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INDICE

INDICE............................................................................................................................................ 1 PRACTICA 1 .................................................................................................................................... 2 OBJETIVO: .................................................................................................................................. 2 FUNDAMENTO TEORICO ........................................................................................................... 2 El almidn .............................................................................................................................. 2 Fundamentos qumicos de las pruebas. ................................................................................ 3 Prueba del Yodo .................................................................................................................... 3 Reaccin de Molisch.............................................................................................................. 4 PARTE EXPERIMETAL ................................................................................................................. 5 MUESTRAS ............................................................................................................................. 5 MATERIALES. ......................................................................................................................... 5 PROCEDIMIENTO ................................................................................................................... 5 EN CALIENTE .......................................................................................................................... 5 EN FRIO .................................................................................................................................. 5 RESULTADOS ......................................................................................................................... 6 FOTOS .................................................................................................................................... 6 CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES .................................................................................... 8 BIBLIOGRAFIA ............................................................................................................................ 8

PRACTICA 1
ESTUDIO CINETICO DE LA ALFA-AMILASA
OBJETIVO:
Estudia la velocidad de las reacciones catalizadas por enzimas, asi como lo factores que influye y los mecanismos por los cuales transcurre.

FUNDAMENTO TEORICO
El almidn El almidn es un polmero de elevado peso molecular formado por una sucesin de molculas de -D-glucosa unidas por enlaces glucosdicos -1,4 y que se ramifica en determinados puntos de la cadena mediante enlaces -1,6. Estos enlaces dan origen a dos polmeros distintos, la amilosa y la amilopectina que a su vez forman los granos de almidn. Los granos de almidn estn formados por amilosa en su parte interior y amilopectina en sus capas ms externas. La amilosa es un polmero predominantemente lineal constituido por enlaces -1,4 que adoptan una disposicin helicoidal, mientras que la amilopectina es un polmero muy ramificado formado por un nmero mayor de unidades de glucosa.

Figura 1. AMILOSA: Polmero lineal de -D-glucosa unido por enlaces -1,4. Adopta una disposicin helicoidal.

Figura 2. AMILOPECTINA: Polmero muy ramificado de -D-glucosa. Las ramificaciones se originan por la formacin de enlaces -(1,6).

El almidn es el principal polisacrido de reserva de los vegetales, se encuentra, principalmente, en semillas, frutos, legumbres, tubrculos y cereales. El almidn se sintetiza a partir de la glucosa generada en los procesos de fotosntesis y se almacena en los amiloplastos. El contenido relativo de amilosa y amilopectina, as como las caractersticas de los granos, vara segn la fuente del almidn

Figura 3. Fuentes de almidn En la naturaleza existe una amplia variedad de enzimas responsables de la hidrlisis del almidn son los denominados enzimas amilolticos o amilasas. Su accin da lugar a oligosacridos, maltosa y finalmente glucosa. En realidad hay que distinguir entre dos clases de amilasas: alfa y beta (en adelante y ). La -amilasa es la que corta de dos en dos unidades de glucosa las cadenas de almidn, empezando por el extremo no reductor. Su actividad se detiene al encontrar un enlace 1-6. As pues, la -amilasa degrada totalmente la amilosa a maltosa mientras que el producto de su accin sobre la amilopectina es maltosa y dextrinas lmite. Por otro lado, la -amilasa degrada el almidn de una forma mucho ms desordenada: ataca enlaces 1-4 en zonas aleatorias de la cadena, incluso a ambos lados de los enlaces 1-6. Dependiendo del tiempo de contacto se obtiene como producto de esta reaccin un conjunto de oligosaridos variados, en parte ramificados, denominados dextrinas, de peso molecular variable. Si se prosigue la reaccin las cadenas rectas se acaban convirtiendo en maltosa y maltotriosa. Fundamentos qumicos de las pruebas. Prueba del Yodo Es una reaccin especfica del almidn, el reactivo de lugol se intercala por la molcula de almidn y esto se detecta por la coloracin violeta que toma la mezcla dandp positivo. Este polisacrido esta formado por molculas de glucosa y es exclusivo de las clulas vegetales. Realmente est formado por dos tipos de polmeros ambos de glucosa: la amilosa que es la que realmente se tie con el yodo del lugol y la amilopectina. La coloracin producida por el Lugol se debe a que el yodo se introduce entre las espiras de la molcula de almidn. No es por tanto, una verdadera reaccin qumica, sino que se forma un compuesto de inclusin que modifica las propiedades fsicas de esta molcula, apareciendo la coloracin azul violeta. El lugol o solucin de Lugol es una solucin de I2 (1%) en equilibrio con KI (2%) en agua destilada. Fue nombrada en honor al fsico francs J. G. A. Lugol. El Lugol colorea las micelas de almidn de color azul intenso casi negro. El almidn es una mezcla (en diferentes proporciones segn las especies) de los polisacridos amilosa (10-20%) y amilopectina (80-90%). El almidn es coloreado de azul en presencia de Lugol, debido a una adsorcin o fijacin del I3 sobre las unidades de glucosa de la amilosa, y ayuda a mantener su estructura. Al calentar hasta ebullicin, desaparece la estructura ternaria (incoloro) yreaparece al enfriar (azul-violeta)

Reaccin de Molisch La reaccin de Molisch es una reaccin que tie cualquier carbohidrato presente en una disolucin; es llamada as en honor del botnico austraco Hans Molisch. Se utiliza como reactivo una disolucin de -naftol al 5% en etanol de 96. En un tubo de ensayo a temperatura ambiente, se deposita la solucin problema y un poco del reactivo de Molisch. A continuacin, se le aade cido sulfrico e inmediatamente aparece un anillo violeta que separa al cido sulfrico, debajo del anillo, de la solucin acuosa en caso positivo. Es una reaccin cualitativa, por lo que no permite saber la cantidad de glcidos en la solucin original. Se basa en la accin hidrolizante y deshidratante del cido sulfrico sobrelos hidratos de carbono. En dicha reaccin el cido sulfrico cataliza lahidrlisis de los enlaces glucosdicos de la muestra y la deshidratacin afurfural (en las pentosas) o hidroximetilfurfural (en las hexosas).Estos furfurales se condensan con el alfa naftol del reactivo de Molisch(reaccin de Molisch) dando un producto coloreado En la reaccin de Molish, el agregado de cido sulfrico concentrado a una disolucin de azcar provoca la deshidratacin del glcido en la interfase, para dar un anillo de furfural o hidroximetilfurfural que reacciona con -naftol, para dar un producto de color prpura. sta es una prueba general de hidratos de carbono.

PARTE EXPERIMETAL
MUESTRAS Yuca Verde Papa Arroz MATERIALES. Caja Petri Tubo de Ensayo Rayador Cuchillo Esptula Estufa Vaso de Precipitacin

PROCEDIMIENTO EN CALIENTE 1. Primero se raya una pequea cantidad de una muestra o se tritura segn sea el caso. 2. Luego en coloca la muestra en un vaso de precipitacin y se lo disuelve con un poco de agua 3. Se lo calienta hasta que hierva Prueba de Yodo 4. Se coloca una pequea cantidad en una caja Petri 5. Finalmente se coloca una gota de Yodo sobre la muestra 6. Observar cambios Prueba de Reaccin de Molish 7. Se coloca una pequea cantidad en un tubo de ensayo 8. Finalmente se coloca una gota de alfa-naftol 9. Observar si se forma halo color violeta EN FRIO 1. Primero se raya una pequea cantidad de una muestra o se tritura segn sea el caso. 2. Luego en coloca la muestra en un vaso de precipitacin y se lo disuelve con un poco de agua 3. Se mezcla hasta conseguir una solucin casi homognea Prueba de Yodo 4. Se coloca una pequea cantidad en una caja Petri 5. Finalmente se coloca una gota de Yodo sobre la muestra 6. Observar cambios Prueba de Reaccin de Molish 7. Se coloca una pequea cantidad en un tubo de ensayo 8. Finalmente se coloca una gota de alfa-naftol 9. Observar si se forma halo color violeta

RESULTADOS

PROCEDIMIENTO

MUESTRA

REACTIVO DE MOLISH

LUGOL

OBSERVACIN

CALIENTE

FRIO

Se observo que el color era intenso el caso del Yodo, pero en el caso del Verde + + Reactivo de Molish se formo un halo pero no era muy marcado. Con el Yodo se observo un color azul claro alrededor de la muestra, Yuca + + mientras que con el Yodo no era muy pronunciado. Se observ que si dio un color violeta azulado lo que significa que Yuca + + hay presencia de almidn. Este no era tan intenso El color en esta muestra era mas intenso dando un violeta oscuro. Por lo que podemos decir que hay Arroz + + mayor % de almidon. La formacin del halo en la prueba de Molish fue inmediata. El color fue mas intenso por lo que Papa el % de almidn es mayor. En el + + centro se concentro mas el color. Tabla 1. Tabla de resultado de pruebas.

FOTOS En caliente Soluciones

Foto: Verde

Foto: Yuca

Prueba de Iodo

Foto: Verde Prueba de Molish

Foto: Yuca

Foto: Verde En frio

Foto: Yuca

CONCLUSIONES Y RECOMENDACIONES
Al realizar la prueba con el reactivo de Molish, observamos que todas las muestras reaccionaron dando positivo. Por lo que podemos concluir que todas las muestras contienen almidn, claro hay en algunos caso en que el cambio de color fue mas intenso esto se dio debido a que algunas estaban mas diluidas que otras. Entonces se puede decir que el reactivo de Molish sirve para identificar si hay presencia o no del carbohidrato. Pero en caliente no se pudo observar mucho el halo por la alta concentracin de almidn. La prueba de Lugol al ser un mtodo que se utiliza para identificar polisacridos como el almidn y al ser positivo da una coloracin azul-violeta, vimos que todas nuestras muestras contienen este polisacrido ya que todas dieron positivo. La prueba de Molish es sensible al calor por lo que no es recomendable hacerlo en caliente debido a que no se puede distinguir mucho el halo. Por lo contrario en frio se fue ver con mayor facilidad la presencia del halo en las muestras. En cambio para el Yodo esto no fue un factor influyente.

BIBLIOGRAFIA
Reconocimiento de Glucidos. http://payala.mayo.uson.mx/QOnline/Prueba_Fehling_y_Lugol.htm. Fecha de Consulta: 20/10/2012 ANLISIS ESTRUCTURAL Y MODIFICACINFUNCIONAL DE LA GLUCOAMILASA DE SACCHAROMYCES EREVISIAE VAR. DIASTATICUS http://es.scribd.com/doc/62864013/3/Estructura-quimica-del-almidon-Enzimasamiloliticas. Fecha de Consulta: 20/10/2012 METODOS CUALITATIVOS PARA LA IDENTIFICACION DE CARBOHIDRATOS. http://webdelprofesor.ula.ve/farmacia/gmendez/manuales%20PDF/EXPERIMENTO%2 04%20IDENT%20CARB%2006-05.pdf. Fecha de Consulta: 20/10/2012 Reaccion de Molish. http://es.wikipedia.org/wiki/Reacci%C3%B3n_de_Molisch. Fecha de Consulta: 20/10/2012 Digestion Enzimatica del Almidon. http://es.scribd.com/doc/3596226/DETERMINACION-ENZIMATICA-DEL-ALMIDON. Fecha de Consulta: 20/10/2012