Anlisis y control decalidad de aceites esenciales 2.

. La calidad de las plantas aromticas Para la utilizacin de los aceites esenciales es necesario conocer su composicin detallada y sus caractersticas fisicoqumicas y organolpticas, como parmetros imprescindibles para establecer las normas que determinen sus requisitos mnimos de calidad. A estas determinaciones habr que agregarles los ensayos que aseguren su eficacia y la inocuidad de su uso. Se debe controlar tambin la calidad de la materia prima de la obtencin de los aceites esenciales: las plantas aromticas. Estas, tambin se comercializan para su consumo en forma directa, ya sea con finalidad medicinal, alimenticia, cosmtica, etc. Las exigencias de los controles de calidad, difieren segn el uso final que se le dar a la planta o al aceite esencial que de ella se obtenga, por lo que no es posible indicar un nico control de calidad analtico. Daremos aqu los conceptos bsicos y comunes a la mayora de ellas. 3. Las Drogas vegetales aromticas como Materia Prima Las drogas vegetales aromticas pueden hallarse en el mercado enteras o bien troceadas con diferentes tipos de corte. Se pueden transportar en distintos recipientes (ej yute , papel) Cuando se las recepciona, tras controlarse el peso e inspeccionar que su contenido corresponda a lo indicado en los envases contenedores y notas de entrega, as como la ausencia de posibles daos ocasionados durante el transporte (por ejemplo, infestacin por insectos u hongos, contaminacin cruzada por olores, envases mojados, etc.), deben someterse a un periodo de cuarentena, hasta evaluar su calidad. De cada lote se efecta una toma de muestras siguiendo un esquema predeterminado, descrito en algunas farmacopeas o normas especficas, siendo ste lo ms representativo del lote posible. 4. Objetivos del control de calidad de las drogas vegetales aromticas: Asegurar la identidad del material, es decir, confirmar que corresponde a la parte de la planta y a la especie vegetal correspondiente. Asegurar que se encuentra en las condiciones adecuadas de comercializacin por lo que se refiere a su estado de conservacin y su pureza, es decir, que no ha sufrido alteraciones, adulteraciones ni excede los lmites de materias extraas u otros contaminantes. Asegurar que contiene la cantidad adecuada de aceite esencial y que su composicin es la correcta. (En caso de un uso especfico, como medicinal, cosmtico o alimenticio, puede ser conveniente el anlisis de otros grupos de principios activos tambin) 5. Tipo de anlisis Mtodos usados olor organolpticos color sabor macroscpicos histoqumicos Ensayos botnicos Indice de estomas Micrografa de polvo Materia extraa Humedad Pureza Cenizas totales, insolubles en cidos Metales pesados Pesticidas, agroqumicos Reacciones de caracterizacin Cualitativos Anlisis cromatogrfico por CG, HPLC y TLCFisicoqumicos Materia extrable por distintos solventes Cuantitativos Determinacin de contenido en aceite esencial Contenido en otros constituyentes activos Microorganismos aerobios totales (bacteria, mohos, microbilgicos levaduras Higinicos Escherichia coli (ausencia) Otros Aflatoxinas (ausencia) 6. Los ensayos botnicos corresponden a los caracteres morfolgicos, tanto macroscpicos como microscpicos y permiten la identificacin de la planta y, a veces, detectar falsificaciones y adulteraciones En materia extraa se determina el contenido en elementos extraos, tanto los procedentes de la planta originaria (partes no usadas, como por ejemplo: partes de races en la menta) partes que no corresponden a la planta de origen, (partes de otras especies vegetales), animal (insectos, plumas, etc.) o mineral (tierra, polvo de ladrillo, arena, etc.). Las especies vegetales deben estar exentas de enmohecimiento, de

insectos y de otras contaminaciones de origen animal. El control de la humedad es importante para la conservacin del material vegetal. Debemos recordar que en el caso de las plantas aromticas, su determinacin en estufa mediante evaporacin hasta peso constante del material entraa un resultado errneo por exceso, ya que incluye tambin al aceite esencial o buena parte del mismo. No debemos olvidar los ensayos microbiolgicos. Junto con el de pesticidas y metales pesados, el control de los contaminantes microbiolgicos (bacterias, hongos) tiene una especial importancia por razones higinicas y toxicolgicas. Los lmites de carga microbiana pueden variar segn el destino previsto para la especie vegetal (Caigueral y col., 1998), y se encuentran especificados en muchas normas y farmacopeas Los ensayos fisicoqumicos cualitativos contribuyen tambin al anlisis de identidad y pureza de la planta. Para ello se emplean reacciones de caracterizacin (generalmente de coloracin o de precipitacin) de grupos qumicos de fitoconstituyentes, o bien el anlisis de extractos de la planta por cromatografa en capa fina (CCF o TLC), cromatografa de gases (CG) o cromatografa en fase lquida de alta resolucin (CLAR o HPLC). stos ltimos nos dan el perfil cromatogrfico y nos ayudan a identificar la presencia de componentes caractersticos de la planta, o posibles adulterantes. En relacin a su costo, la TLC resulta particularmente interesante, puesto que siendo una tcnica mucho ms barata que las instrumentales, da mucha informacin con cantidades pequeas de muestra y de reactivos Para los ensayos fisicoqumicos cuantitativos, el ms destacable en el caso de las plantas aromticas es la determinacin del contenido en esencia, segn extractor de FA VII Ed. Con el aceite esencial obtenido en este ensayo pueden efectuarse anlisis cromatogrficos, que nos permitirn ver el perfil de la esencia (TLC, CG) y cuantificar sus principales componentes (CG).. 7. Determinacin del contenido de aceite esencial en un material vegetal Colector de destilacin empleado para la determinacin del contenido en esencia de una especie vegetal segn la Farmacopea Argentina VII Ed. Medidas en mm. 8. Fundamento, desventajas Se basa en efectuar una hidrodestilacin de un peso conocido de material vegetal y recoger el aceite esencial en un tubo graduado, que se encuentra en un colector de destilacin especialmente diseado para este tipo de anlisis. El colector se acopla a un matraz que contiene el material vegetal y un cierto volumen de agua, que se calienta para provocar la destilacin y regular su velocidad. El aceite esencial es arrastrado por el vapor generado en el matraz, y es atrapado por la trampa de xileno, donde luego se lee. El principal problema que tiene es que el material vegetal est constantemente inmerso en el agua hirviendo durante todo el tiempo de extraccin. Esto hace que si la planta tiene productos termolbiles, puedan descomponerse parcial o totalmente (por ejemplo la hidrlisis de steres, o la oxidacin de aldehidos y cetonas), modificando o la calidad o el rendimiento del producto obtenido. Se ha visto experimentalmente por ejemplo que en las esencias de lavanda, el contenido de acetato de linalilo puede disminuir hasta un 10% con respecto al contenido original presente en la planta. Al estar el agua en continuo contacto con el material vegetal va bajando su acidez, llegando a veces hasta pH 5 o menores, lo que favorece algunas conversiones o hidrlisis de los productos naturales (Koedam y col., 1980). Boutekedjiret y col. (1997) encontraron por ejemplo que el rendimiento de la esencia de romero en una hidrodestilacin es la mitad del obtenido con extraccin con vapor de agua 9. Ahora: Anlisis de la composicin de los aceites esenciales Son mezclas que pueden llegar a ser muy complejas, por lo que la identificacin de sus componentes no es una tarea

simple Antiguamente, esta identificacin se converta en una larga y tediosa operacin, que consuma muchsimo tiempo, ya que requera el aislamiento y purificacin de cada componente por tcnicas combinadas de destilacin fraccionada, TLC, CC, cristalizacin, etc. Por ello se usaban ms comunmente para el control, la determinacin de sus constantes fsicas (principalmente solubilidad, densidad, poder rotatorio e ndice de refraccin) o algunos ndices qumicos (de acidez, de ster, de acetilo, de fenoles, etc.). En las ltimas dcadas, el desarrollo de tcnicas instrumentales de anlisis y su acoplamiento a sistemas informticos y bases de datos, ha cambiado sustancialmente el panorama, agilizando de forma notable la identificacin de los componentes de las esencias. Han contribuido especialmente a este cambio, el desarrollo de: Tcnicas cromatogrficas de alta resolucin, principalmente la cromatografa de gases con columnas capilares. Tcnicas espectroscpicas, particularmente la espectrometra de masas (EM), la espectroscopa infrarroja (IR) y la espectroscopia de resonancia magntica nuclear (RMN). Sistemas cromatogrficos acoplados a tcnicas espectroscpicas, especialmente la cromatografa de gases acoplada a la espectrometra de masas (CG-MS) y la cromatografa de gases acoplada a la espectroscopa infrarroja (CG-FTIR) 10. Control de calidad de aceites esenciales El control de la calidad de un aceite esencial tiene como objetivo garantizar que posea unas determinadas caractersticas analticas, y que stas se mantengan de un lote de produccin a otro 11. A travs de estos anlisis se puede evaluar: El cumplimiento con normas de calidad. La deteccin de adulteraciones: por ejemplo el agregado de diluyentes, u otros casos como el agregado de mentol a esencias naturales de mentas, o el de terpenos ctricos a la esencia de limn. Discriminacin de calidades: como puede ser diferenciar una esencia de Geranio de Reunin de otra de origen africano. Normalizacin de calidades: como la estandarizacin de una esencia de menta por mezclado de distintas partidas con diferentes calidades. Determinacin de que el producto es realmente natural. 12. Anlisis realizados para control de calidad de aceites esenciales1.- Caractersticas organolpticas Olor- sabor- color2.- Determinaciones fsicas Densidad Poder rotatorio ndice de refraccin Miscibilidad en etanol Punto de congelacin Punto de inflamacin Rango de destilacin3.- Indices qumicos ndice de acidez ndice de ster ndice de saponificacin ndice de acetilo ndice de fenoles4.- Cromatografa cuali y Perfil cromatogrfico por CGcuantitativa Cuantificacin de los principales componentes5. Caracterstica espectroscpicas Ultravioleta-visible Infrarrojo6.- Otras determinaciones Pesticidas Metales pesados 13. Comparacin con monografas de referencia Las caractersticas estudiadas deben ser suficientemente descriptivas del producto para que permitan detectar aquellas desviaciones que se consideren suficientes para rechazar el lote. Se utilizan diferentes parmetros analticos y los valores obtenidos para una muestra se comparan con los establecidos en la correspondiente norma, que habr sido dictada por algn organismo de normalizacin o, en su defecto, por el propio interesado. 14. Parmetros analticos empleados en el control de calidad de aceites esenciales : Determinaciones fsicas El ndice de refraccin, permite detectar adulteraciones y envejecimientos, y sus principales ventajas son la rapidez y sencillez con que pueden obtenerse. La determinacin del punto de congelacin, puede ser reflejo de la calidad de un aceite esencial. Este es el caso de la esencia de ans, cuyo punto de congelacin depende del contenido en anetol, componente mayoritario de la esencia La miscibilidad en etanol,

es una tcnica muy sencilla para detectar adulteraciones por el agregado de acietes fijos o minerales, insolubles en etanol. El punto de inflamacin tiene importancia para el transporte de este tipo de materias, en relacin con su peligrosidad El rango de destilacin suele usarse para determinar la volatilidad de la esencia. Se controla la temperatura mnima a la cual comienza a destilar la esencia, y la temperatura mxima a la cual se destila su totalidad. Tambin puede indicarse qu porcentajes destilan a determinados rangos de temperaturas 15. Parmetros analticos empleados en el control de calidad de aceites esenciales : Determinaciones qumicas Su uso va decayendo debido a la implantacin de mtodos cromatogrficos y espectroscpicos, que tienen las ventajas de ser ms rpidos, completos y sensibles. Sin embargo en algunos casos (por razones econmicas, logsticas, etc.) siguen siendo muy tiles, y por eso se incluyen en casi todas las normas existentes ndice de acidez. Se refiere al grado de acidez de un aceite esencial y se define como el nmero de miligramos de hidrxido potsico necesarios para neutralizar la acidez contenida en un gramo de aceite esencial. ndice de ster. Se refiere al contenido de steres de la muestra. Se define como el nmero de miligramos de hidrxido potsico necesarios para saponificar los steres contenidos en un gramo de aceite esencial. ndice de saponificacin. Es la suma de los dos ndices anteriores. ndice de acetilo. Indica la riqueza en hidroxilos alcohlicos. Su determinacin requiere un proceso de acetilacin seguido de una saponificacin. ndice de fenoles. Se refiere al contenido en fenoles de un aceite esencial y ha sido utilizado para aquellas esencias con elevado contenido en este tipo de compuestos, como puede ser la de clavo (eugenol) o la de tomillo (timol y/o carvacrol). Se basa en el cambio de solubilidad que sufren los fenoles de esas esencias al formar el correspondiente fenato (en medio bsico), pasando de la fase oleosa a la fase acuosa. 16. Parmetros analticos empleados en el control de calidad de aceites esenciales : Anlisis cromatogrfico La tcnica cromatogrfica ms importante para el anlisis de los aceites esenciales es, la cromatografa de gases (CG). Se utiliza para obtener el perfil cromatogrfico y cuantificar los principales componentes del aceite esencial. Podemos tambin comparar el cromatograma de la muestra con un cromatograma patrn. El mayor valor de un perfil cromatogrfico es que permite, ante la presencia de un componente inusual, o ante la ausencia de un constituyente tpico, el rechazo de una partida de aceite esencial. Sin embargo, el manejo de perfiles cromatogrficos para la caracterizacin de aceites esenciales requiere de la suficiente experiencia y criterio como para evitar malas interpretaciones o falsas conclusiones. El principal problema radica en que por un lado los aceites esenciales suelen tener una composicin qumica sumamente compleja, lo que muchas veces supera las posibilidades analticas del mtodo cromatogrfico simple. En algunos casos sera necesario disponer de varias columnas y varios detectores, como para lograr un anlisis completo que d una idea acabada de la calidad de la esencia en estudio. Es casi imposible determinar si una esencia de vainilla es natural o no por cromatografa en fase gaseosa, y dos cromatogramas de esencia de menta con distintos perfiles cromatogrficos pueden ser de calidades comparables y aceptables. Por ello, sigue siendo polmico el agregado de perfiles cromatogrficos a las normas. Para paliar este problema es que las normas estn en constante revisin, y su actualizacin requiere de un cuidadoso y pragmtico estudio. La nica manera de asegurarse un resultado adecuado puede ser usando patrones de referencia, es decir esencias consideradas como buenas, y a las que deberan corresponderse las sucesivas muestras. Sin embargo no debe olvidarse que la

eleccin del patrn de referencia puede ser totalmente arbitrario, y que las esencias, como todo producto de origen natural, siempre tendr diferencias. 17. Parmetros analticos empleados en el control de calidad de aceites esenciales : Otras determinaciones Caractersitcas espectroscpicas: Se utilizan principalmente la espectroscopa ultravioleta-visible y la infrarroja. En la espectroscopa infrarroja, el perfil del espectro IR de la esencia puede emplearse como parmetro de calidad en relacin a un estndar establecido. Una coleccin interesante de espectros IR de aceites esenciales y de algunos de sus componentes fue publicada por Bellanato e Hidalgo (1971). Otras determinaciones: Merece una especial atencin el anlisis de pesticidas en aceites esenciales, debido a su liposolubilidad, es necesario detectar su presencia. Sobre estos contaminantes existe muy poca informacin, pero debe s destacarse el trabajo realizado por Schilcher y col. (1997, 1998). A pesar de la gran difusin de su uso, debe admitirse como lo hacen estos autores que las dosis y la forma de uso de un aceite esencial, an en medicina y en alimentacin, juegan a favor de las mismas, y resulta altamente improbable que surja algn problema toxicolgico por esta causa. 18. Normas de calidadpara aceites esenciales 19. Para fragancias: La calidad est determinada principalmente por las caractersticas olfativas. La industria de fragancias suele utilizar patrones propios de referencia, tpicos para cada empresa, y a veces para cada producto terminado donde va a ser usado. Debe destacarse en este mbito el rol que juegan las normas IFRA (International Fragrance Association), como determinantes de aquellos productos aromticos que tienen restricciones o prohibicin de uso. 20. Para sabores o alimentacin La calidad depende de su sabor y olor. Las normas correspondientes estn inscriptas en los Cdigos Alimentarios y legislaciones nacionales sobre alimentos. Tambin en este caso debe recalcarse la importancia de las normas IOFI (International Organization of the Flavour Industry), que al igual que con las normas IFRA para la industria de fragancias, tratan de regular o restringir el uso de determinadas materias primas, tanto naturales como sintticas. 21. Para la industria farmacutica y cosmtica La calidad est supeditada a la presencia de constituyentes activos definidos, los que deben ser cuantificados, o a su actividad farmacolgica, aunque no se conozca con certeza cul o cules son los principios activos. En estos casos solamente se podr hacer una evaluacin a travs de un perfil cromatogrfico, contra patrn. Las normas estn dadas por las Farmacopeas oficiales, tanto nacionales, como regionales (Farmacopea Europea)o herbarias (como la Farmacopea Ufficiale italiana (1992) o la British Herbal Pharmacopoeia (1996). Cuando el uso es cosmtico, las normas ms empleadas son las publicadas por FMA (Fragrance Material Association), IFRA (International Fragrance Association), y las AFNOR (Francia), ISO (Internacionales), o las normas nacionales existentes en muchos otros pases. 22. Para uso industria Se buscan disolvente, agente de flotacin de minerales, etc. Aqu pueden ser parmetros trascendentes la densidad relativa, el rango de destilacin, el color, la constante dielctrica, su poder oxidante o el punto de inflamacin, poder disolvente o el porcentaje de residuo de evaporacin a determinadas temperaturas, sin importar tanto el olor, el sabor o la constitucin especfica de cada esencia. 23. Bibliografa Los recursos vegetales aromticos en Latinoamrica, Dr. Bandoni A., CYTED. (2002) Bases de datos MEDLINE, AGRICOLA. Chemical Abstracts- Section

Essential Oils. (Chemical Titles) Bellanato, J. e Hidalgo, A. (1971) Infrared analysis of essential oils. Heyden & Son Ltd., Londres.153 pg.. Boutekedjiret, C. y col. (1997). Influence du mode dextraction sur le rendement et la composition de lhuile essentielle de Rosmarinus officinalis L. Riv. it. EPPOS(22):33-35 Caigueral, S.; Vila, R. y Wichtl, M. (Eds.) (1998). Plantas medicinales y drogas vegetales para infusin y tisana. OEMF International srl, Miln. 606 pg. Koedam, A. y A. Looman. (1980). Effect of pH during distillation on the composition of the volatile oil from Juniperus sabina. Planta Medica(supl.):22-28. Schilcher, H. y M. Habenicht. (1997). A new method for the determination of organochlorine pesticides in essential oils with results of analysis of 110 essential oil samples and 10 medicinal products. Proceedings of the 27th International Symposium on Essential Oils (Vienna).Ed. Allured Publ. Co. 342 pg. Schilcher, H. y M. Habenicht. (1998). New analytical method for the detection of organochlorine pesticides in essential oils and results of the investigation in 110 commercial essential oil samples and finished drugs. Part 5. On hazardous contaminant contents in plants drugs and drug preparations. Pharm-Ind. 60(3):249-252.