PENDAHULUAN Mikroorganisme hidup dalam hubungan dengan tanaman (mikroba endofit) umumnya diamati padaalam (Bacon dan White,

2000). Mereka umumnya ditemukan di Coniferaceae, Gramineae, Dan Ericaceae (Okane et al, 2001a.), Bakau Bruguiera gymnorrhiza (Okane et al, 2001b., 2001c), Theobroma cacao (Rubini et al, 2005.), Dan Camelia sinensis (Agusta et al, 2006.). Mikroba endofit, khususnya jamur endofit telah diakui sebagai sumber potensi bagi beberapa metabolit sekunder bioaktif (Tan dan Zou, 2001), dan karenanya Owen dan Hundley (2004) mengusulkan "sintesis kimia dalam tanaman ". Menariknya, jamur endofit terutama Taxomyces andreanae yang tinggal di Taxus brevifolia mampu meniru metabolit inangnya, taksol (Stierle et al., 1993). Contoh lain, teridentifikasi jamur endofit diisolasi dari tanaman Notapodytes foetida juga memproduksi camptotecin dalam kondisi laboratorium (Puri et al., 2005). Di lain pihak, jamur endofit Diaporthe sp. diisolasi dari Camellia sinensis tumbuh di Ciawi, Bogor, Jawa Barat secara selektif mengubah katekin alami menjadi leucoantosianidin dalam medium semisintetik (Agusta et al., 2005). Selain itu, jamur Diaporthe sp. juga menghasilkan dua bisanthraquinones langka yaitu (+) -2,2 '-epicytoskyrin dan (+) -1,1'-bislunatin yang menunjukkan efek sitotoksik yang tinggi terhadap sel KB. Berdasarkan informasi di atas, maka secara ekonomis cukup menjanjikan untuk mengeksplorasi kemampuan fisiologis endofit jamur untuk menghasilkan metabolit sekunder dengan berbagai kepentingan. Satu endofit penting adalah jamur yang hidup di (Uncaria gambir (Hunter) Roxb) yang pernah dieksplorasi sejauh ini.. makalah ini akan melaporkan keragaman jamur endofit yang hidup dalam dua varietas U. gambir yaitu var. Udang dan var. nasi. BAHAN TANAMAN Batang muda U. gambir var. nasi dan U. gambir var. udang yang dikumpulkan dari Lembah Harau, Kabupaten Limapuluh Kota, Propinsi Sumatera Barat, pada bulan Agustus 2007 dan diidentifikasi taksonominya di Herbarium Bogoriense, Pusat Penelitian Biologi, Lembaga Ilmu Pengetahuan Indonesia. ISOLASI JAMUR ENDOFIT Batang muda dipotong-potong (ca. 1 cm panjang) dan dicuci dengan air keran selama 10 menit. Potongan itu dibersihkan dengan aq 70% EtOH selama 1 menit, 5,3% aq. sodium hipoklorit selama 5 menit, dan aq 75% EtOH selama 0,5 menit, dan kemudian dipotong menjadi dua bagian. Potongan batang ditempatkan pada medium (CMMA) yang mengandung ekstrak daun gambir 2% dan 0,05 mg / mL kloramfenikol dalam cawan Petri dan diinkubasi pada suhu 27oC. Setelah 3 hari, koloni individu yang ditransfer ke PDA dalam cawan Petri dan kemudian diinkubasi lagi di 27oC selama beberapa hari dengan periodik cek kemurnian untuk mendapatkan 53 endopyhtic filamen jamur. Kultur murni jamur endofit berfilamen kemudian diawetkan dalam media yang mengandung gliserol 10% dan 5% trehalosa dan ditempatkan pada -80 C (Nakagiri, 2005).

IDENTIFIKASI JAMUR ENDOFIT BERFILAMEN Identifikasi taksonomi jamur endofit berfilamen yang terisolasi dilakukan melalui pengamatan makroskopis dan mikroskopis sesuai dengan Barnett (1955), Domsch et al. (1980), Ellis (1971), Kobayashi (1970), Samson et al. (1995), Sutton (1980) Webster (1980), dan Barnett dan Hunter (1998). Semua mengamati jamur ditanam pada Media PDA pada 27 C. Fitur berikut dari penampilan kultur dicatat: tekstur, warna, permukaan, elevasi dan margin. Mikroskopis: Pengamatan dilakukan dengan jenis mikroskop Olympus BX-51 (Olympus, Jepang). BUDIDAYA JAMUR UNTUK PRODUKSI METABOLIT SEKUNDER Jamur endofit berfilamen diinokulasi dalam 10 mL (PDB) dan (GYP) (20 g glukosa, 1 g ekstrak ragi, 5 g pepton, 0,5 g K2HPO4, 0,5 g MgSO4.7H2O, 0,01 g FeSO4.7H2O, 1,0 g CaCO3, 1 L H2O, pH 6,44) dalam 100 mL Erlenmeyer. Setelah budidaya selama 3 minggu pada suhu kamar (26-28oC), media termasuk jamur diekstraksi dengan etil asetat dan dianalisis dengan kromatografi lapis tipis (KLT) dengan diklorometana-metanol (20:1) sebagai pengembangan pelarut. Profil pola TLC kemudian diamati di bawah UV 254 nm dan 365 nm UV, dan dengan menggunakan sigap reagen 1% Ce2SO4 di 10% H2O4. HASIL DAN DISKUSI Total 53 isolat jamur yang diperoleh dari U. gambir var. udang dan var. nasi. Dari U. gambir var. udang diperoleh 26 isolat, yaitu isolat 7 (GUDP-1, GUDP3 ~ GUDP-8) dari daun, 12 isolat (GUBP-1, GUBP-3, GUBP-5 ~ GUBP-15) dari batang, 6 isolat (GUFP-1 ~ GUFP-6) dari buah-buahan dan 1 isolat (GUAP-1) dari akar (Tabel 1). Sedangkan U. gambir var. nasi diperoleh 27 isolat, Yakni 8 isolat (GNDP-1 ~ GNDP-8) dari daun, 10 isolat (GNBP-1 ~ GNBP-10) dari batang, 5 isolat (GNFP-1 ~ GNFP-5) dari buah-buahan dan 4 isolat (GNAP-1 ~ GNAP-4) dari akar (Tabel 2). Berdasarkan karakter morfologi (Tabel 1 dan Tabel 2), menunjukkan bahwa ada 12 spesies dari 8 genera. satu isolat diidentifikasi sampai tingkat keluarga, satu isolat diidentifikasi sampai tingkat kelas dan 15 isolat yang steril-hifa tidak dapat diidentifikasi oleh observasi karakter morfologi. Pengamatan morfologi menunjukkan bahwa 2 isolat jamur yang diperoleh dari akar (GNAP 2 dan GNAP 5) adalah genus Aspergillus. satu isolate diperoleh dari daun gambir U. var. udang (GUBP 15) juga Aspergillus. Detail pengamatan morfologi (mikroskopis dan makroskopik) menunjukkan bahwa ada empat spesies Aspergillus (Gbr. 1A-D), yang dengan jelas menunjukkan bahwa mereka adalah spesies yang berbeda. TLC kromatogram ekstrak etil asetat dari kultur jamur pada PDB dan GYP juga menunjukkan profil yang berbeda dan memperkuat preposisi tersebut. Secara umum, Aspergillus mampu tumbuh pada banyak jenis habitat (kosmopolit), dan genus yang menulis dari 180 spesies dan 70 spesies anamorph dari teleomorph (Samsons et al., 1995). Aspergillus adalah umum terdapat pada tanah dan rizosfer hortikultura (Moreau & Moss, 1979), dan baru-baru dilaporkan beberapa spesies Aspergillus juga berkembang menjadi endofit. Selain endofit terkenal jamur Penicillium dan Aspergillus yang tinggal di dalam jaringan tanaman Melia azedarach (Geris-dos Santos et-al, 2003.). Aspergillus fumigatus CY018 adalah endofit dari Cynodon dactylon (Liu et al., 2004), dan Aspergillus niger EN-13 adalah endofit alga Colpomenia sinuosa (Zhang et al., 2007).

Pada isolat jamur (GNDP-2) yang diperoleh dari daun dan satu isolat (GUFP-3) yang diperoleh dari buahbuahan dari U.gambir var. nasi menunjukkan karakter morfologi yang identik satu sama lain. Kedua jamur mengalami mikro dan makro-konidia sebagai badan reproduksi. Setengah-moon macroconidia berbentuk (pedicellate) adalah karakter morfologi aseksual pada Fusarium (Summerel et al., 2003). Kedua isolat jamur juga memiliki jumlah macroconidia yang sama (Gambar 1E) dan pola TLC identik ekstrak etil asetat yang berasal dari kultur jamur tumbuh pada PDB dan GYP memperkuat bahwa kedua isolat identik satu sama lain. Sehingga, kedua isolat jamur merupakan genus Fusarium (Gambar 1E). Sebagian besar anggota Fusarium bersifat tanaman patogen, dan baru-baru beberapa evolusi spesies disesuaikan dengan jaringan tanaman melakukan pertumbuhan endofit. Fusarium oxysporum, nonpatogenik jamur terkait dengan Cucumis sativus, dapat mempertahankan kelangsungan hidup inangnya dari infeksi Phytium ultimum (Rubini et al., 2005). Fusarium sambucinum terkait dengan tanaman Aphelandra tetragona memiliki kemampuan unik untuk detoksifikasi benzoxazolinone (BOA), konstituen kimia dengan inang mereka (Zikmundova et al., 2002). Bacon dan Putih (2000) melaporkan secara intensif hubungan antara Fusarium dan tanaman liar. Coelomycetes adalah jamur pada umumnya yang diisolasi dalam penelitian; dari 53 isolat yang diperoleh 11 isolat yang berasal dari taksonomi yang sama. Coelomycetes terkenal memiliki hubungan yang kuat dengan tanaman pathogen yang lebih tinggi atau saling simbiosis. Hubungan yang erat antara tanaman dan jamur memungkinkan untuk mentransfer materi genetik di antara mereka (Tanaka et al., 1999). Banyak dari Coelomycetes menghasilkan spora aseksual (teleomorphic fase) serta spora aseksual (fase anamorphic) pada inang mereka, namun gagal untuk melakukannya dalam media sintetis (Paulus et al, 2003.). Anggota Coelomycetes yang menghasilkan spora aseksual dan seksual dalam kultur bisa diidentifikasi dalam tingkat genus atau khusus. Kami mengamati 13 anggota isolat Coelomycetes menghasilkan spora aseksual dan diidentifikasi dalam tingkat genus , dan mereka dapat dibagi menjadi 3 genus termasuk Pestalotiopsis (GUBP-3, GUDP-7, GNBP-1, GNBP-3, GNBP-9, GNDP-8), Phoma (GUDP-4, GUBP-13, GNBP-4, GNDP-4, GNDP-6, GNDP-7) dan Phomopsis (GUDP-1). Pestalotiopsis adalah jamur endofit yang umumnya diisolasi dari tanaman tinggi daripada anggota lainnya. Dua isolat (GUDP-7, GUBP-3) terisolasi dari var. udang, dan 4 isolat (GNDP-8, GNBP-1, GNBP-3, GNBP9) dari var. nasi teridentifikasi mengalami karakter morfologi yang identik sebagai Pestalotiopsis. isolat mereka membentuk spora seperti ditunjukkan pada Gambar. 1H. Meskipun morfologisnya identik satu sama lainnya, namun pola TLC dari ekstrak etil asetat medium kultur berbeda. Mereka membentuk 4 pola yang berbeda dan membentuk 4 spesies yang berbeda. Isolat dari GNDP-8, GNBP-3 dan GNBP-9 menunjukkan pola TLC spesifik mereka sendiri, namun GUDP-7, GUBP-3 dan GNBP1 memiliki profil yang identik dan teridentifikasi sebagai Pestalotiopsis sp. GUDP. Dari U. gambir var. udang diperoleh dua isolate (GUDP-4, GUBP-13) yang menunjukkan morfologi mirip dengan karakter Phoma. Kedua jamur menunjukkan karakter morfologi identik yang mirip dengan jamur yaitu GNDP-4, GNDP-6, GNDP-7, dan GNBP-4 diperoleh dari U. gambir var. nasi, sehingga enam jamur diidentifikasi sebagai Phoma sp GUDP, dan enam isolat menunjukkan pola yang mirip TLC (data tidak ditampilkan) yang menyiratkan bahwa mereka menghasilkan isolat metabolit sekunder yang sama bila ditanam pada PDB dan GYP. Fase anamorphic dari Phoma ditunjukkan dengan pembentukan konidia

atau phyliaspore dalam pycnidia (Sutton, 1980). Ditumbuhkan pada PDA, Phoma sp. GUDP menghasilkan sebuah phyliaspora (Gambar 1I). Salah satu dari 14 Coelomycetes terisolasi (GNBP-10) membentuk tongkat hitam berwarna reproduksi seksual (Gambar 1J), ini adalah salah satu karakter Diaporthe. Diaporthe adalah jamur endofit dari berbagai tanaman inang. Genera Diaporthe adalah tahap seksual (teleomorph), dan sebagian besar ditemukan dalam stadium aseksual (stadium anamorphic) yang dimiliki genus Phomopsis (Kobayashi, 1970). Morfologis Diaporthe sangat sulit untuk diidentifikasi dengan benar karena genus ini jarang untuk membentuk perithecia yang ditumbuhkan dalam media sintetis. Dalam media sintetis mereka kebanyakan membentuk pycnidia (Pioli et al., 2003). Hanya dua isolat (GNAP-3, GNAP-6) terisolasi dari akar var. nasi yang diidentifikasi sebagai Penicillium. Identifkasi spesies Penicillium berdasarkan pengamatan morfologi sangat sulit (Samson et al., 1995). Dua Penicillium terisolasi dari var. nasi yang juga sulit diidentifikasi ke tingkat spesies. Kedua isolat memiliki konidia identik (Gambar 1F dan 1G), namun makroskopik warna dari isolat yang berbeda. Munculnya koloni GNAP-3 yang biru keputihan, dan GNAP-6 adalah biru. Pola TLC kromatogram isolat jamur (data tidak ditunjukkan) tidak identik menyiratkan bahwa dua isolat merupakan spesies yang berbeda. Umumnya Penicillium adalah saprofit dan beberapa parasit untuk tanaman. Penicillium merupakan endofit pada P. janthinellum dan Melia azedarach (Marinho et al., 2005), dan Taxus brevifolia (Stierle et al, 1997.). Kami mengamati 15 hifa steril, dan menunjukkan perbedaan dari segi makroskopik (Tabel 1 dan Tabel 2). Semua isolat tidak membentuk organel seksual atau aseksual pada PDA sampai inkubasi 60 hari. Identifikasi isolat ini akan dilaksanakan berikutnya dengan analisis molekul DNA ribosom. KESIMPULAN Diisolasi 53 isolat jamur dari U. gambir var. nasi dan var. Udang. Berdasarkan pengamatan morfologi, 53 isolat merupakan Coelomycetes dan Hypomycetes, 15 isolat tidak teridentifikasi karena mereka membentuk hanya hifa steril. Identifikasi pada tingkat genera, jamur endofit diperoleh Aspergillus, Cladosporium, Diaporthe, Fusarium, Penicillium, Pestalotiopsis, Phoma, dan Phomopsis. Analisis Chemotaxonomy berdasarkan TLC pola metabolit sekunder yang diekstraksi dengan etil asetat, kultur tumbuh pada PDB dan GYP memperkuat identifikasi morfologi, dan pengelompokan jamur endofit.