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Antecedentes En 1595, el famoso profesor de anatoma y botnica de Leiden, Holanda, Peter Pauw (1564-1617), realiz la autopsia de una nia

de 11 aos que estaba muy delgada debido a una fiebre hctica y tena pericarditis. En el informe, el doctor anot: "... se supona que la nia estaba hechizada... la nia estaba muy flaca... el pncreas estaba abultado, cirroso y color blanco brillante..." (Astudillo, 2011). En un libro de medicina editado en 1606, escrito por el profesor espaol Alonso, se puede leer el siguiente prrafo: "...una seora honorable dice que conoce a la gente embrujada, si al rascarles la frente, uno nota despus un sabor salado en los dedos...". Otras antiguas historias, similares a las anteriores, donde el exceso de sal en la frente de los nios, era irremediablemente sntoma de hechizo, encantos, magia, posesin demonaca, se encontraron en otros tantos pueblos de Europa como por ejemplo: Rusia, Polonia, Checoslovaquia, Hungra, Rumania, Italia, Suiza, Austria, etc. Es en 1905 cuando Karl Landsteiner describe la asociacin entre meconio espeso en un recin nacido y fibrosis del pncreas, especulando que ambos fenmenos se producen debido a la deficiencia de una enzima. En 1912, Sir Archibald Garrod describi familias, algunos de cuyos nios tenan esteatorrea y moran por bronconeumona, sugiriendo un posible modo recesivo de herencia. En 1936, el pediatra suizo Guido Fanconi fue el primero en usar el trmino fibrosis qustica (FQ) para describir la combinacin de insuficiencia pancretica y enfermedad pulmonar crnica en nios, pero su reporte se difundi poco por estar escrito en alemn (Astudillo, 2011). En 1953, Di Sant'Agnese describi la existencia de un exceso de cloruro de sodio en el sudor de los nios afectados por la FQ. Esto condujo rpidamente a la utilizacin de esta alteracin como prueba diagnstica, la nica existente en ese momento. A principios de los 1980s, Quinton (Quinton, 1983) describi de manera precisa esta alteracin en el transporte de sales, explicando el defecto en la permeabilidad de los iones cloruro (Cl-) en las clulas epiteliales afectadas de las glndulas sudorparas, seguidamente Knowles (Knowles, 1983) observ el mismo fenmeno en el epitelio respiratorio. En 1989 se aisl el gen CFTR, implicado en

la FQ. Este gen se encuentra localizado en 7q31 y tiene 27 exones. La protena que codifica est compuesta por 1480 aminocidos (Hasnain y Fanen, 2009). INTRODUCCION La fibrosis qustica (FQ) es una enfermedad sistmica, caracterizada principalmente por la presencia de secreciones viscosas en las vas areas y tracto digestivo y una eliminacin excesiva de cloro y sodio por el sudor (FRANCHI, 2011).La Fibrosis Qustica (FQ) es la enfermedad hereditaria letal ms frecuente en raza blanca. Se transmite de manera autosmica recesiva, de tal modo que una pareja de portadores tiene la probabilidad de un 25% de un hijo con FQ en cada embarazo y que cada hijo sano tiene 2/3 de probabilidades de ser portador (Minsal, 2007). La enfermedad se produce por una mutacin en el gen que codifica la protena reguladora de la conductancia transmembrana de la FQ (CFTR), ubicado en el brazo largo del cromosoma 72, 3. A la fecha se han encontrado ms de 1.400 mutaciones que la determinan, siendo la ms comn la llamada F508. El defecto de la protena provoca un trastorno del transporte de cloro y sodio por las clulas de los epitelios, generndose un gran espesamiento de las secreciones, que determina daos en los epitelios secretores, siendo los principales rganos afectados el pulmn, pncreas, hgado, la piel, el aparato reproductor masculino y otros (Minsal, 2007). El gen de la FQ13 se encuentra localizado en el brazo largo del cromosoma 7; la zona que lo contiene ha sido completamente clonada y mapeada, de un tamao de 250kb con 27 exones, con un rango de 38 a 724kb, codifica una protena de 1480 amino-cidos que se ha llamada Protena Transportadora de Transmembrana (CFTR), esta se localiza en el polo apical de las clulas epiteliales. Es una glicoprotena cuya funcin es actuar como canal de cloro, est constituida por dos regiones transmembrnicas (hidrofbicas) separadas por una regin de unin al ATP, regin NBF (NBF-1), y una subunidad reguladora R (hidrfila), seguidas por otra regin NBF (NBF-2) (Garca, 2009). La primera mutacin encontrada fue la F508, localizada en el dominio NBD1, presente en alrededor del 75% de la poblacin caucsica14, corresponde a la falta

de tres pares de bases en el exn 10, lo que se traduce en la deleccin de fenilalanina en la posicin 508 de la protena. Posteriormente se han descrito ms de 1500 mutaciones clasificadas en 5 tipos, lo cual determina su mayor o menor severidad. Adems se han encontrado ms de 150 haplotipos (Garca, 2009). La expresin fenotpica de la enfermedad vara ampliamente, dependiendo de la mutacin o mutaciones presentes4, 5. Ms de 1200 distintos cambios en las secuencias de la CFTR han sido asociados con enfermedad clnica.5 La gravedad de la enfermedad parece variar en funcin de la mutacin gentica especfica (Minsal, 2007).

El gen y la protena CFTR: Estructura, funcin, mutaciones y sus efectos El gen CFTR est ubicado en el cromosoma 7 y tiene una extensin considerable, de aproximadamente 250 kilobases(kb), por lo tanto, ofrece un blanco mutacional grande. De hecho, se han descrito ms de 1700 mutaciones causantes de la enfermedad, con frecuencias individuales variables (Cystic Fibrosis en Como es sabido, la

MutationDatabase,

CFTR1

http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/StatisticsPage.html).

mutacin mundialmente ms comn es la deleccin de fenilalanina en la posicin 508 de la protena para las mutaciones, el prefijo p. denota que la descripcin de la mutacin se refiere a la secuencia de aminocidos de la protena. En cambio, la anotacin de una mutacin precedida de c., implica que la descripcin se refiere a la secuencia del ADN codificante; por ejemplo, c.1521_1523delCTT describe, a nivel de ADN, la prdida de 3 nucletidos de la secuencia codificante de CFTR que dan origen a la prdida del aminocido fenilalanina en la secuencia de aminocidos de la protena. La descripcin precedida de la letra g., se refiere al ADN genmico. Esta es la nueva nomenclatura estandarizada segn las recomendaciones de la Human GenomeVariationSociety (www.hgvs.org). Un nmero variable de mutaciones adicionales a la p.F508del (entre 1 y 25-30, segn la poblacin estudiada) son relativamente comunes y se han encontrado con frecuencias variables en distintos grupos tnicos. Para la mayora de estas

mutaciones comunes, hay suficientes pacientes como para realizar anlisis de sus consecuencias clnicas y su efecto patognico sobre la funcin de la protena se ha estudiado in vitro(Repetto y Lay-Son, 2011). Los efectos de las mutaciones comunes sobre la protena en la clula se han clasificado en 5 grandes grupos (3): Clase 1, con ausencia de produccin de la protena (Ejemplo, p.Gli542X o p.G542X) Clase 2, con defecto de procesamiento de la protena (Ejemplo, p.F508del) Clase 3, con defecto en la regulacin del canal (ejemplo, p.Gli551Asp o p.G551D) Clase 4, con defecto en la conductancia (ejemplo, p. Arg117His o p.R117H) Clase 5, por alteracin del splicing o empalme (ejemplo c. 621+1G>T). En las mutaciones clases 1 y 2, hay ausencia de la protena en la membrana celular. En contraste, en las mutaciones clases 3 y 4 pueden resultar en la presencia de una protena con cierta actividad residual, pero el defecto funcional suele ser ms marcado en las mutaciones clase 3. Las mutaciones clase 5 tienen efecto variable, segn el tipo de mutacin. Las mutaciones clases 1, 2 y 3, se consideran severas, las clase 4, leves y las clase 5, como se seal, tienen consecuencias variables. El resto de las mutaciones (ms de 1600) han sido descritas en uno o muy pocos pacientes, lo que limita la posibilidad de correlacionarlas con las consecuencias clnicas. Para la mayora de ellas, sus efectos deletreos no han sido claramente demostrados in vitro. As como se han descrito muchas mutaciones patognicas, tambin hay centenas de polimorfismos o variantes normales. Con el uso cada vez ms frecuente de screening preconcepcional o neonatal para diagnstico presintomtico, paneles diagnsticos

que incluyen grandes nmeros de mutaciones, mayor acceso a secuenciacin directa y otros mtodos de bsqueda de rearreglosgenmicos (inserciones, deleciones, inversiones, etc.), se ha hecho cada vez ms imperativo el contar con informacin que permita claramente distinguir entre variantes normales y mutaciones causantes de enfermedad. En este sentido, el consorcio internacional de anlisis gentico de FQ (CysticFibrosis GeneticAnalysisConsortium) ha iniciado un estudio denominado Clinical and FunctionalTRanslation of CFTR o CFTR2, destinado a correlacionar todas las mutaciones con informacin completa, actualizada y revisada por expertos sobre los aspectos funcionales y las consecuencias clnicas de toda mutacin listada en su base de datos (http://www.genet.sickkids.on.ca/cftr/app). Esto, sin duda, ser de gran utilidad para los clnicos(Repetto y Lay-Son, 2011). La protena CFTR tiene 1480 aminocidos y ejerce funciones complejas; primariamente es un canal de cloruro activado por AMPc que se ubica en la membrana apical de las clulas epiteliales. Adems, participa en el transporte de otros iones y en la regulacin de otros canales inicos, como el canal de sodio epitelial o ENaC. La ausencia o defecto funcional de la protena produce efectos en la hidratacin de conductos epiteliales, y tambin predispone a mayor adherencia bacteriana(Repetto y Lay-Son, 2011). Hay evidencia de que adems puede producir alteraciones en la respuesta inmune. Las consecuencias fisiopatolgicas de la disfuncin del canal estn analizadas con ms detalle en una revisin de McAuley y Elborn, entre otras 3. Estos diversos roles han sido tiles para plantear la bsqueda de factores que modifiquen el efecto primario de las mutaciones en el gen CFTR y que pudieran influir en el fenotipo de la enfermedad(Repetto y Lay-Son, 2011). Incidencia Los datos obtenidos de los estudios epidemiolgicos y cribado neonatal sealan una gran variabilidad de la incidencia de la FQ entre diferentes pases y razas

Poblacin caucasiana La mayora de los autores citan una incidencia de un enfermo de FQ cada 2.5003.000 nacidos vivos en la raza blanca, aunque trabajos recientes, documentados por estudios de deteccin precoz neonatal, sealan cifras inferiores. Existe una gran variabilidad entre los distintos pases; as, en Canad, concretamente en Quebec, se resea una incidencia de 1 por cada 891 recin nacidos vivos, mientras que en Finlandia es de 1 por cada 25.000. Un estudio de cohortes realizado en el Reino Unido seala cifras de 1 por 2.500, mientras que el grupo de Wisconsin, basado en un estudio sobre pacientes diagnosticados mediante screening neonatal, observa un 1 por 3.400. En Espaa, en el ao 1999 comenzaron a realizarse en varias autonomas programas de deteccin precoz de FQ; as, en la Comunidad de Canarias se ha reseado una incidencia de 1 por 2.810, mientras que en Catalua y CastillaLen se sealan cifras inferiores (1 por cada 4.510 y 5.352, respectivamente)(Posadas y Moreno, 2005). Poblacin no caucasiana En los grupos no caucasianos las cifras son muy inferiores; as, en la poblacin de raza negra americana se indica una incidencia de 1 por cada 17.000, en la raza oriental de Hawaii 1 por cada 90.000 y en Japn de 1 cada 320.000 a 680.000 nacidos vivos. Estos resultados pueden estar influidos, adems de por factores genticos, por la carencia de mtodos diagnsticos para la deteccin de la enfermedad, ya que en estos pases existen otros problemas de salud que son mucho ms prioritarios(Posadas y Moreno, 2005).

Manifestaciones clnicas La presentacin clnica de la FQ vara entre los individuos de distintas familias e incluso entre los individuos de la misma familia. En la mayora de los casos la enfermedad se diagnostica antes de la adolescencia, aunque existen casos asintomticos hasta la edad adulta. Es imposible diferenciar, tanto desde el punto de vista clnico como biolgico, los heterocigotos portadores de los homocigotos que no portan ninguna mutacin.

La presentacin clnica vara con la edad. En 10% de los recin nacidos afectados se presenta leo meconial (obstruccin intestinal debido a un meconio anormalmente espeso). Posteriormente la sintomatologa se presenta

principalmente en dos sistemas, el respiratorio y el digestivo, manifestado como infecciones respiratorias repetidas y signos de mala absorcin. El sistema ms afectado es el respiratorio. Ello se debe a la obstruccin de los bronquiolos por un moco espeso que favorece el crecimiento de microorganismos. Este hecho explica las infecciones respiratorias repetidas por grmenes oportunistas. En 85% de los pacientes se puede observar como alteracin digestiva una insuficiencia pancretica exocrina (con defecto en la produccin de enzimas) que conduce a una obstruccin de los canales pancreticos y mala absorcin de protenas. El estado de esta funcin pancretica exocrina (IP, insuficiencia pancretica o SP, suficiencia pancretica) es un marcador de gravedad fenotpica siendo ms grave la IP que la SP (Kerem, 1990). La alteracin en las glndulas sudorparas conduce a la presencia de un exceso de cloruro de sodio en el sudor, sta prdida de sales es responsable de una deshidratacin aguda en caso de exposicin al calor. La enfermedad tambin afecta a otros rganos, entre los que destacan el aparato reproductor y el hgado. 98% de los varones afectados son estriles por atrofia y ausencia del vas deferens debido a la azoospermia obstructiva, por otro lado 80% de las mujeres afectadas son frtiles. La afectacin heptica del 30% de los casos comienza con hepatomegalia y en 9% como insuficiencia heptica. Ello se debe a la obstruccin de los tractos biliares intra y extrahepticos por compresin a nivel del pncreas. En 2-5% ello conduce a cirrosis biliar. Pronstico: si no se trata, la tasa mediana de supervivencia es de 3 a 5 aos.

No hay un tratamiento efectivo para la FQ, sin embargo la posibilidad de un diagnstico ms temprano y la posibilidad de tratamiento sintomtico ha hecho posible aumentar la supervivencia media a entre 25 y 30 aos. Este tratamiento sintomtico va desde la terapia antibitica a la nebulizacin con broncodilatadores o mucolticos y administracin de proteasas que inhiben los sntomas pulmonares hasta la administracin de enzimas pancreticas sustitutivas y vitaminas para la insuficiencia pancretica. En los estadios avanzados, se ha mostrado efectivo el trasplante triple (coraznpulmn-rin), aunque el principal obstculo para ello es la ausencia de rganos de donantes. De entre los ltimos avances teraputicos, la terapia gnica se ha encontrado con muchos obstculos. En la actualidad se estn estudiando otras estrategias prometedoras que tienen como objetivo la compensacin del defecto en la produccin y/o funcin de la protena CFTR en funcin del tipo de mutacin(Hasnain y Fanen, 2009).

Diagnostico El diagnstico de la FQ se basa en la prueba de la presencia de cloruro de sodio en sudor. Esta prueba se considera, todava hoy, la prueba ms fiable de la FQ. Las tcnicas usadas para ello son bastante simples pero un factor limitante importante es la cantidad necesaria de sudor, especialmente en recin nacidos, lo que aumenta la tasa de error al 30%(Hasnain y Fanen, 2009). A- Test del Sudor Los Consensos de la EuropeanCystic Fibrosis Societyy de la Cystic Fibrosis Foundation de Estados Unidos, han puesto de nuevo a esta prueba en el centro, al reconocer las limitaciones del conocimiento actual, referente al verdadero aporte del estudio de las mutaciones. La prueba se basa en la determinacin laboratorial de la concentracin de cloro (Cl) y si es posible, tambin de sodio (Na) en muestras de sudor. La nica determinacin validada y considerada patrnoro, es

el Test cuantitativo de iontoforesis con pilocarpina. Los mtodos cualitativos, (determinacin de la conductividad o de la osmolalidad) son slo de pesquisa para la enfermedad. Es recomendable realizar el examen a partir del mes de vida, siendo esencial garantizar la calidad del procedimiento. Debe ser llevado a cabo con una metodologa estandarizada, por profesionales con experiencia y en centros donde se efecte un nmero adecuado de pruebas, con el objeto de obtener un buen control de calidad(Paranza y Ascurra, 2009). B- Diagnstico molecular La FQ tiene un patrn autosmico recesivo de transmisin, esto significa que los padres de un nio afectado, son portadores sanos de la enfermedad. La caracterizacin del gen CFTR en 1989, abri la posibilidad del diagnstico molecular al paciente y su entorno familiar, propiciando la deteccin de portadores, el diagnstico prenatal y en los ltimos aos, el diagnstico preimplantacional. El anlisis gentico pone en evidencia la alta heterogeneidad molecular y su variable expresin fenotpica, dependiente, no slo del gen CFTR, sino tambin de su interaccin con otros factores genticos y ambientales(Paranza y Ascurra, 2009). C- Potencial de Membrana Aunque esta determinacin es segura y no exige un utillaje excesivamente caro, existen limitaciones que hacen difcil su generalizacin en la prctica clnica habitual. Es de suma importancia la estandarizacin de la tcnica antes de interpretar sus resultados. El epitelio respiratorio, incluido el nasal, regula la composicin del fluido que baa la superficie de la va area, transportando sodio y cloro. Este transporte activo genera una diferencia de potencial elctrico transepitelial que puede medirse in vivo, habindose documentado un patrn de anormalidades en los pacientes con FQ que pueden ser tiles en el diagnstico y en la evaluacin de eficacia de tratamientos encaminados a la correccin del defecto bsico. Las anormalidades en el transporte inico en el epitelio respiratorio de pacientes con FQ se asocian con un patrn caracterstico de diferencia de potencial comparado con el epitelio normal: potencial basal ms negativo, mayor

cambio ante la exposicin a amiloride, respuesta escasa o nula ante la perfusin de la mucosa con solucin libre de cloro(Paranza y Ascurra, 2009).

Factores modificadores Si bien existen manifestaciones clsicas y comunes entre los pacientes con FQ, la heterogeneidad clnica es muy amplia entre individuos o incluso hermanos que comparten el mismo genotipo. Hay pacientes diagnosticados antenatalmente por alteraciones que son aparentes en la vida intrauterina, otros individuos tienen manifestaciones tpicas de compromiso crnico de los tractos respiratorios y digestivo y son diagnosticados en la edad peditrica, y otros son identificados como adultos con presentaciones oligosintomticas como sinusitis crnica, azoospermia o pancreatitis recurrente. Fuera de estas diferencias en presentacin inicial, el curso de la enfermedad es muy variable entre cada grupo(Repetto y LaySon, 2011). Numerosos estudios, con estrategias diversas, han tratado de identificar causas que pudieran explicar la gran variabilidad clnica. Su individualizacin es relevante para comprender los factores involucrados en la patognesis de la enfermedad, establecer criterios predictivos del pronstico de la enfermedad, disear seguimiento y tratamientos personalizados y para identificar nuevos blancos teraputicos potenciales(Repetto y Lay-Son, 2011). Los factores modificadores pueden clasificarse como ambientales (o nogenticos), y genticos. Estos ltimos, a su vez, pueden dividirse entre variantes del mismo gen CFTR y variantes en otros genes. Muchos estudios han abordado la bsqueda de factores modificadores de diversos aspectos de la enfermedad. Entre algunos resultados, destacan la presencia de insuficiencia pancretica, en cuyo caso, las mutaciones en el gen CFTR tienen un alto valor predictivoya que la presencia de al menos una mutacin leve, clase 4 y algunas clase 5, se asocia a suficiencia pancretica; el leo meconial y su asociacin con variantes en el gen ADIPOR2; la diabetes mellitus con variantes en el gen TCF7L2, un gen previamente asociado a riesgo de diabetes en la poblacin general; el desarrollo

de cirrosis heptica y el alelo Z del gen SERPIN1A que codifica para la 1 antitripsina. En las secciones siguientes, describiremos aquellos estudios relacionados con la identificacin de factores de riesgo de dao pulmonar y su progresin, que constituyen la principal causa de mortalidad en FQ(Repetto y LaySon, 2011).

Marco terico
Deteccin de la mutacin F508 en el gen CFTR Extraccin de ADN La extraccin de ADN se realiz por la tcnica de TSNT, los leucocitos son lisados con el buffer de lisado TSNT, liberando el contenido citoplasmtico dejando una muestra contenida nicamente de protenas, lpidos y cidos nucleicos. Las protenas desnaturalizadas fueron extradas con fenol y cloroformo. Esta muestra fue sometida a centrifugacin que nos dio una placa solida entre la fase slida y acuosa, despus se prosigui a recuperar la fase acuosa que contiene el DNA. Y por ltimo se obtiene le DNA con una precipitacin por etanol. El ADN se lav con etanol al 70% para limpiarlo de exceso de sales e seco y disolvi en una solucin amortiguadora. Por ultimo verificamos el xito de la extraccin de ADN para esto lo realizamos una electroforesis en un gel de agarosa al 0.8%, se concluye el proceso verificando en el equipo de fotodocumentacion gel Doc 1000 de Bio Rad una vez que se tio el gel con Bromuro de etidio y exponerlo a la luz ultravioleta (LOZANO, 2003). Deteccin de la mutacin F508 El ADN extrado es sometido a PCR, en la cual la enzima termoestable Taq polimerasa se encarga de sintetizar de manera muy precisa la secuencia

nucleotidica complementaria a la hebra molde comprendida entre los cebadores diseados para cubrir el rea flaqueante a la regin del exn 10, donde reside el codn F508 (LOZANO, 2003). Para que la reaccin se lleve a cabo con gran eficacia es necesario realizar una mezcla de reaccin que incluye dNTPs, MgCl2, un amortiguador especial, la

mezcla con los iniciadores, el ADN de inters, la enzima Taq y agua mili-Q(Se refiere a agua ultra pura, grado de laboratorio, que ha sido filtrada y purificada por osmosis inversa). El primer paso consiste en la desnaturalizacin del ADN, esto se refiere a que se separan las dos cadenas sencillas que forman la doble cadena del ADN. Para poder lograr este propsito la temperatura del tubo de reaccin se eleva muy cercas del punto de ebullicin del agua entre 90C y 94C. Despus que se elev la temperatura para abrir la doble cadena la temperatura desciende a una temperatura de 55C. A esta temperatura se llevaba a cabo el acoplamiento y alineacin de los iniciadores. Despus la temperatura se eleva alrededor de los 72C que es la temperatura ptima de accin de la Taq polimerasa, enzima que se encarga de copiar fielmente el fragmento de ADN flanqueado por los

iniciadores especficos en la reaccin. A esta secuencia de eventos se le denomina ciclo, para obtener un gran nmero de copias del fragmento de inters se realizan varios ciclos. Lo usual es realizar alrededor de 25 a 40 ciclos. Una vez obtenido el producto amplificado de la reaccin es corrido en un gel de agarosa al 2% y posteriormente se tie con bromuro de etidio para verificarlo en el equipo de fotodocumentacion (LOZANO, 2003).

Una vez confirmada la amplificacin se procede a correr los productos amplificados en un gel de poliacrilamida al 12% el cual se tio con bromuro de etidio y el patrn de bandas se analiza para ver las diferencias en el corrimiento de las muestras aun cuando estas sean muy pequeas (LOZANO, 2003). Secuenciacin Purificacin del producto amplificado Una vez amplificadas las muestras identificadas como variantes (probables mutaciones o polimorfismos a lo largo del gen) se procede a purificar el producto amplificado para estas muestras, previo a su secuenciacin (LOZANO, 2003). El proceso de purificacin se lleva a cabo por un mtodo enzimtico. Este mtodo consiste en adicionar a un producto amplificado de inters una mezcla de dos enzimas, la exonucleasa l y la fosfatasa alcalina encogedora. Una vez terminada

la PCR en la mezcla quedan remantes de dNTPs e iniciadores que interfieren en el procedimiento de secuenciacin. Ambas enzimas zona activas en el buffer de reaccin de PCR, y su objetivo es degradar a los iniciadores y a los dNTPs. La exonucleasa l remueve los iniciadores iniciales de la cadena sencilla y cualquier ADN de cadena sencilla ajeno producido por la PCR. La fosfatasa alcalina encogedora remueve remueve a los dNTPs remantes de la mezcla de PCR que pueden interferir en la reaccin de secuenciacin. Ambas enzimas se desactivan elevando la mezcla a una temperatura de 80C por un lapso de 15 minutos (LOZANO, 2003). Reaccin de PCR para secuenciacin La reaccin de PCR para secuenciacin difiere de la reaccin de PCR tradicional, en ese caso se preparan cuatro cockteles, todos con un nucletido distinto en cantidades suficientes para llevar a cabo todas las reacciones cclicas completas, y adems este nucletido se encuentra marcado fluorescentemente. Esto da como resultado productos de diferente longitud y que poseen todos el mismo nucletido marcado para cada tubo (LOZANO, 2003).

Resultados
Al realizar esta metodologa se logra diferenciar entre los dos alelos, el sano( con una longitud de 98 pares de bases) y el alelo afectado con ( una longitud de 95 pares de bases), esta diferencia se observa debido a que los iniciadores utilizados flanquean al codn 508 del gen, posicin que se pierde al encontrarse presente la mutacin F508. Esta prdida de 3 bases se puede resolver mediante su corrimiento en un gel de poliacrilamida al 12% cuando las molculas se someten a un campo elctrico de 100 volts, forzndolas a correr una distancia de 15 cm. De igual manera para obtener resultados ms exactos se purifica la muestra del amplificado de PCR y despus se realiza una secuenciacin para as una vez secuenciado se realiza una comparacin ms exacta del gen afectado y el gen sano y diagnosticar si est presente o no la mutacin F508.

Conclusiones
La fibrosis qustica (FQ) es una enfermedad sistmica, caracterizada

principalmente por la presencia de secreciones viscosas en las vas areas y tracto digestivo y una eliminacin excesiva de cloro y sodio por el sudor. La enfermedad se produce por una mutacin en el gen que codifica la protena reguladora de la conductancia transmembrana de la FQ (CFTR). El defecto de la protena provoca un trastorno del transporte de cloro y sodio por las clulas de los epitelios, generndose un gran espesamiento de las secreciones, que determina daos en los epitelios secretores, siendo los principales rganos afectados el pulmn, pncreas, hgado, la piel, el aparato reproductor masculino y otros. Se realiz el siguiente trabajo embace a la mutacin F508 porque esta mutacin es la ms frecuente y comn en el mundo, se presenta con una frecuencia

relativa mundial del 66%, para comprobar la presencia de este tipo de mutacin se utiliz la metodologa de PCR y secuenciacin, con las cuales podemos concluir y diagnosticar si una persona padece de este tipo de mutacin o no.

Bibliografa

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