UNIVERSIDAD AUTONOMA DE GUERRERO Unidad acadmica de ciencias qumico-biolgicas

Microbiologa
Practica No. 12 Aislamiento

e identificacin de bacterias de inters medico

Practica No. 12

Aislamiento e identificacin de bacterias de inters mdico

OBJETIVO Aislamiento e identificacin de algunas bacterias de inters mdico, utilizando algunas tcnicas para su aislamiento. RESULTADOS o PRIMERA PARTE: SIEMBRA Y OBSERVACION AL MICROSCOPIO Tincin de Gram

Cepa 7: Bacilos Gram Negativo Siembra en estra cruzada sobre los medios de cultivo: Agar EMB Agar Mc Conkey Agar Salmonella Shigella Agar Sangre Agar Sulfito de Bismuto Agar Xilosa Lisina Desoxicolato Agar Verde Brillante

Siembra del microorganismo en placa agar

Incubacin a 37C 24hrs.

o SEGUNDA PARTE: OBSERVACION DE LA MORFOLOGIA COLONIAL Y SIEMBRA DE PRUEBAS BIOQUIMICAS Morfologa colonial Cepa 7

Agar EMB
[Medio de cultivo diferencial para el aislamiento de bacilos entricos Gram negativos]

Agar Mc Conkey (sin crecimiento)

[Medio de cultivo diferencial para el aislamiento de microorganismos Gram negativos]

Agar Salmonella Shigella (Sembrado por mi)

[Medio de cultivo selectivo para el aislamiento de Salmonella y Shigella]

Agar Sangre
[Medio de cultivo de enriquecimiento]

Agar XLD
[Medio de cultivo selectivo para el aislamiento de enteropatgenos, especialmente Salmonella y Shigella]

Agar Sulfito de Bismuto

[Medio selectivo para Salmonella]

Agar Verde Brillante

[Medio de cultivo selectivo para el aislamiento de Salmonella]

Microorganismo Medio de Cultivo Siembra Lectura Tamao (mm) Forma Elevacin Margen o Borde Color Superficie Aspecto Luz reflejada Luz transmitida Consistencia Agar EMB

Cepa 7
Agar Mc Agar SS Conkey 12/06/2012 13/06/2012 1.5 mm Circular plana Entero Transparentes Lisa Hmedo Brillante Traslcida Membranosa sin crecimiento Agar SB

1 mm Puntiforme Convexa Entero Gris Lisa Hmedo Mate Opaca Suave-viscosa

1 mm Puntiforme Convexa Entero Negro Lisa Hmedo Mate Opaca Suave-viscosa

Pruebas bioqumicas

Prueba de citocromo oxidasa: Negativo

Prueba de la catalasa: Positivo

(Realizada por m)

Inoculacin de pruebas bioqumicas por: ~Picadura (asa recta) -Agar Motilidad Indol Ornitina (MIO) ~Picadura y estra simple (asa recta) -Agar Hierro de Kligler (KIA) -Agar Hierro Lisina (LIA) ~Estra simple (asa bacteriolgica o aguja de inoculacin) -Agar Citrato de Simmons -Agar para prueba de Fenilalanina ~Mezcla en caldo (asa bacteriolgica) Caldo Malonato Caldo Urea Caldo rojo de metilo (RM) Caldo de Voges Proskauer (PV) Caldo base rojo de fenol + sacarosa con campana de Durham Caldo base rojo de fenol + glucosa con campana de Durham Caldo base rojo de fenol + maltosa con campana de Durham Caldo base rojo de fenol + lactosa con campana de Durham

o TERCERA PARTE: LECTURA DE PRUEBAS BIOQUMICAS

-Agar Hierro de Kligler (KIA)

-Agar Hierro Lisina (LIA)

-Agar Citrato de Simmons

-Agar para prueba de Fenilalanina

-Caldo Urea

-Caldo rojo de metilo (RM)

-Caldo de Voges Proskauer

-Agar Motilidad Indol Ornitina

-Caldo Malonato

Maltosa Caldo base rojo de fenol + Glucosa Lactosa Sacarosa

Cepa 7
Prueba
Crecimiento Cambio de color Produccin H2S Produccin de gas Descarboxilacion de Lisina Produccin de H2S Citrato Fenilalanina Ureasa Rojo de metilo Voges Proskauer Movilidad Descarboxilacion de ornitina Indol Fermentacin de sacarosa Fermentacin de lactosa Fermentacin de maltosa Fermentacin de galactosa Oxidasa catalasa

Resultado
Positivo K/A Positivo Negativo k/k Negativo Negativo Negativo Negativo Positivo Negativo Positivo Negativo Negativo Negativo Negativo Positivo Positivo con produccin de gas Negativo Positivo

Medio de cultivo
Agar Kligler

LIA Citrato de Simmons Agar de fenilalanina Caldo urea Caldo rojo de metilo Caldo VP Agar MIO Caldo base rojo de fenol + sacarosa con campana de Durham Caldo base rojo de fenol + lactosa con campana de Durham Caldo base rojo de fenol + maltosa con campana de Durham Caldo base rojo de fenol + galactosa con campana de Durham Prueba de citocromo oxidasa Prueba de catalasa

 DISCUSION La finalidad de esta prctica es la identificacin de una bacteria; por lo cual a cada equipo se le proporciono un tubo con cultivo en caldo que contena la bacteria a identificar por dicho equipo, en nuestro caso, al equipo 2 le asignaron la cepa 7. Comenzamos por realizar dos frotis, que posteriormente teimos con la tcnica de Gram; al observar las preparaciones al microscopio se observaron bacilos Gram negativo; posteriormente se realiz la siembra del microorganismo en distintos medios de cultivo, que se incubaron a 37C durante 24 horas. Pasado el tiempo de incubacin se realiza la lectura de la morfologa colonial; cabe desatacar que la bacteria de la cepa 7 creci en todos los medios proporcionados, exceptuando Agar Mc Conkey, En agar SS crecieron planas y transparentes, mientras que en Agar SB eran convexas y negras. Por los resultados de la tincin de Gram y las caractersticas morfolgicas se trata de una enterobacteria, ms especficamente se pudiera pensar en Salmonella o Shigella por su crecimiento en Agar SS; sin embargo las caractersticas morfolgicas coloniales obtenidas en Agar SB nos indica que lo ms probable es que se trate de Salmonella. Para asegurarse de que bacteria se trata realizamos las pruebas bioqumicas correspondientes y los resultados se compararon con tablas preestablecidas de libros para identificar con el menor margen de error la bacteria que se desea; segn la tabla que consulte (y que agrego como anexo) 18 de los 20 resultados que obtuve son idnticos, 1 se obvia y otro no se menciona en la literatura consultada, por lo cual podemos decir que 19 de los 20 resultados son idnticos y por lo tanto la bacteria en cuestin es Salmonella typhi.

CONCLUSION Mediante la realizacin de esta prctica se aprendieron los procedimientos necesarios para el aislamiento e identificacin de bacterias de inters mdico, puesto que a partir de un cultivo en caldo, del cual se desconoca el microorganismo que contena, se realizaron tcnicas de tincin y cultivo para conocer su morfologa microscopia y aislar la bacteria para su posterior resiembra en pruebas bioqumicas que segn las reacciones obtenidas nos indicaran de que bacteria se trata. En el caso particular de nuestro equipo 2 en la asignada Cepa 7, despus de realizar las tcnicas y pruebas correspondientes, determinamos que la bacteria contenida en esta cepa es Salmonella tiphy; ya que los resultados obtenidos y la literatura consultada coincidieron en que la bacteria es Bacilo Gram-Negativo, tanto Agar SS y Agar SB son medios especiales para el aislamiento de salmonella y la morfologa colonial de esta tiene como caracterstica ser planas y traslucidas en Agar SS y de color negras en Agar SB. La presencia de Salmonella se confirm con las pruebas bioqumicas ya que 19 de los 20 resultados obtenidos fueron los esperados para dicha bacteria.

ANEXO