UNIVERSIDAD NACIONAL MAYOR DE SAN MARCOS

(Universidad del Per, DECANA DE AMRICA)

FACULTAD DE QUMICA E INGENIERA QUMICA

ESCUELA ACADMICO PROFESIONAL DE QUMICA (0.71)

DEPARTAMENTO ACADMICO DE QUMICA ORGNICA

LABORATORIO DE PRODUCTOS NATURALES

PRCTICA N 2 TRITERPENOIDES SAPONINAS TRITERPENOIDALES. GRUPO: Lunes 1:00 - 5:00 pm.

PROFESORA: Qca. Juana Mara Huamn Malla.

INTEGRANTES:

2011

INTRODUCCION

Las saponinas son glucsidos de esteroides o de triterpenoides, llamadas as por sus propiedades como las del jabn: cada molcula est constituida por un elemento soluble en lpidos (el esteroide o el triterpenoide) y un elemento soluble en agua (el azcar), y forman una espuma cuando son agitadas en agua. Se hallan ampliamente distribuidas en el reino vegetal, especialmente entre las legumbres. En un principio se consideraron nocivas para la salud ya que pueden daar los glbulos rojos de la sangre, pero en la actualidad se destaca su efecto positivo. Debido a que las saponinas slo son absorbidas en cantidades nfimas por el intestino, actan especialmente en la luz del tracto gastrointestinal. Se les atribuye un efecto protector del cncer de estmago e intestinos. Ejercen adems un efecto inhibidor sobre ciertos microorganismos, reducen la colesterolemia. Muchos de los efectos farmacolgicos que inducen estos compuestos estn relacionados con su capacidad para permeabilizar membranas biolgicas (actividad hemoltica), actividad que parece estar asociada a los monodesmsidos. Se ha descrito adems actividad antiviral, citotxica (antitumoral), espermicida, etc. Clsicamente se han utilizado como antitusivos y expectorantes, antiinflamatorios, analgsicos, venotnicos y antihemorroidales y adaptgenos.

TRITERPENOS Y ESTEROIDES

Este grupo de principios activos est constituido por numerosos compuestos, estructuralmente muy similares, derivados mayoritariamente del epoxiescualeno o en menor nmero del propio escualeno. Todos ellos poseen un hidroxilo en el C3 que les permite la unin con una o varias molculas glucdicas, dando lugar a estructuras heterosdicas. Pueden establecerse dos grandes grupos dependiendo de su estructura qumica: triterpenos (tetra y pentacclicos) y esteroides. Se encuentran en estos grupos compuestos de gran inters farmacutico como son los saponsidos y los hetersidos cardiotnicos. Saponsidos: Tambin llamados saponinas, su nombre deriva del latn sapo, saponis que significa jabn debido a que poseen propiedades tensioactivas, pues al disolverse en agua y por agitacin forman espuma persistente, tienen propiedades detergentes. Muchas de ellas tienen adems propiedades hemolticas debido a que alteran la permeabilidad de las membranas biolgicas resultando txicas para animales de sangre fra. Por esta razn, algunas plantas que contienen estos principios activos, han sido empleadas desde la antigedad en el arte de la pesca. Sin embargo no todos los saponsidos cumplen estas caractersticas.

Estos compuestos tienen inters farmacutico a dos niveles. Por un lado, debido a su actividad farmacolgica, pueden ser de aplicacin directa a la teraputica y por otro, o bien pueden ser utilizados indirectamente como precursores para la obtencin de frmacos por semisntesis qumica (como ocurre en el caso de los saponsidos esterodicos de diversas especies del gnero Dioscorea utilizados para la obtencin de anticonceptivos orales), o bien pueden ser empleados como herramientas farmacotcnicas debido principalmente a sus propiedades fsicas (tensioactividad). Son compuestos con estructura heterosdica. Por lo general la unin al azcar se realiza sobre el hidroxilo del C3 (monodesmsidos) aunque en algunos casos se establece una esterificacin adicional con otras molculas glucdicas a travs del grupo cido situado sobre el C28 (bidesmsidos). En estos hetersidos, la parte glucdica es compleja pues corresponde a un

nmero relativamente elevado de molculas glucdicas (1 a 10) tanto en forma lineal como ramificada. Las geninas pueden ser de dos tipos estructurales: esterodicas y triterpnicas. Las saponinas con genina esterodica, generalmente hexacclicas y con 27 tomos de carbono (espirostano), se localizan en plantas Monocotiledneas (Dioscoreceas, Liliceas, Agavaceas) y las de tipo triterpnico, con 30 tomos de carbono, tetracclicas (dammarano) o pentacclicas (lupanos, oleananos, ursanos), en Dicotiledneas, Pteridofitas y algunos animales marinos. Muchos de los efectos farmacolgicos que inducen estos compuestos estn relacionados con su capacidad para permeabilizar membranas biolgicas (actividad hemoltica), actividad que parece estar asociada a los monodesmsidos. Se ha descrito adems citotxica (antitumoral), espermicida, etc. Clsicamente se han utilizado como antitusivos y expectorantes, antiinflamatorios, analgsicos, venotnicos y antihemorroidales y adaptgenos. Entre las plantas medicinales que poseen saponsidos hay que destacar la raz de polgala por sus propiedades antitusgenas y expectorantes, la raz de regaliz como antiulcerosa y antiinflamatoria, el rizoma de rusco y la corteza y semillas de castao de indias por sus propiedades venotnicas y la raz de ginseng como adaptgena. Hetersidos cardiotnicos: A este grupo pertenecen una serie de principios activos que actan directamente sobre el msculo cardiaco y por tanto ejercen su accin teraputica en la insuficiencia cardaca congestiva o en las alteraciones del ritmo cardaco. Sin embargo, precisamente por la gravedad de esta patologa y las caractersticas especiales de estos principios activos, cuyo margen teraputico es sumamente estrecho, las drogas que les contienen no se emplean en la actualidad directamente como productos fitoteraputicos aunque sus principios activos aislados siguen siendo indispensables en la teraputica. Estructuralmente estos compuestos corresponden, como su nombre indica, a estructuras heterosdicas cuya genina es de tipo esterodico con distintos sustituyentes, generalmente de tipo hidroxlico o metoxlico. Se caracterizan por llevar sobre el C17 un anillo lactnico pentagonal o hexagonal insaturado que es indispensable para que ejerzan su actividad. La parte glucdica corresponde a una cadena de azcares o desoxiazcares que intervinen como moduladores cuantitativos de la accin cardiotnica. Aunque an hoy no est totalmente esclarecida su accin farmacolgica, estos compuestos parecen actuar inhibiendo un enzima: ATPasa que regula el intercambio Na/K en el miocito. Algunas de las plantas que contienen hetersidos digitlicos son: Digitalis purpurea y D. lanata Scrophulariaceae, cuyos efectos farmacolgicos fueron descritos por Whitering en el s XVIII; Adonis vernalis Ranunculaceae; Urginea maritima conocida como escila, Liliaceae; Nerium oleander o adelfa y Strophanthus ssp. estrofanto Apocynaceae, cuyo principio activo la ouabaina se emplea como herramienta para la investigacin farmacolgica, etc. actividad antiviral,

RECOMENDACIONES
La presente tcnica puede ser aplicada a otros alimentos que presentan una cierta concentracin de saponinas. Se recomienda evaluar la interferencia que pueda causar las sustancias que no son saponinas pero pueden dar color a la longitud de onda de trabajo.

BIBLIOGRAFA
Yanet Palencia Mendoza, Sustancias Bioactivas en los Alimentos, (http://www.unizar.es/med_naturista/bioactivos%20en%20alimentos.pdf). Mara Emilia Carretero Accame, Terpenos III: Triterpenos y esteroides, Panorama Actual Med 2001; 25 (240): 124-130. Mauricio Garca colmenares, Evaluacin del Efecto Sanitizante de un Extracto biodegradable obtenido de la especie Solanum Marginatum, de uso etnobotnico en Boyac, Luna Azul ISSN 1909-2474, No. 32, enero - junio 2011. http://es.wikipedia.org/wiki/Corticosteroide. http://www.ferato.com/wiki/index.php/Corticoide http://scielo.sld.cu/scielo.php?pid=S1028-47961999000100002&script=sci_ arttext R.G. Rodrguez-Garza, G.M. Gonzlez-Gonzlez, Bioprospeccin de la Actividad antimictica de extractos metanlicos de ariocarpus kotschoubeyanus y ariocarpus retusus, Nm. 31, pp. 143-155, ISSN 1405-2768; Mxico, 2011 http://www.ehu.es/biomoleculas/hc/sugar33c1.htm#s1a

5.- Qu otras pruebas diferentes a las usadas se podra realizar en el laboratorio? Fundamente la tcnica o reaccin.
Prueba del bicarbonato de sodio 10% para saponinas. Disolver 1-2 mg de la muestra en metanol, se le agregan de 2-3 gotas de cido sulfrico concentrado. Se agita ligeramente. Luego se agregan 2-3 gotas de la solucin de bicarbonato de sodio. La aparicin de burbujas y su permanencia por ms de un minuto indican la presencia de saponinas. Reaccin de Rosenthaler: A una porcin de residuo etanlico se le aade una gota del reactivo de Rosenthaler (se diluye 1 g de vainillina en 100 mL de etanol) y una gota de cido sulfrico concentrado. Las saponinas de triterpenos pentacclicos dan color violeta.

6.- En qu consiste la prueba de la hemlisis?

Este ensayo es ms confiable que el de la espuma. La cual consiste en que a una suspensin de glbulos rojos en solucin salina diluida, se aade una solucin de la muestra que se presume que es o que contiene saponinas. Si los glbulos rojos se rompen (lisan o hemolizan), se asume que la prueba es positiva. Este ensayo puede realizarse en tubo de ensayo, en placas Petri con agar-sangre o en placas Petri con gelatina-sangre. Cuando la muestra contiene taninos, deben eliminarse antes de realizar la prueba ya que la interfieren. Esto se logra por tratamiento repetido de la muestra con xido de magnesio, el cual forma complejos insolubles con los taninos, por lo cual es fcil eliminarlos por filtracin. Las saponinas en contacto con la sangre son hemolticas, ya que interaccionan con el colesterol de la membrana de los eritrocitos. El poder hemoltico es caracterstico de los saponsidos triterpnicos, pero es variable segn los sustituyentes de la estructura. As, los saponsidos monodesmosdicos son hemolticos mientras que los bidesmosdicos no lo son. Debido a su poder hemoltico resultan muy txicos si se administran por va intravenosa, ya que de esta manera contactan directamente con la sangre, mientras que por va oral su toxicidad es muy baja. La mayora de los saponsidos son ictiotxicos, es decir, son txicos para animales de sangre fra, sobre todo para los peces.

7.- En qu consiste la prueba de la hidrlisis y que reactivos empleara para identificar glicsidos?
La hidrlisis de saponinas se realiz siguiendo el procedimiento descrito por Segal, Mansour y Saitschek (1966), el cual consisti en disolver 2 g del crudo de saponinas en 50 ml de etanol al 50 %. A esta disolucin se adicionaron 10 ml de solucin de KOH 1mol/L en metanol, y se mantuvieron en reflujo durante 2 horas. La solucin se refresc y acidific ligeramente con solucin de HCl 0,5 mol/L y se evapor el solvente con corriente de aire a temperatura ambiente. El residuo se lav dos veces con pequeos volmenes de agua y se cristaliz en metanol. El residuo obtenido de la hidrlisis de saponinas corresponde a cristales de

sapogeninas, los cuales se identificaron por medio de espectroscopia infrarroja y punto de fusin. Para identificar glicsidos: Reaccin de Vainilln sulfrico: Gotas de muestra problema + gotas de S.R. Vainilln sulfrico, dando un color rojizo violceo en anillo de interfase. (+) Glicsidos. Tabla Nro 1: Resultados de los ensayos realizados para la identificacin de saponinas.
Ensayo/Extracto Liebermann Rosemheim Salkowski Espuma Burchard Crudo de saponinas Hidrolizado +++ + + +++ Molish Atrona Vainillina Woller Sudan

++

+++

+++

++

++

+++ Muy positivo o evidente. ++ Positivo. + Ligeramente positivo. - Negativo.

8.- Indique el fundamento de cada una de las reacciones usadas en la prctica.

Prueba de la espuma: La espuma se forma debido a que los saponsidos disminuyen la tensin superficial del agua, es decir, son tensioactivos naturales. Prueba de Salkowski para esteroles y triterpenos: colores amarillo o rojo para esteroles y metilesteroles. Ensayo de Liebermann-Burchard: Por la porcin esteroide que poseen las saponinas esteroides, este ensayo puede confirmar su presencia por ejemplo en muestras y extractos vegetales, tal como se indic anteriormente para los esteroles, pero debe tenerse en cuenta que al igual que en el caso de los esteroles -y los esteroides en general- solamente dan un resultado positivo los que tengan grupos dienos conjugados reales o potenciales (color azul-verdoso). Sin embargo otras saponinas como las triterpenoides tambin dan positiva la prueba (color rosado a prpura).

9.- Mencione un mtodo de extraccin de saponinas de cada tipo.

Obtencin del crudo de saponinas esteroidales: En la literatura se encuentra una gran cantidad de trabajos en los que se reportan la extraccin de saponinas. En los mismos se aprecia la existencia de un tronco comn en las metodologas utilizadas que se puede resumir en los siguientes pasos: a) Proceso de desengrase del material vegetal: El mismo tiene como objetivo eliminar los compuestos lipdicos que posee la planta, que pueden afectar operaciones posteriores. El desengrase puede realizarse directamente al material vegetal o a extractos obtenidos de ste.

b) Obtencin del crudo de saponinas: Se realiza la extraccin del material vegetal empleando solventes polares tales como metanol, etanol y n-butanol o mezclas hidroalcohlicas de cada uno de ellos. El n-butanol es muy utilizado por su especificidad para este tipo de compuestos. c) Hidrlisis de las saponinas: Generalmente se realiza por va qumica utilizando un cido mineral como catalizador y su finalidad es liberar las sapogeninas. d) Extraccin de las sapogeninas liberadas en el proceso de hidrlisis: En este proceso se utilizan solventes de mediana polaridad como acetato de etilo y cloroformo. Los pasos c y d se realizan para obtener las sapogeninas que se encuentran en forma de glicsidos y proceder a su caracterizacin como informacin previa en la elucidacin estructural de las saponinas. Obtencin del crudo de saponsidos triterpnicos: El polvo se obtuvo a partir de la corteza de las races, que despus de limpias, fueron cortadas en trozos pequeos y secado en horno a 40 C; despus de secas fueron trituradas hasta polvo fino. Con el polvo fue elaborado un extracto fluido por percolacin con un pH de 6,35, IR 1,36, densidad 0,9488 y slidos totales de 7,3 g/dL. El extracto fluido fue entonces utilizado para obtener el crudo de saponsidos. Del extracto fluido se concentraron 100 mL a presin reducida para eliminar alcohol. El residuo acuoso se lav con eter etlico para eliminar pigmentos y despus se aadi n-butanol saturado con agua para extraer las saponinas triterpnicas. El extracto butanlico y el residuo acuoso se concentraron a presin reducida y las fracciones se pesaron. La fraccin butanlica (FBP) pes 1 g y la acuosa (FAP) 6,3 g. Los residuos de FBP y FAP son finalmente redisueltos en 30 mL de etanol al 70 % el primero y 30 mL al 20 % el segundo.

10.- Investigue la sntesis de un esteroide indicando su aplicacin.

Sntesis de las distintas hormonas esteroides suprarrenales a partir del colesterol.

Aldosterona: el principal mineralocorticoide, producida a partir de la progesterona en la zona glomerulosa de la corteza adrenal, incrementa la presin sangunea y el volumen circulatorio, aumenta el ingreso de Na+. Cortisol: glucocorticoide dominante en los humanos, sintetizado de la progesterona en la zona fasciculata de la corteza adrenal, involucrado en la adaptacin al estrs, aumenta la presin arterial y el ingreso de Na+, tiene varios efectos en el sistema inmune. La Androstenediona es una sustancia que interviene en la produccin y sntesis natural de testosterona.

11.- Qu son corticoides? Cortisona? Cules son las utilidades de estos compuestos y sus precauciones para su administracin en el ser humano.
Los corticosteroides (del lat. cortex, cis, corteza, y esteroide) o corticoides son una variedad de hormonas del grupo de los esteroides (producida por la corteza de las glndulas suprarrenales) y sus derivados.Los corticosteroides estn implicados en una variedad de mecanismos fisiolgicos, incluyendo aquellos que regulan la inflamacin, el sistema inmunitario, el metabolismo de hidratos de carbono, el catabolismo de protenas, los niveles electrolticos en plasma y, por ltimo, los que caracterizan la respuesta frente al estrs. Estas sustancias pueden sintetizarse artificialmente y tienen aplicaciones teraputicas, utilizndose principalmente debido a sus propiedades antiinflamatorias e inmunosupresoras y a sus efectos sobre el metabolismo. En general, se distinguen diferentes afecciones en las cuales la terapia con corticoides es una alternativa importante, especialmente en el tratamiento de las enfermedades no endocrinas como: Desrdenes reumticos y enfermedades del colgeno (Artritis reumatoidea, Lupus eritematoso, etc.) Enfermedades Respiratorias (Asma, Bronquitis obstructiva, etc.) Enfermedades Dermatolgicas (Alergias, Dermatitis, etc.) Enfermedades Oftalmolgicas (Alergias estacionales) Enfermedades Renales (Sndrome Nefrtico).

Los corticoides son medicinas potentes que tienen efectos secundarios, incluso puede debilitar los huesos, gastritis, y causar cataratas. Por este motivo, se suelen indicar por perodos lo ms cortos posibles. El tratamiento corticoide debe hacerlo siguiendo las estrictas indicaciones del mdico que ir disminuyendo las dosis en forma lenta y progresiva. La cortisona (17-hidroxi-11-corticosterona) es una hormona esteroide (lipdica). Qumicamente es un corticosteroide muy parecido a la corticosterona. Se clasifica como corticosteroide (glucocorticosteroide). Se utiliza para tratar una gran variedad de dolencias y puede ser administrado va intravenosa, oral, intraarterial o cutnea. La cortisona suprime el sistema inmunitario (inmunosupresora), reduciendo as la respuesta inflamatoria, neutralizando el dolor

e hinchazon en el sitio daado. Sin embargo, sus efectos sobre el sistema inmunitario pueden conducir a varios efectos secundarios, particularmente cuando se utiliza la cortisona durante un perodo largo de tiempo (tratamientos duraderos). Se produce en el crtex de las glndulas suprarrenales una atrofia. El cuerpo produce corticosteroides de forma natural. Estos influyen en el funcionamiento de muchos de los sistemas corporales (corazn, inmune, msculos, huesos y los sistemas endocrino y nervioso). Ejercen una gran cantidad de efectos incluyendo efectos en el metabolismo de los carbohidratos, protenas y grasas. Ayudan a mantener el equilibrio de fluidos y electrolitos. La cantidad de Cortisona que deber tomar depende de muchos factores, incluso su altura y peso, el estado general de su salud y sus otros problemas de salud, as como el motivo por el cual recibe este frmaco. Su mdico determinar la dosis y el calendario de administracin del frmaco.

12.- Fundamente los mecanismos de accin de una saponina triterpnica y una esteroidal.
Las saponinas son glicsidos en los cuales varias unidades de monosacridos se enlazan mediante un enlace glicosdico a un resto denominado aglicn. El aglicn puede ser de naturaleza triterpnica o esteroidal y en funcin de esto las saponinas se clasifican en saponinas triterpnicas y saponinas esteroidales respectivamente. a) En este grupo de saponinas, las geninas estn constituidas por tres unidades de terpenos (Figura izquierda de la tabla inferior). Cada terpeno est formado por dos unidades de isopreno (de cinco carbonos), de forma que las geninas son molculas con 30 tomos de carbono. Un ejemplo de saponina triterpnica pentacclica es la glicirricina, muy abundante en el regaliz.

triterpeno pentacclico

cido glicirretnico

cidos urslico y oleanoico (son ismeros)

En las plantas se encuentran tambin los cidos triterpnicos correspondientes a estas sapogeninas. Se forman cuando un grupo carboxilo sustituye a un grupo metilo en las posiciones 4, 17 20 (Figuras central y derecha de la tabla superior). Ejemplos de cidos

triterpnicos pentacclicos son los cidos urslico y oleanoico (que se encuentran en el ginseng) y el cido glicirretnico (que se encuentra en el regaliz). b) La saponinas (y sapogeninas) esteroidales son metabolitos ampliamente distribuidos en el reino vegetal y son especialmente abundantes en algunas familias, entre ellas la Agavaceae y se caracterizan por la diversidad de sus actividades biolgicas. El aglicn en las saponinas esteroidales (sapogenina) presenta el esqueleto tetracclico caracterstico de este tipo de compuestos, denominado gonano (ciclopentanoperhi drofenantreno) en el caso de ser saturado. Las sapogeninas pueden clasificarse de acuerdo a la estructura de los anillos E y F en espirostanos, furostanos y furoespirostanos fundamentalmente, siendo el primer grupo el ms importante. Las saponinas esteroidales poseen de una a seis unidades de monosacridos unidas entre s mediante enlaces glicosdicos. Estas unidades son comnmente hexosas, pentosas y deoxihexosas, entre los que se encuentran principalmente glucosa, rhamnosa, galactosa y xilosa. Los enlaces glicosdicos pueden tener configuracin a b. Este resto glicosdico, que puede ser lineal o ramificado en la mayora de los casos se une con el aglicn a travs del C-3 del mismo. Se obtiene a partir de la raz de Dioscorea villosa (ame salvaje mejicano, figura de la izquierda), aunque est presente en ms de 90 familias distintas de plantas. Por hidrlisis cida origina una glicona formada por dos ramnosas y una glucosa (bis--Lramnopiranosil (12) y (1 4)--D-glucopiranosa) y la correspondiente genina (diosgenina) (figura derecha de la tabla inferior), cuyo anillo esteroide es muy parecido a la dehidroepiandrosterona. Por este motivo, hasta 1970 fue la nica fuente para la elaboracin de anticonceptivos esteroides orales. Tambin se utiliza para la fabricacin de hormonas sexuales y hormonas corticoides. Recientemente se le ha atribudo actividad antitumoral, ya que induce la apoptosis de determinadas clulas cancergenas.

Glicsido = Dioscina

Aglicona = Diosgenina

Glicona = bis--L-ramnopiranosil (12) y (14)--D-glucopiranosa