Nutricin de los microorganismos EI crecimiento de los microorganismos va Iigado a la presencia de agua.

Las sustancias disueltas en el agua, a partir de las cuales los microorganismos forman su material celular y obtienen energa, son los nutrientes. Los requerimientos de los distintos microorganismos en cuanto a la composicin del medio de cultivo y a las dems condiciones ambientales son muy variables. Por ello se han descrito muchas recetas de la composicin de los medios de cultivo para los microorganismos. Bsicamente la disolucin ha de cumplir la siguiente condicin mnima: han de estar presentes todos los elementos implicados en la constitucin del material celular, y en forma de compuestos utilizables. [1] El peso seco de los microorganismos consiste en materia orgnica que contiene carbono, hidrgeno, nitrgeno, oxgeno, fsforo y azufre. Se requieren, adems, iones inorgnicos como potasio, sodio, hierro, magnesio, calcio y cloruro para facilitar la catlisis enzimtica y conservar los gradientes qumicos a travs de la membrana celular. [2] La materia orgnica se encuentra en macromolculas formadas por enlaces anhdridos entre los bloques estructurales. Para la sntesis de los enlaces anhdridos se requiere la energa qumica proporcionada por los dos enlaces fosfodiestricos del ATP (trifosfato de adenosina). Para conservar una composicin citoplsmica relativamente constante, se necesita una energa adicional derivada de la fuerza motriz protnica que es la energa potencial que se puede liberar al pasar un protn a travs de una membrana. En los organismos eucariotas la membrana puede ser parte de la mitocondria o del cloroplasto; mientras que en los organismos procariotas la membrana es la membrana citoplsmica de la clula. [2] Durante el crecimiento, un microorganismo requiere todos los elementos de su materia orgnica y el complemento total de iones necesarios para la energtica y la catlisis. Adems, debe haber una fuente de energa que establezca la fuerza motriz protnica y que permita la sntesis macromolecular. Los microorganismos varan ampliamente en cuanto a sus demandas nutricionales y sus fuentes de energa metablica. [2] Requerimientos nutritivos esenciales El anlisis de la composicin de la clula microbiana revela que ms del 95 % del peso de la clula est constituido por unos pocos elementos: carbono, oxigeno, nitrgeno, azufre, fosforo, potasio, calcio, magnesio y hierro. Estos se denominan macroelementos o macronutrientes, porque los microorganismos los captan en cantidades grandes. Los seis primeros (C, H, O, N, S y P) son componentes de los hidratos de carbono, lpidos, protenas y cidos nucleicos. Los cuatro macroelementos restantes se encuentran en la clula en forma de cationes y desempean diversos papeles. [3]

Todos los organismos, incluidos los microorganismos requieren diversos micronutrientes o elementos traza, adems de los macroelementos. La mayora de las clulas necesitan los micronutrientes: magnesio, zinc, cobalto, molibdeno, nquel y cobre. Sin embargo, las clulas precisan de unas cantidades tan pequeas, que contaminantes presentes en el agua, recipientes y en los componentes habituales del medio son a menudo suficientes para el crecimiento. Por ello, es muy difcil demostrar la necesidad de un micronutriente. En la naturaleza los micronutrientes son ubicuotas y probablemente, por lo general, no limitan el crecimiento. Estos micronutrientes son normalmente parte de enzimas y cofactores, y facilitan la catlisis de reacciones y el mantenimiento de la estructura de protenas. Por ejemplo, el zinc se encuentra en el centro activo de algunas enzimas, pero tambin est involucrado en la asociacin de las subunidades reguladoras y catalticas de la aspartato carbamoiltransferasa en E. coli. [3] Adems de los microelementos comunes y elementos traza, los microorganismos pueden tener necesidades especiales que reflejen la naturaleza especial de su morfologa o de su habitad natural. Las diatomeas necesitan acido silcico (H 4SiO4) para construir sus paredes celulares de slice. Aunque la mayora de las bateras no requieren grandes cantidades de sodio, muchas bacterias que crecen en los lagos salinos y ocanos dependen de la presencia de concentraciones elevadas del ion sodio. [3] Por ltimo, debe recalcarse que los microorganismos requieren una mezcla compensada de nutrientes. Si un nutriente esencial no se encuentra disponible, el crecimiento microbiano se ver limitado, independientemente de la concentracin de otros nutrientes. [3] FUENTES DE ENERGA METABLICA Los tres modos principales de generar energa metablica son: fermentacin, respiracin y fotosntesis. Los microorganismos, para poder crecer, deben utilizar, por lo menos, uno de estos mecanismos. [2] FUENTE DE CARBONO La mayora de las bacterias utilizan compuestos de carbono como fuente de energa y otras, para la sntesis de elementos celulares. Los organismos fotosintticos reducen el dixido de carbono (CO2) a glucosa y otras molculas orgnicas. Los organismos auttrofos emplean nutrientes completamente inorgnicos; mientras que los hetertrofos requieren nutrientes orgnicos. Ambos organismos, auttrofos y hetertrofos, obtienen la energa a partir de la glucosa por gliclisis, fermentacin y el ciclo de Krebs. Ellos, adems, sintetizan algunos componentes celulares a partir de intermediarios formados por medio de estas vas. [2] Muchos organismos requieren para su nutricin. Adems de minerales, fuentes de carbono y energa, algunos suplementos o factores de crecimiento. Se trata de

algunas sustancias que pertenecen a los componentes bsicos de la clula y que no pueden sintetizarse a partir de componentes ms sencillos. Los factores de crecimiento pertenecen a tres grupos de sustancias, los aminocidos, las purinas y pirimidinas, as como las vitaminas. [1] OXIGENO. EI oxgeno se encuentra a disposicin de las clulas en forma de agua. Esta contenido adems en el anhdrido carbnico y en muchos compuestos orgnicos. Muchos microorganismos necesitan adems oxgeno molecular. La funcin principal del O2 es la de aceptor final de electrones en la respiracin aerbica; el O2 se reduce entonces a agua. Las molculas de oxgeno procedentes del O2 nicamente se incorporan al material celular cuando la fuente de carbono es el metano o hidrocarburos de cadenas largas o aromticas. [1] Con respecto a la relacin con el oxgeno se diferencian como mnimo tres grupos de organismos: los organismos aerbicos obligados o estrictos, solo pueden obtener energa mediante la respiracin y necesitan O2. Los organismos anaerbicos obligados solo pueden crecer en un medio sin O 2; este es toxico para ellos. Los microorganismos anaerbicos facultativos crecen tanto en presencia como en ausencia de O2. Entre ellos hay que distinguir dos tipos: las bacterias del cido lctico, aunque pueden crecer en presencia del oxgeno atmosfrico, no pueden utilizarlo, sino que obtienen la energa exclusivamente por fermentacin; son aerotolerantes. Otras bacterias anaerbicas facultativas (Enterobacteriaceas) y muchas levaduras pueden obtener energa tanto por respiracin (en presencia de O2) como por fermentacin (en ausencia de O2). [1] Muchas, sino la mayora, de las bacterias aerbicas son microaerofilas, esto es, necesitan O2 para la obtencin de energa, pero no toleran la presin parcial del aire (0,20 bar), sino tan solo entre 0,01 a 0,03 bar. [1] FUENTE DE NITRGENO Todos los organismos, incluyendo los microorganismos, necesitan nitrgeno para sintetizar enzimas, protenas y cidos nucleicos. Algunos microorganismos obtienen el nitrgeno a partir de fuentes inorgnicas y otros adquieren la energa mediante el metabolismo de sustancias que contienen nitrgeno inorgnico. Los procesos por los cuales las protenas y los cidos nucleicos son sintetizados, estn directamente relacionados con la informacin gentica contenida en la clula. El producto final de todas las vas de asimilacin del nitrgeno es la forma ms reducida del elemento, el ion amonio (NH4+). [2] Muchos microorganismos poseen capacidad para asimilar el nitrato (NO 3) y el nitrito (NO2) de manera reductiva al convertir a estos iones en amonaco (NH 3). Estas vas de asimilacin difieren de las vas empleadas para la desasimilacin de nitrato y nitrito. Emplean las vas desasimilatorias los microorganismos que recurren a los iones como aceptores finales de electrones en la respiracin; este

proceso se llama desnitrificacin y su producto es el gas nitrgeno (N2) que vuelve a la atmsfera. [2] La capacidad para asimilar N2 de manera reductiva por medio del NH3 se nombra fijacin del nitrgeno, y es una propiedad nica de los procariotas, siendo pocas las bacterias que poseen esta capacidad metablica. El proceso requiere gran cantidad de energa metablica y se inactiva con facilidad por accin del oxgeno. La mayor parte de los microorganismos pueden recurrir al NH4+ como nica fuente de nitrgeno, y muchos otros poseen capacidad para producir este ion a partir de las aminas (R- NH2). [2] Ambos elementos se encuentran en la clula predominantemente en forma reducida, como grupos sulfuro o amino. La mayora de los microorganismos son capaces de captar estos elementos en su forma oxidada y de reducirlos hasta sulfato y nitrato. La fuente de nitrgeno ms comn entre los microorganismos es la sal de amonio. Algunos procariotas son capaces de reducir el nitrgeno molecular (N2 o dinitrogeno). Otros microorganismos necesitan aminocidos, esto es, fuentes de nitrgeno que lo contengan ya en forma orgnica. Tampoco todos los microorganismos son capaces de reducir el sulfato; algunos requieren sulfuro de hidrogeno y otros cistena como fuente de S. [1] Adems de los requerimientos de carbono, hidrogeno y oxgeno, todos los organismos necesitan fuentes de energa y electrones para su crecimiento. Los microorganismos pueden agruparse en clases nutricionales basadas con como satisfacen dichos requerimientos. Se pueden clasificar en hetertrofos o auttrofos con respecto a su fuente preferente de carbono. Por otra parte, existen nicamente dos fuentes disponibles para los microorganismos: 1) la energa lumnica para la fotosntesis y 2) la energa derivada de la oxidacin de molculas orgnicas o inorgnicas. Los fototrofos emplean luz como fuente de energa; los quimiotrofos obtienen la energa a partir de la oxidacin de compuestos qumicos (orgnicos o inorgnicos). Tambin, los microorganismos tienen solamente dos fuentes de tomos de hidrogeno, o electrones. Los littrofos utilizan sustancias inorgnicas reducidas como fuente de electrones, mientras que los organotrofos obtienen electrones o hidrogeno de compuestos orgnicos. [3] A pesar de la enorme diversidad metablica que presentan los microorganismos, la mayora puede incluirse en una de los cuatro grupos nutricionales, tomando como base sus fuentes primarias de energa, hidrogeno o electrones, o ambos, y carbono. La inmensa mayora de los microorganismos estudiados hasta la fecha son fitolitotrficos o hetertrofos quimioorganotrficos. Los auttrofos fitolitotrficos utilizan energa lumnica y CO2 como fuente de carbono. Las algas y cianobacterias emplean agua como dador de electrones, liberando oxgeno. Las bacterias verdes y purpuras del azufre no pueden oxidar agua, pero captan electrones de dadores orgnicos, como hidrogeno, sulfuro de hidrgeno y azufre elemental. Los heterotrofos quimioorganotrficos emplean compuestos orgnicos como fuente de energa, hidrogeno, electrones y carbono para realizar la

biosntesis. Con frecuencia, un mismo nutriente orgnico satisface todas las necesidades. [3] Las otras dos clases de microorganismos comprenden muy pocos, pero que son a menudo muy importantes desde el punto de vista ecolgico. Algunas bacterias prpuras y verdes son fotosintticas y utilizan materia orgnica como dador de electrones y fuente de carbono. Estos organismos heterotrofos fotoorganotrficos habitan comnmente en lagos y arroyos contaminados. Alguna de estas bacterias pueden crecer tambin como fotoautotrofos, teniendo como dador de electrones al hidrogeno molecular. Los miembros del ltimo grupo, los auttrofos quimiolitrficos oxidan compuestos inorgnicos reducidos, como molculas de hierro, nitrgeno o azufre para liberar energa y electrones para la biosntesis. [3] Aunque una especie particular puede pertenecer solamente a uno de los cuatro grupos nutricionales mencionados, algunas muestran una gran sensibilidad metablica y modifican sus modelos metablicos para adaptarse a cambios ambientales. A estos microorganismos se les denominan habitualmente mixotrficos, ya que combinan procesos metablicos quimiolitoautrficos y heterotrficos. Esta clase de flexibilidad parece compleja y confusa, pero aporta al organismo en cuestin una gran ventaja adaptativa cuando las condiciones ambientales cambian con frecuencia. [3] AZUFRE Y FSFORO Adems del carbono y el nitrgeno, los microorganismos necesitan un suministro de ciertos minerales, especialmente azufre y fsforo, los cuales son componentes celulares importantes. Ellos obtienen el azufre a partir de las sales inorgnicas de sulfato y de los aminocidos que contienen azufre, y lo utilizan en la elaboracin de protenas, coenzimas y otros componentes celulares. El fsforo es adquirido, principalmente, mediante iones fosfato inorgnico (PO43) y lo emplean para sintetizar ATP, fosfolpidos y cidos nucleicos. [1] Hierro Es fundamental en la respiracin celular y es tambin un elemento clave para los citocromos y para las protenas que contienen hierro y azufre implicados en el transporte de electrones. En condiciones anaerobias, el hierro se encuentra por lo general en estado de oxidacin +2 y es soluble. Sin embargo, bajo condiciones aerbicas suele estar en el estado de oxidacin +3 y forma varios minerales insolubles. Para obtener hierro de tales minerales, las clulas producen agentes quelantes de hierro llamados siderforos que solubilizan el hierro y lo transportan dentro de la clula. Un grupo importante de siderforos derivan del cido hidroxmico y quelan el hierro. Una vez que el complejo hierro-hidroxamato pasa a la clula, el hierro se libera y el hidroxamato puede salir y ser utilizado de nuevo para transportar mas hierro. Las bacterias producen siderforos fenlicos, estructuralmente complejos, llamados enterobactinas. [4]

En las aguas marinas, el hierro es prcticamente indetectable y se han encontrado bacterias marinas que producen siderforos estructuralmente complejos capaces de secuestrar el hierro presente en concentraciones tan bajas. Estos siderforos poseen una regin peptdica que compleja el Fe +3 y una regin lipdica se asocia con la membrana celular. Algunos procariotas pueden crecer en ausencia total de hierro, el magnesio sustituye en estas bacterias el hierro como componente metlico de las enzimas que normalmente contienen Fe2+. [4] Otros macronutrientes El potasio es necesario en todos los microorganismos. Una gran diversidad de enzimas lo requiere especficamente como por ejemplo alguno implicado en la sntesis de protenas. El magnesio funciona como estabilizador de los ribosomas, las membranas celulares y los cidos nucleicos, y tambin se necesita para la actividad de muchas enzimas como cofactor. El calcio (que no es un nutriente esencial para muchos microorganismos) ayuda a estabilizar la pared celular bacteriana y tiene una funcin importante en la termorresistencia de endosporas. El sodio es requerido por algunos microorganismos, aunque no todos, y su necesidad suele ser un reflejo del habitad del microorganismo. Por ejemplo, el agua de mar tiene un elevado contenido de sodio y los microorganismos marinos normalmente lo requieren para su crecimiento; en cambio, otras especies muy relacionadas, pero de agua dulce, crecen bien en ausencia de este elemento. [4]

ELEMENTOS TRAZAS Muchos microorganismos requieren una variedad de elementos trazas, usualmente en la forma de iones. Todos los organismos necesitan cierta cantidad de sodio y cloro, y los halfilos lo requieren en grandes cantidades. Potasio, zinc y manganeso son usados para activar ciertas enzimas. El cobalto es necesario a los organismos que sintetizan vitamina B12. Las bacterias gram positivas requieren calcio para la sntesis de las paredes celulares y los organismos formadores de esporas, para la sntesis de las paredes de la espora. [1] Debido a que la necesidad de estos micronutrientes es muy pequea en cuanto a la concentracin, con frecuencia no es necesario aadirlos a los medios de cultivo para cultivar microorganismos en el laboratorio. No obstante, si un medio de cultivo contiene compuestos muy puros, disueltos en agua destilada de elevada pureza, puede darse una deficiencia en algn elemento traza. En tales casos, se aade al medio una pequea cantidad de una solucin de metales traza a fin de suministrar los metales necesarios. [4] Factores de crecimiento Normalmente los microorganismos podran crecer y multiplicarse cuando dispongan de fuentes de energa, carbono, nitrgeno, fosforo y azufre. Estos organismos tienen enzimas y vas necesarias para sintetizar todos los componentes celulares que precisan para su mantenimiento adecuado; sin embargo, muchos microorganismos carecen de una o ms enzimas esenciales. Por ello, no pueden elaborar todos los constituyentes indispensables, sino que obtenerlos, o a su precursores, del ambiente. Los compuestos orgnicos que son necesarios porque son componentes celulares esenciales, o sus precursores, y no pueden sintetizarse por el organismo, se denominan factores de crecimiento. Existen tres clases principales de factores de crecimiento: 1) aminocidos, 2) purinas y pirimidinas, y 3) vitaminas. Los aminocidos se necesitan para la sntesis de protenas, y las purinas y pirimidinas, para la sntesis de cidos nucleicos. Las vitaminas son molculas orgnicas pequeas que normalmente forman la totalidad o parte de los cofactores enzimticos y solo requieren algunas cantidades pequeas para el crecimiento. Algunos microorganismos necesitan muchas vitaminas diferentes para crecer. [3] Las vitaminas necesarias para algunos microorganismos incluyen inositol, cido flico, vitamina B12 y vitamina K. Los microorganismos patgenos humanos requieren a menudo una variedad de vitaminas y por esta razn son capaces de crecer solamente cuando pueden obtener esas sustancias a partir del organismo hospedero. El desarrollo de tales organismos en el laboratorio necesita un medio complejo el cual contenga todos los nutrientes que normalmente obtiene de sus hospederos. [1] FACTORES AMBIENTALES QUE AFECTAN EL CRECIMIENTO

El crecimiento microbiano puede estar influido por una variedad de factores, tanto fsicos como nutricionales. Los factores fsicos incluyen: la concentracin de iones hidrgeno (pH), la temperatura, la concentracin de oxgeno, la humedad, la presin hidrosttica, la presin osmtica y la radiacin. Los factores nutricionales comprenden: la disponibilidad de carbono, nitrgeno, azufre, fsforo y otros minerales, y en algunos casos vitaminas. [2] FACTORES NUTRICIONALES En las pginas anteriores se describieron los nutrientes necesarios para el cultivo de los microorganismos. Para realizar estudios sobre metabolismo microbiano, por lo general es necesario preparar medios completamente sintticos en los cuales las caractersticas y la concentracin de cada ingrediente sean exactamente conocidas. La mayora de los microorganismos de vida libre crecen bien en extracto de levaduras, mientras que las formas parsitas pueden requerir sustancias especiales que se encuentran nicamente en la sangre o en extractos de tejidos animales. [2] Para muchos organismos, un solo compuesto (como un aminocido) puede servir como fuente de energa, de carbono y de nitrgeno; otros requieren un compuesto diferente para cada una de ellas. [2] FACTORES FSICOS Concentracin de iones hidrgeno (pH) La acidez de un medio es expresada en trminos de pH. Los microorganismos tienen un pH ptimo en el cual se obtiene el mejor crecimiento. Comnmente, el pH ptimo es neutro (pH 7), y la mayora de los microorganismos no se desarrollan a una unidad de pH por encima o por debajo de su pH ptimo. [2] Las bacterias son clasificadas como acidfilas, neutrfilas y alcalinfilas de acuerdo con las condiciones de acidez o alcalinidad que ellas puedan tolerar. Las bacterias acidfilas se desarrollan en un rango que va desde pH 0.0 hasta 5.4. Las bacterias neutrfilas crecen en un rango de pH 5.4 hasta 8.5; incluyndose en este grupo a la mayora de las bacterias que causan enfermedades en el hombre. Las bacterias alcalinfilas se desarrollan entre un pH 7.0 hasta 11.5. Vibrio cholerae, agente causal del clera, se desarrolla mejor a un pH cercano a 9. [2] Temperatura La mayora de las bacterias se desarrollan a un rango de temperatura por encima de 30C, pero las temperaturas mnimas y mximas varan considerablemente para las diferentes especies. Las bacterias pueden ser clasificadas, de acuerdo con el rango de temperatura al cual se desarrollan, en psicrfilas, mesfilas y termfilas; y a su vez subclasificadas como obligadas o facultativas. Obligada

significa que el organismo debe tener las condiciones ambientales especficas, y facultativa que el organismo es capaz de tolerar las condiciones ambientales, pero puede desarrollarse, adems, en otro ambiente. [2] Las bacterias psicrfilas se desarrollan mejor entre 15 y 20C, y pueden ser subdivididas en psicrfilas obligadas cuando no crecen por encima de 20C y psicrfilas facultativas cuando son capaces de crecer por debajo y por encima de 20C. [2] Las bacterias mesfilas incluyen a la mayora de las bacterias y se desarrollan en un rango de temperatura entre 30 y 37C. Las bacterias patgenas al hombre estn incluidas en esta categora y la mayora de ellas crecen mejor a una temperatura cercana al cuerpo humano (37C). [2] Las bacterias termfilas se desarrollan mejor a temperaturas entre 50 y 60C. [2] Concentracin de oxgeno Las bacterias, especialmente las hetertrofas, pueden ser divididas en aerobias, que requieren oxgeno para crecer, y anaerobias, las cuales no lo requieren. Los microorganismos aerobios obligados, tales como Pseudomonas, que causa muchas infecciones adquiridas en el hospital, se desarrollan en presencia de oxgeno libre; mientras que los anaerobios obligados, tales como Bacteroides, mueren en presencia de oxgeno libre. Entre estos extremos se encuentran los microorganismos microaeroflicos que se desarrollan mejor en presencia de una pequea cantidad de oxgeno libre. Los microorganismos anaerobios facultativos son capaces de desarrollarse en ausencia y en presencia de oxgeno. Bacillus y Staphylococcus son anaerobios facultativos y se encuentran en el tracto intestinal y urinario donde slo est disponible una pequea cantidad de oxgeno. [2] Humedad Generalmente todas las clulas con un metabolismo activo requieren agua del ambiente. A diferencia de los organismos superiores, los organismos unicelulares estn expuestos directamente a su ambiente. La mayora de las clulas vegetativas slo pueden vivir pocas horas sin humedad; slo las esporas y los organismos formadores de esporas pueden existir en un ambiente seco. [2] Presin hidrosttica Las bacterias que viven a altas presiones mueren si son mantenidas en el laboratorio pocas horas en condiciones de presin atmosfrica estndar. [2] Presin osmtica

La mayora de las bacterias pueden tolerar un rango amplio de concentraciones de sustancias disueltas. Su membrana celular contiene un sistema enzimtico llamado permeasas que regulan el movimiento de las sustancias disueltas a travs de las membranas. Si la concentracin fuera de la clula se torna demasiado alta, la prdida de agua puede inhibir o detener el crecimiento celular. Ciertas bacterias llamadas haloflicas requieren de una moderada a gran cantidad de sal y se hallan en el ocano donde la concentracin de sal (3,5%) es ptima para su crecimiento. [2] Radiacin La energa radiante, particularmente la luz ultravioleta, puede causar mutaciones y eventualmente ocasionar la muerte de los organismos. Sin embargo, algunos microorganismos tienen pigmentos que los protegen de la radiacin y ayudan a prevenir el dao del ADN. Otros poseen sistemas enzimticos que pueden reparar algunos tipos de daos del ADN. [2]

MEDIOS DE CULTIVO Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el crecimiento de los microorganismos es el Cultivo. Se han preparado ms de 10.000 medios de cultivo diferentes. [7] Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante. [7] La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes. [7] En los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes. [7]

Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas). [7] El conocimiento de la nutricin microbiana permite el cultivo de los microorganismos en el laboratorio. Como acabamos de ver, en general, todos los microorganismos tienen parecidos requerimientos de macro- y micronutrientes, aunque ha quedado claro que la forma en que cada nutriente es captado puede variar mucho entre unas bacterias y otras, as como la cantidad relativa de cada nutriente. Los microbilogos, en su trabajo cotidiano, estn acostumbrados a manejar multitud de recetas o frmulas correspondientes a muchos tipos de medios de cultivo. [5] De acuerdo a su consistencia, los medios de cultivo pueden clasificarse en: Lquidos: Se utilizan para el crecimiento de cultivos puros en lote. Se denominan caldos de cultivo y no tienen agar en su formulacin. [6] Semislidos: Contienen 0.5% de agar en su formulacin. Se utilizan para estudiar la movilidad de las bacterias (presencia o ausencia de flagelo). [6] Slidos: Contienen de 1.5 a 2% de agar en su formulacin. Estos medios inmovilizan a las clulas, permitindoles crecer y formar masas aisladas visibles llamadas colonias. Las colonias permiten al microbilogo reconocer la pureza del cultivo; las placas que contengan ms de un tipo de colonia no provienen de un cultivo puro. Las placas de agar tambin se utilizan para la determinacin de clulas viables (recuento en placas). [6]

SEGN SU UTILIZACIN 1) Medios comunes: Son aquellos que poseen los componentes mnimos para que pueda producirse el crecimiento de bacterias que no necesiten requerimientos especiales. El medio ms conocido de este grupo es el agar nutritivo o agar comn, que resulta de la adicin de agar al caldo nutritivo. Otros representantes de este grupo son el agar tripticase de soja, el agar Columbia, etc. [8] 2) Medios de enriquecimiento: Son aquellos que, adems de las sustancias nutritivas normales, incorporan una serie de factores indispensables para el crecimiento de microorganismos exigentes. Este enriquecimiento se hace por adicin de sangre u otros productos biolgicos (sangre, suero, leche, huevo, bilis, etc.) que aportan dichos factores. En ocasiones es posible aadir suplementos artificiales a los medios para producir un enriquecimiento del mismo (p. ej. Polivitex, Isovitalex, etc)El gonococo, por ejemplo, necesita cistina y cistena para su crecimiento. Estas sustancias son aportadas por la sangre calentada adicionada al medio de cultivo (agar chocolate). [8] 3) Medios selectivos: Son medios utilizados para favorecer el crecimiento de ciertas bacterias contenidas en una poblacin polimicrobiana. El fundamento

4)

5)

6)

7)

8)

de estos medios consiste en facilitar nutricionalmente el crecimiento de una poblacin microbiana especfica. Un ejemplo de medio selectivo es el caldo selenito, que se utiliza para favorecer el crecimiento de salmonellas y frenar el del resto de enterobacterias. [8] Medios inhibidores: Cuando las sustancias aadidas a un medio selectivo impiden totalmente el crecimiento de una poblacin microbiana, se denomina inhibidor. Los medios inhibidores podran considerarse como una variante ms restrictiva de los medios selectivos. Los medios inhibidores se consiguen habitualmente por adicin de sustancias antimicrobianas o de cualquier otra que inhiba completamente el desarrollo de una poblacin determinada. Un medio inhibidor es el MacConkey que permite el crecimiento de los grmenes Gram negativos e impide el crecimiento de los Gram positivos. [8] Medios diferenciales: Se utilizan para poner en evidencia caractersticas bioqumicas que ayuden a diferenciar gneros o especies. La adicin de un azcar fermentable o un sustrato metabolizable se utilizan para este fin. El medio MacConkey es un medio diferencial porque permite distinguir los grmenes que fermentan la lactosa de aquellos que no lo hacen. Tambin lo son el C.L.E.D. (lactosa +/lactosa -), el agar sangre (tipo de hemlisis), el SS (que es doblemente diferencial), etc. [8] Medios de identificacin: Son los destinados a comprobar alguna cualidad especfica que puede servirnos para reconocer la identidad de un microorganismo. Estos medios han de poseer los elementos necesarios para asegurar el crecimiento de los microorganismos, el sustrato especfico que vaya a ser metabolizado y el indicador que nos muestre el resultado. El agar Kligler, el medio de Simmons y en general, cualquier medio al que se le haya aadido un elemento diferencial de un microorganismo, son medios utilizados en identificacin. Actualmente estn apareciendo en el mercado una gran cantidad de medios especficos de identificacin para ciertos microorganismos, con lo cual se consigue simultneamente abaratar el costo y reducir el tiempo de identificacin. Son ejemplos de esto ltimo los medios CPS ID3 o Uriline ID(Biomerieux), utilizados para identificar los grmenes urinarios ms importantes a partir de la placa de cultivo gracias a la utilizacin de sustratos cromognicos especficos. [8] Medios de multiplicacin: Sirven para obtener una gran cantidad de clulas a partir de un microorganismo ya aislado. Seemplean en la obtencin de vacunas, en la investigacin y en la industria. Los medios ms adecuados para la multiplicacin suelen ser lquidos. El caldo-infusin cerebro-corazn (BHI), es un ejemplo tpico de estos medios. [8] Medios de conservacin: Se utilizan para conservar una cepa que, por diversas razones nos interese mantener. Fundamentalmente se utilizan como controles de calidad de las pruebas y reactivos utilizados en elLaboratorio de Microbiologa. En el laboratorio se pueden conservar las cepas de tres formas [8]: a. haciendo pases peridicos de placa a placa, b. mediante liofilizacin de una suspensin bacteriana, y c. congelando las cepas en leche descremada estril al 0,1%.

9) Medios de transporte: Se usan para el transporte de muestras clnicas que no pueden sembrarse inmediatamente. Suutilizacin debe hacerse introduciendo la torunda con la que se obtuvo la muestra en el interior delmedio (generalmente en un tubo). Son ejemplos tpicos de este grupo los medios de Stuart-Amies,Cary-Blair, etc. [8] De acuerdo a su composicin, los medios de cultivo pueden clasificarse en: Definidos: es aqul medio de cultivo del cual se conoce su composicin exacta. Son muy utilizados en estudios fisiolgicos. Los medios mnimos son medios definidos que nicamente le proporcionan al microorganismo los nutrientes necesarios para crecer, pero no para desarrollarse ptimamente. [6] Complejos: es aqul del cual no se conoce la composicin exacta del medio. A menudo, los medios complejos emplean sangre, leche, extracto de levaduras, extracto de carne u otras sustancias muy nutritivas pero de las cuales se desconoce la composicin qumica exacta. Estos medios son muy utilizados para cultivar bacterias desconocidas o bacterias de requerimientos nutricionales muy complejos. [6] Segn su origen: a) NATURALES: son los preparados a partir de sustancias naturales de origen animal o vegetal como ser extractos de tejidos o infusiones y cuya composicin qumica no se conoce exactamente. [8] b) SINTTICOS: son los medios que contienen una composicin qumica definida cuali y cuantitativamente. Se utilizan para obtener resultados reproducibles. [8] c) SEMISINTTICOS son los sintticos a los que se les aaden factores de crecimiento bajo una forma de un extracto orgnico complejo, como por ejemplo extracto de levadura. [8] Mantenimiento y preservacin de microorganismos Gran parte de los estudios en microbiologa depende de la capacidad de cultivar y mantener microorganismos en un laboratorio, y esto es slo posible si se dispone de los medios de cultivo adecuados. [9] El mantenimiento de los microorganismos consiste en la conservacin de ellos y de sus caractersticas por largos periodos. [9] A travs de los aos, se han desarrollado varios mtodos de conservacin de microorganismos, que se basan en la reduccin de su actividad metablica. La seleccin del mtodo de conservacin depende de varios factores, entre los que se pueden mencionar:

* La susceptibilidad del microorganismo (al proceso de conservacin). * La facilidad con la que puedan ocurrir cambios genticos en la cepa. * El numero de muestras por conservar. * El costo del proceso de conservacin. * El periodo durante el cual se desea conservar el microorganismo. * El tipo de equipo disponible. * La probabilidad de contaminacin que exista en el medio. [9] Los objetivos de la conservacin de los cultivos podran resumirse en los siguientes aspectos: a) Preservar la pureza gentica del cultivo sin prdida de ninguna de sus propiedades bioqumicas. b) Preservar los niveles de su productividad inicial (que durante el tiempo de conservacin sobrevivan al menos el 70-80% de las clulas). c) Lograr que el cultivo sea transportado y manejado con facilidad. [11] El requerimiento de que las clulas tienen que permanecer genticamente estables es el motivo por el cual existen varios mtodos de conservacin para los microorganismos, y ninguno de ellos es de utilizacin general. Vamos a resumir estos mtodos agrupndolos en tres apartados, que son: Mtodos de eleccin o de conservacin a largo plazo, mtodos a mediano alternativos y mtodos restringidos. [11] MTODOS DE ELECCIN O DE CONSERVACIN A LARGO PLAZO Son los mejores porque en ellos se paraliza el crecimiento de las clulas microbianas, pero stas no han muerto. As se garantiza al mximo la estabilidad gentica, por evitarse la aparicin de generaciones sucesivas. An as no se puede descartar algn cambio originado por el mtodo preparatorio en s mismo. Los mtodos de conservacin pertenecientes a este grupo son dos: Congelacin y liofilizacin. [11] Tcnicas que minimizan al mximo el riesgo de cambio gentico en las clulas y las mantienen viables por 10 aos o ms. Sin embargo el elevado costo de los equipos que emplean estos mtodos dificulta su implementacin en muchas instituciones, las que en ocasiones hacen uso del servicio de mantenimiento y conservacin mediante estos, los cuales brindan colecciones de cultivos reconocida. [11] Conservacin por congelacin. Se congelan las clulas en suspensin en un lquido con un agente crioprotector y se guardan a temperaturas inferiores a cero grados centgrados, con lo que el agua se congela. De esta forma, al no disponer las clulas de agua en forma lquida, no hay crecimiento. Cuando se quiere trabajar con las clulas as conservadas, se recuperan subiendo la temperatura. Este es el mejor mtodo de conservacin desde todos los puntos de vista, pero tiene el inconveniente de requerir aparatos especiales, y adems existe el peligro

de que algn fallo del sistema produzca una subida no deseada de la temperatura durante el almacenamiento. Tambin resulta ser el mtodo ms molesto para realizar el envo de las cepas. Los cuatro factores que influyen en la viabilidad y estabilidad de las clulas conservadas por este mtodo son los siguientes: 1.- Edad de las clulas: En la mayora de los casos conviene utilizar clulas maduras del inicio de la fase estacionaria de la curva de crecimiento, pero cuando se trate de organismos que presenten en su ciclo vital algn estado que les prepare para la resistencia a condiciones adversas, es preferible alcanzar este estado. Esto sucede en el caso de microorganismos que esporulan, en algunos pleomrficos e incluso en algunos ms sencillos. [11] 2.- Velocidad en la congelacin y descongelacin: Aunque hay programas de congelacin bien estandarizados para determinados casos o circunstancias, en general es mejor que las variaciones de la temperatura sean rpidas, tanto para la congelacin como para la descongelacin, por lo que para descongelar conviene poner las clulas a 37C. [11] 3.- Temperatura de almacenamiento: Debe ser lo ms baja posible. Lo mejor es guardar tubos cerrados o sellados, que contengan las clulas microbianas, sumergidos en nitrgeno lquido, que tiene una temperatura de 195C, o bien en la fase gaseosa del nitrgeno lquido, con una temperatura de 140C. [11] En el mercado existen variados tipos de armarios congeladores, de los cuales los ms aconsejables son los que alcanzan temperaturas por debajo de 70C. Aquellos que slo alcanzan temperaturas entre 20C y 40C, como ocurre con la mayora, no son aconsejables, entre otras cosas porque debido a la gran concentracin de solutos que existen en la suspensin celular, su punto de congelacin baja. El dao que se produce en las clulas es debido a que a estas temperaturas hay frecuentes congelaciones y descongelaciones. Si se aade un crioprotector no inico, como por ejemplo el glicerol, se reduce la cantidad de hielo que se produce y se evita el aumento de la concentracin inica. [11] Para la conservacin en armarios congeladores, las clulas se almacenan en criotubos (tubos de plstico esterilizables resistentes a la congelacin que cierran hermticamente), preparando lotes de varios tubos para cada cepa a conservar y utilizando en su totalidad un tubo para cada ocasin. De esta manera se evita que las cepas se congelen y se descongelen varias veces. Esto tambin se puede evitar empleando tubos con criobolas (bolas de tipo abalorio que se impregnan con la solucin celular a congelar), ya que para tomar una muestra basta con emplear una o varias bolitas sin necesidad de descongelar el resto. Este mtodo no se debe emplear para la conservacin de microorganismos anaerobios, como por ejemplo el gnero bacteriano Clostridium, ya que al estar las clulas en una superficie hay un mayor contacto con el oxgeno y puede afectarse la viabilidad. [11]

4.- Empleo de agentes crioprotectores: Estas sustancias protegen del dao que se pueda producir en las clulas microbianas en el momento de la congelacin. Existen muchos compuestos que se pueden utilizar como crioprotectores, pero el que se utiliza con ms frecuencia es el glicerol, a una concentracin del 15 al 20%. Tambin se pueden utilizar el dimetilsulfxido, la leche descremada y carbohidratos como glucosa, lactosa, sacarosa, inositol, etc. En su eleccin influye el tipo de microorganismo que se quiera conservar. [11] El proceso de congelacin se puede clasificar, con base en la temperatura en la que se lleva a cabo, en: a) Congelacin ordinaria. Durante la congelacin ordinaria se mantienen a temperaturas de -5 a -20C; en este intervalo, los microorganismos permanecen viables (es decir, una vez descongelados, los microorganismos conservan todas sus funciones y caractersticas) por uno o dos aos. No recomendable para periodos mayores. [9] b) Congelacin ultrafra. El cultivo por congelar se recoge directamente por centrifugacin de una suspensin de microorganismos, o se prepara raspando una muestra de la suspensin en un tubo con las condiciones adecuadas para su crecimiento. Luego, el cultivo se suspende en un medio con glicerol o DMSO. La suspensin se coloca en tubos especiales. La congelacin ultrafra se efecta en congeladores mecnicos, a temperaturas entre -50 y -80C. Dalby recomienda congelarlos a una velocidad de 1 a 2C/min. Hasta llegar a -30C; despus de alcanzar esta temperatura, se acelera el proceso de congelacin hasta lograr la temperatura deseada. Drew ha observado que las cepas se conservan bien, durante cinco aos, a -60C. [9] c) Congelacin con nitrgeno liquido. El mtodo de conservacin por congelacin mas recomendado es el que utiliza nitrgeno liquido, porque se logran temperaturas de -150 a-196C. La velocidad de congelacin debe ser de 1a 2C hasta alcanzar una temperatura de -30C, luego, 1C/min hasta -56C. Despus, se colocan las muestras directamente en nitrgeno lquido para acelerar el proceso de congelacin. [9] El metabolismo celular se detiene completamente a partir de los -130C; por esta razn, si el microorganismo soporta el proceso de congelacin, su viabilidad permanece durante muchos aos. Una de las principales ventajas de este mtodo es que son innecesarias siembras, por lo que se reducen al mnimo los riesgos de contaminacin y los cambios genticos y bioqumicos en el microorganismo. Sin embargo, el costo del equipo requerido es alto y es necesario mantener un suministro constante de nitrgeno, lo que encarece el proceso. Adems, es imprescindible tomar previsiones en cuanto a fallas mecnicas y elctricas para evitar perder toda una coleccin. [9] Conservacin por liofilizacin

La liofilizacin es la remocin de agua de las clulas congeladas (solidas) a presin reducida (sublimacin). Para llevar a cabo este procedimiento, se toma una muestra del cultivo por conservar y se suspende en algn medio con crioprotectores, como leche, suero o glutamato de sodio. Se transfieren unas gotas de la muestra a una ampolla, se congela y se somete a alto vaco hasta que el agua celular se sublima (pasa del estado dolido al gaseoso). Una vez liofilizada la cepa, la ampolla que la contiene se sella para impedir que el microorganismo se altere por el contacto con el medio ambiente. [11] Los factores que influyen en la eficacia de la liofilizacin como medio de conservacin son: 1. Tipo de microorganismo. Hay algunos microbios que no resisten la liofilizacin y lgicamente sern aquellos que contengan ms agua en su interior. Algunos hongos filamentosos, especialmente los no esporulados, no se pueden guardar liofilizados y hay que recurrir a otros mtodos. 2. Concentracin celular. Lo mejor es liofilizar suspensiones celulares con una concentracin del orden de 108-109 clulas/ml en el caso de las bacterias y algo inferior en el caso de hongos filamentosos y levaduras. 3. Temperatura durante la sublimacin. Debe ser lo ms baja posible, sin subir por encima de 50C. 4. Grado de deshidratacin alcanzado. Debe ser lo ms alto posible, aunque la concentracin de solutos puede conllevar una pequea cantidad de agua remanente que no es perjudicial. 5. Atmsfera de oxgeno en el tubo. Las clulas liofilizadas se guardan en tubos cerrados al vaco para evitar, tanto la rehidratacin como la presencia de algn gas dentro del tubo, como el oxgeno que puede daar a las clulas. 6. Condiciones de almacenamiento. La temperatura debe ser constante, preferentemente a 18C y sin bajar de los 0C. Los lifilos se deben guardar en la oscuridad. [11] Es uno de los mtodos mas efectivos para la conservacin, pues los microorganismos pueden mantener su viabilidad por veinte aos o mas. Una de las principales ventajas de este mtodo es que, una vez liofilizado, el cultivo no necesita tratamientos especiales-solo se debe mantener en refrigeracin-, lo que disminuye los costos de operacin y facilita enormemente el transporte. Otra ventaja es que no requiere resiembras, lo que contribuye a evitar la contaminacin y los cambios genticos y bioqumicos en las clulas. [9] La inversin inicial en la adquisicin del equipo es alta; sin embargo, los costos totales son menores que los de la congelacin en nitrgeno liquido. Este es el mtodo que seleccionan muchas instituciones para conservar las colecciones de cultivos. [9] MTODOS ALTERNATIVOS

Son los que se utilizan cuando no se pueden emplear los mtodos de eleccin, bien por carecer de los equipos necesarios, o bien porque la cepa microbiana no resiste los tratamientos de la conservacin por estos mtodos. Conviene tener en cuenta que nunca se debe usar un nico mtodo alternativo, sino que se recomienda conservar el microorganismo empleando varios de estos mtodos. [11] a) Conservacin por transferencia peridica (resiembra o subcultivo). El procedimiento se debe repetir cada cierto tiempo. Se lleva cabo en tubos de ensayo con agar inclinado (slants), o en botellas especiales que contienen un medio de cultivo solido y estril (botellas de Roux). El tubo de ensayo se mantiene en posicin inclinada hasta que el medio de cultivo solidifique, con lo cual se logra una mayor superficie para el crecimiento del microorganismo; en el caso de las botellas, estas se mantienen en forma horizontal. El microorganismo se inocula en el medio solido y se deja crecer durante varios das; luego, el cultivo se refrigera. Una de las desventajas del mtodo es que los tubos guardados en refrigeracin se deshidratan y, entonces, el microorganismo muere; por esta razn, es necesario repetir el procedimiento peridicamente: al menos cada seis meses. [9] La resiembra es uno de los mtodos de mantenimiento de cultivos ms simples y no requiere equipo especializado y costos; sin embargo, es un mtodo caro, ya que necesita mucha mano de obra, por la periodicidad de las resiembras. [9] Este es el peor mtodo para conseguir la estabilidad gentica, puesto que al estar las clulas creciendo hay una alternancia de generaciones, y al cabo del tiempo las clulas que se estn guardando sern descendientes lejanas de las clulas iniciales y es posible que ya no conserven algunas de sus caractersticas. Si se va a utilizar este mtodo es aconsejable retardar el envejecimiento y alargar los periodos entre dos resiembras. Esto se puede conseguir de varias maneras como por ejemplo: disminuyendo la cantidad de inculo; rebajando la proporcin de algunos nutrientes en el medio de cultivo; inoculando en picadura los microorganismos que son anaerobios facultativos, ya que el crecimiento en presencia de oxgeno es ms rpido y origina productos generalmente txicos; y almacenando los cultivos a 4C-8C. A veces tambin se suele recubrir el crecimiento con una capa de aceite mineral estril. Con esto se consigue tambin evitar en la medida de lo posible la desecacin del medio de cultivo, que podra ser txico para las clulas al aumentar su concentracin. Hay que tener en cuenta que los microorganismos muy aerobios, como por ejemplo los hongos filamentosos, no se pueden guardar en tubos completamente cerrados. Por ltimo, otro inconveniente que tiene la transferencia peridica es que la contaminacin de los cultivos resulta ms fcil al tener que manejar los tubos a lo largo del tiempo y tambin por la posibilidad de entrada de caros en los mismos. [11] b) Conservacin por suspensin en agua destilada o en agua de mar estril. Es un mtodo alternativo muy utilizado y que da altos porcentajes de viabilidad en diversos tipos de microorganismos, tanto hongos filamentosos como levaduras y algunas bacterias. Consiste en suspender en agua estril unas cuantas clulas del

cultivo que se quiere conservar. Se pueden preparar en criotubos de los anteriormente mencionados. En este caso la concentracin celular no debe ser superior a 104-105 clulas/ml en el caso de bacterias y levaduras. Para los hongos filamentosos que no esporulan, se pueden poner en suspensin trocitos de agar con el crecimiento del hongo. En el caso de microorganismos marinos, la suspensin se hace en agua de mar diluida. [11] Los resultados obtenidos por la CECT en la conservacin de microorganismos por este mtodo muestran altos porcentajes de viabilidad en periodos a veces superiores a 5 aos. La estabilidad para caracteres morfolgicos y fisiolgicos es buena, pero no se ha comprobado para caracteres especficos como la virulencia, el poder fermentativo, etc. [11] MTODOS RESTRINGIDOS Agrupa las tcnicas con las que se logran mantener la viabilidad de los cultivos entre 2 y 5 aos. Se destacan en este grupo la desecacin en diferentes soportes (arena, slica gel, perlas de vidrio) donde la paralizacin del crecimiento se produce por eliminacin del agua disponible, as como el almacenamiento en tierra, parafina liquida y la suspensin en agua estril. (Hernndez) En este grupo se engloban mtodos no empleados habitualmente, pero a los que es necesario recurrir a la hora de conservar grupos de microorganismos muy determinados que no resisten bien la liofilizacin o la congelacin, como por ejemplo los gneros bacterianos Spirillum, Rhodospirillum, etc. Los cuatro mtodos que vamos a citar se basan en la paralizacin del crecimiento por eliminacin del agua disponible para las clulas. [11] a) Desecacin en papel de filtro. Se utiliza un papel bastante absorbente (Whatmann n 3) que se impregna con una solucin muy densa de clulas y se deja secar al aire (en condiciones estriles). Tambin es posible desecarlos por el procedimiento que se llama desecacin lquida (L-Dry) porque se utiliza para ello el liofilizador, pero sin que haya habido congelacin previa de las clulas. El vaco producido por el liofilizador deseca las clulas, pero hay que evitar que un vaco excesivo provoque evaporacin brusca con ebullicin o que la temperatura disminuya demasiado, ocasionando la congelacin incontrolada de las clulas. b) Desecacin en suelo, arena, slica gel, etc. Se aaden las clulas a estos sustratos que las protegern al desecar. Los microorganismos productores de esporas se pueden conservar durante bastante tiempo por este mtodo. c) Desecacin en bolitas de alginato. ste es un procedimiento bastante eficaz. Las clulas se encuentran en una matriz de alginato y la eliminacin del agua se hace por tratamiento con soluciones hipertnicas sucesivas y posterior desecacin al aire hasta que se pierde un 70% de su contenido en agua. Estas bolitas de alginato se pueden conservar en tubos cerrados hermticamente y a temperaturas de entre 4C y 18C, pudindose guardar incluso a 80C debido al bajo contenido en agua de las clulas y la proteccin que suministra el

soporte de alginato. Este es un mtodo que se est utilizando incluso para la conservacin de algas y clulas vegetales. d) Desecacin en sal gorda para halobacterias. Para su conservacin por este mtodo se mezclan las clulas con sal y se dejan desecar espontneamente. Debido a la higroscopicidad de la sal, la desecacin no es total, pero las clulas dejan de multiplicarse por ser insuficiente el nivel de agua disponible. [11] No hay mtodos de mantenimiento en procesos industriales que sean comunes a todas las industrias, emplendose en algunos casos mtodos especficos secretos. [11] El conocimiento de las caractersticas del cultivo es esencial en la eleccin de un mtodo de preservacin. La identidad del cultivo puede conocerse en base a sus caractersticas de crecimiento en uno o ms medios especficos, tomando en consideracin propiedades macro y microscpicas exhibidas, o en base a una evaluacin ms exhaustiva empleando muchos ensayos bioqumicos, biolgicos, inmunolgicos y genticos. [11] Bibliografa: [1] microbiologa general. Hans Schlegel [2] microbiologa tomo I [3] microbiologa. Prescott [4] biologa de los microorganismos. Brock [5] http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/11nutrientes.htm#_Toc58164014. Nutricin microbiana. [6] practica 4. Preparacin de medios de cultico. Pdf [7] http://www.danival.org/notasmicro/medioscult/_madre_medios.html [8] http://perso.wanadoo.es/sergioram1/medios_de_cultivo.htm. Clasificacin de los medios de cultivo [9] Prescott, M.; Harley, J.; Klein, D. (2002). Microbiologa. Editorial McGRAWHILL-INTERAMERICANA DE ESPAA. Pp. 109 [10] Hernndez, A; Alfaro, I; Arrieta, R. Microbiologa Industrial. Pp. 18 [11] Garca, D; Uruburu, F. La conservacin de cepas microbia