CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

din totalul celulelor seriei albe, limfocitele reprezint cam 25-40%, ceea ce corespunde unei valori absolute de 1500-4000 de limfocite pe mm3 din punct de vedere morfologic, se mpart n: 1. Limfocite mici aproximativ 80-85% din totalul limfocitelor periferice diametru 6-9 m raport nucleu/citoplasma supraunitar subvarieti: a. limfocite T b. limfocite B 2. Limfocite mari 10-15% din totalul limfocitelor periferice diametru 10-16m prezint citoplasm foarte abundent ce nconjoar de jur mprejur nucleul n citoplasm sunt prezente din abunden granulaii azurofile uor de evideniat n microscopia optic se numesc LGL (Large Granular Limphocytes) ea include celulele NK implicate n imunitatea natural i RIC 1. Limfocitele mici difereneierea LT/LB NU poate fi fcut niciodat pe baza unor criterii morfologice diferene din punct de vedere electronomicroscopic diferenierea se face rapid i eficient pe baza unui test funcional: testul Rozetrii (foarte vechi, const n punerea n contact a limfocitelor raportate anterior prin tehnici de gradient cu eritrocite de oaie; singurele care angajeaz legturi cu acestea i formeaz conglomerate celulare sunt LT)

LB NU sunt celule rozetante LT prezint pe suprafaa lor un receptor tipic de adeziune intercelular (CD2). El NU exist pe suprafaa LB LT NU reprezint o populaie celular omogen, ci este foarte heterogen din punct de vedere funcional avem 4 subvarieti de LT:

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa a. TH b. TC c. TS d. TCS (contrasupresoare) diferenierea dintre ele NU poate fi fcut pe baza criteriilor morfologice i nici pe baza testului rozetrii pentru c toate rozeteaz la fel diferenierea dintre ele se face prin evidenierea markerilor de suprafa pe TH se afl un marker diferit de TC, TS, TCS se bazeaz pe utilizarea Ac monoclonali (artificiali, cu nalt specificitate, marcai fluorescent i recunosc tipic NUMAI 1 marker) conteaz de fapt markerii de suprafa, NU forma limfocitelor

Limfocitele T
I. Caractere generale reprezint populaia limfocitar majoritar prezent n sngele periferic (68-80% din totalul limfocitelor periferice) - sunt celule cu durat de via lung sau foarte lung (ani, yeci de ani, ct o via de om) - celule intens recirculante (ele patruleaz continuu n ntreg organismul n cutarea Ag pentru care sunt programate genetic) II. Receptorii de suprafa ai LT - expun pe suprafaa lor 3 categorii de receptori: 1. Receptori de recunoatere Ag a. Complexul TCR-CD3 - rol n recunoaterea Ag (epitopilor) b. Coreceptori: CD4 sau CD8 (recunoaterea moleculelor prezentatoare ale epitopilor CD4 MHC II CD8 MHC I Din a. i b. => recunosc simultan att Ag prezentat ct i moleculele prezentatoare ale acestora = recunoaterea Ag asociativ (reprezint i principala cale de activare metabolic a LT) 2. Receptori cu rol accesor n activarea LT: o CD28 o CD45 3. Receptori de adeziune intercelular - permite stabilirea de contacte LT alte tipuri de celule o CD2 o LFA1 (CD11A/CD18) - CD = titulatura de catalog a receptorilor prezeni la suprafaa limfocitelor. CD urmat de un numr = un singur receptor prezent la suprafaa LT. s-a recurs la aceast titulatur, pentru a se nlocui titulaturile mai vechi, descriptive. Unele se mai pstreaz (LFA1 antigen asociat funciei leucocitare; VLA antigen cu apariie foarte trzie, el apare dupa ce LT au fost activate, deci apar foarte trziu; ICAM molecule de adeziune intercelulara) - CD = cluster of designation = class du differention = clas de difereniere -

1. Receptori de recunoatere Ag
Laura & Daniel 2

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa Caracteristicile recunoaterii Ag realizat de LT i. LT recunosc Ag NUMAI dup structura lor primar (secvena de aa). Recunosc n mod tipic doar Ag hidrofili ii. LT recunosc NUMAI Ag prezentat pe suprafaa APC n complex cu molec MHC (LT, spre deosebire de LB NU recunosc niciodat Ag solubile) iii. Recunoaterea realizat de LT e prin definiie o recunoatere asociativ a. Complexul TCR-CD3 pe suprafaa LT aflate n repaus exist n jur de 60000 de asemenea complexe TCR (receptorul celulei T pentru Ag) heterodimer constituit din 2 lanuri transmembranare ( i ) orientate cu capetele Nterminale afar i cele C-terminale n interiorul LT lanurile sunt elaborate dup codul unor gene diferite: Cz 14, Cz 7 n segmentul extracelular i se asociaz ntre ele prin puni disulfurice

membrana LT strbtut de lanuri separ 3 segmente n cele 2 lanuri

a. segmentul extracelular

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa lanurile NU sunt liniare, ci adopt o configuraie imunoglobin-like (sunt organizate n bucle sau domenii situate simetric) - pe cele 2 lanuri exist cte 2 domenii, fiind de principiu formate din 100-110 aa - domeniile N-terminale sunt constituite din secvene de aa variabile/hipervariabile. Ele se noteaz cu V i V - V i V se asociaz ntre ele i constituie o cavitate de dimensiuni mici = situs combinativ pentru Ag (SCAg) - celelalte 2 domenii sunt constituite din secvene de aa constante ca structur pe majoritatea limfocitelor. Se noteaz cu C i C - dintre cele 2 perechi de domenii, cele mai importante din punct de vedere funcional sunt cele variabile. Ele formeaz SCAg i pentru aceasta ele sunt responsabile de recunoaterea Ag - dei V i V sunt implicate n recunoaterea Ag, ele NU angajeaz niciodat contacte cu Ag prin ntreaga lor secven de aa, ci realizeaz contacte cu Ag care sunt punctiforme, realizate prin intermediul unor mici secvene de aa (8-15) rezultate n urma plicaturrii V i V. Aceste segmente sunt situate n vrful plicaturilor i protruzioneaz adnc n cavitate, realiznd legturi cu Ag prin potrivire de form sau complementaritate => ele se numesc CDR (regiuni determinante ale complementaritii) domeniile variabile V, V - circular prin plicaturare - plicaturile exist prin intermediul celor 3 puni disulfurice intradomeniu - secvenele din vrful plicaturilor sunt doar ele responsabile de contactul cu Ag (8-15 aa). Ele se numesc CDR - pe fiecare domeniu exist 3 CDR. Ele constituie paratopul - restul secvenelor = zona scheletal (FR framework regions) - recunoaterea Ag se face prin stabilirea de contacte difereniate ntre CDR i complexul MHC epitop - LT recunosc doar Ag care sunt prezentate pe suprafaa APC - APC expun prin moleculele MHC un epitop - CDR1 CDR2 angajeaz legturi NUMAI cu moleculele MHC, recunoscnd din acestea doar domeniile polimorfe (MHC I 1,2, MHC II 1, 1) - CDR3 sunt singurele care asigur legturi cu epitopul prezentat e recunoscut att epitopul, ct i prezentatorul acestuia, deci se realizeaz o recunoatere Ag asociativ intrareceptorial (1 receptor 2 molecule recunoscute) domeniile constante C, C - poriunea din segmentul extracelular al TCR ntre domeniile intern i membranar = zona balama - n aceast poriune (ZB) lanurile i se asociaz ntre ele prin puni disulfurice => heterodimerul - ea e poriunea din TCR dotat cu maximum de flexibilitate. n jurul ZB TCR execut n mod continuu micri de baleiere, care favorizeaz recunoaterea Ag (contactul cu complexul MHC epitop prezentat pe suprafaa APC)

b. segmentul transmembranar
constituit din 22-25 aa

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

c. segmentul intracitoplasmatic
este extrem de scurt 5-12 aa Funciile TCR - realizeaz recunoaterea Ag - genereaz semnale activatoare care apar secundar recunoaterii Ag - NU poate realiza transmisia sau transducia semnalelor ctre sistemele enzimatice din profunzime. Ea se realizez prin a doua component a complexului TCR-CD3, adic prin CD3

CD3 complex pentameric, format din 5 lanuri: 3 lanuri scurte i groase care prezint segmente intracitoplasmatice destul de reduse (notate , , ). Au GM de aproximativ 21-25kda i sunt elaborate dup gene prezente pe cromozomul 11 - la cele 3 lanuri scurte i groase se asociaz 2 lanuri foarte lungi i efilate care cel mai frecvent sunt identice ntre ele (notate , au GM de 16kda, fiind elaborate dup codul unor gene aflate pe cromozomul 1) - cele 5 lanuri se asociaz ntre ele prin puni disulfurice i se asociaza la TCR complexul heptameric TCR-CD3 - CD3 trimite semnalele activatoare ctre lanurile , ele avnd acces la sistemele enzimatice de profunzime -

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa CD3 fixeaz localizarea membranar a unor enzime foarte importante pentru activarea metabolic a LT. Ea se face la nivelul unor secvene mici de aa prezente n poriunea intracitoplasmatic a tuturor lanurilor CD3 se numesc ITAM (motive activator imunoregulatoii tirozinice)

b. Coreceptori

CD4 coreceptor de recunoatere Ag GM 60kda elaborat dup codul unor gene prezente pe Cz 12 distribuia: CD4 e distribuit tipic pe suprafaa TH el e considerat marker definitoriu pentru TH TH = LT CD4+

e o glicoprotein transmembranar orientat cu captul N-terminal afar, C-terminal nuntru exist 3 segmente: a. segmentul extracelular organizat n bucle sau domenii

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa 4 bucle diferite ntre ele (D1 D2 D3 D4) E implicat n recunoaterea moleculelor prezentatoare de Ag Contactele se stabilesc cnd LT coopereaz n vederea recunoaterii Ag cu APC, care expun MHC cu epitop Receptorul recunoate NUMAI moleculele MHC II, contactndu-l prin D1, NUMAI domeniul monomorf al moleculei MHC II 2 b. segmentul transmembranar c. segmentul intracitoplasmatic este foarte lung prin el contribuie esenial la activarea TH CD4 se afl n contact fizic cu o enzim (proteintirozinkinaz PTK1). Varietatea tipic pentru TH e PTK p56lck p56 proteina 56kda lck titulatura protooncogenei responsabil de sinteza acestei proteinkinaze (kinaz caracteristic leucocitelor)

CD8 glicoprotein transmembranar heterodimeric: 1 lan i unul orientat cu capetele N-terminale afar i cele C-terminale la interior elaborat dup codul unor gene de pe Cz 2 particularitate: n segmentul extracelular prezint cte un domeniu domeniile sunt poziionate simetric => conformaie Ig-like segmentele intracitoplasmatice sunt foarte lungi CD8 e prezent pe suprafaa TC i TS (LT CD8+) funcii realizate diferit prin segmentul extracelular i cel intracitoplasmatic segmentul extracelular: cooperarea ntre TC/TS i APC (cooperarea se face cu ocazie prezentrii i recunoaterii Ag. n timpul cooperrii CD8 recunoate specific NUMAI moleculele MHC I, angajnd legturi NUMAI cu domeniul monomorf al MHC I 3). Are rol important n activarea TC/TS. segmentul intracitoplasmatic: se afl n contact cu aceeai PTK p56lck

Cei 4 receptori (TCR, CD3, CD4, CD8) realizeaz recunoaterea Ag asociativ. - recunoaterea e dublu asociativ: o recunoatere Ag asociativ intrareceptorial (realizat de TCR) o recunoatere Ag asociativ interreceptorial (recunosc moleculele prezentatoare) stabilirea unui numr mare de contacte intre moleculele prezentatoare i cele prezentate LT leg. cu MHC (5) prin TCR i CD4/CD8 cu Epi (2) prin TCR DAR ele se realizeaz DOAR cnd e recunoscut epitopul - moleculele MHC de regul sunt molecule prezentate NUMAI pe membranele celulare => LT recunosc NUMAI Ag membranare

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

Ag membranare pot fi de 3 tipuri: 1) Ag prezentate 2) Ag constitutive 3) Ag ataate

LT NU recunosc niciodat Ag ataate (Ac) i Ag constitutive (Ac/NK)

LT recunosc DOAR Ag prezentate n complex cu MHC recunoaterea Ag de LT este o recunoatere MHC restrictiv

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

2. Receptori cu rol accesor n activarea LT

CD28 glicoprotein transmembranar homodimeric GM 45kda distribuie: prezent NUMAI pe suprafaa TH/TC i niciodat pe TS segmentul extracelular: cte o bucl pe domeniu segmentul intracitoplasmatic: lung sau foarte lung funcie: favorizeaz net cooperarea dintre TH/TC i APC n timpul cooperrii se stabilesc legturi ntre CD28 i un contraligand (CD80) prezent NUMAI pe suprafaa APC profesionale => semnale activatoare care se trimit ctre profunzime, ele contnd enorm pentru maturarea funcional a TH/TC TH produce diverse tipuri de IL TC produce CK

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

o CD45 glicoprotein transmembranar GM 100-200kda pe suprafaa tuturor celulelor de origine hematogen (excepie eritrocitele i trombocitele) pe suprafaa LT e extrem de bine reprezentat (ocup 10% din suprafaa lor membranar) NU exist ca receptor izolat El se ataeaz prin puni disulfurice la lanul al CD3 => CD45 e activat ntotdeauna ca urmare a stimulrii Ag Funcie enzimatic, e o fosfataz (PTP) care impreun cu PTK formeaz un cuplu funcional extrem de important

3. Receptorii de adeziune intercelular

- foarte importani printre altele n cooperarea prin contact ntre LT i APC = cooperare cognitiv

Laura & Daniel

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa

o CD2 - receptor panT (pe toate LT) i pe suprafaa celulelor NK - glicoprotein transmembranar - are GM 50kda - segmentul extracelular prezint 2 domenii - segmentul intracitoplasmatic este foarte lung - funcii: segmentul extracelular stabilirea de contacte cu un contraligand prezent pe APC (LFA3[CD58]) contacte prin complementaritate segmentul intracitoplasmatic pregtirea activrii LT, se afl n contact fizic cu o enzim PLC (fosfolipaza C) - cnd se stabilesc contacte CD2-LFA3, CD2 sufer modificri conformaionale ce permit translocarea PLC de la nivelul citoplasmei la nivelul membranei - LT naive = limfocite care n existena lor NU au ntlnit niciodat Ag pentru care au fost programate genetic s l recunoasc - cuplul de adeziune CD2-LFA3 = cuplul de adeziune de linia nti (primele legturi dintre APC i LT se stabilesc prin acest cuplu). Afinitatea reciproc CD2-LFA3 e extrem de mare LFA1 - prezent pe LT, LB, NK Laura & Daniel 1

CURS 3 Populaiile limfocitare i markerii lor de suprafa 2 lanuri (CD11a) i (CD18) segmentul extracelular 2 domenii (imagine de Ig-like) segmentul intracitoplasmatic foarte lung funcie: segmentul extracelular stabilirea de contacte cu un contraligant prezent pe suprafaa APC (din categoria ICAM) prezent pe suprafaa LT, n mod particular pe suprafaa LT cu memorie (au ntlnit de nenumrate ori Ag pentru care sunt programate s l recunoasc) cuplul de adeziune LFA1-ICAM = cuplul de linie a doua (legturile se stabilesc mai trziu i sunt instabile o perioad de timp)

Rolul receptorilor - stabilirea de contacte APC-LT pe arii ntinse ale membranelor - aceste cupluri de adeziune favorizeaza net prezentarea i recunoaterea Ag pentru c MHC+Epi i TCR NU sunt poziionate fa n fa. Astfel ele au timp s pluteasc pe membran i s vin n contact unul cu altul

LT TH TC TS

CD3 + + +

CD4 + -

CD8 + +

CD28 + + -

Laura & Daniel