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04-06-2011

3. Metabolismo Bioenergtico
AULA 19 BIOQUMICA

A C A DEI A R ES PI R A T R I A

Metabolismo energtico das clulas

Gliclise

Beta-oxidao

Ciclo dos cidos tricarboxlicos

Cadeia respiratria e fosforilao oxidativa ATP

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Metabolismo Energtico
CADEIA RESPIRATRIA OU CADEIA TRANSPORTADORA DE ELECTRES E FOSFORILAO OXIDATIVA

A cadeia respiratria ou cadeia transportadora de electres e fosforilao oxidativa

A cadeia respiratria permite aproveitar a energia electorqumica do NADH e FADH2 produzidos pela gliclise e ciclo do TCA para gerar ATP

Os componentes da cadeia respiratria (5 complexos) esto integrados na membrana interna da mitocndria. A sntese de ATP feita por dissipao de um gradiente quimismotico de protes, gerado a partir do fluxo de electres na cadeia transportadora de electres. A sntese de ATP (fosforilao de ADP) est associada ao consumo do oxignio, e por chama-se fosforilao oxidativa

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Viso geral da cadeia respiratria


Complexo I NADH desidrogenase Complexo II succinato desidrogenase Complexo III Ubiquinol:citocromo c oxidoredutase I II III I III FADH2 (succinato) II O2 IV V ATP IV V Complexo IV Citocromo c oxidase Complexo V ATP sintase

NADH

Viso geral da cadeia respiratria


A energia da libertada na sequencia das reaces redox dos complexos I, II, III e IV utilizada pelos complexos I, III e IV para produzir um gradiente protnico O complexo V dissipa esse gradiente (energia potencial), associando-o fosforilao de ADP

II

III I III

IV

NADH FADH2 (succinato)

IV

V ATP

II O2

O mecanismo de aco do complexo V muito semelhante ao de um transportador de membrana do tipo bomba ATPase.

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O transporte de electres na cadeia respiratria


O sistema de transportadores de electres composto de complexos multiproteicos com cofactores que recebem e transferem electres, e por transportadores mveis . Cofactores
Centros de ferro-enxofre Fe-S Flavinas FMN e FAD

Dinucletido de nicotinamida

O transporte de electres na cadeia respiratria


O sistema de transportadores de electres composto de complexos multiproteicos com cofactores que recebem e transferem electres, e por transportadores mveis . Cofactores
Centros de ferro-enxofre Fe-S Flavinas FMN e FAD Dinucletido de nicotinamida

Hemos ou citocromos

Citocromo vem de cor na clula

Fe 2+ Fe3+ O Fe um metal essencial para a respirao

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O transporte de electres na cadeia respiratria


O sistema de transportadores de electres composto de complexos multiproteicos com cofactores que recebem e transferem electres, e por transportadores mveis . Transportadores mveis
Ubiquinona ou coenzima Q

derivada da tirosina e de lpidos. um benzoquinona ligada a uma cadeia isoprenide R. lipossolvel

O transporte de electres na cadeia respiratria


O sistema de transportadores de electres composto de complexos multiproteicos com cofactores que recebem e transferem electres, e por transportadores mveis . Transportadores mveis
Ubiquinona ou coenzima Q

Citocromo c

Pequena protena com um hemo c No lipossolvel, encontra-se no espao intermembranar Fe 2+ Fe3+

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O transporte de electres na cadeia respiratria


E0= -0,32 A transferncia de electres decorre sempre segundo o potencial redox de cada interveniente, ou seja, daquele que mais facilmente perde electres para o que ganha mais facilmente electres. E0= 0,10
O potencial redox dos cofactores depende do ambiente proteico onde se encontram

E0= 0,22

Vai sempre do menor para o maior potencial de reduo

E0= 0,82

A cadeia respiratria passo a passo

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Complexo I : NADH desidrogenase


NADH:ubiquinona oxidoredutase
Nos eucariotas este complexo formado por ~46 subunidades diferentes, 7 das quais so codificadas por DNA mitocondrial. 1 FMN e 8 centros Fe-S

Efremov, R. G., Baradaran, R. and Sazanov, L. A. (2010) Nature 465, 441-445.

Complexo II succinato desidrogenase


succinato:ubiquinona oxidoreductase

Este complexo comum via do TCA Composto por 4 subunidades: 2 hidrfilas (A e B) e 2 hidrfobas (C e D)

Subunidades C e D ligam a ubiquinona

subunidade A a cataltica No h passagem de H+ No contribui directamente para ATP

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A cadeia respiratria passo a passo

Complexo III
Ubiquinol:citocromo c oxidoredutase

No complexo III d-se a transferncia de e- de um transportador bivalente (2 e-) para um univalente (1 e-). A partir de ubiquinol formam-se 2 cit c reduzidos Esta transferncia requer dois ciclos de oxidao de duas molculas de ubiquinol, em que 1 e- transferido para o cit c, e o outro utlizado para a reduo consecutiva de uma molcula de ubiquinona a semiquinona e depois a ubiquinol. Em cada ciclo so transportados contra gradiente 2 protes. (Q + QH2) + QH2 + 2 cit c (oxi) + 4H+in Q + 2 cit c (red) + 4H+out + (Q + QH2)

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Complexo III
Ubiquinol:citocromo c oxidoredutase
Do 1 QH2, 1e- segue pelo Rieske/cit c1 para o 1 cit c O outro segue pelos cit b e reduz a Q a semiQ

Bombeados 2 H+ em cada reduo do cit c

O 2 QH2, d 1e- para o 2 cit c, via Rieske/cit c1 O outro segue pelos cit b e reduz a semiQ a QH2

Complexo IV citocromo c oxidase


citocromo c : O2 oxidoredutase
O complexo 4 tem vrios cofactores: Hemo a,, um centro binuclear CuA e outro centro binuclear hemo a3CuB A reduo do O2 a duas H2O requer 4 e4 cit c 2 QH2 2 NADH ou FADH2 Espcies reactiva de Oxignio so txicas (stress oxidativo)

Um ciclo completo leva produo de 2 H2O e acompanhado de transporte de 1 H+ por e-/cit c, i.e., 4 H+

A libertao de O2 parcialmente reduzido evitada, em parte, com a ligao dos intermedirios no centro CuB hemo a3

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A cadeia respiratria balano do transporte de electres


Complexo I+III+IV: A partir de NADH so bombeados 10 H+ mais ATP Complexo II+III+IV: A partir do FADH2 so bombeados 6 H+ menos ATP 4H+ 0 4H+ 2H+

Complexo V ATP sintase


F0F1 ATP sintase ou ATPase
A ATP sintase um transportador activo de H+ com uma actividade dupla: 1. Bombeia protes para fora da mitocondria, consumindo ATP 2. Produz ATP se houver uma diferena de potncial electroqumico. Esta bifuncinalidade do complexo V pe em risco os nveis de ATP quando no haja formao de um gradiente protnico. A ATP sintase regulada por uma subunidade inibidora IF1, que se liga ao complexo e impede a hidrlise de ATP. A ligao do IF1 depende do pH. A pH <7 a IF1 forma um complexo estvel

O mecanismo de reaco envolve alteraes conformacionais, e pressupe uma estequeometria de 4H+ por ATP

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Rendimento energtico da cadeia transportadora de electres


A partir de NADH (Complexo I+III+IV) A partir do FADH2 (Complexo II+III+IV) 4H+ 0 4H+ so bombeados 10 H+ so bombeados 6 H+ 2H+ 2,5 ATP 1,5 ATP

1 ATP /4H+

Rendimento energtico da cadeia transportadora de electres a partir da gliclise

O NADH produzido no citoplasma tem de entrar na mitocndria, e o seu transporte A leva produo de protes na matriz (dissipa o gradiente em 1 H+) , i.e., menos ATP

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Sistemas de transporte de NADH do citosol para a mitocondria


Transporte acoplado aos transportadores malato/-cetoglutarato e glutamato/aspartato Transporte associado ao transportador do 3-fosfato de glicerol

Glutamato

Glutamato

Dissipa 1 H+ do gradiente/NADH NADH (C I,III,IV) 10-1=9 H+ 2,25

Entrada directa para o C III. No dissipa protes, mas tb no produz no C I. NADH (C III,IV) 6 H+ 1,5

CADEIAS RESPIRATRIAS ALTERNATIVAS

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Estrutura de uma cadeia respiratria


Membrana Externa

Espao intermembranar
Cadeia Transportadora de electres

Q /QH2

Membrana Interna

Dadores de electres

eeH+

Aceitadores de electres O2, sulfato/sulfito, nitrato/nitrito, metais

Catabolismo de glucose ou outros compostos de C

Exemplo das possveis cadeias respiratrias da bactria Desulfovibrio dessulfuricans

Complexos enzimticos que recebem electres da ubiquinona

Complexos enzimticos que transferem e- para a ubiquinona

Takaki Y et al. DNA Res 2010;17:123-137

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Mapa metablico das vias do metabolismo central da bactria Desulfovibrio desulfuricans


Via dos fosfatos de pentose Utilizao de glicerol Fermetao de butirato

Utilizao de acetato

Utilizao de propionato

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Potencialidades negativas e positivas de respiraes microbianas alternativas


Biocorroso Bioremediao por reduo de metais pesados

bibliografia
Captulo 26

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Questes
1. Qual a localizao e constituio geral da cadeia transportadora de electres? 2. Qual a funo da coenzima Q (ubiquinona) e do citocromo c na cadeia transportadora de electres? Localize-os na clula eucaritica e procaritica, com base nas suas propriedades fisico-qumicas. 3. Como que regulada a actividade hidroltica da ATP sintase? Para que serve esta regulao. 4. A cadeia respiratria no uma via linear. a) Indique como bifurca (desenhe um esquema da via). b) Justifique porque se obtm um rendimento de 2,5 ATP por NADH e 1,5 por FADH2 c) Se o NADH for proveniente do citosol gera o mesmo n de ATP?

Questes
5. Complete os espaos: Os e- provenientes da reduo do NADH no ________ e do _______ no complexo II, so tranportados at ao complexo ___ pelo ________ , uma molcula que transporta __ e-. A catlise neste complexo envolve __ ciclos sucessivos, que permitem a transferncia de e- do _______ para o ______, uma molcula que transporta __ e-. A reduo total do ______ requer 4 e-, este passo catalizado no ______ IV. No entanto o citocromo c s transporta ___ e-, assim so necessrios ____ cit c para efectuar um ciclo completo. As protenas so polmeros de _________, ligados atravs de ligaes ______, so chamadas cadeias polipeptdicas. A estrutura tridimensional das protenas est associada sua funo, e esta depende em grande parte das propriedades fisico-qumicas das _______ __________ dos aminocidos. No entanto, s os aminocidos no so sempre suficientes para permitir a catlise. No caso dos complexos da cadeia transportadora de electres, a transferncia dos electres requer a presena de cofactores, tais como: ________ e _________.

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