CAPTULO 2

MORFOLOGA Y ESTRUCTURA BACTERIANA Mara Anglica Martnez T. Tamao, morfologas y agrupaciones bacterianas La observacin microscpica de las bacterias revela su tamao, morfologa y tipos de agrupaciones, caractersticas que son de ayuda para la identificacin bacteriana. Las bacterias tienen alrededor de 1 m de dimetro y 0.2 a 3-4 m de largo y poseen tres formas bsicas; las cocceas cocos (bacterias de forma esfrica); los bacilos (bacterias de forma cilndrica) y las espiroquetas (bacterias con forma de espiral). Muchas especies bacterianas, especialmente las cocceas, permanecen unidas luego de su divisin, dando origen a distintas agrupaciones que facilitan su identificacin presuntiva. Las agrupaciones estn determinadas por el plano de divisin bacteriana y la mayor menor tendencia de las bacterias a permanecer unidas. Cuando una coccea se divide en un plano forma un diplococo. Existen dos tipos de diplococos; neisserias y neumococos. Las neisserias estn unidas por sus caras adyacentes planas lo que les da forma de granos de caf. Esta disposicin es caracterstica de Neisseria gonorrhoeae y Neisseria meningitidis, agentes de la gonorrea y meningitis respectivamente. Los neumococos, trmino cientfico Streptococcus pneumoniae, es la principal causa de neumonia adquirida en la comunidad. Este microorganismo forma cadenas cortas y diplococos y se caracterizan por tener una forma alargada descrita como lanceolada (la forma de la punta de una lanza), de llama de una vela. Si la coccea se divide en un plano, pero permanece unida luego de la divisin da origen a una cadena estreptococo (Streptococcus). Si por el contrario, la coccea se divide en varios planos, da origen a un racimo de uva, caracterstica presente en los estafilococos (Staphylococcus). Los bacilos tienen menor tendencia a permanecer unidos luego de la divisin, pero se decriben dos agrupaciones; los estreptobacilos (cadenas de bacilos) caracterstica presente en el gnero Bacillus y las bacterias dispuestas en empalizada letra china. Esta ltima caracterstica se debe a que los bacilos quedan unidos por un extremo luego de su divisin, lo que se presenta en los difteromorfos, bacterias de morfologa similar a Corynebacterium diphteriae, el agente de la difteria. Mientras la difteria ha sido controlada por vacunas, existen numerosas otras especies de Corynebacterium que forman parte de la Microbiota comensal de nuestra piel y mucosas. Ultraestructuras bacterianas Muchos elementos de la estructura bacteriana estn involucrados en su interaccin con el hospedero, siendo responsables de su patogenicidad. Algunas estructuras bacterianas participan en la adherencia a los tejidos del hospedero, en la evasin de la respuesta inmune o induciendo una respuesta inflamatoria de diferente magnitud. Algunos de sus componentes permiten en el laboratorio el diagnstico microbiolgico. Por otra parte, componentes de la estructura bacteriana constituyen el sitio blanco de antimicrobianos y vacunas.

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En la figura 2-1, se observa un esquema de la clula procaritica. Su citoplasma carece de organelos membranosos, (mitocondrias) y sistemas de membranas (retculo endoplasmtico) e incluye el material gentico. En contraste, su envoltura es ms compleja comparada con la clula eucaritica, ya que, adems de la membrana celular, posee una compleja pared celular y frecuentemente una cpsula. Las estructuras bacterianas las podemos clasificar, por razones didcticas, en estructuras constantes o accesorias. Las estructuras constantes son las estructuras esenciales para la vida de la bacteria e incluyen el citoplasma con el cromosoide bacteriano, la membrana y la pared celular. Por otra parte, las estructuras accesorias: cpsula, flagelos y fimbrias, estn presentes slo en algunas de ellas y aunque no son indispensables para la vida, otorgan extraordinarias ventajas adaptativas a las bacterias que las poseen.

Figura 2-1: ESTRUCTURAS CONSTANTES

Estructura de una clula procaritica.

El citoplasma bacteriano es un gel de alta presin osmtica. Al microscopio electrnico muestra un aspecto finamente granular, debido a su alto contenido en ribosomas e inclusiones de diversos materiales nutritivos que las bacterias almacenan en forma insoluble. Aproximadamente en el centro del citoplasma localizamos el material gentico de la bacteria, organizado en un nucleoide, el cual se destaca en microfotografas por su aspecto hipolcido. Este material gentico consiste de un cromosoide nico formado por ADN de doble hebra circular. En las bacterias tpicas, como Escherichia coli, tiene aproximadamente 4.800 kpb y extendido mide 1 mm de longitud. Esta gran molcula se encuentra compactada por sobreenrrollamiento, proceso en el que intervienen enzimas del tipo topoisomerasa y protenas estructurales tipo-histonas. La membrana citoplasmtica, mejor llamada membrana celular, es la fina membrana que protege el citoplasma. Cumple con el modelo de Singer de unidad de membrana, estando constituida por una bicapa fosfolipdica y protenas, tanto integrales como perifricas.
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Constituye la principal barrera de permeabilidad celular, pero en las bacterias cumple numerosas otras importantes funciones. Entre otras, contiene las protenas y otros componentes de la respiracin celular y fosforilacin oxidativa. Es un soporte para la sntesis y translocacin de las macromolculas externas que forman la pared celular y los exopolisacridos. Es el lugar de sntesis de enzimas y de protenas en general. La membrana celular se pliega al interior formando un saco membranoso denominado mesosoma, en al menos dos localizaciones. Los mesosomas sirven de sitio de anclaje del cromosoide bacteriano a la membrana celular, participando en su separacin luego de la replicacin y en la formacin de un septum que dividir las clulas hijas. La pared celular es el soporte fsico de la clula y la estructura ms externa cuando no existe cpsula. La pared celular otorga proteccin fsica a la bacteria y tambin la protege del shock osmtico, dada la hipertonicidad celular. Adems de estas funciones esenciales, algunos de sus elementos tambin participan en la interaccin agente-hospedero, ya sea facilitando la adherencia a los tejidos, protegiendo la bacteria de los mecanismos inespecficos de defensas o induciendo una respuesta inflamatoria. El componente bsico de la pared celular es el peptidoglicano o murena. Est presente en todas las bacterias, excepto los Mycoplasmas que carecen de pared celular y que han desarrollado otras estrategias para protegerse del shock osmtico. El peptidoglicano es una macromolcula compleja que se dispone como una red alrededor de la clula bacteriana. Est compuesto por cadenas de dos aminoazcares alternados: N-acetil glucosamina y cido N-acetil murmico, unidos por enlace -1-4. El cido murmico est constituido por un tetrapptido formado por L y D aminocidos: L-alanina, D-cido glutmico, L-lisina, D-Alanina. Finalmente, las cadenas de azcares se unen entre si por la unin de los tetrapptidos de una cadena con la otra. Esto le da al peptidoglicano su estructura de red, determinando su resistencia. La unin entre los tetrapptidos de cadenas vecinas es inhibida por los antibiticos -lactmicos. Existen diferencias en la composicin y estructura de la pared celular entre las bacterias Gram (+) y Gram (-) (Figura 2-2).

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Figura 2-2: Pared celular en bacterias Gram (+):

Envolturas bacterianas.

El pptidoglicano se dispone en varias capas lo que le otorga grosor a la pared. Atraviesan el peptidoglicano polisacridos cidos, denominados cidos teicoicos. Los cidos teicoicos son de dos clases: poliglicerol fosfato y poliribitol fosfato. Los poliglicerol fosfatos estn unidos a la membrana celular y se les denomina cidos lipoteicoicos, mientras que los poliribitol fosfato o cidos teicoicos estn unidos al peptidoglicano. Las funciones primarias de estos polmeros son la estabilizacin del peptidoglicano y la captura de Mg++. Sin embargo, se ha demostrado en algunas bacterias patgenas, como Staphylococcus y algunos Streptococcus, que cumplen funciones tipo adhesinas. En S. pneumoniae contribuyen a la respuesta inflamatoria. Otros componentes, presentes en algunos microorganismos, tienen importancia antignica o clnica. Por ejemplo, los polisacridos neutros se encuentran presentes en todos los Streptococcus, as como la protena M en el S. pyogenes. Pared celular en bacterias Gram (-): Su pared celular es ms delgada, pero ms compleja que la de los Gram (-). El pptidoglicano se dispone en una sola capa, pero por fuera de ella se encuentra una segunda membrana denominada membrana externa. La membrana externa es una membrana asimtrica, porque si bien la monocapa interna est formada por fosfolpidos, la monocapa exterior est formada por un tipo especial de lpido, denominado lipopolisacrido (LPS). El LPS es una molcula anfiptica que contiene tres regiones diferentes: el lpido A, el core y el antgeno O. El lpido A, es un complejo de azcares, fosfatos, cidos grasos y forma una bicapa con los fosfolpidos de la membrana. Adems, es el responsable de la toxicidad del LPS. El core, es un oligosacrido de 4 a 5 azcares, algunos infrecuentes como las heptosas y un azcar de 8 carbones, denominado ceto-deoxioctanoico (KDO) . Sirve de enlace entre el lpido A y el Antgeno O. El antgeno O, est formado por cadenas de 25 o ms unidades de azcares repetidas. En el laboratorio permite la clasificacin de importantes grupos bacterianos como Salmonella, Shigella, E. coli uropatgenos y enteropatgenos. El LPS constituye una endotoxina, que se libera cuando la bacteria se divide o muere. Es un potente estimulador de los macrfagos, lo que causa la activa liberacin de citoquinas, responsables de las manifestaciones clnicas de las infecciones por bacterias Gram (-) y que varan desde una fiebre hasta el shock sptico. Entre la membrana externa y la membrana celular se crea un compartimento virtual, llamado espacio periplsmico. El espacio periplsmico es una matriz que incluye al pptidoglicano, enzimas, protenas captadoras de nutrientes y sustancias de secrecin. La membrana externa contiene numerosas protenas, siendo las porinas las ms abundantes. Se denominan as, porque forman poros que comunican el exterior con el espacio periplsmico. Las porinas constituyen poros de difusin inespecficos que permiten el paso de sustancias hidroflicas y no mayores de 700 daltons (aminocidos o disacridos). Las porinas

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ms conocidas en E. coli son OmpC y OmpF. En condiciones de alta osmolaridad o temperatura (como las que se encuentran en el ser humano), se sintetiza preferentemente OmpC, porina de poro pequeo, mientras que en condiciones de baja osmolaridad y baja temperatura (medio ambiente), se sintetiza la porina OmpF, que tiene un poro de mayor dimetro. Otra protena abundante en la membrana externa, es OmpA. Esta ltima, no es una porina, sino que es el receptor del pili F que participa en el proceso de conjugacin. ESTRUCTURAS ACCESORIAS Exopolisacridos: La mayora de las bacterias; tanto Gram (+) como Gram (-) sintetiza una cubierta de naturaleza polisacrida que las rodea. Los exopolisacridos son sintetizados en la membrana citoplasmtica, atraviesan la pared celular y se establecen afuera. Se clasifican de acuerdo a la relacin con la superficie exterior de la bacteria y a su grado de rigidez en cpsulas y glicoclix. Las cpsulas tienen una unin firme a la bacteria, son rgidas y excluyen partculas, entre ellas la tinta china. Su funcin es proteger a las bacterias de la fagocitosis, interfiriendo en la accin del complemento. Los polisacridos capsulares son antignicos (Antgeno K). Debido a su estructura fibrilar radial altamente hidratada, las cpsulas no se tien con las tinciones habituales, sino que requieren colorantes especficos para polisacridos o tincin negativa con tinta china. El glicoclix es flexible, se une en forma laxa a las bacterias, perdindose fcilmente. Participa en la formacin de biopelculas. Esta forma de crecimiento bacteriano se caracteriza por la formacin de microcolonias rodeadas de glicoclix. Un ejemplo de importancia clnica es la colonizacin del Staphylococcus epidermidis en material protsico y catteres. Una vez adherida esta bacteria, se multiplica formando una microcolonia rodeada de glicoclix que la protege de los antimicrobianos, anticuerpos y de la fagocitosis. Flagelos: Los flagelos son apndices filamentosos, helicoidales, que se emplean en la movilidad bacteriana. Las bacterias nadan rotando los flagelos, como una hlice. Estn presentes slo en los bacilos. Estn formados por un cuerpo basal y un gancho embebidos en la envoltura celular y un filamento externo. El filamento externo mide 20 nm de dimetro y consiste en el ensamblaje de miles de monmeros de una protena llamada flagelina, que se dispone como un cilindro de 5 10 m de longitud. Los flagelos se observan al microscopio de luz, solamente si las bacterias se tien con tinciones que aumenten su grosor. La posicin de los flagelos puede ser pertrica, rodeando toda la bacteria; montrica o loftrica si poseen un flagelo o un haz de flagelos en un polo, respectivamente; o anftricas si poseen un haz de flagelos en cada polo. Los flagelos son muy buenos inmungenos. Los antgenos flagelares se denominan antgenos H. Las bacterias mviles tienen una ventaja adaptativa a su ambiente, porque regulan su desplazamiento, mediante quimiotaxis frente a diversas sustancias nutritivas y repelentes.

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En Salmonella existen dos genes con distinta ubicacin en el cromosoide, que codifican flagelos, antignicamente diferentes. La regulacin de la expresin de estos genes se debe a la inversin de una secuencia repetida invertida, responsable de la activacin de un promotor (off / on). Este fenmeno se denomina variacin de fases y probablemente ayuda a la bacteria a evadir la respuesta inmune humoral. Fimbrias: Las fimbrias, tambin llamadas pili, son microfibrillas parecidas a pelos, que rodean en nmero de 100-200 a algunas bacterias Gram (-). Miden 3-7 m de dimetro, por lo que se observan slo al microscopio electrnico. Estn constitudas por el ensamblaje de miles de monmeros de un protena estructural llamada pilina, que se dispone en cilindros rgidos o flexibles y por unas pocas copias de una protena apical con propiedades de adhesina. Las fimbrias son responsables de la adherencia especfica de las bacterias a los tejidos del hospedero, explicando la especificidad de hospedero y de tejidos de las bacterias. Entre los ejemplos ms conocidos destacan las fimbrias tipo 1 o pilis comunes, que se adhieren a residuos de manosa y que se encuentran en un gran nmero de Enterobacteriaceas y las fimbrias P, que se encuentran en los clones uropatgenos y pielonefritognicos de E. coli y cuyo receptor es gal-gal. Dada su importancia, numerosas bacterias fimbriadas han desarrollado mecanismos que le permiten la variacin de fases y variacin antignica de las fimbrias, con el objeto de evadir la respuesta inmune humoral del hospedero. Esporas: Dos gneros de bacilos Gram (+): Bacillus y Clostridium pueden dar origen a una forma de vida latente y resistente denominada endospora. Estas estructuras se originan dentro de la clula bacteriana vegetativa y se liberan por lisis celular. Las endosporas son resistentes a condiciones ambientales desfavorables como calor, desecacin y radiacin ultravioleta, permaneciendo viables en el ambiente por cientos de aos. Debido a su resistencia y a que son producidas por microorganismos altamente patgenos, es imprescindible esterilizar las soluciones e instrumentos mdicos que van a ser empleados en ciruga adecuadamente (autoclave y horno Pasteur). El proceso de esporulacin comienza con la expresin de una nueva subunidad de la ARN polimerasa, la cual va a transcribir los genes relacionados con este proceso. Con la replicacin del ADN y migracin de un cromosoide a un polo, se invagina la membrana celular rodeando en una doble capa el cromosoide y una pequea cantidad de citoplasma. Luego, se sintetizan dos capas de la espora entre ambas bicapas de membrana. La ms interna, o corteza, corresponde a una gruesa capa de peptidoglicano, mientras que la externa o cubierta, est compuesta por una protena similar a la queratina; impermeable y rica en enlaces S-S-. La termorresistencia parece estar mediada por un compuesto rico en calcio, el dipicolinato de calcio y por el estado de deshidratacin de la espora. El proceso de germinacin es igualmente complejo. Lesiones de la cubierta de la espora, ms un ambiente propicio estimularan la germinacin. Esta se inicia con la captacin de agua y la prdida del dipicolinato de calcio y contina con la biosntesis de las estructuras de la forma vegetativa.

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