Univ.

: Claudia Lorena Martinez Cardona IAM- 205-A II/SEM/09

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL INVESTIGACION DE PSEUDOMONAS AERUGINOSA EN AGUAS LABORATORIO N 5 I) OBJETIVOS:

Aplicar las tcnicas de cultivo y aislamiento de pseudomonas aeruginosa e interpretar los resultados.

II) MARCO TERICO:

Pseudomonas aeruginosa es un patgeno oportunista que cuando encuentra condiciones favorables puede ocasionar infecciones graves. Su hbitat es el suelo, agua, plantas y tambin se puede encontrar en las heces. Es un microorganismo extraordinariamente adaptable porque puede utilizar un gran nmero de compuestos orgnicos diferentes y adems es resistente a muchos de los agentes antimicrobianos. Su presencia en las aguas de bebida envasadas se considera un ndice de contaminacin. Tambin se investiga en las aguas de recreo como ndice de calidad, por su resistencia al cloro. III) MATERIALES Materiales Algodn Hilo Gradilla Trpode Malla de amianto Vaso pp Cinta naskin Reactivos Alcohol de 90 al 2 % Caldo lacto sada con magnsio o concetracion doble Placas con agar cetrimida Placas de agar p. Placas de agar f. Reactivos de la oxidasa

IV) PROCEDIMIENTO

TECNICAS: cultivo y aislamiento Sembrar 100 ml del agua problema en un matraz que contiene 100 ml de caldo lacto sado con magnesio a concentracin doble.

Univ.: Claudia Lorena Martinez Cardona IAM- 205-A Incubar a 37C durante 24-48 horas. II/SEM/09

Despues de la incubacin se examina el crecimiento del medio que se manifiesta como un enturbiamiento. Sembrar de este cultivo, con asa, una placa de agar cetrimida. Incubar a 42C durante 24 horas. Si las colonias desarrolladas en este medio son verdosas y fluorescentes se procede a su identificacin.

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V) CONCLUSION Con la elaboracin de este laboratorio pudimos aplicar las tcnicas de cultivo y aislamiento de pseudomonas aeruginosa para que posteriormente interpretemos los resultados de nuestra experiencia. VI) BIBLIOGRAFIA Guia de laboratorio.

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL IDENTIFICACION DE PSEUDOMONAS LABORATORIO N 6 I) OBJETIVOS: Estudiar las caractersticas bioqumicas del gnero pseudomonas para su identificacin. II) MARCO TERICO: Las Pseudomona aeruginosa, es un bacilo negativo no fermentador. Ha sido aislado incluso de las soluciones de jabones desinfectantes usadas por las enfermeras y mdicos para lavarse las manos. Cuando se toman muestras del medio ambiente hospitalario la P. aeuroginosa se encuentra en desagues, piletas, soluciones limpiadoras, medicamentos e incluso en las flores de los pacientes. Debe recordarse que aunque la P. aeruginosa posee muchos factores de virulencia solo es un patgeno significativo para los pacientes inmuno deficientes. Estos microorganismos pueden desarrollar en la mayora de los medios de rutina de laboratorio, incluyendo agar sangre y escaso crecimiento en agar de Mac Conkey.

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TEST DE OXIDACION-FERMENTACION DE HUGH-LETFSON: El medio Hugh-Letfson es una base sin carbohidratos, a la que se puede aadir despus de esterilizarlo, cualquier azcar esterilizado previamente por filtracin. Cuando se haba de esta prueba sin especificar nada, se supone que el test ha sido efectuado con glucosa, asi, cuando se dice que un microorganismo es oxidante o fermentador se sobreentiende que lo es con respecto al metabolismo de la glucosa. PRIMEROS INDICIOS DE QUE UN AISLAMIENTO DESCONOCIDO ES UN NO FERMENTADOR Ausencia de evidencia de fermentacin de glucosa. Reaccin de citocromoxidasa positiva. Sin crecimiento en agar de Mac Conkey.

III) MATERIALES

Materiales Asa de platino Mechero bunsen Tubo con agares Placas con agares

Reactivos Alcohol ya dado al 2% Parafina

Medios de cultivos Glucosa Sacarosa Lactosa TSI

IV) PROCEDIMIENTO

Experiencia #1 crecimiento en agar sangre

Las colonias son planas con aspecto ruugoso o de vidrio molido y Bhemolticas. Estas colonias pueden alcanzar hasta 3-5 mm de dimetro a las 48 horas de incubacin.

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Experiencia #2 crecimiento en agar Mac Conkey Escaso crecimiento de colonias, color: gri claro no fermentadoras de lactosa.

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Experiencia #3: prueba de oxidacin de los carbohidratos

Los tubos que contienen respectivamente los carbohidratos: glucosa, lactosa, maltosa, sacarosa y TSI, son colocados en una gradilla. Recoger un cultivo joven de la bacteria y con un hilo de platino estril, sembrar por picadura central en cada tubo. Cubrir con parafina liquida estril (6mm) uno de los dos tubos de la galera. Incubar a 35C, durante varios das. Observndose el cambio de color verde- azul verdoso original a amarillo, si se produjo la oxidacin del carbohidrato.

Prueba en agar hierro-hierro-triple azcar (TSI) rojo Con el hilo de platino, estril y enfriado se toma una colonia bien aislada, sospechosa a investigar y se introduce hasta 3 a 5 mm del fondo del tubo. El alambre inoculador se retira de la profundidad del tubo con un movimiento hacia adelante y hacia atrs a travs de la superficie del pico de flauta en forma de zigzag. Se incuba a 35C por 18 a 24 horas.

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Experiencia #4: prueba de la oxidasa Con una pinza estril se coloca, en el centro de un porta objeto, el disco de oxidasa (papel impregnado con doclorhidrato de tetramtilparafenilendiamina). Colocar 1 a 2 gotas de agua destilada en la superficie del disco, para reactivar la sustancia. Con un asa de platino estril, se recoge una colonia sospechosa de ser pseudomona y se deposita en el disco, apretando con el asa para que la colonia se quede impregnada. Despus de unos segundos se observa, si aparece color purpura oscuro casi negro la prueba de oxidasa es positiva; si se mantiene incolora o ligeramente rosado la prueba es negativa.

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V) CONCLUSION A travs de este laboratorio pudimos estudiar las caractersticas bioqumicas del gnero pseudomonas, para que posteriormente aprendamos a indetificarlas. VI) BIBLIOGRAFIA Guia de laboratorio.

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL INVESTIGACION DE STAPHYLOCOCCUS AEREUS LABORATORIO N 7 1. OBJETIVOS: Determinar si el agua est contaminada con staphylococcus. Determinar entre las especies patgenas y no patgenas del gnero staphilococus aerues.

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2. MARCO TERICO: Staphylococcus aereus es un microorganismo patgeno capaz de producir una gran diversidad de sntomas climaticos. Poseen encimas que hidrolizan un amplio expectro de sustatros y produce diversos toxicas henolicinas exofoliatina enterotoxina. La presencia de capa toxignicas en agua envasada de recin puede ser causa de infecciones. Especie microbiana pertenecen a la familia micrococaceae y al genero estaphilocococus integrada por los germenes en forma de cocos agrupadas generalmente entre individuales, gran positivo anerobios y anaherobias facultativas con temperatura optima de 37C caracterstica leafila carbohidratos mantol. Posee encinas que lo diferencian de otras especias coagulosas, fortalece y desoxirribreneodasa. La especie staphilococus produce la cagulosas no producen las enzimas. Todas las especies de staphilocococus (patgenas y no patgenas) producen sus enzimas catalasa. La especie saproplyticas es resistente a la moverbiana la especia st. Epidermis y st. Aereus es asecible a este antibitico. 3. MATERIALES Materiales Mechero Busen Proceta Asa de siembra Reactivos Matraz con 100 ml. De 1 coasina Placa de agar Muestra de agar Reactivo para 4 gram Perxido de N2O2 Placa con agar sangre Placa con mantol

DESARROLLO DE LA EXPERIENCIA Investigacion de staphylocococus en aureus en un matraz de 100 ml de caldo casena soja se siembra 100ml. de agua.

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Incubar a 35C-37C durante 24-48 horas, despus de la i ncubacin se observa el crecimiento por turbidez. Sembrar en el cultivo anterior las placas de agar bard parkes con el aza esterilizado para confirmar la presencia de aereus.

La placa sembrada se lleva a incubar a 37C por 24-48 horas

Resultado.Se observan colonias de un color oscuro.

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MICROBIOLOGIA AMBIENTAL INVESTIGACION DE STAPHYLOCOCCUS AEREUS LABORATORIO N 8 a. Estudios Macroscpico Se realiza la siembra en un medio de cultivo agar sangre y se incuba a 35C-37C durante 24 hroas y se observan las caractersticas propias.

Resultado:
1. Morfologa de la colonia

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Planas Lisas Rugosas

2. Pigmentacin Blancos Grises Cremas Amarillos

3. Olorsurgnesis Pie de atleta

4. Grado de hemolisis
-

= Berdosa =Translucido = Nada

Resultado.- son grandes sus colonias presentan una pigmentacin amarilla-anaranjada por la produccin de pigmento. b. Estudio Microscpico. A partir de una colonia caracterstica hacer un fretis sobre un porta objeto y teir por tincin de gran. Tinsin de gran (+)

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Luego se observa en el microscopio

Resultados.Son azul-violeta gran + agrupadas en racciones en formas de cocos.

PRUEBAS BIOQUIMICAS Prueba de catalasa La enzima catalasa presente en los staphylocococus tienen la propiedad de desdoblar el H2O2 H2O2 + catalasa = H2O + O2 burbujas de agua Tcnicas y procedimientos 1. Transferir celdas del centro de una colonia bien aislada con una aza de agar a la superficie del porta objeto 2. Aadir 1 a 2 gotas de perxido de hidrogeno al 30% con agua destilada, se recomienda no aadir el organismo al reactivo especialmente si se utilizan aza que contienen hierro ya que puede producir resultados falsos, positivos

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Resultado.Cuando da catalasa positiva, produce burbuja de gas o esfervecencia.

Prueba de coagulosa Principio.- La coagulosa es una enzima de composicin capas de transformar el filorigenos en fibinas. La formacin de un coagulo visible en un sistema analtico adecuado. La coagulosa se halla presente en diferentes libres y fijas cada una de ellas posee diferentes propiedades que requieren el uso de tcnicas superiores. 1. Coagulosa fijas: conocida como factor aclutinacion esta unida en la pared celular bacteriana y no est presente en los filtradores de cultivo.
2. Coagulosa libre: cuando una sucesin de bacterias productoras

de coagulosa se mezclan en partes iguales con una pequea cantidad o plasma en un tubo de ensayo doble. Se forma un coagulo visible como consecuencia de utilizacin de factores coagulacin del plasma.

Resultado.-

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El microorganismo produce enzimas que coagula el plasma

CRECIMIENTO DE MANITOL El St. Aureos y St. saprothyticos tienen caracteristicas halotilas ya sea puede crecer en presencia de cloruro de sodio al 7,5 % Tcnica La colonia se siembra con un aza esteril, a travs de estrias por ayuntamiento en la placa de agar salado.

Posteriormente la placa sembrada se lleva a la estufa de cultivo a 37C durante 18 a 24 horas. Resultados.Se observ el crecimiento conformacin de un color amarillo al de reductor de las colonias cremosas y un olor surgeneris fetido que confirma la especie de staphylocococu aerues.

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