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Virologia

Aula 1 Princpios de Virologia


Caractersticas Gerais 1 - Acelulares, estrutura compacta e econmica No apresentam organelas, como ribossomos, Golgi, RE etc No possuem maquinaria completa para sntese de protenas Possuem cido nucleico, protinas, lipdeos (alguns) 2 - Parasitas intracelulares obrigatrios Usurpam e manipulam a maquinaria celular para formar sua prognie No se multiplicam fora da clula hospedeira (macromolculas) Multiplicao depende de encontro com hospedeiro especfico 3 - Dimenses ultramicroscpicas De 24 nm (bacteriofago MS2) at 800 nm (mimivirus)

Capsdeo Formado por subunidades proteicas idnticas ou similares (capsmeros) Capsmeros podem apresentar auto-montagem Capsdeo pode apresentar diferentes simetrias dependendo da forma ou arranjo dos capsmeros o simetria icosadrica: herpesvirus, papillomavirus o simetria helicoidal: Influenza virus o simetria complexa: Bacterifago T4, Varola virus

Genoma viral DNA ou RNA Fita simples ou dupla Linear ou circular Fita nica ou segmentada (permite rearranjos, aumentando variabilidade) Polaridade positiva ou negativa

Relao direta com as caractersticas biolgicas do vrus

Componentes da Partcula Viral: elementos e geometria Estrutura Viral Bsica 12345Envelope (lipoproteico) Enzimas e/ou outras protenas Capsdeo (proteico) Cerne (Genoma: DNA ou RNA) Espculas ou ligantes virais (protenas e/ou carboidratos)

Vrus de RNA: o apresentam maiores taxas de mutao o multiplicao no citoplasma o RNA polaridade positiva: genoma viral funciona como RNA mensageiro o RNA polaridade negativa: genoma viral precisa ser transcrito para iniciar multiplicao (RNA polimerase dependente de RNA necessria) Vrus de DNA o Possuem os maiores genomas virais o Multiplicao nuclear

Mecanismos de economia gentica (4): 1. 2. 3. 4. Sobreposio de ORFs Protenas multifuncionais Leitura das fitas do genoma nos dois sentidos Ampla utilizao da maquinaria celular

Funo da Partcula Viral: ciclo de multiplicao 1. 2. 3. 4. 5. 6. Adsoro Penetrao Desnudamento Biossntese Morfognese Liberao -

4 Biossntese Dengue virus: o Sntese de RNA polimerase dependente de RNA aps traduo Variola virus: o Sntese de DNA polimerase ou utiliza a celular aps traduo Rabies virus: o RNA polimerase dependente de RNA presente na partcula viral e mais sntese aps traduo HIV: o

1 Adsoro Ligao especfica entre os ligantes virais e receptores celulares localizados na membrana citoplasmtica Receptores virais esto diretamente relacionados com tropismo celular/tecidual e a especificidade do hospedeiro Alguns virus tambm interagem com receptores secundrios (coreceptores)

Transcriptase reversa presente na partcula viral

5 Morfognese Montagem das subunidades proteicas (e dos componentes da membrana no caso de vrus envelopados) e empacotamento do genoma viral, com formao de novas partculas virais completas em um determinado stio das clulas. Stios replicativos dependem de disponibilidade nutricional e proteo (citoplasmticos ou nucleares) Herpesvirus: interao entre regio terminal do genoma e protena do capsdeo Vrus envelopados: envelopes devem ser adquiridos de compartimentos membranosos da clula previamente modificados por protenas virais (vrus no so capazes de sintetizar lipdeos)

2 Penetrao Envelopados: o Fuso de membranas o Endocitose mediada por receptor No envelopados: o Perfurao da membrana o Formao de poros

3 Desnudamento Associado membrana Citoplasmtico Associado ao ncleo

6 Liberao Vrus volta ao ambiente extracelular Intimamente relacionada com as caractersticas biolgicas do vrus: o Envelopado ou no, stio de multiplicao celular

Aula 2 Patognese Viral


Etapas da Doena Infeco: vrus alcana um stio primrio e consegue se multiplicar Perodo de incubao: entre a infeco e o aparecimento dos primeiros sintomas Perodo prodrmico: ocorrem os sintomas inespecficos Perodo de doena: ocorrem sintomas clnicos caractersticos Perodo de convalescncia: hospedeiro se recupera

Transmisso Aerossois: saliva e perdigotos Contato direto com secrees Infeco pode ser localizada (e.g. rhinovirus) ou sistmica (e.g. influenza) Somente partculas menores que 5 m atingem alvolos

o o

Transmisso do Vrus na Natureza Vertical: Me > Embrio/Feto o HIV, Rubola Horizontal o Contato: sexual, fmites, pele etc o Veculos: gua, alimentos o Vetores: invertebrados, vertebrados

Trato gastrointestinal o Vrus precisam ser resistentes a variaes de pH, ao de enzimas digestivas e condies ambientais extremas o Transmisso gua e alimentos Infeces Localizadas Rotavrus, norovrus e coronavrus: diarreias Sistmicas Enterovrus: plio, hepatite A Reovrus: infeces entricas Adenovrus: infeces entricas, renais Clulas M Promotoras de transcitose de agentes de defesa Usada por vrios patgenos para a entrada: reovrus, coronavrus, HIV (via anal)

Requisitos para o nicio da Infeco 1. Inculo viral suficiente: resistncia ambiental, diluio, defesas do hospedeiro 2. Stio de entrada correto: acessibilidade, susceptibilidade e permissividade 3. Vencer as defesas do organismo: mecnicas, qumicas, inatas e adaptativas Rotas de Entrada Mucosas Vastas, imunologicamente muito ativas preveno da entrada de patgenos (IgA, clulas NK, clios, folculos linfoides, macrfagos etc) Trato respiratrio o Defesas Superior: IgA, muco, clios, tonsilas Inferior: macrfagos e moncitos

Trato Urogenital o Defesas IgA, muco, fagcitos, pH cido o Entrada Microabrases TUG feminino mais susceptvel, apesar do baixo pH HIV, HHV-1/2, vrus da hepatite B

Conjuntiva o Defesas: Secreo da ocular, plpebras o Entrada: Microabrases (lente, gua) o Disseminao sistmica rara

Danos Teciduais Efeitos citopticos Imunopatologias o Apoptose o Superantgenos

Pele o o o Defesas: Queratina, clulas de Langerhans Entrada: Abrases, picadas, agulhas, pircing, tatuagens, mordidas HIV, dengue, hepatites, vaccinia, HPV

Padres de infeco HIT-AND-RUN (multiplicao rpida) vs STAY-AND-FIGHT (multiplicao lenta)

Tropismo Acessibilidade: capaz de alcanar rgo ou tecido no qual ele se multiplica Susceptibilidade: clula que tenha receptor que permita entrada viral Permissividade: clula possui toda maquinaria que permite multiplicao do vrus

Agudas o Produo rpida de vrus seguida da resoluo rpida e eliminao da infeco pelo hospedeiro. Pode ser aparente ou no. Persistentes o Infeces no so eliminadas rapidamente, podendo evoluir para cronicidade, latncia ou com recidivas Abortivas o Infeco no produtiva. Clula susceptvel, mas no permissiva, ou partcula viral defectiva

Receptores celulares: receptores com funo fisiolgica, mas que so reconhecidos pelos ligantes virais, aos quais se ligam inadvertidamente.

Disseminao Infeco localizada o Multiplicao no stio de entrada - Disseminao clula-clula o Ex: papilomavirus (epiderme), rotavirus (vilosidades intestinais) Infeco disseminada 1. Stio primrio de infeco 2. Linfonodo regional 3. Viremia primria 4. Stios secundrios de infeco (rgos linfoides) 5. Viremia secundria 6. Stio trpico de infeco 7. Eliminao e transmisso Infeco Aguda

Ex: Varola, Caxumba, Gripes e resfriados

Infeco Lenta Aguda com recorrncia tardia

Excreo Etapa fundamental para a manuteno e circulao da prognie viral na natureza o o o o o o Secrees respiratrias Sangue Leses ulceradas na pele Leite materno Fezes Trato genitourinrio

Ex: Varicela, Herpes Zoster, Sarampo

Evoluo da Infeco: multi -fatorial Infeco Crnica Vrus o o o o o

Espcie Amostra Variabilidade gentica Tamanho do inculo Rota de entrada

Ex: Hepatite B, AIDS, HTLV

Hospedeiro o Gentica o Idade Habilidade das clulas suportarem a multiplicao viral Resistncia perda celular (grande capacidade de renovao tecidual) Resposta imune Imunopatologias podem ser mais graves em adultos saudveis do que em idosos ou crianas

Infeco Latente

o o

Estado nutricional Outros

Ex: Herpes e Hepatite C

Aula 3 Diagnstico Viral


Deteco Vrus em cultura (crescimento viral) o mais utilizado em pesquisas Antgenos virais (protenas) o ELISA, imunofluorescncia, Western-Blot cidos nucleicos virais o PCR Anticorpos contra vrus o Mais utilizado o ELISA, ensaio de neutralizao, inibio de hemaglutinao

Desvantagens o Caro o Mo de obra treinada o Demorado o Alguns vrus no se multiplicam em cultura ou no causam efeito citoptico

Diagnstico HIV Sorologia: o o ELISA (triagem) alta sensibilidade Western-blot (confirmatrio)

Coleta de Espcimes para Diagnstico Local: em infeces agudas, no local da doena o Lcor (meningite), bipsia (mucosa) Tempo: ttulos virais so maiores nos primeiros dias de doena aguda

Mtodos Empregados Cultura viral em clulas Microscopia ptica (cospsculos de incluso) Microscopia eletrnica Exame citolgico (Papanicolau) Deteco de antgeno viral Deteco de cidos nucleicos Sorologia (deteco de anticorpos)

ELISA Deteco de anticorpos sricos contra protenas do HIV 1. Preparao da placa de teste (ligao de antgenos HIV) 2. Adio do soro teste (anticorpo primrio) 3. Adio de anticorpos Anti-Ig humano conjugado com enzima (anticorpo secundrio) 4. Adio de substrato enzimtico cromognico Resultados Reaes cromognicas indicam soro positivo Podem haver resultados intermedirios (automatizao)

Cultura viral em clulas Observa-se o efeito citoptico Vantagens o Obteno do patgeno vivo o Especfico

Western-Blot Anlise individual da presena de anticorpos antiprotenas do HIV 1. Separao das protenas em gel 2. Transferncia das protenas separadas para membrana 3. Adio do soro teste, de anticorpos anti-humano conjugados a enzima e substrato cromognico Resultados Considerado positivo se pelo menos trs bandas so visualizadas, sendo uma a da polimerase (TR)

Observaes quanto deteco de anticorpos o Indicador de status imunolgico o Indicador de infeces agudas o Nem sempre diferencia infeces ativas de pregressas o De importncia relativa em infeces crnicas ou latentes o No distingue indivduo vacinado do doente o Importante para acompanhamento do paciente

Procedimentos 1. Preparao da reao 2. Reao de amplificao 3. Anlise em gel de agarose Obs: PCR em tempo real quantitativo

Marcadores de carga viral

PCR Vantagens o Altssima especificidade e reprodutibilidade o Simplicidade o Potencial para automao e anlise em larga escala o Diagnstico rpido (~4h)