 2.9586 = 3.8894

Concentracin letal 50 =

= 0.3753

CL50= 10 = 2.373 mg/mL Error estndar de la media S= = = =5 = 0.48

Lmites de confianza CL50= 2.373 0.94 = 3.313 LS =1.433 LI Mtodo Reed-Muerch [Tabla 3] C
4 3 2 1,5 1 0,5 0

Log C
0,602 0,477 0,301 0,176 0 -0,301 -----

Artemias muertas
20 20 9 4 3 2 0

Artemias vivas
4 10 21 26 27 28 30

A. muertas A. viva acumuladas acumuladas A.M.A/A.M.A+A.V.A % M


64 38 18 9 5 2 0 4 14 35 61 88 116 146 0,941 0,73 0,339 0,128 0,053 0,016 0 94,1 73 33,9 12,8 5,3 1,6 0

A.M.A: Artemia Muerta Acumulada A.V.A: Artemia Viva Acumulada

[Grafica 2]

140 No. de artemias acumuladas 120 100 80 60 40 20 0 -0.4 -0.2 0 0.2 Log C 0.4 0.6 0.8 Artemias acumuladas vivas Artemias acumuladas muertas

Valor de CL50 LogC 0.38 100.38 2.39 mg/mL Grfica 3


100 90 80 70 60 %M 50 40 30 20 10 0 -0.4 -0.2 0 0.2 Log C 0.4 0.6 0.8

Valor de CL50 LogC 0.38 100.38 2.39 mg/mL

Discusin
La tabla 1 nos muestra los resultados obtenidos en la parte experimental realizada en el laboratorio. Estos datos no fueron usados en el clculo de la CL50, dado que los resultados para el grupo no fueron homogneos y haba mucha disparidad en el momento de ordenar los datos y presentarlos en una grfica. De igual manera, se present que con una concentracin de K2Cr2O7, hubo una muerte instantnea de las artemias, y se tuvo que optar por cambiar la solucin a una concentracin de 25 mg/mL. Una vez unificados los criterios de medicin, se procedi a realizar dos mtodos diferentes para calcular la CL50 de dicromato de potasio, registrados en la tabla 2. Dado que el anlisis es con unidades probit, se procedi a calcular la probabilidad por concentracin, que implica la relacin de artemias totales muertas entre artemias totales vivas, y posteriormente, transformar estos valores a unidades probit con ayuda del apndice del manual de prcticas de la materia. La grfica 1 presenta la relacin entre las unidades probit y el logaritmo de la concentracin, que tras aplicar la frmula segn el mtodo de Miller y Tainter, se obtuvo que la CL50 fue de 2.373 mg/mL. Se procedi a calcular el error estndar de la media, que es definido como la desviacin estndar de las medias de todas las muestras del mismo tamao, es decir, el error contenido que no cumpla con una distribucin normal segn la figura de la campana de Gauss para el acomodo estadstico. Este error fue de 0.48, lo que nos indica que la estadstica realizada tiene un intervalo de confianza de aproximadamente el 95%, que significa que son bastante exactos. Los lmites superiores e inferiores calculados a partir de este error estndar de la media, representan los rangos en donde la campana de Gauss ya no se cumple para toda la poblacin, es decir, mas all de esos niveles puede haber comportamientos diferentes a los esperados en los que se calcularon. Posteriormente, se realiz un segundo mtodo, de Reed-Muerch, donde se relacionan en una misma grfica (grfica 2) el acumulado de artemias muertas y artemias vivas, para que el punto de cruce de ambas lneas sea el valor determinado para el logaritmo de la CL50, cuyo valor fue de 2.39 mg/mL. La grfica 3 se encarga de corroborar este dato, pues relaciona el porcentaje de mortalidad contra el logaritmo de la dosis, que en este caso, se busca que sea del 50% debido a que se trata de un anlisis de dosis letal 50, donde el 50% de la poblacin muere. Este valor result aproximadamente el mismo (dado que en Excel no se puede hacer una interpolacin, o al menos, no hubo manera de realizarlo) que el de la grfica anterior: 2.39 mg/mL. Comparando estos dos mtodos, mediante unidades Probit (Miller y Tainter) y el Reed-Muerch, se observa que ambos arrojaron un valor de CL50 muy semejante, lo cual nos indica que los clculos fueron los correctos. La metodologa Probit es ms usada y recomendable dado que permiten el estudio de los efectos adversos de un determinado evento y porque mediante el uso de estas unidades, se puede pasar de una curva de distribucin normal a una lnea recta con parmetros fciles de calcular. Para la evaluacin de los efectos txicos de los contaminantes qumicos es importante la adecuada eleccin del organismo de prueba que se emplear, pues no slo es necesario contar con un valor de CL50, sino que es tambin indispensable el poder inferir posibles daos sobre las comunidades acuticas en los sistemas receptores, a partir de este resultado. En este caso, Artemia salina fue la elegida por su fcil almacenamiento y conservacin, su biodiversidad, es decir, se puede presentar en muchos ambientes, su fcil reproduccin y su bajo costo.

Por el potencial impacto que representa para el ambiente, la emisin de cromatos y dicromatos (cromo VI) vertidos, producto de la actividad de diferentes sectores industriales, se determina la toxicidad aguda del K2Cr2O7 en larvas de Artemia salina como mtodo alternativo aplicado a la ecotoxicologa (dao en el medio ambiente). El cromo es uno de los metales pesados de mayor importancia toxicolgica en la actualidad. Est presente en rocas, plantas, suelos, animales, humos y gases volcnicos. El estado metlico (valencia 0) es biolgicamente inerte; la forma trivalente representa el cromo como elemento esencial, es la ms estable, y el estado hexavalente (cromo VI), usualmente es de origen antropognico y el de mayor importancia toxicolgica. Los compuestos derivados de ste son fundamentalmente los cromatos y dicromatos, los cuales se utilizan en operaciones de cromado, manufactura de pigmentos y colorantes, curtido de pieles y tratamiento de madera. Dependiendo del pH del medio, tiene la capacidad de ingresar a la clula utilizando la va general de los canales proteicos transportadores de aniones. La clula lo confunde con iones sulfato y le permite su entrada. Al ingresar al espacio intracelular, el cromo (VI) interacciona con agentes reductores e inicia un proceso reductivo a los estados Cr(V), Cr (IV) y Cr(III), generando una fuerza oxidativa capaz de producir lesiones en el DNA, aductos Cr-DNA, uniones cruzadas DNA-DNA, DNAprotenas, sitios apricos, entre otros. Los mecanismos de transporte del cromo a nivel celular, la interaccin con agentes reductantes como el glutatin y uniones con el DNA, no se encuentran totalmente esclarecidos. Esto puede generar que los organismos padezcan de inmovilidad, mutacin, esterilidad y hasta provocar su muerte El cromo hexavalente es acumulado por los organismos acuticos por difusin pasiva. La toxicidad para los diferentes grupos, especies y estadios no es la misma y vara adems de acuerdo con las condiciones ecolgicas y a las caractersticas qumicas del agua. Las especies de invertebrados como los crustceos son ms sensibles a sus efectos que los vertebrados como los peces. Desde el punto de vista ecotoxicolgico los invertebrados acuticos juegan un importante papel en la transferencia de alimentos o flujo de energa dentro de la cadena alimentaria de estos ecosistemas, por lo que las alteraciones originadas por la presencia de un agente txico en uno de estos grupos pueden en algn grado, interferir con otros componentes interdependientes de la cadena trfica.

Conclusiones
En esta prctica pudimos determinar la concentracin letal 50 del dicromato de potasio en un sistema biolgico distinto a los comunes que son mamferos y roedores, usando el crustceo Artemia salina por su disponibilidad, bajo precio y fcil reproduccin, que fue determinado en 2.373 mg/mL mediante anlisis probit y en 2.39 mg/mL con un mtodo alternativo (Reed-Muerch), siendo ambos muy parecidos. Esto fue posible obteniendo la probabilidad de concentracin y transformando las unidades correspondientes a unidades Probit con la ayuda de la Tabla de conversin de proporcin a unidades Probit que est en el Apndice 1 del manual de prcticas de farmacologa.

Bibliografa
Katzung. Farmacologa bsica y clnica. Ed. El manual moderno, 2002, Pg. 36-39 Rang, H. P. Farmacologa. Ed. Elsevier Science. 4 edicin, Espaa 2002. Pg. 49- 53.

Biblioteca virtual en salud, Cuba, Centro de Toxicologa y Biomedicina, Determinacin de la toxicidad aguda de dicromato de potasio, 2001, http://bvs.sld.cu/revistas/anu/vol1_1_01/anu1701.htm