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UNIVERSIDAD VERACRUZANA

FACULTAD DE MEDICINA VETERINARIA Y ZOOTECNIA

SITUACIN ACTUAL DE LA PIROPLASMOSIS EQUINA EN MXICO


TRABAJO RECEPCIONAL EN LA MODALIDAD DE:

MONOGRAFA
COMO REQUISITO PARCIAL PARA OBTENER EL TTULO DE

MDICO VETERINARIO ZOOTECNISTA


PRESENTA:

JOS IVN MNDEZ MANUEL


ASESORES: M.V.Z. DR. ALEJANDRO TAYLOR ESTRADA COATES M.V.Z. MC. ARMANDO LPEZ GUERRERO

VERACRUZ, VER.

ENERO 2012

NDICE GENERAL.
NDICE DE CUADROS.............................................................................................v NDICE DE FIGURAS..............................................................................................vi AGRADECIMIENTOS..............................................................................................ix DEDICATORIAS.......................................................................................................x RESUMEN...............................................................................................................xi 1. INTRODUCCIN..................................................................................................1 2. ANTECEDENTES.................................................................................................2 3. JUSTIFICACIN...................................................................................................4 4. OBJETIVOS..........................................................................................................5 4.1. Objetivo General................................................................................................5 4.2. Objetivos Especficos........................................................................................5 5. METODOLOGA...................................................................................................6 6. ETIOLOGIA...........................................................................................................7 7. MORFOLOGIA......................................................................................................7 8. CICLO EVOLUTIVO Y TRANSMISIN..............................................................10 9. RESPUESTA INMUNE A LA PIROPLASMOSIS EQUINA.................................12 10. PATOGNESIS Y SIGNOS CLNICOS............................................................13 10.1. ANEMIA: UNO DE LOS PRINCIPALES SIGNOS CLNICOS A TRATAR EN LA PIROPLASMOSIS EQUINA...17

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10.1.1. DIAGNSTICO DE ANEMIA.....................................................................18 10.1.2. HEMATOLOGA.........................................................................................19 10.1.3. CAUSAS ESPECFICAS DE LA ANEMIA..................................................20 10.1.4. TRANSFUSIN SANGUNEA....................................................................22 11. DISTRIBUCIN GEOGRFICA.......................................................................25 11.1. DISTRIBUCIN EN MXICO........................................................................25 11.2. SITUACIN ACTUAL DE PIROPLASMOSIS EQUINA EN MXICO (REPORTE DE CASOS EN LOS LTIMOS 10 AOS).........................................27 12. ANATOMIA PATOLGICA..............................................................................35 12.1. LESIONES MACROSCPICAS...................................................................35 12.2. LESIONES MICROSCPICAS.....................................................................38 13. DIAGNSTICO.................................................................................................38 13.1. DIAGNSTICO DIFERENCIAL....................................................................38 13.2. DIAGNSTICO DE LABORATORIO.............................................................41 13.3. TCNICAS DE DIAGNSTICO.....................................................................42 13.3.1. IDENTIFICACIN DEL AGENTE...............................................................42 13.3.2. PRUEBAS SEROLGICAS.......................................................................44 13.3.2.1. PRUEBA DE INMUNOFLUORESCENCIA ORDENADA PARA INDIRECTA EL CON

ANTICUERPO

(PRUEBA

MERCADO

INTERNACIONAL)..................................................................................................45

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13.3.2.2. ENZIMOINMUNOENSAYO.....................................................................47 13.3.2.3. PROTOCOLO DE C-ELISA.....................................................................49 13.3.2.4. FIJACIN DEL COMPLEMENTO (PRUEBA PRESCRITA PARA EL MERCADO INTERNACIONAL)..............................................................................52 14. TRATAMIENTO................................................................................................55 14.1. TRATAMIENTO CRNICO...........................................................................56 15. MEDIDAS DE CONTROL.................................................................................57 15.1. NOTIFICACIONES A LAS AUTORIDADES..................................................57 15.1.1.NOTIFICACIN INMEDIATA.......................................................................58 BIBLIOGRAFIA.......................................................................................................62

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NDICE DE CUADROS. Cuadro 1. Las causas de la anemia en los caballos deportivos. Cuadro 2. Las terapias para la recuperacin del volumen por va intravenosa y el aumento de la capacidad de transportar oxgeno de la sangre. Cuadro 3. Claves utilizadas por la OIE. Cuadro 4. Claves y medidas de control utilizadas por la OIE. Cuadro 5. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo enero 2001diciembre 2001. Cuadro 6. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo enero 2002diciembre 2002. Cuadro 7. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo enero 2003diciembre 2003. Cuadro 8. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo enero 2004diciembre 2004. Cuadro 9. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo enero 2005diciembre 2005. Cuadro 10. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo enero 2006diciembre 2006. Cuadro 11. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo enero 2007diciembre 2007. Cuadro 12. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo enero 2008diciembre 2008.

Cuadro 13. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo enero 2009diciembre 2009. Cuadro 14. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo enero 2010diciembre 2010. Cuadro 15. Diagnstico diferencial de las enfermedades de los caballos caracterizadas por anemia y edema (Radostits, 2002).

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NDICE DE FIGURAS.

Figura 1. Diversas formas eritrocticas de B. caballi que se encuentran en los glbulos rojos. Figura 2. Trofozoto y merozoto intraeritrocitario etapas de T. equi. Figura 3. Diversas formas eritrocticas de T.equi se encuentra en los glbulos rojos. La Cruz de Malta es tpica de la especie, pero no siempre se ve en el examen de un frotis de sangre. Figura 4. Forma de un merozoto intraeritrocitario de B caballi. Figura 5. Hemoglobinuria, uno de los signos agudos en piroplasmosis equina. Figura 6. Edema de las extremidades posteriores en un caballo afectado por T. equi. Figura 7. Ictericia en un caballo afectado por T. equi. Figura 8. Distribucin mundial de piroplasmosis equina. Figura 9. Regiones climticas en Mxico. Figura 10. Caballo, las cavidades pleural y peritoneal. Existe una marcada ictericia generalizada. La sangre en la cavidad torcica es delgada y acuosa. Figura 11. Corazn y pulmones de caballo. La grasa de la trquea y el pericardio muestran ictericia. Los pulmones se encuentran congestionados. Figura 12. Rin de caballo. La corteza es de color rojo oscuro debido a la hemoglobinuria. La mdula y pelvis muestran ictericia. Figura 13. Agrandamiento de los ndulos linfticos submandibulares en un caballo afectado por T. equi. Figura 14. Edema de los parpados con un poco de moco purulento en un caballo afectado por T. equi. vii

Figura 15. Estado actual de la campaa contra la garrapata Rhipicephalus microplus.

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AGRADECIMIENTOS. Agradezco a Dios y a mi familia por el apoyo brindado durante mi formacin universitaria, por confiar en m siempre y sobre todo por brindarme su amor y cario. A mi entraable amigo y profesor el M.V.Z. Augusto Mancisidor Ahuja por dedicarme su tiempo, enseanza y sobre todo por sus consejos de amigo. Al M.V.Z.Dr. Alejandro Taylor Estrada Coates y al M.V.Z. M.C. Armando Lpez Guerrero por su tiempo y apoyo en revisar mi trabajo de Experiencia Recepcional, as como brindarme y compartir sus conocimientos en el rea de equinos. A mi entraable amigo y tutor de mi carrera el M.V.Z. Rubn Loeza Limn por estar al pendiente de m y por ensearme el buen camino del estudio, al M.V.Z. Jos Alberto Mndez Santos por brindarme su amistad y respaldo todo este tiempo. A mis amigos: Jos Manuel Clara Sarmiento Clarita, Damin Garca Guevara, Alejandro Salvador Morales Chabelo, Jorge Alberto Landa Avalos Cochofo, Ana I. Mota Torres, Denisse Saldaa Sandoval La Gera, Elisa Castro Flores, Sergio Arroniz Mora El nalgn, Jonathan Pealoza Tadeo El compa Johnny, Pedro lvarez Rincn El Pedrn ntrax, Alfredo Cabaas acosta El loquito, Rubn lvarez Muiz El becerro, Jos ngel lvarez Landa El Bobby, Pablo Montero Castro El Lechn, Francisco Barradas Ruz El compa picho, Evelio Aguilar Figueroa, Gibran D. Farfn Rodrguez El piloto, Abraham Domnguez De la Mora, Gamaliel Altamirano Arenas El gama, Pamela Lrtigue Corona, y Mara Jos Muoz Lpez Cheche, a ellos por brindarme su amistad y cario. Al M.V.Z. Manuel Salgado Vzquez por haber permitido que realizara mi servicio social en su clnica HVECH, por brindarme su apoyo, amistad y sobre todo por compartir su conocimiento en el rea de equinos.

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DEDICATORIAS. A mi padre: Jos Luis Mndez Cruz ( ) por motivarme en mis estudios, por ensearme a trabajar el rancho, por ser un ejemplo para m, por cuidar de m estos aos y sobre todo por quererme demasiado, gracias pap en donde quiera que ests siempre estars en mi mente y corazn por juguetn y travieso siempre te voy a recordar. A mi madre: Teresa Manuel Norberto por sacarme adelante en mis estudios, por cuidarme, por darme todo lo que necesit durante mi formacin profesional, por el amor y cario que siempre me has brindado, siempre estar en deuda contigo mam, sabes que te amo y quiero mucho.

RESUMEN. MNDEZ MANUEL JOS IVN. 2012. Situacin actual de la piroplasmosis equina en Mxico. Monografia de Licenciatura. Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia, Universidad Veracruzana. Veracruz, Ver. Mxico. Asesores: M.V.Z. Dr. Alejandro Taylor Estrada Coates y M.V.Z. M.C. Armando Lpez Guerrero. El incremento global de la industria del caballo representa una fuente potencial para la diseminacin de las enfermedades que aquejan a los equinos. La piroplasmosis equina es una enfermedad parasitaria transmitida por garrapatas que afectan a caballos, ponis, burros, mulas, y cebras. Los animales infectados con piroplasmosis equina pueden presentar fiebre, anemia, membranas

amarillentas en los ojos y la boca, y orina teida desde caf oscuro hasta rojo. Algunos animales mueren por esta enfermedad, mientras que otros nunca enferman. Los equinos con infecciones persistentes de PE son portadores de los parsitos que causan la enfermedad y son fuentes potenciales de infeccin para otros equinos. Las personas tambin pueden diseminar los agentes de la enfermedad cuando utilizan agujas o jeringas usadas entre equinos infectados y no infectados, hoy en da stas prcticas son realizadas en todo el pas, dentro de instalaciones ecuestres, hipdromos, hpicos, lienzos charros donde existe la "negligencia, la impericia y la irresponsabilidad" por parte del ser humano, quien llev una educacin superior "no valorada" o bien quien no pudo llevarla y lo realiza empricamente

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1. INTRODUCCIN
La babesiosis es producida por cualquiera de las diversas especies de Babesia que infectan a una gran variedad de hospederos vertebrados, incluyendo animales domsticos y salvajes, y el hombre. En la naturaleza las babesias son tradicionalmente transmitidas en forma biolgica por garrapatas ixdidas, pero en otros medios tales como moscas hematfagas y fmites que transfieren sangre desde un portador infectado hasta un animal susceptible, y pueden estar involucrados en la transmisin mecnica de estos parsitos intraeritrocitarios (IICA,2000).

La piroplasmosis equina o babesiosis equina, causada por los protozoarios Theileria equi (antes Babesia) y Babesia caballi, se transmite mediante la picadura de garrapatas y otros vectores que afectan a los equinos, prcticas de inyectologa emprica de entrenadores e inclusive de mdicos veterinarios no profesionales que utilizan agujas, jeringas y aparatos de venoclisis usados, contaminados con sangre de caballos enfermos de piroplamosis para inyecciones de soluciones endovenosas, son las principales causas de la diseminacin de la piroplasmosis equina en reas tropicales y subtropicales cercanas a las costas mexicanas y actualmente en mayores reas geogrficas por el cambio climtico mundial y las condiciones climticas ms calurosas favorables a la prevalencia de las garrapatas y vectores en la mayor parte del territorio nacional mexicano (Murga, 2010).

Esta revisin tratar primordialmente de aquellas babesias que afectan al ganado equino. Se cree que estos animales son, desde el punto de vista econmico, los ms severamente afectados por las infecciones de Theileria equi y Babesia caballi (IICA, 2000).

2. ANTECEDENTES.
Antes de 1901, la piroplasmosis equina no fue reconocida como una enfermedad y a menudo era confundida con otras enfermedades, la llamaron fiebre de ntrax, la fiebre irritable, la fiebre biliar, y malaria equina (Roberts et al., 1962). La piroplasmosis equina se mencion como malaria equina porque los signos clnicos observados en quidos en Pretoria, Sudfrica, eran similares a la infeccin por malaria (Plasmodium) encontrado en personas (Theiler, 1903). Basado sobre la morfologa, el hemoparsito era clasificado con otro protozoo periforme dentro del grupo de los piroplasmas, y fue llamado Piroplasma equi (USDA-APHIS, 2008).

A principios del siglo XX, el veterinario sudafricano Sir Arnold Theiler intent transmitir el agente infeccioso de los caballos infectados a aquellos que no lo estaban va transfusin sangunea, desafortunadamente sin xito alguno. Theiler especul que no fue posible desarrollar la enfermedad porque la problemtica en la transmisin del agente infeccioso giraba en torno a la inmunidad, de este modo, los caballos nativos no fueron capaces de generarla debido a que ya eran inmunes a sta, o quizs porque el agente infeccioso requera la presencia de un vector para su efecto adverso. Asimismo, Theiler report que la enfermedad no pareca ser contagiosa de manera directa ya que la mayor parte de los caballos eran importados y provenan de Nueva Zelanda, Inglaterra, Australia y Argentina. A pesar de que la enfermedad no pareca contagiarse o expandirse de forma directa, Theiler indic que la susceptibilidad al contagio era directamente proporcional al nmero de animales que se encontraban presentes, tomando en cuenta los factores epidemiolgicos de la malaria equina, ligada como se menciona anteriormente, al nmero de animales susceptibles. Se encontr tambin que la malaria era ms frecuente durante el verano, especialmente durante la temporada de lluvias. Theiler indic que la incidencia de dicha enfermedad fue encontrada en ms de una ocasin de forma clnica (Theiler, 1902). En 1912, Nutall y Strickland descubrieron que la piroplasmosis equina puede ser causada por dos agentes distintos: B.equi y B.caballi (Nuttall, 1912). 2

En Mxico Osorno y Solana encontraron en 1972 T. equi y B. caballi en el estado de Veracruz, posteriormente, Osorno y Vega muestrearon 120 caballos en los estados de Puebla y Mxico, encontrando 10 positivos (Guzmn, 2004).

Rodrguez et al., reportan que T. equi y B. caballi se encuentran presentes en equinos del estado de Yucatn, Mxico, y hoy en da la babesiosis equina representa un problema importante (Rodrguez et al., 1997). En el estado, existe una gran variedad de garrapatas potencialmente vectores de estos agentes tales como Anocentor nitens y Riphicephalus sanguineus; sin embargo, hasta la fecha no se ha realizado algn estudio sobre los vectores y su relacin con la babesiosis equina (Rodrguez y Domnguez, 1998).

Posteriormente en el ao 2000, Rodrguez et al., revisaron los archivos del Laboratorio de Parasitologa de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Autnoma de Yucatn, con datos de marzo de 1984 a diciembre de 1999. Obtuvieron la informacin de 79 muestras sanguneas que fueron remetidas y procesadas mediante las tcnicas de Knott y frotis sanguneos teidos con Giemsa al 10% de caballos procedentes del estado de Yucatn, los hemoparasitos encontrados fueron 3.79% de T. equi y 2.53% de B. caballi (Rodrguez et al., 2000).

3. JUSTIFICACIN.
La realizacin de esta monografa surge de la necesidad de crear una recopilacin de informacin actual para el MVZ dedicado a la clnica veterinaria, y estudiantes de Medicina Veterinaria con inters en las grandes especies, ya que actualmente es una enfermedad recurrente en la prctica privada y hospitales veterinarios adems de ser una enfermedad de reporte obligatorio inmediato ante las autoridades de sanidad animal (SENASICA).

En muchos casos, el mdico veterinario no est familiarizado con el cuadro clnico, o este puede ser poco especifico, por lo tanto suele ser fcilmente confundida con otras patologas y al no ser identificada y tratada debidamente puede complicarse al grado de poner en riesgo la vida del paciente o progresar a una fase crnica.

De esta forma, no slo estudiantes sino mdicos veterinarios han tenido la creciente necesidad de contar con trabajos de tipo monogrfico, para poder as disponer de informacin descrita de forma veraz, clara, breve y actualizada, lo cual es finalmente el objetivo del presente trabajo.

4. OBJETIVOS.
4.1. Objetivo general. Compilar informacin sobre la piroplasmosis equina en un solo documento para que sea una fuente de informacin actualizada para el clnico veterinario y los estudiantes de medicina veterinaria. 4.2. Objetivos especficos. Describir los aspectos importantes de este padecimiento como etiologa, inmunologa, epidemiologa, semiologa, y otros factores que servirn de fuente de consulta al mdico veterinario y estudiantes de medicina veterinaria. Explicar las bases diagnsticas para poder utilizar los elementos que estn a nuestro alcance y llegar a un diagnostico temprano. Informar sobre las medidas de prevencin y control que existen en nuestro pas.

5. METODOLOGA.
Se llev a cabo la seleccin de informacin documental en libros e Internet, con un motor de bsqueda para las siguientes palabras: piroplamosis, babesiosis, Theileria equi, Babesia caballi; tambin el uso principalmente de libros especializados, manuales clnicos, journals indexados de la biblioteca de la Facultad de Medicina Veterinaria y Zootecnia de la Universidad Veracruzana en el periodo agosto diciembre del ao 2011.

6. ETIOLOGA.
La piroplasmosis equina es una infeccin parasitaria en los caballos producida por protozoarios del gnero Babesia y transmitida por garrapatas del gnero Anocentor, Dermacentor, Rhipicephalus y Hyaloma (Quiroz, 2006). La garrapata Cayenne (Amblyomma cajennense) actualmente ha sido identificada como uno de los vectores de la piroplasmosis equina por los cientficos del Servicio de Investigacin Agrcola (ARS por sus siglas en ingles) de Estados Unidos, basndose en la investigacin epidemiolgica de un brote que ocurri en Texas en el 2009 y que afect a casi 300 animales (Scoles et al., 2011). Es posible que sea difcil diagnosticar la piroplasmosis, ya que puede causar signos clnicos variables y no especficos. La piroplasmosis es la principal restriccin para el movimiento internacional de equinos (Rovid et al., 2010). La babesiosis equina es causada por Theileria (antiguamente Babesia) equi o B. caballi. Theileria equi es un parasito pequeo y es ms virulento que B. caballi. Theileria equi se reclasific como Theileria en 1998 (Maynard et al., 2007). En raras ocasiones, se han informado casos en caballos por otros protozoos relacionados, como Babesia bovis (Rovid et al., 2010).

7. MORFOLOGA.
Theileria equi es pequea, de 2 micras. Los trofozotos en los eritrocitos tienen forma redondeada, amiboide y otras de pera (figura 1); por lo general estas formas se encuentran en nmero de cuatro, con aspecto de cruz de Malta (figura 2) (Quiroz, 2006).

Figura 1. Diversas formas eritrocticas de T.equi se encuentra en los glbulos rojos. La Cruz de Malta es tpica de la especie, pero no siempre se ve en el examen de un frotis de sangre (Tomado de Kaufmann, 1996).

Figura

2.

Trofozoto

y merozoto

intraeritrocitario

etapas

de Theileria equi (Tomado de Traub-Dargatz et al., 2010).

Babesia caballi es una especie en forma de pera parecida a B. bigemina, los trofozotos son piriformes y miden de 2.5-4 micras (figura 3) (Kaufmann, 1996). Se encuentran en los eritrocitos de caballos, burros, mulas y cebras y las formas de pera integran pares, dando lugar a un ngulo recto (figura 4) (Quiroz, 2006).

Figura 3. Diversas formas eritrocticas de B. caballi que se encuentran en los glbulos rojos (Tomado de Kaufmann, 1996).

Figura 4. Forma de un merozoto intraeritrocitario de Babesia caballi (Tomado de Traub-Dargatz et al., 2010. 9

8. CICLO EVOLUTIVO Y TRANSMISIN.


Babesia caballi y T. equi son transmitidas por garrapatas que se infectan al ingerir parsitos que se encuentran en la sangre de los quidos infectados (Uilenberg, 2006). Aproximadamente 14 especies de garrapatas del gnero Dermacentor, Hyalomma, Amblyomma y Rhipicephalus pueden ser vectores para estos organismos; sin embargo, se desconoce la importancia epidemiolgica de algunas especies (Rovid et al., 2010). Aunque las garrapatas son vectores biolgicos para T. equi y B. caballi, las diferencias en los ciclos de multiplicacin de estos parsitos pueden afectar su mtodo de transmisin. Dentro de la garrapata, los cigotos de Babesia se multiplican como vermculos que invaden muchos de los rganos de la garrapata, incluidos los ovarios, y la especie Babesia pasa fcilmente a la siguiente generacin de garrapatas en el huevo (transmisin transovrica) (Friedhoff et al., 1996). Cuando una garrapata en estado de larva, ninfa o adulta de la generacin siguiente se adhiere a un nuevo hospedero, el parsito es estimulado para que llegue a su maduracin final, lo que le permite infectar al hospedero. En contraste, los cigotos de Theileria no se multiplican en la garrapata y la transmisin transovrica de T. equi es incierta o est ausente (Uilenberg, 2006). Las garrapatas que transmiten este organismo pueden infectarse como larvas y transmitir la infeccin como ninfas, o pueden infectarse como ninfas y transmitir la infeccin como adultas (transmisin transestadial). En algunas especies de garrapatas, como Rhipicephalus microplus (anteriormente Boophilus microplus), T. equi tambin puede transmitirse por el mismo estadio en que la garrapata adquiri el parsito (transmisin intraestadial); se desconoce si esto ocurre en otras especies de garrapatas. Las garrapatas infectadas con Theileria pierden esos parsitos despus de la transmisin. Al igual que en el caso de B. caballi, los parsitos T. equi slo son estimulados para completar su maduracin despus de que la garrapata se adhiere para alimentarse. Por ese motivo, una 10

garrapata infectada con cualquiera de los organismos debe permanecer adherida al hospedero durante cierto tiempo antes de convertirse en infecciosa; con frecuencia, B. caballi y T. equi son transmitidos despus de que la garrapata ha estado adherida durante algunos das (Rovid et al., 2010). Despus de la recuperacin, los caballos pueden convertirse en portadores durante un perodo prolongado. Los animales infectados con B. caballi pueden ser portadores durante un perodo de hasta cuatro aos, aunque es posible que finalmente queden libres del organismo. Los quidos infectados con T. equi parecen quedar infectados en forma permanente. Con frecuencia, la parasitemia no se encuentra en los portadores, pero puede volver a presentarse en estos animales despus de padecer inmunodepresin o de realizar ejercicio intenso. T. equi puede pasar al potro in utero, y algunos de ellos pueden ser portadores sanos (Rovid et al., 2010). El primer informe clnico agudo y fatal de la transmisin transplacentaria de T. equi de madres portadoras a potros fue en Punjab, India. Dos casos de equinos con piroplasmosis por T. equi fueron diagnosticados en los potros recin nacidos de dos yeguas de raza Pura Sangre Ingls. Se observ un alto grado de parasitemia y en ambos casos la forma de cruz de Malta de los parsitos en los eritrocitos. Los cambios celulares de la sangre revelaron leucopenia y neutropenia con leve desviacin degenerativa a la izquierda. La anemia fue de tipo normocrmica macroctica y una coloracin amarillo intenso en las membranas mucosas, que indica ictericia. En las zonas endmicas para equinos con piroplasmosis, la ictericia neonatal en el potro puede ser fcilmente mal diagnosticada como isoeritrolisis neonatal. Los potros con ictericia despus del parto siempre deben ser examinados y hacerles pruebas de piroplasmosis equina (Chhabra et al., 2011). En raras ocasiones se han informado casos de transmisin

transplacentaria de B. caballi, y algunas fuentes no consideran que la evidencia para esta va sea confiable (Rovid et al., 2010). Las personas tambin pueden diseminar los agentes de la enfermedad cuando utilizan agujas o jeringas usadas entre equinos infectados y no infectados. El equipo para uso dental, de tatuaje y 11

quirrgico puede tambin propagar la enfermedad si no est completamente limpio y estril. Adems, hacer una transfusin de sangre de un equino infectado (aunque parezca sano) a un equino no infectado probablemente transmitira el agente de la enfermedad entre los equinos (USDA-APHIS, 2010).

9. RESPUESTA INMUNE A LA PIROPLASMOSIS EQUINA.


Los datos indican que la respuesta de los equinos al parsito es que ste, no puede ser eliminado y que los caballos permanecen con la infeccin durante toda su vida. La investigacin para encontrar un tratamiento eficaz que elimine a T. equi del caballo infectado est en proceso. Aunque las infecciones por B. caballi se han descrito como auto limitadas, con una duracin de hasta cuatro aos despus de la infeccin, muchos caballos que, aparentemente, se han recuperado de la infeccin por B. caballi sufren una recada, lo que sugiere infeccin de por vida y un punto de tiempo en que el patgeno no se pudo detectar, pero todava est presente. Adems, algunos cientficos creen que las observaciones de B. caballi se hicieron antes de que se desarrollaran mtodos ms sensibles de diagnstico, como la reaccin en cadena de la polimerasa anidada (PCR, por sus siglas en ingls). La investigacin adicional se justifica para determinar si las infecciones por B. caballi y T. equi se puede eliminar y se basan en el desarrollo de un programa de pruebas que garantiza la deteccin de cualquier resto de agentes patgenos en los animales tratados (USDA-APHIS, 2008).

La resistencia a la enfermedad clnica y la re-infeccin en los animales expuestos previamente se ha descrito y se cree que es debido a la estimulacin contina inmune de los parsitos, aunque los mecanismos exactos de resistencia no han sido aclaradas. Recadas clnicas en los quidos portadores puede ser debido a la supresin inmune, enfermedades concurrentes o esplenectoma. No existe inmunidad cruzada entre B. caballi y T. equi (USDA-APHIS, 2008).

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La infeccin persistente de los quidos es muy importante en el mantenimiento de la piroplasmosis equina en la naturaleza. A pesar de que el nmero de patgenos en los eritrocitos de los quidos portadores suele ser baja, los animales actan como reservorios de agentes patgenos de piroplasmosis equina y pueden servir como fuentes para la difusin de los patgenos siempre cuando y haya vectores como garrapatas u otras formas de transmisin (USDAAPHIS, 2008).

10. PATOGNESIS Y SIGNOS CLNICOS.


Theileria equi y Babesia caballi no se pueden distinguir clnicamente, pero la diferenciacin entre las dos infecciones puede ser importante para el xito del tratamiento y control (Rothschild y Knowles, 2007).

Theileria equi es ms virulenta que B. caballi; ambas tienen accin traumtica en los glbulos rojos, accin expoliatriz, accin mecnica obstructiva a nivel capilar y accin txica con los productos metablicos (Quiroz, 2006).

La garrapata transmite los parsitos a travs de su saliva, ya que se alimenta de los caballos. El parsito entra a la circulacin e invade los glbulos rojos y los linfocitos. Los glbulos rojos se rompen, y los signos de hemlisis se presentan. Despus de la ruptura, los parsitos entran a nuevos glbulos rojos para seguir replicndose. El caballo es ahora infeccioso para otras garrapatas. Dependiendo de la especie, el parsito tambin puede transmitirse a travs del ciclo de vida de la garrapata (Wilson, 2011).

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El perodo de incubacin vara de 10 a 30 das para B. caballi y de 12 a 19 das para T. equi (de Waal, 1992). La infeccin puede presentar varios signos clnicos. El curso de la enfermedad puede ser hiperaguda, aguda, subaguda o crnica. Signos clnicos para la fase hiperaguda y aguda pueden incluir fiebre, ictericia, anemia, hemoglobinuria (muy raro) (figura 5), bilirrubinuria, problemas digestivos (clico, estreimiento o diarrea) o signos respiratorios, y

ocasionalmente la muerte. Los equinos con piroplasmosis subaguda pueden mostrar anorexia, letargo, prdida de peso, anemia, edema en las extremidades (posteriores) (figura 6), frecuencia respiratoria baja y esplenomegalia (Rothschild y Knowles, 2007). La fiebre puede ser intermitente y haber signos de clicos leves. Las membranas mucosas en los casos subagudos pueden ser de color rosa, rosa plido o amarillo, y pueden tener petequias o equimosis (figura 7). En los casos crnicos, los signos comunes incluyen inapetencia leve, baja tolerancia al ejercicio, prdida de peso, fiebre transitoria y esplenomegalia (palpable mediante examen rectal). Algunas yeguas infectadas, incluidas las yeguas portadoras, pueden abortar o transmitir T. equi a sus cras. Los potrillos infectados in utero pueden estar dbiles al nacer, y desarrollar rpidamente anemia e ictericia grave. En otros casos, estos potrillos pueden ser portadores sanos. Los portadores asintomticos pueden desarrollar signos clnicos despus de padecer

inmunodepresin o de realizar ejercicio enrgico (Rovid et al., 2010).

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Figura 5. Hemoglobinuria, uno de los signos agudos en piroplasmosis equina (Tomado de Abutarbush, 2009).

La mayora de los caballos seropositivos para T. equi y B. caballi son los transmisores que, por definicin, son persistentemente infectados con agentes patgenos de piroplasmosis equina, pero no muestran signos clnicos y pueden servir como una fuente de infeccin para otros quidos durante toda su vida (Rothschild y Knowles, 2007).

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Figura 6. Edema de las extremidades distales en un caballo afectado por T. equi (Tomado de Zobba et al., 2008).

Figura 7. Ictericia en un caballo afectado por T. equi (Tomado de Zobba et al., 2008).

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10.1. ANEMIA: UNO DE LOS PRINCIPALES SIGNOS CLNICOS A TRATAR EN LA PIROPLASMOSIS EQUINA. En los caballos, la anemia (recuento bajo de eritrocitos totales, el hematocrito y la concentracin de hemoglobina) es menos comn a una condicin primaria, y ms a menudo ocurre secundaria a alguna otra condicin primaria, por ejemplo, las infecciones (bacterianas o virales), parasitismo (endo o ectoparasitismo), o alteracin metablica (por ejemplo, hepatopata, nefropata), que requiere un diagnstico y tratamiento especficos. La desnutricin es rara vez visto en establos de caballos de rendimiento, pero los desequilibrios de minerales y vitaminas (que incluye la deficiencia o exceso) pueden ocurrir (Hinchcliff et al., 2004). La anemia se define como una disminucin en los glbulos rojos que lleva a una reduccin en la concentracin de eritrocitos, la concentracin de hemoglobina y el hematocrito o por debajo del valor de referencia. Como la hemoglobina es el principal determinante del contenido de oxgeno arterial (CaO 2), la anemia es funcional, caracterizada por la reduccin de la capacidad de transportar oxgeno por sangre (Hinchcliff et al., 2004). Varios mecanismos compensatorios sirven para aumentar la oxigenacin de los tejidos en presencia de anemia. Una de las adaptaciones a la anemia inicial es un aumento en el 2,3 - difosfoglicerato (2,3-DPG) en el contenido de los glbulos rojos. Esto es probablemente causado por un cambio en el pH intracelular y conduce a una disminucin del oxgeno-afinidad de la hemoglobina, el oxgeno es por lo tanto, ms fcilmente liberado a los tejidos. La viscosidad de la sangre se reduce notablemente, con una concentracin de eritrocitos ms bajos, y la hipoxia tisular activa los mecanismos de la regulacin local del flujo sanguneo y hace que los vasos perifricos se dilaten. Esto se traduce en una cada espectacular de la resistencia vascular perifrica, un aumento del gasto cardaco y la mejora en el suministro de oxgeno a los tejidos. Los cambios individuales en el resultado del tono vascular en la redistribucin de la sangre de reas no vitales (piel, intestino) a los tejidos altamente dependientes de oxgeno (corazn, cerebro, msculos). Por ltimo, el suministro de oxgeno disminuido en los riones conduce a aumento de 17

la sntesis de eritropoyetina, lo que acelera la eritropoyesis en la mdula sea y provoca una respuesta regenerativa a la anemia (Hinchcliff et al., 2004). Estos mecanismos pueden, al menos en parte, compensar la disminucin de la concentracin de hemoglobina y atenuar la disminucin en el aporte de oxgeno a los tejidos. Incluso la anemia severa es relativamente bien tolerada en reposo, siempre y cuando cumpla con los siguientes criterios: No aparecer de forma aguda No estar asociada con hemlisis aguda o prdida de sangre No haber prdida de volumen sanguneo No haber procesos de enfermedades o condiciones (por ejemplo, infeccin, fiebre, lesiones graves, el ejercicio, la agitacin o avanzado estado de gestacin) que aumenten la demanda de oxgeno.

La hemoglobina libre debido a la hemlisis intravascular, ejerce fuertes efectos vasoconstrictores debido a la unin de xido ntrico, y tiene una mayor afinidad por el oxgeno debido a una prdida de 2,3-DPG. La consiguiente disminucin del aporte de oxgeno y la liberacin efectiva en los tejidos contribuye a los efectos fisiopatolgicos de la anemia hemoltica. Cuando la demanda de oxgeno del tejido es mayor, o cuando la anemia se agrava lo suficiente para superar la capacidad de compensacin del organismo, el grado de extraccin de oxgeno de la sangre no puede ser aumentado y el consumo de oxgeno por los tejidos disminuye a medida que el suministro de oxgeno disminuye (la oferta depende consumo del oxgeno). El metabolismo anaerbico resultante conduce a una condicin de acidosis lctica y metablica. En ltima instancia, la hipoxia tisular y la capacidad metablica limitada del tejido afectado puede conducir a dao tisular y fallo multiorgnico (Hinchcliff et al., 2004).

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10.1.1. DIAGNSTICO DE ANEMIA. La disminucin de la capacidad de transportar oxgeno de los mecanismos de compensacin relacionados con la sangre son responsables de la mayora de los signos clnicos asociados con la anemia. La gravedad y la velocidad de desarrollo de la anemia determinan la eficacia de los mecanismos fisiolgicos

compensatorios (Hinchcliff et al., 2004). La anemia sutil es difcil de detectar y tiene leves efectos clnicos. El total de los glbulos rojos, del volumen y de la concentracin de hemoglobina se relacionan con la capacidad de ejercicio de un caballo. Durante el ejercicio, la demanda de oxgeno del tejido es mayor. Las pequeas disminuciones de los glbulos rojos baja el nivel de la intensidad del ejercicio, en el que se produce una hipoxia tisular, y por lo tanto dar lugar a la intolerancia al ejercicio (Hinchcliff et al., 2004). La anemia ms severa se caracteriza por depresin, debilidad, taquipnea, taquicardia, pulso hipercintico e ictericia. La hemoglobinuria o bilirrubinuria pueden ser vistas en caballos con anemia hemoltica. Las arritmias cardiacas pueden indicar hipoxia miocrdica. Hay dolor abdominal y signos de leo intestinal funcional probablemente relacionados con la isquemia esplcnica, lo que puede dar lugar a desprendimiento de la mucosa intestinal, endotoxemia y bacteriemia (Hinchcliff et al., 2004). 10.1.2. HEMATOLOGA. La anemia se diagnostica cuando el hematocrito, la concentracin de hemoglobina y la concentracin de eritrocitos en un conteo sanguneo completo (CSC) estn por debajo del rango de referencia para la raza correspondiente. La definicin clnica de la anemia puede ser problemtica, ya que el estado de hidratacin y la contraccin del bazo debido al ejercicio, la excitacin o el estrs tambin pueden influir en los valores hematolgicos. Los cambios en el hematocrito y la concentracin de hemoglobina no pueden reflejar el verdadero cambio en la capacidad de transportar oxgeno a la sangre (Hinchcliff et al., 2004). 19

El enfoque tradicional para determinar la etiologa y patogenia de la anemia consiste en determinar si la anemia es regenerativa o no regenerativa. En los caballos, la evaluacin de una respuesta regenerativa es difcil sobre la base de un hemograma de rutina, debido a la maduracin de reticulocitos se ha completado en la mdula sea y la liberacin de reticulocitos a la sangre es mnima, incluso en respuesta a una anemia severa. En raras ocasiones, reticulocitos y glbulos rojos nucleados se pueden encontrar en los casos de hemlisis severa. Los eritrocitos jvenes son generalmente ms grandes que los eritrocitos normales. Por lo tanto, una respuesta regenerativa es en la mayora de las especies caracterizada por la liberacin de macrocitos en el torrente sanguneo, independiente de la reticulocitosis. La macrocitosis y anisocitosis pueden ser los nicos indicadores de la regeneracin en la sangre perifrica de los caballos. Puede ser detectada por la determinacin de los ndices de eritrocitos (volumen corpuscular medio y el ancho de distribucin de glbulos rojos), citogramas clulas de la sangre e histogramas de volumen de distribucin, o la evaluacin de frotis de sangre (Hinchcliff et al., 2004). 10.1.3. CAUSAS ESPECFICAS DE LA ANEMIA. La anemia es consecuencia de una hemorragia (anemia por prdida de sangre), lisis de glbulos rojos en el espacio intravascular o extravascular (anemia hemoltica), o la falta de produccin de eritrocitos (anemia hipo proliferativa) (cuadro 1). Las anemias por prdida de sangre y anemias hemolticas se conocen como anemias regenerativas, mientras que las anemias hipoproliferativa son no renovables (Maynard et al., 2007).

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Cuadro 1. Las causas de la anemia en los caballos deportivos (Hinchcliff et al., 2004).
ANEMIA REGENERATIVA. Anemia por prdida de sangre. Anemia hemoltica. ANEMIA NO REGENERATIVA (HIPOPROLIFERATIVA). Agudo. Trauma Ciruga. Micosis de la bolsa gutural. Trauma abdominal interna o grave. Trastornos de coagulacin. Crnico. Gastrointestinales (ulceracin, neoplasia, parsitos) Respiratorias (hematoma etmoidal, micosis de bolsa gutural, hemorragia pulmonar). Urogenital. Trastornos de la coagulacin. Otros. Insuficiencia heptica terminal. Administracin intravenosa de soluciones concentradas de dimetil-sulfxido (DMSO) o hipotnica. Otros. Disfuncin orgnica crnica. Anemia aplsica Trastornos mielotsica. Sndromes mielodisplsicos. Infeccioso. Anemia infecciosa equina. Piroplasmosis (Babesia caballi y Theileria equi). Inmune-mediada por anemia hemoltica (IMHA). Secundaria IMHA (infeccin clostridial, penicilina, linfoma de purpura hemorrgica). Dao oxidativo (anemia con cuerpos de Heinz y metahemoglobinemia). Toxicidad de las hojas de arce rojo. Envenenamiento por cebolla. Intoxicacin por fenotiazina. Anemia de la inflamacin (crnica). Infeccin crnica. Inflamacin crnica. Trauma severo. Neoplasia. Deficiencias nutricionales. Deficiencia de hierro. Deficiencia de folato. Inmune- mediada por anemia hipoproliferativa. Eritropoyetina humana recombinante (rhEPO) inducida por aplasia pura de clulas rojas. Inmune mediada por anemia hemoltica que afectan a los precursores eritroides. Infeccioso. Anemia infecciosa equina.

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10.1.4. TRANSFUSIN SANGUNEA. Despus de la sustitucin del volumen y de la estabilizacin del paciente, este debe ser reevaluado nuevamente para tomar la decisin de realizar la transfusin de sangre entera. La decisin de transfusin debe basarse en la evaluacin clnica y clnico-patolgica. La transfusin est indicada si (Maynard et al., 2007): El hematocrito desciende rpidamente por debajo del 15% y sigue disminuyendo El hematocrito est por debajo del 10% Hay sangrado incontrolable. La prdida de sangre cuantitativa es ms del 30% del volumen total de sangre. La demanda de oxgeno en los tejidos aumenta debido a la fiebre o agitacin Hay signos gastrointestinales (clicos, diarrea) que indican posible isquemia intestinal o hipoxia Hay taquicardia, taquipnea, depresin y debilidad persisten despus de la restauracin inicial del volumen circulatorio.

Frecuentemente, la necesidad de transfusiones de sangre es grande, como en la hemlisis o hemorragias intensas; las transfusiones tambin son apropiadas en el tratamiento de las anemias agudas o crnicas. Las transfusiones de sangre deben administrarse con cuidado porque tienen el potencial de afectar an ms al receptor. La diversidad de grupos sanguneos en animales y la falta de reactivos comercialmente disponibles para tipificar la sangre dificultan la hemotipologa y el cruce completos, lo cual no debe impedir el uso clnico de las transfusiones. En los equinos se conocen bien los antgenos de grupos sanguneos comnmente implicados en incompatibilidades de transfusin; mediante la seleccin de animales donantes que carezcan de esos grupos o que sean compatibles con el receptor se minimiza el riesgo de sensibilizacin del receptor contra los antgenos ms importantes. Los receptores previamente sensibilizados se pueden detectar 22

por pruebas de compatibilidad, lo cual impedir la administracin de sangre incompatible (Maynard et al., 2007).

Frecuentemente la sangre total no es el producto ideal que se puede administrar. Si lo que se necesita es reponer la capacidad de transportar el oxgeno de la sangre (cuadro 2), los concentrados de hemates son mas apropiados; si se requiere reponer volumen circulante, se pueden utilizar soluciones de cristaloides o coloides, aadiendo hemates concentrados segn se necesite. El nmero de plaquetas se eleva rpidamente despus de una hemorragia, de modo que raramente es necesario remplazarlas. Las protenas plasmticas se equilibran desde el espacio intersticial, de modo que no se necesita plasma, excepto en casos de hemorragia masiva (>1 de un volumen de sangre en 24h) (Maynard et al., 2007).

Cuadro 2. Las terapias para la recuperacin del volumen por va intravenosa y el aumento de la capacidad de transportar oxgeno de la sangre (Hinchcliff et al., 2004).
TRATAMIENTO. Soluciones isotnicas de cristaloides. DOSIS RECOMENDADA. Tres veces el volumen estimado de la prdida de sangre a un ritmo de 40-80 ml / kg / h La solucin salina hipertnica (7,2%) 4-6 ml / kg durante 10-15 min Seguido por 40 mL / kg de un solucin isotnica dentro de las 2h Hetastarch 6% Plasma equino frescocongelado 10 mL / kg 12-16 ml / kg Solucin coloide. Estimado: 7 L de plasma (70 g / l) aumenta la concentracin de protenas plasmticas en un 10 g / L en un caballo de 500 kg Polimerizado ultra purificado 10-30 ml / kg a una velocidad Vida media estimada 40 h. COMENTARIOS. Choque dosis

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de hemoglobina bovina (Oxyglobin ) Transfusin.

de 10 ml / kg/ h

Vida til de dos aos (temperatura ambiente)

12-16 ml / kg o un 20-40% de la prdida estimada de sangre a una velocidad de 20 ml / kg/ h (velocidad inicial: 0,1 ml / kg durante 10 minutos)

Puede que se tenga que repetir la transfusion debido a la destruccin de los glbulos rojos.

La cantidad de eritrocitos que se necesita para tratar la anemia se basa en el volumen necesario para aumentar el hematocrito o la concentracin de hemoglobina hasta el valor deseado. Todos los animales domsticos tienen volmenes sanguneos aproximados de 7% de su peso corporal, excepto los gatos, que tienen un volumen sanguneo aproximado del 4% de su peso corporal. Determinando el volumen sanguneo del receptor y conociendo el hematocrito del animal, puede calcularse el volumen requerido de eritrocitos que deben remplazarse. (Maynard et al., 2007). Por ejemplo caballos adultos con seguridad pueden donar 10 a 16 ml / kg (5 a 8 l para un caballo de 500 kg) de sangre entera, sin reposicin de lquidos, y hasta 25 ml / kg (12,5 l para un caballo de 500 kg) de sangre entera, cuando el volumen extrado es reemplazado con soluciones isotnicas (Hinchcliff et al., 2004).

24

11. DISTRIBUCIN GEOGRFICA.


Los parsitos que causan la piroplasmosis equina son endmicos en muchas regiones tropicales y subtropicales, que incluyen partes de frica, Medio Oriente, Asia, Amrica Central y del Sur, el Caribe y Europa. En reas templadas pueden encontrarse en menor cantidad. Se cree que T. equi tiene una distribucin ms amplia que B. caballi. Australia, Nueva Zelanda, Canad, Japn y algunos otros pases estn libres de estos parsitos (figura 8) (Rovid et al., 2010).

Figura 8. Distribucin mundial de piroplasmosis equina (Tomado de OIE, 2011).

11.1 DISTRIBUCIN EN MXICO.

En Mxico la piroplasmosis en los quidos se encuentra ampliamente distribuida en regiones denominadas de tierra caliente. La presencia de Anocentor nitens, garrapata de las orejas de los quidos en zonas tropicales es muy frecuente (figura 9) (Quiroz, 2006).

Debido a que la piroplasmosis en los equinos se encuentra en forma endmica su presencia pasa inadvertida; sin embargo cuando se introducen caballos del altiplano o de regiones del norte a las zonas costeras, se presentan

25

por lo general casos agudos con elevada mortalidad si no son tratados a tiempo (Quiroz, 2006).

Figura 9. Regiones climticas en Mxico (Tomado de www.wikipedia.com).

26

11.2 SITUACIN ACTUAL DE PIROPLASMOSIS EQUINA EN MXICO (REPORTES DE CASOS EN LOS LTIMOS 10 AOS DE MXICO A LA OIE).

Cuadro 3. Claves utilizadas por la OIE. Claves utilizadas por la OIE. 0000 _ Frecuencia de la Enfermedad. Enfermedad nunca sealada Enfermedad no sealada (se desconoce la fecha del ltimo foco) (mes/ao) Fecha en la que la enfermedad se sealo por ltima vez en aos anteriores. ? Sospecha de la enfermedad sin confirmacin. + +? Presencia sealada o conocida. Hallazgos serolgicos y/o aislamiento del agente etiolgico, sin manifestacin clnica de la enfermedad () Enfermedad limitada a determinadas zonas. ... No se dispone de informacin.

SENASICA

(Servicio

Nacional

de

Sanidad,

Inocuidad

Calidad

Agroalimentaria)

27

Cuadro 4. Claves y medidas de control utilizadas por la OIE. Claves utilizadas por la OIE. Cn Medidas de control de la enfermedad. Control de vectores invertebrados (artrpodos) Cr Control de reservorios en la fauna salvaje, control de animales silvestres reservorios de agentes patgenos M Seguimiento epidemiolgico (monitoreo) Qf Cuarentena (y otras precauciones) en la frontera, medidas de control en puestos fronterizos.

Restriccin de los desplazamientos en el interior del pas

S Sp GSu Te V Vp Z * TSu Qi

Sacrificio sanitario Sacrificio sanitario parcial Vigilancia de rutina Rastreo Vacunacin Vacunacin prohibida Zonificacin Declaracin obligatoria Vigilancia dirigida Restriccin de los movimientos en el interior del pas.

T Su

Tratamiento Vigilancia epidemiolgica

28

Cuadro 5. Situacin zoosanitaria y medidas de control, perodo enero 2001diciembre 2001(SENASICA, 2001).

Piroplasmosis equina
Focos. Casos. Muertos. Medidas de control. 36 54 1 */Te/Su/Cn/Qf/Qi

Frecuencia:+( ) Destruidos sacrificados vacunados. 0 0 0

En el ao 2001 se reportaron 36 focos en todo el pas con un total de 54 casos y un equino muerto. Las medidas de control realizadas por la SENASICA fueron las siguientes: Declaracin obligatoria, rastreo, vigilancia

epidemiolgica, control de vectores (garrapatas), cuarentena en la frontera y medidas de control en puestos fronterizos, as como la restriccin de movimientos de equinos en el interior del pas.

Cuadro 6. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo, enero 2002diciembre 2002 (SENASICA, 2002). Piroplasmosis equina
Focos. Casos. Muertos. Medidas de control. ... */Te/Su/Cn/Qf/Qi

Frecuencia: +( ) Destruidos Sacrificados Vacunados 0 0 0

En el ao 2002 no hubo reportes de la enfermedad, pero se tomaron las medidas de control del ao 2001 (Vase cuadro 5).

29

Cuadro 7. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo, enero 2003diciembre 2003 (SENASICA, 2003). Piroplasmosis equina
Focos. Casos. Muertos. Medidas de control. 100 100 1 */Te/Su/Cn/Qf/Qi

Frecuencia: +( ) Destruidos Sacrificados Vacunados 0 0 0

En el ao 2003 se reportaron 100 focos en todo el pas con un total de 100 casos y un equino muerto. Las medidas de control realizadas por la SENASICA fueron las siguientes: Declaracin obligatoria, rastreo, vigilancia

epidemiolgica, control de vectores (garrapatas), cuarentena en la frontera y medidas de control en puestos fronterizos as como la restriccin de movimientos de equinos en el interior del pas.

Cuadro 8. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo, enero 2004diciembre 2004 (SENASICA, 2004). Piroplasmosis equina
Focos. Casos. Muertos. Medidas de control. 41 46 */Te/Su/Cn/Qf/Qi

Frecuencia: +( ) Destruidos Sacrificados Vacunados 0 0 0

En el ao 2004 se reportaron 41 focos en todo el pas con un total de 46 casos y no existen datos de si hubo equinos muertos. Las medidas de control realizadas por la SENASICA fueron las siguientes: Declaracin obligatoria, rastreo, vigilancia epidemiolgica, control de vectores (garrapatas), cuarentena en la frontera y medidas de control en puestos fronterizos, as como la restriccin de movimientos de equinos en el interior del pas.

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Cuadro 9. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo, enero 2005diciembre 2005 (OIE, 2009). Piroplasmosis equina
Focos. Casos. Muertos. Medidas de control 50 72 */Qf/M/GSu/Qi/Cr/Cn

Frecuencia: +?
Destruidos. Sacrificados. Vacunados ... ...

En el ao 2005 se reportaron 50 focos en todo el pas con un total de 72 casos y no existen datos de si hubo equinos muertos. Las medidas de control realizadas por la SENASICA fueron las siguientes: Declaracin obligatoria, cuarentena en la frontera y medidas de control en puestos fronterizos, seguimiento epidemiolgico (monitoreo), vigilancia de rutina, restriccin de movimientos de equinos en el interior del pas, control de reservorios en la fauna silvestre, control de animales silvestres reservorios de agentes patgenos y control de vectores (garrapatas).

Cuadro 10. Situacin zoosanitaria y medidas de control perodo, enero 2006diciembre 2006 (OIE, 2009). Piroplasmosis equina Frecuencia: +?(Presencia de la infeccin sin signos clnicos).
Focos. Casos. Muertos. Medidas de control 19 123 */Qf/M/GSu/Qi/T/Cr/Cn Destruidos Sacrificados Vacunados

En el ao 2006 se reportaron 19 focos en todo el pas con un total de 123 casos y no existen datos de si hubo equinos muertos. Las medidas de control realizadas por la SENASICA fueron las siguientes: Declaracin obligatoria, cuarentena en la frontera y medidas de control en puestos fronterizos, seguimiento epidemiolgico (monitoreo), vigilancia de rutina, restriccin de movimientos de equinos en el interior del pas, control de reservorios en la fauna silvestre, control de animales silvestres reservorios de agentes patgenos, control de vectores (garrapatas) y tratamiento de equinos con la infeccin.

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Cuadro 11. Situacin zoosanitaria y medidas de control, perodo enero 2007diciembre 2007 (OIE, 2009). Piroplasmosis equina
Frecuencia: +?

(Presencia de la infeccin sin signos clnicos). Focos. Casos. Muertos. Medidas de control. 68 94 0 Susceptibles

Destruidos 0 Sacrificados 0 Vacunados

*/Qf/M/Te/GSu/TSu/Qi/Cr/Cn 904

En el ao 2007 se reportaron 68 focos en todo el pas con un total de 94 casos, 904 equinos susceptibles a la infeccin y no existen datos de si hubo equinos muertos. Las medidas de control realizadas por la SENASICA fueron las siguientes: Declaracin obligatoria, cuarentena en la frontera y medidas de control en puestos fronterizos, seguimiento epidemiolgico (monitoreo), vigilancia de rutina, vigilancia de rutina, restriccin de movimientos de equinos en el interior del pas, control de reservorios en la fauna silvestre, control de animales silvestres reservorios de agentes patgenos, control de vectores (garrapatas), rastreo y tratamiento de equinos con la infeccin.

Cuadro 12. Situacin zoosanitaria y medidas de control, perodo enero 2008diciembre 2008 (OIE, 2009). Piroplasmosis equina Frecuencia: +? (Presencia de

la infeccin sin signos clnicos).


Focos. Casos. Muertos. Medidas de control. 40 43 Susceptibles. 285

Destruidos 0 Sacrificados 0 Vacunados

0 */Qf/M/Te/GSu/Tsu/Qi/Cr/Cn

En el ao 2008 se reportaron 40 focos en todo el pas con un total de 43 casos y 285 equinos susceptibles a la infeccin y no existen datos de si hubo equinos muertos. Las medidas de control realizadas por la SENASICA fueron las 32

siguientes: declaracin obligatoria, cuarentena en la frontera y medidas de control en puestos fronterizos, seguimiento epidemiolgico (monitoreo), vigilancia de rutina, restriccin de movimientos de equinos en el interior del pas, control de reservorios en la fauna silvestre, control de animales silvestres reservorios de agentes patgenos, control de vectores (garrapatas), rastreo y tratamiento de equinos con la infeccin.

Cuadro 13. Situacin zoosanitaria y medidas de control, perodo enero 2009diciembre 2009 (OIE, 2009). Piroplasmosis equina Frecuencia: (Presencia de +? la

infeccin sin signos clnicos).


Focos. Casos. Muertos. Medidas de control. Susceptibles. 45 54 10 */Qf/M/Te/TSu/Qi 435

Destruidos 0 Sacrificados 0 Vacunados

En el ao 2009 se reportaron 45 focos en todo el pas con un total de 54 casos, 10 equinos muertos y 435 equinos susceptibles a la infeccin. Las medidas de control realizadas por la SENASICA fueron las siguientes: Declaracin obligatoria, cuarentena en la frontera y medidas de control en puestos fronterizos, seguimiento epidemiolgico, rastreo, vigilancia dirigida y restriccin para movilizar equinos en el interior del pas.

33

Cuadro 14. Situacin zoosanitaria y medidas de control, perodo enero 2010diciembre 2010 (OIE, 2011). Piroplasmosis equina Frecuencia: +?

(Presencia de la infeccin sin

signos clnicos).
Focos. Casos. Muertos. Medidas de control. 10 10 0 Susceptibles 79

Destruidos Sacrificados Vacunados

*/Qf/M/Te/GSu/TSu/Qi/S/T

En el ao 2010 se reportaron 10 focos en todo el pas con un total de 10 casos, 79 equinos susceptibles a la infeccin y no existen datos de si hubo equinos muertos, las medidas de control realizadas por la SENASICA fueron las siguientes: declaracin obligatoria, cuarentena en la frontera y medidas de control en puestos fronterizos, seguimiento epidemiolgico, rastreo, vigilancia dirigida, vigilancia de rutina, sacrificio sanitario, restriccin para movilizar equinos en el interior del pas y tratamientos de equinos con la infeccin.

En resumen durante los ltimos 10 aos solo SENASICA ha reportado 409 focos en todo el pas con un total de 596 casos y 12 equinos muertos habiendo hasta el ao 2008 una poblacin de 6, 350,000 equinos en el pas (Ortiz, 2010).

34

12. ANATOMA PATOLGICA.


12.1 LESIONES MACROSCPICAS.

Las lesiones observadas son las que a menudo se asocian con una enfermedad hemoltica intravascular (OIE, 2009). Membranas mucosas plidas o ictericia, la sangre puede parecer delgada y aguada (figura 10). Inflamacin del hgado con una coloracin naranja-marrn plido, oscuro, friable y bazo palpable en el examen rectal. Los riones pueden aparecer ms plido o ms oscuros de lo normal, con posibles hemorragias petequiales (figura 11). Hemorragias subepicrdicas y subendocrdicas pueden ser visibles en el tejido cardaco. Edema en las extremidades posteriores (a veces se produce en forma subaguda). Las infecciones secundarias pueden llevar a varias lesiones no especficas tales como edema, enfisema o enfermedad pulmonar (figura 12).

Figura 10. Caballo, las cavidades pleural y peritoneal. Existe una marcada ictericia generalizada. La sangre en la cavidad torcica es delgada y acuosa (anemia). (Tomado de CFSPH, 2011).

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Figura 11. Rin de caballo. La corteza es de color rojo oscuro debido a la hemoglobinuria. La mdula y pelvis muestran ictericia. (Tomado de CFSPH, 2011).

Figura 12. Corazn y pulmones de caballo. La grasa de la trquea y el pericardio muestran ictericia. Los pulmones se encuentran congestionados. (Tomado de CFSPH, 2011).

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Figura 13. Edema de los parpados con un poco de moco purulento en un caballo afectado por T. equi. (Tomado de Zobba et al., 2008).

Figura 14. Agrandamiento de los ndulos linfticos submandibulares en un caballo afectado por T. equi. (Tomado de Zobba et al., 2008).

12.2 LESIONES MICROSCOPICAS. El examen histopatolgico revela edema pulmonar, necrosis heptica,

degeneracin tubular renal y cilindros heritrocitarios, la proliferacin de las clulas fagocticas mononucleares en (Hinchcliff et al., 2004). 37 hgado, riones, los pulmones y linfondulos

13. DIAGNSTICO.
13.1 DIAGNSTICO DIFERENCIAL.

Cuadro 15. Diagnstico diferencial de las enfermedades de los caballos caracterizadas por anemia y edema (Radostits, 2002).

Enfermedad. Anemia infecciosa equina.

Epidemiologa. Transmisin por insectos (especies de Tabanus y mosquitos). Tambin por agujas hipodrmicas, instrumentos quirrgicos, hisopos, vacunas, sueros. Muchos portadores inadvertidos. Propagacin lenta en una poblacin.

Signos Clnicos. Enfermedad muy prolongada, incluso de aos. Fiebre recurrente, anemias, petequias en la mucosa, edema en labios inferiores, ictericia. Periodos de normalidad (tres semanas) entre periodos de enfermedad (tres semanas).

Pruebas Analticas. Trombocitopenia peridica. Leucopenia ligera, anemia. Prueba diagnstica de inmunodifusin en gel de agar y otras pruebas serolgicas.

Prpura hemorrgica.

Espordica. Normalmente secuelas de infeccin de vas respiratorias.

Inflamacin subcutnea grave, edema fro. Principalmente cara y hocico, tambin en reas ventrales, no necesariamente simtrico o en reas bajas. Piel normal. Petequias de la mucosa siempre presentes. La

Leucocitosis, neutrofilia, no disminucin del recuento.

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frecuencia cardaca es de 100, fiebre leve y la mayora de los animales mueren en pocos das. Arteritis viral equina Enzotica en algunos pases. Animales de todas las edades. Propagacin por ingestin/inhalacin. Hipertermia. Enfermedad grave, secrecin nasal serosa, ingurgitacin y petequias de las mucosas. Edema no extenso en reas ventrales, miembros, prepucio, escroto. Aborto en yeguas. Edema Espordico. Inicio agudo, inquietud, fiebre moderada. Placas edematosas y Ninguna. Cultivo viral. Muchas pruebas serolgicas. Leucopenia intensa.

angioneurtico. Respuesta a inyeccin, por ejemplo penicilina,

picaduras de insectos bullas a menudo o alergia por contacto o ingestin. muy grandes, principalmente alrededor de la cabeza, tambin en el cuerpo. Recuperacin muy rpida entre 24 y 48 horas. Insuficiencia cardiaca congestiva. Espordica. Soplo de insuficiencia mitral o tricuspdea, u otros No hay anemia.

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soplos. Estrongilosis. Todos los caballos que pastan se infectan. La enfermedad afecta a caballos en zonas donde no se lleva control, sobre todos en animales jvenes descuidados y en hembras de cra. Debilidad, poco peso, anemia. Algunos casos muestran agresividad, edema ventral. Clico por aneurisma verminoso y clico tromboemblico como secuelas frecuentes. Buena respuesta a antihelmnticos. Examen fecal en busca de huevos de parsitos. Ms de 1000 huevos por gramo es una cantidad importante.

El diagnstico diferencial para piroplasmosis incluye: Anemia infecciosa equina, durina, peste equina africana, prpura hemorrgica y varias intoxicaciones por plantas y productos qumicos (Rovid et al., 2010).

13.2 DIAGNSTICO DE LABORATORIO.

La introduccin de los animales portadores en reas con prevalencia de garrapatas vectoras puede conducir a una distribucin epidmica de la enfermedad (OIE, 2006).

Identificacin del agente: Los caballos infectados se pueden identificar mediante la demostracin de los parsitos en sangre teida o en frotis de rganos. Los mtodos de tincin tipo Romanovsky, como el de Giemsa, dan los mejores resultados. El bajo nivel de parasitemia en los animales portadores hace muy difcil la deteccin de los parsitos, especialmente en el caso de las infecciones por B. caballi, aunque, a veces, se pueda demostrar su presencia utilizando una tcnica de frotis de sangre (OIE, 2006). 40

Se han elaborado y se contina extendiendo el uso de tcnicas moleculares para la deteccin de T. equi y B. caballi basadas en pruebas de PCR, orientadas al gen 18S rARN. Se examinan los eritrocitos para investigar la presencia de los parsitos. Se ha demostrado que estas pruebas son muy sensibles y especficas y prometen desempear un papel muy importante en el diagnstico de las infecciones (OIE, 2006).

Pruebas serolgicas: La mejor manera de demostrar la infeccin en los animales portadores es estudiar sus sueros para analizar la presencia de anticuerpos especficos (OIE, 2006).

En la actualidad, las pruebas de FC, inmunofluorescencia indirecta (IFI) y enzimoinmunoensayo de competicin (C-ELISA) son las ms utilizadas para diagnosticar caballos de importacin. La prueba de FC, utilizada durante muchos aos como la prueba fundamental, ha sido remplazada por las pruebas de IFI y CELISA. Se ha demostrado que estas pruebas son ms efectivas para la deteccin de los animales con una infeccin duradera y los animales tratados con medicamentos antiparasitarios. Dichos animales puede ser negativos a la FC y, an as, estar infectados. Se ha demostrado que las pruebas IFI y C-ELISA son muy especficas para cada una de las dos especies de agentes causantes de la piroplasmosis. Las tcnicas de C-ELISA indirectas tambin se pueden utilizar para la deteccin de las mencionadas especies en caballos infectados, aunque se da reaccin cruzada entre T. equi y B. caballi. La aplicacin de protenas recombinantes de los merozotos de T. equi y B. caballi en pruebas de diagnstico parece ser muy prometedora para determinar con precisin la infeccin por piroplasmosis (OIE, 2006).

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13.3 TCNICAS DE DIAGNSTICO.

13.3.1. IDENTIFICACIN DEL AGENTE.

Los caballos infectados pueden identificarse demostrando los parsitos en frotis teidos de sangre o de rganos, obtenindose la primera preferiblemente de capilares cutneos durante la fase aguda de la enfermedad. Los mtodos de tincin de tipo Romanovsky, como el de Giemsa, normalmente proporcionan los mejores resultados. Sin embargo, en los casos de infeccin por B. caballi, la parasitemia es muy baja y difcil de detectar. Los analistas con experiencia pueden a veces detectar una parasitemia muy baja utilizando una tcnica de frotis gruesos de sangre. Se preparan extensiones densas colocando una pequea gota de sangre (aproximadamente 50 l) sobre un porta de vidrio limpio. Esta gota se seca al aire, se fija a 80C durante 5 minutos, y se tie con Giemsa al 5% por 2030 minutos (OIE, 2006).

A veces es deseable una identificacin precisa de la especie, ya que con frecuencia se presentan infecciones mixtas de T. equi y de B. caballi. (OIE, 2006).

La identificacin mediante el examen de frotis sanguneos no solo es difcil sino tambin imprecisa, por lo que son preferibles los mtodos serolgicos. Sin embargo, se pueden encontrar falsos negativos y falsos positivos con las pruebas serolgicas. En tales casos, aunque constituye un ejercicio incmodo y costoso, la transfusin de sangre completa es una tcnica muy til para determinar la verdadera situacin. Se transfieren a un caballo susceptible, preferiblemente esplenectomizado, grandes cantidades de sangre completa (500 ml). Este animal se mantiene luego bajo una observacin estrecha para detectar signos clnicos de la enfermedad. El diagnstico se confirma por la presencia de parsitos en sus eritrocitos (OIE, 2006).

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En una tcnica adicional, se deja que una garrapata especfica no infectada se alimente sobre un animal sospechoso, y la presencia del microorganismo puede identificarse en la garrapata misma, o mediante la transmisin del microorganismo a otro animal susceptible por medio de la garrapata vector (OIE, 2006).

Para identificar a los portadores de los parsitos, una alternativa que complementa los mtodos anteriores puede ser el lograr establecer cultivos in vitro de T. equi y de B. caballi. Se han logrado cultivar parsitos de B. caballi de la sangre de dos caballos que dieron negativo a la prueba de FC. De modo anlogo, se ha podido cultivar T. equi a partir de caballos que no mostraban ninguna parasitemia patente al tiempo de iniciacin de los cultivos (OIE, 2006).

Se han descrito tcnicas moleculares para la deteccin de T. equi y B. caballi. Estas tcnicas son PCR especfica para especie, orientada sobre todo al gen 18S rARN. Versiones ms refinadas de esa tcnica incluyen PCR anidada, la amplificacin isotrmica mediante bucles (LAMP), a la que se atribuye una mayor sensibilidad; la muy sensible prueba de transferencia lineal inversa (RLB) y la PCR mltiple para la deteccin e identificacin simultneas de las especies Theileria y Babesia en los caballos (OIE, 2006).

13.3.2. PRUEBAS SEROLGICAS.

Resulta muy difcil diagnosticar la presencia de los microorganismos en animales portadores mediante un examen microscpico de los frotis de sangre. Adems, este sistema no es prctico a gran escala. Por consiguiente, se recomienda el anlisis serolgico de los animales como el mtodo preferido de diagnstico, en especial cuando los caballos se destinan a la importacin a pases donde no se presenta la enfermedad, pero en los que est presente el vector (OIE, 2006).

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Los sueros se deben recoger y enviar a los laboratorios de diagnstico siguiendo las especificaciones de dichos laboratorios. Los caballos para la exportacin que hayan sido sometidos a pruebas serolgicas y que estn libres de la infeccin deben ser mantenidos en ausencia de garrapatas para evitar infecciones accidentales (OIE, 2006).

En el diagnstico de la piroplasmosis se han utilizado varias tcnicas serolgicas, como la prueba de FC, la prueba IFI, y ELISA. Adems,

recientemente se ha descrito una prueba sencilla y rpida de inmunocromatografa para T. equi, que podra resultar muy til para el anlisis masivo de muestras de suero (OIE, 2006).

13.3.2.1 Prueba de inmunofluorescencia indirecta con anticuerpo (prueba ordenada para el mercado internacional).

La prueba de IFI se ha aplicado con xito en el diagnstico diferencial de infecciones por T. equi y B. caballi. El reconocimiento de una reaccin fuertemente positiva es relativamente sencillo, pero, para cualquier diferenciacin entre una reaccin positiva dbil y una negativa dbil, se requiere una experiencia considerable de cara a su interpretacin. Se ha ofrecido una descripcin detallada del protocolo de la prueba IFI (OIE, 2006).

Produccin de antgeno.

Se recoge sangre para antgeno de caballos con parasitemia creciente; lo ideal es 25. Los animales portadores que ya han producido anticuerpos no son adecuados para la produccin de antgeno. Se recoge sangre (unos 15 ml) en 235 ml de solucin salina tamponada con fosfato (PBS), pH 7,2. Los eritrocitos se lavan tres veces con PBS fro (1.000 g durante 10 minutos a 4C). El sobrenadante y la capa celular blanca de leucocitos se eliminan despus de cada 44

lavado. Despus del ltimo lavado, los eritrocitos empaquetados en el precipitado despus de la centrifugacin se reconstituyen al volumen normal inicial con una solucin al 4% de la fraccin V de seroalbmina bovina preparada en PBS, es decir, el volumen de clulas empaquetadas se considera un 30% del original, de modo que alrededor de un tercio sean eritrocitos. Si el volumen original era 15 ml, entonces 5 ml de eritrocitos empaquetados + 10 ml de seroalbmina bovina al 4% en PBS constituyen el antgeno. Despus de mezclar bien, se coloca el antgeno en pocillos preparados sobre un porta excavado mediante un sacabocados o una jeringa. Alternativamente, se pueden extender cuidadosamente las clulas sobre portas para microscopio, cubriendo por completo el porta con una capa uniforme y moderadamente gruesa. Estos portas se dejan secar, se envuelven en papel suave y se sellan en bolsas de plstico o se envuelven en papel de aluminio, guardndose a 20 C hasta por un ao (OIE, 2006).

Procedimiento de la prueba.

i) Se ensaya cada muestra de suero frente a antgeno de B. caballi y de T. equi. ii) Antes de su uso, se retiran los portas congelados de su lugar de mantenimiento a 20 C y se incuban a 37 C durante 10 minutos. iii) Los frotis de antgeno se sacan luego de su cubierta protectora y se fijan en acetona con hielo seco (20 C) durante 1 minuto. Existen portas comerciales disponibles que estn prefijados. iv) Si se trata de frotis sobre la superficie completa del porta, se forman cuadrculas sobre el frotis de antgeno con esmalte para uas o un medio de montaje de secado rpido (como Cytoseal) (se dibujan 1421 cuadrculas en total, es decir 23 filas de 7 en cada una). v) Se diluyen de 1/80 a 1/1280 con PBS los sueros a ensayar y los sueros de control positivo y negativo. Se incluyen los sueros de control negativo y positivo en cada prueba.

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vi) Se aplican los sueros (10 l de cada uno) a las diluciones apropiadas en los diferentes pocillos o cuadrculas sobre el frotis de antgeno, se incuba 30 minutos a 37C, y se lava varias veces con PBS y una vez con agua. vii) Se diluye en PBS una inmunoglobulina anti-caballo preparada en conejos y conjugada con isotiocianato de fluorescena (este conjugado est disponible comercialmente) y se aplica al frotis, que se incuba y se lava luego como antes. viii) Despus del lavado final, se colocan en cada frotis dos gotas de una solucin que contenga glicerina y PBS a partes iguales, y se monta con un cubre para la observacin microscpica. ix) Luego se examinan los frotis al microscopio para observar parsitos fluorescentes. Por lo general, los sueros diluidos 1/80 o ms, que den fluorescencia fuerte, se consideran positivos, aunque hay que tener tambin en cuenta el tipo de fluorescencia que presentan los controles positivos y negativos (OIE, 2006).

13.3.2.2 Enzimoinmunoensayo.

En los ltimos aos se ha descrito la produccin de varios antgenos recombinantes para su uso en tcnicas de ELISA. Se han producido protenas recombinantes de T. equi (EMA-2, Be82, B158) y B. caballi (RAP-1, Bc48, Bc134) en Escherichia coli en clulas de insectos mediante baculovirus. Los antgenos recombinantes producidos en E. coli o por baculovirus presentan la ventaja obvia de evitar la necesidad de infectar caballos para la produccin de antgenos y de eliminar las reacciones cruzadas que se han experimentado con los antgenos crudos de la prueba ELISA. Tambin suponen una fuente lgica de antgeno para su distribucin y estandarizacin a nivel internacional (OIE, 2006).

Los ELISA indirectos en los que se utiliza EMA-2 y Bc48 han mostrado una gran especificidad y sensibilidad en la deteccin de anticuerpos en caballos

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infectados. Los resultados iniciales de estas pruebas son prometedores y est en curso la validacin adicional de las pruebas (OIE, 2006).

La protena EMA-1, y un anticuerpo monoclonal especfico (MAb) que define el eptopo de esta protena superficial del merozoto, se han utilizado en ensayos C-ELISA para T. equi. Con este mtodo se evita el problema de la pureza del antgeno, ya que la especificidad de esta prueba depende solo de la especificidad definida por el eptopo de T. equi para el MAb. En la deteccin de anticuerpos frente a T. equi, se observ una correlacin del 94% entre las pruebas C-ELISA y FC. En los sueros que dieron resultados discrepantes se comprob su capacidad para inmunoprecipitar los productos de la traduccin in vitro del ARN mensajero del merozoto de T. equi marcados radiactivamente con 35S-metionina. Sin embargo, los resultados de la inmunoprecipitacin con las muestras de suero que fueron negativos en el C-ELISA y positivos en la FC no fueron concluyentes. Los datos limitados hasta la fecha parecen sugerir que la prueba C-ELISA es especfica para T. equi. Esta prueba C-ELISA fue tambin recientemente validada para T. equi en Marruecos y en Israel, presentando una similitud del 91% y del 95,7%, respectivamente, con la prueba IFI. Se ha elaborado un mtodo C-ELISA similar utilizando la protena1 recombinante (RAP-1) de B. caballi, que es un componente asociado al orgnulo secretor (rhoptry), y un MAb que reacciona con un pptido del eptopo del antgeno de 60 kDa de B. caballi. Los resultados de 302 muestras de suero ensayados por C-ELISA y FC mostraron un 73% de concordancia. De las 72 muestras que fueron negativas a la FC y positivas al CELISA, 49 (el 67%) fueron positivas a la IFI, mientras que cuatro de las cinco muestras que fueron positivas a la FC y negativas al C-ELISA fueron positivas en la prueba IFI (OIE, 2006).

Se ha descrito un procedimiento para C-ELISA en la piroplasmosis equina y se ha utilizado en estudios adicionales de validacin. La aparente especificidad de los ensayos C-ELISA para T. equi y B. caballi cae dentro del 92,2%99,5% cuando se utilizan sueros de 1.000 caballos que se suponen libres de 47

piroplasmosis. La sensibilidad diagnstica aparente de ambas pruebas aplicadas a ms de 1.000 caballos de origen extranjero y de estado infeccioso desconocido origin la deteccin neta de un 1,1% (T. equi) y un 1,3% (B. caballi) ms de animales seropositivos que por la prueba de la FC, segn lo confirmado mediante la prueba de la IFI por dos observadores independientes. En un estudio similar con 645 caballos de origen extranjero que se ensayaron con fines de importacin y preimportacin se usaron sueros tratados con calor (a 58 C durante 30 minutos dio como resultado un 3.6% (T. equi) y un 21% (B. caballi) ms de animales seropositivos detectados mediante el C-ELISA que mediante la FC; ambas pruebas de C-ELISA fueron muy reproducibles pocillo a pocillo, placa a placa y da a da, con variaciones globales de 1,2% y 1,6%, para las pruebas de T. equi y B. caballi, respectivamente (OIE, 2006).

13.3.2.3 Protocolo de C-ELISA.

Los National Veterinary Services Laboratories del Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (USDA) han ofrecido una descripcin detallada de la

produccin de antgeno y el protocolo de la prueba. Existe un kit comercial disponible que se basa en los mismos antgenos y anticuerpos monoclonales (VMRD, Inc. Pullman, Washington USA, http://www.vmrd.com/).

Soluciones

Tampn de revestimiento de antgeno: se prepara el volumen necesario de tampn de revestimiento de antgeno usando las siguientes cantidades de reactivos para cada litro: 2,93 g de bicarbonato sdico; 1,59 g de carbonato sdico; suficiente agua bidestilada para disolver lo anterior, y se lleva a un volumen de 1 litro con agua bidestilada. Se ajusta el pH a 9,6.

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Solucin de lavado para C-ELISA (diluyente de alta salinidad): se prepara el volumen necesario de solucin de lavado para C-ELISA usando las siguientes cantidades de reactivos para cada litro: 29,5 g de cloruro sdico; 0,22 g de fosfato sdico monobsico; 1,19 g de fosfato sdico dibsico; 2 ml de Tween 20; suficiente agua bidestilada para disolver lo anterior, y se lleva a un volumen de 1 litro con agua bidestilada. Se mezcla bien. Se ajustar el pH a 7,4. Se esteriliza en autoclave a 121C (OIE, 2006).

Produccin de antgeno

Un cultivo congelado de clulas transformadas de E. coli se inocula a una dilucin 1/10,000 en cualquier medio lquido no selectivo estndar para permitir el crecimiento bacteriano (por ejemplo, caldo de Luria) y que contenga carbenicilina (100 g/ml) e isopropil-tiogalactsido (IPTG, 1 mM). Los cultivos se incuban en un agitador orbital a 200 rpm a 37C toda la noche. Las clulas crecidas despus de ese perodo se recogen por centrifugacin (5.000 g durante 10 minutos), se lavan con tampn Tris-HCl 50 mM y cido etilndiamino tetra actico (EDTA), pH 8,0, y se colectan de nuevo como antes. (El antgeno est disponible en los National Veterinary Services Laboratories, P.O. Box 844, Ames, Iowa 50010, USA).

Las clulas se resuspenden al 10% de su volumen original en el tampn Tris-ClH, al que se aade 1 mg/ml de lisozima, y se mantienen en hielo 20 minutos. Luego se aade el detergente Nonidet P-40 (NP-40) a una concentracin final del 1% (v/v), se agita con un vrtex, y se deja la muestra en hielo 10 minutos. El material se sonica a continuacin con cuatro ciclos de 4 segundos a 100 vatios, en hielo, con intervalos de 2 minutos entre cada ciclo de sonicacin para evitar el calentamiento de la muestra. El sonicado se centrifuga a 10,000 g durante 20 minutos. El sobrenadante resultante se distribuye en tubos de microcentrfuga en alcuotas de 0,5 ml y puede conservarse durante aos a 70C. La presencia de los antgenos bacterianos heterlogos en el hospedador no interfiere en la unin con los anticuerpos especficos equinos antipiroplasma o la unin de los pares de 49

MAb a los epitopos de los antgenos recombinantes expresados mediante los procedimientos siguientes. Se controla la calidad de los sobrenadantes que contienen el antgeno titulndoles con sus anticuerpos emparejados y con antisueros equinos monoespecficos de referencia para verificar un nivel de expresin adecuado y una especificidad completa para la especie homloga del agente de la piroplasmosis. Los controles normales de suero (suero negativo) no deben interferir con la unin de los MAb, o sueros equinos de referencia, con la preparacin de antgeno expresada (OIE, 2006).

Procedimiento de la prueba. i) Se preparan las placas de microtitulacin revistiendo los pocillos con 50 l de antgeno de T. equi o de B. caballi diluido en tampn de revestimiento de antgeno, Se determina la dilucin usada por tcnicas estndar de titulacin serolgica. La placa se sella con su tapadera, se guarda durante la noche a 4C y se congela a 70C. Las placas se pueden guardar a 70C hasta 6 meses. ii) Los MAb de T. equi o anti-B. caballi y el conjugado de peroxidasa y anticuerpos secundarios se diluyen, segn las instrucciones del fabricante, en el momento en que vayan a utilizarse en un CELISA, con el tampn de dilucin de los anticuerpos (proporcionados con el kit de la prueba). iv) Los sueros control y las muestras del suero de prueba se diluyen a un 1/2 con tampn para dilucin de suero antes de aadir 50 l de sueros a los pocillos. Se ensaya cada muestra de suero desconocida en pocillos individuales o duplicados. Los sueros de control positivo y los pocillos vacos se ensayan por duplicado, mientras que los sueros control negativos se ensayan por triplicado o en diferentes partes de la placa. Las placas se cubren e incuban a temperatura ambiente (21 25C) durante 30 minutos en una cmara hmeda y luego se lavan tres veces con solucin de lavado para C-ELISA v) Se aade a cada pocillo una dilucin de peroxidasa secundaria conjugada con IgG anti-ratn marcada con biotina (50 l/pocillo). Las placas se cubren e incuban

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30 minutos a temperatura ambiente en una cmara hmeda y luego se lavan tres veces con solucin de lavado para C-ELISA. vi) Se aade a cada pocillo una dilucin de peroxidasa secundaria conjugada con IgG anti-ratn (50 l/pocillo). Las placas se cubren e incuban 30 minutos a temperatura ambiente en una cmara hmeda y luego se lavan tres veces con solucin de lavado para C-ELISA. vi) Se aade a cada pocillo una dilucin de peroxidasa secundaria conjugada con IgG anti-ratn (50 l/pocillo). Las placas se cubren e incuban 30 minutos a temperatura ambiente en una cmara hmeda y luego se lavan tres veces con solucin de lavado para C-ELISA. vii) A todos los pocillos se aade un substrato cromgeno para el enzima (50l/pocillo). Las placas se incuban cubiertas durante 15 minutos a temperatura ambiente (2125C) durante el revelado del color. viii) El desarrollo del color se detiene aadiendo a todos los pocillos 50l de solucin de parada y se leen las placas de forma inmediata mediante un lector de placas. ix) Las placas se leen a 620, 630 o 650 nm de longitud de onda (OD). Se calcula la OD590 media del par de pocillos para cada uno de todos los sueros control y los pocillos vacos. Para que un ensayo sea vlido, la media de los controles debe producir un OD > 0.300y < 2.000. La media del control positivo debe producir una inhibicin de 40%. x) El porcentaje de inhibicin [%I] se calcula del modo siguiente: %I = 100 [(OD de la muestra 100) (OD de la media del control negativo)]. xi) Si la muestra de prueba produce una inhibicin 40%, se considera positiva; si produce una inhibicin <40%, se considera negativa (OIE, 2006).

13.3.2.4. Fijacin del complemento (prueba prescrita para el mercado internacional).

La prueba de FC se ha utilizado en el pasado en algunos pases para certificar caballos de importacin. Se dispone de una descripcin detallada de la produccin 51

del antgeno y del procedimiento de la prueba, como la ofrecida por el Departamento de Agricultura de los Estados Unidos (USDA). La prueba de FC no identifica a todos los animales infectados, especialmente si han sido tratados, y debido a las reacciones anti-complementarias de algunos sueros, y a la incapacidad de la IgG (T) (el principal isotipo de las inmunoglobulinas de los quidos) para fijar complemento de cobaya. De ah que tambin se acepte el uso de la IFI y de C-ELISA, en lugar de la de FC como las prescritas para el mercado internacional (OIE, 2006).

Soluciones.

Solucin de Alsever: se prepara 1 litro de solucin de Alsever disolviendo 20,5 g de glucosa; 8,0 g de citrato sdico; y 4,2 g de cloruro sdico en suficiente cantidad de agua. Se ajusta el pH a 6,1 utilizando cido ctrico y se ajusta hasta 1 litro con agua destilada. Se esteriliza por filtracin. Stock de tampn veronal (5 ): se disuelven los siguientes componentes en 1 litro de agua destilada: 85,0 g de glucosa; 3,75 g de 5,5 dietil barbiturato sdico; 1,68 g de cloruro magnsico (MgCl2.6H2O); y 0,28 g de cloruro clcico. Se disuelven 5,75 g de cido 5,5 dietil barbitrico en 0,5 litros de agua destilada caliente (casi hirviendo). Se enfra esta solucin de cido y se aade a la anterior solucin de sales. Se lleva el volumen a 2 litros con agua destilada y se guarda a 4 C. Para preparar una solucin de trabajo, se aade una parte de solucin stock a cuatro partes de agua destilada. El pH final debe estar entre 7,4 y 7,6. (OIE, 2006).

Produccin de antgeno.

La sangre se obtiene a partir de caballos con alta parasitemia (por ejemplo, 37% para B. caballi y 6085% para T. equi), y se mezcla con un volumen idntico de solucin de Alsever como anticoagulante. Cuando los eritrocitos se han decantado al fondo del recipiente, se retira el sobrenadante que contiene el plasma y la solucin de Alsever, y la capa de leucocitos. Los eritrocitos se lavan varias veces 52

con tampn veronal fro y luego se lisan. El antgeno se recoge del lisado por centrifugacin a 30.900 g durante 30 minutos.

El antgeno recuperado se lava varias veces en tampn veronal fro mediante centrifugacin a 20.000 g por 15 minutos. Se aade como estabilizador polivinil pirrolidona 40.000 (15% [p/v]) y la preparacin se mezcla bien en un agitador magntico durante 30 minutos, se tamiza a travs de una capa doble de gasa estril, se distribuye en volmenes de 2 ml y se liofiliza. El antgeno se puede conservar a continuacin por debajo de 50 C durante varios aos (OIE, 2006).

Procedimiento de la prueba.

i) Deben comprobarse la especificidad y la potencia de cada lote de antgeno frente a los antisueros estndar de especificidad y potencia conocidas. Se determinan tambin las diluciones ptimas del antgeno en una titulacin primaria por el sistema de tablero de ajedrez o tabla de doble entrada. ii) Los sueros de ensayo se inactivan 30 minutos a 56 C (los sueros de asnos y mulas se inactivan a 62,5 C durante 35 minutos) y se prueban a diluciones de 1/5 a 1/5120. Para todas las diluciones se utiliza tampn veronal. iii) El complemento se prepara y se titula espectrofotomtricamente para determinar la dosis hemoltica media (CH50) (45) y se utiliza en la prueba a valores de 5 veces CH50. El sistema hemoltico consta de partes iguales de una suspensin al 2% de eritrocitos de oveja (RBC) y de tampn veronal con 5 dosis hemolticas mnimas (MDH) de hemolisina (amboceptor). Algunos laboratorios utilizan el 100% de la dosis hemoltica, que da una sensibilidad equivalente. iv) La prueba se ha adaptado a las placas de microtitulacin. El volumen total del ensayo es 0,125 ml, formado por fracciones iguales (0,025 ml) de antgeno, complemento (cinco veces CH50) y suero diluido. La incubacin se realiza a 37 C durante 1 hora. v) Se aade una fraccin doble (0,05 ml) del sistema hemoltico y se incuban las placas durante otros 45 minutos a 37 C con agitacin despus de 20 minutos. 53

vi) Las placas se centrifugan a 200 g durante 1 minuto antes de proceder a la lectura sobre un espejo. vii) Se considera como resultado positivo una lisis del 50%, y el ttulo es la dilucin mayor de suero que produce un 50% de lisis. Un ttulo de 1/5 se considera como suero positivo. En cada ensayo se debe incluir un juego completo de controles (sueros positivos y negativos) as como un control de antgeno preparado de eritrocitos (RBC) de un caballo normal (no infectado).

Las muestras que no dan la reaccin del complemento se examinan por la prueba de la IFI. Los sueros de asno son frecuentemente negativos para la reaccin del complemento (OIE, 2006).

14. TRATAMIENTO.
Las opciones de tratamiento y la probabilidad de xito vara en funcin con el tratamiento que se est dando a un caballo, ya sea para resolver los signos clnicos de la enfermedad o eliminar por completo esterilizar al caballo de todos los parsitos en el cuerpo. El objetivo de la limpieza de la infeccin es eliminar el riesgo de transmisin del caballo. (Traub-Dargatz et al., 2010).

Como ya se mencion anteriormente T. equi es menos susceptible al tratamiento que B. caballi. La recuperacin clnica se alcanza generalmente, pero las infecciones por T. equi son difciles de eliminar con los frmacos actualmente disponibles. Los caballos que se recuperan de la enfermedad clnica suele ser portadores, probablemente de por vida (Hinchcliff et al., 2004).

Imidocarb es el frmaco de eleccin para el tratamiento de la piroplasmosis. Para B. caballi, dos dosis de 2,2 mg / kg I.M. en intervalos de 24 h se recomienda: T. equi pueden ser tratados con cuatro dosis de 4 mg / kg I.M. con intervalos de 72 horas. Esta dosis, sin embargo, estn cerca de los niveles txicos y pueden ser perjudiciales para el propio animal. El medicamento slo debe ser administrado 54

por va intramuscular. Los efectos adversos pueden ser tratados con sulfato de atropina. El tratamiento combinado con buparvaquone (4 mg / kg IV) e imidocarb (4 mg / kg IM) se ha sugerido para la eliminacin de T. equi (Hinchcliff et al., 2004)

Otras terapias para B. caballi incluyen diminazeno (11 mg / kg IM cada 24 horas) para dos tratamientos y amicarbalida (10 mg / kg) como dosis nica. Los caballos deben ser monitoreados de cerca para detectar signos de toxicidad, incluyendo las reacciones locales en el sitio de inyeccin, salivacin, clicos, alteraciones de la motilidad gastrointestinal, enfermedad heptica, enfermedad renal y muerte (Wilson, 2011).

Para los potros recin nacidos, la informacin sobre la seguridad y la eficacia de estos frmacos es insuficiente (Wilson, 2011). Los burros pueden ser especialmente sensibles a los efectos adversos de imidocarb (Wilson, 2011).

14.1 TRATAMIENTO CRNICO

Caballos con infeccin crnica por B. caballi se puede eliminar con imidocarb (4 mg / kg/ IM/ cada 72 h) para cuatro dosis (Wilson, 2011). Se ha informado que no hay tratamiento eficaz para la erradicacin del estado de portador de T. equi, pero la dosis mencionada se encuentra bajo investigacin (Wilson, 2011).

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15. MEDIDAS DE CONTROL.


15.1 NOTIFICACIN A LAS AUTORIDADES.

La piroplasmosis debe notificarse ante la Organizacin Mundial de Sanidad Animal (OIE, por sus siglas en francs). Los requisitos para la notificacin de la enfermedad a las naciones miembro de la OIE y las pautas de

importacin/exportacin pueden consultarse en el Cdigo Sanitario para los Animales Terrestres de la OIE

[http://www.oie.int/esp/normes/mcode/es_sommaire.htm]. Los veterinarios que detecten un caso de piroplasmosis deben seguir las pautas nacionales y/o locales para la notificacin y las pruebas de diagnstico correspondientes (Rovid et al., 2010).

Los desinfectantes y la higiene no son generalmente efectivos contra la propagacin de las infecciones transmitidas por garrapatas. Sin embargo, es fundamental eliminar el contacto con garrapatas y evitar la transferencia de sangre de un animal a otro. En reas endmicas, el uso de acaricidas, junto con la evaluacin frecuente del animal y la remocin de cualquier garrapata (la transmisin parasitaria no ocurre de inmediato) pueden ayudar a prevenir la infeccin (Rovid et al., 2010).

Si se encuentra un animal infectado en una regin libre de piroplasmosis, el animal debe ser puesto bajo cuarentena y debe permanecer lejos del contacto con garrapatas. Se deben tomar medidas de precaucin estrictas para evitar el contacto entre los caballos y las garrapatas, siempre que ingresen portadores a un pas libre de piroplasmosis para una competencia internacional. Estas medidas pueden incluir la fumigacin de los establecimientos con acaricidas en forma repetida, la eliminacin de la vegetacin de estas reas, y la permanencia de los caballos infectados en el rea de cuarentena, excepto durante la competencia y dems actividades especficas. Las mascotas, la fauna silvestre y los roedores 56

deben ser excluidos de esas reas. Los caballos deben ser revisados diariamente para detectar garrapatas y pueden ser tratados con aspersiones y champs con acaricidas. Las garrapatas podran estar escondidas en los desechos de los animales, que se deben destruir para no permitir que salgan del rea de cuarentena. Se pueden utilizar caballos centinela para controlar la efectividad de estos controles (Rovid et al., 2010).

El tratamiento puede suprimir los signos clnicos, aunque los tratamientos disponibles en la actualidad no son efectivos para eliminar T. equi de los portadores. Algunos estudios han sugerido que el tratamiento podra eliminar al B. caballi de los caballos infectados; sin embargo, en un estudio reciente, este organismo persisti en los portadores an despus de recibir un tratamiento con una alta dosis de imidocarb. Aunque esta droga podra eliminar los parsitos en forma temporaria y proporcionar resultados negativos transitorios en PCR, se encontr ADN de B. caballi en caballos despus de la finalizacin del tratamiento. No existe una vacuna para B. caballi ni para T. equi (Rovid et al., 2010).

15.1.1. NOTIFICACIN INMEDIATA.

Este sistema de alerta est dirigido a los Servicios Veterinarios de los pases miembros para que se tomen las medidas protectoras necesarias tan rpidamente como sea posible para prevenir la introduccin de patgenos provenientes de los pases infectados.

La

notificacin inmediata tiene por objeto alertar a la comunidad

internacional sobre eventos excepcionales desde el punto de vista epidemiolgico en algn o algunos de los pases miembros. Para mejorar este Sistema de Alerta Temprana de la OIE, los eventos de significancia epidemiolgica que deben ser notificados inmediatamente (en un plazo de 24 horas) son los siguientes:

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La aparicin de una enfermedad y/o infeccin de la lista de la OIE, en un pas, zona o compartimento. (El trmino compartimento designa una o varias explotaciones con un mismo sistema de gestin de la bioseguridad, que contienen una subpoblacin animal con un estatus sanitario particular respecto de una enfermedad o enfermedades determinadas contra las cuales se han aplicado las medidas de vigilancia, control y bioseguridad requeridas para el comercio internacional. Ejemplo: granjas de avicultura comercial y aves de traspatio). La reaparicin de una enfermedad y/o infeccin de la lista de la OIE en un pas, zona o compartimento, despus de haber declarado que se haba extinguido el foco. La aparicin de una nueva cepa del agente etiolgico de una enfermedad de la lista de la OIE en un pas, zona o compartimiento. Un aumento repentino e inesperado en la morbilidad o mortalidad por una enfermedad de la lista de la OIE prevalente en el pas. Evidencia de un cambio en el comportamiento epidemiolgico enfermedad de la lista de la OIE, como nuevos de una

hospederos susceptibles,

aumento de virulencia, mutacin del agente etiolgico, en particular si hay impacto zoontico.

Adems de las notificaciones inmediatas, los pases proporcionarn informacin sobre las medidas adoptadas para prevenir la propagacin de las enfermedades, en particular sobre las medidas de cuarentena y restricciones en materia de circulacin de animales, productos de origen animal, productos biolgicos y objetos que, por su ndole, pudieran ser responsables de la transmisin de la enfermedad. En el caso de enfermedades transmitidas por vectores, se debern indicar tambin las medidas adoptadas para controlarlos.

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En Mxico, la Direccin General de Salud Animal, a travs del Sistema de Vigilancia Epidemiolgica es la responsable de recabar, analizar la informacin y enviar las notificaciones e informes a la OIE. Los responsables de informar sobre la sospecha o confirmacin de las enfermedades son los responsables de los laboratorios de diagnstico zoosanitario, Mdicos Veterinarios, servidores pblicos, productores, transportistas; personal de farmacias y clnicas veterinarias; personal de Escuelas Tcnicas, Escuelas y Facultades de Medicina Veterinaria, as como de Centros de Investigacin; Mdicos Veterinarios de establecimientos para el sacrificio de animales, puntos de verificacin de la movilizacin de animales y productos, Colegios y Asociaciones de M.V.Z. y pblico en general (Mateos, 2005).

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CONCLUSIONES.
La piroplasmosis equina es una infeccin parasitaria que deteriora rpidamente a los animales que la padecen ya sea su fase aguda o crnica, estn ligadas una a la otra y si no se atiende lo antes posible puede progresar a una fase crnica, y con esto en un deterioro en la calidad de vida, pudiendo incluso causar la muerte del paciente.

Es por esto que es de suma importancia que el mdico veterinario aprenda a utilizar de manera correcta los elementos que tiene a su alcance, como identificacin del agente y las pruebas serolgicas necesarias para poder llegar a un diagnstico y rpidamente implementar un tratamiento adecuado. Se debe recordar que esta enfermedad es de notificacin inmediata ante las autoridades de nuestro pas, y que muchos mdicos veterinarios no la llevan a cabo.

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