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INFORME DE LABORATORIO

PRACTICA N 10: EXTRACCION Y SEPARACION DE PRINCIPIOS ACTIVOS EN PLANTAS MEDICINALES APROBADAS EN COLOMBIA MEDIANTE CROMATOGRAFA EN CAPA FINA - SAUCO

DAVID STIVEN ESCUDERO AGUDELO ESTEBAN GONZLEZ ACEVEDO

LABORATORIO DE FARMACOGNOSIA

GLORIA AMPARO VALENCIA P.

V SEMESTRE

UNIVERSIDAD DE ANTIOQUIA FACULTAD DE QUIMICA FARMACEUTICA TECNOLOGIA EN REGENCIA DE FARMACIA

OCTIBRE 2012.

OBJETIVO:

Identificar mediante la tcnica de cromatografa en capa fina la presencia de metabolitos secundarios en la parte aprobada de las plantas medicinales comercializadas en Colombia, teniendo como referencia el metabolito secundario la rutina.

PRACTICA N 10: EXTRACCION Y SEPARACION DE PRINCIPIOS ACTIVOS EN PLANTAS MEDICINALES APROBADAS EN COLOMBIA MEDIANTE CROMATOGRAFA EN CAPA FINA SAUCO

Para el desarrollo de esta prctica se empleo extracto de las flores de sauco para identificar mediante cromatografa en capa fina la presencia de metabolitos secundarios, teniendo como referente el metabolito rutina y otros que estn presentes en las flores de la planta. Los materiales empleados para el desarrollo de la prctica fueron: Extracto: Flores de Sauco ( Sambucus nigra) Fase estacionaria: Placa de Silica gel GF-254 Fase mvil: acetato de etilo (100): cido frmico (11) : cido actico (11) : agua (26) Revelador Qumico: Revelador de productos Naturales: cido deifenilborico (solucin 1) y polietilenglicol (solucin 2). Revelador fsico: Luz UV 365 nm

Luego se procede a realizar el montaje de la prueba, primero se realiza las medidas de la fase dividindola en varios sectores, marcando la lnea y los puntos de siembre del extracto; cuando se tiene todo medido se realiza la siembra de la muestra y del patrn, en este caso Rutina, de manera simultanea se tiene la fase mvil en estado de saturacin del recipiente donde esta; luego se introduce la fase estacionaria con la siembra, cuidando siempre que la fase mvil no sobrepase el punto de siembra. Se tapa y empieza a observar como se hace el desplazamiento hasta llegar al punto final. En la siguiente imagen se muestra el proceso de montaje de la prueba

Imagen 1: Montaje Prueba de cromatografa en capa fina. Fuente: Manual de prcticas de Laboratorio de Farmacognosia. 2009. Luz Mariela Sorza S Gloria A. Valencia P. Despus de uno minutos de retira la fase estacionaria de la mvil, se deja secar; luego se observa bajo luz a 254 nm para identificar la rutina. Se marcan los puntos de referencia donde aparece el patrn de la rutina junto con el del extracto de las flores de sauco. En la siguiente imagen se muestra los puntos donde aparece la rutina.

Punto de llegada

3.1 cm

Patrn Ref.
Rutina

1.2 cm

Punto de Siembra

Imagen 2: Rf rutina en extracto de flores de sauco Patrn de referencia. Fuente: Creacin propia

La mancha que corresponde a la rutina se observa (bajo la luz a 254 nm) de color amarillo naranja, esta a una distancia de 1.2 cm del punto de siembra; por lo tanto su Rf para esta muestra es de 0.38, este se clculo de la siguiente manera:

Rf =

= 0.38

Este calculo aplica tambin para determinar el Rf de los otros metabolitos.

En la teora la rutina se debe de notar a un Rf de 0.4; en la prctica apareci un poco antes, cerca de 0,02 puntos, pero puede deberse a las caractersticas qumicas de la fase mvil que pueden haber estado levemente alteradas las concentraciones.

Dentro de la practica tambin se identificaron otros metabolitos secundarios presentes en el extracto de las flores de sauco; para identificarlos el proceso fue el mismo, solo que se emplearon dos reveladores qumicos como el cido deifenilborico (solucin 1) y polietilenglicol (solucin 2) y bajo la presencia de Luz UV 365 nm para poder identificar con mayor facilidad estos compuestos. Entre ellos esta: Isoquercitrina, que despus de aplicar el revelador quimico y observar bajo la luz UV presenta un color amarillo, lo que le permite diferenciar de la ruina que es entre amarillo y naranja; se logra apreciar a 2.3 cm de la siembra y esta por encima de la rutina. Su Rf en esta prctica fue de 0.73, coincidiendo con el dato consignado en el manual. En la siguiente imagen se ilustra la posicin en donde aparece la isoquercitrina

Punto de llegada

Isoquercitrina

3.1 cm

2.3 cm

Punto de Siembra

Imagen 3: Rf Isoquercitrina en extracto de flores de sauco Fuente: creacin Propia.

El otro metabolito que se identifico en la practica fue el cido Cafico, que bajo la luz UV 365 nm, se observa de un color azul fluorescente y esta mucho mas arriba que la isoquercitina; su Rf corresponde a 0.9; en la practica de laboratorio se obtuvo un Rf de 0.90, calculado de la misma forma que se calculo el de la rutina. En la siguiente imagen se muestra la distancia en la que se halla el acido Cafico.

Punto de llegada cido Cafeico

3.1 cm

2.8 cm

Punto de Siembra

Imagen 4: Rf cido Cafico en extracto de flores de sauco Fuente: Creacin propia.

Punto de llegada Acido Cafico

Isoquercitrina

3.1 cm
Rutina

Imagen 5: Metabolitos secundarios presentes e identificados en el extracto de las flores de sauco. Fuente: Creacin propia.
Punto de Siembra

RESULTADOS OBTENIDOS

En la siguiente tabla se consignan los valores obtenidos durante la prctica de laboratorio.

Identificacin de Metabolitos Secundarios en extracto de flores de sauco Rf 0.38 0.7 0.9 Metabolito Rutina Isoquercitina cido Cafico Color Amarillo Naranja; se observa una franja grande, tanto en el patrn como en la muestra Amarillo, se observa una pequea lnea, esta mas arriba que la lnea de la rutina Azul Fluorescente; es una lnea muy delgada que se aprecia al final de la fase estacionaria.

ANALISIS DE RESULTADOS. Despus de realizar la prueba se pudo determinar la presencia de metabolitos secundarios en el extracto de las flores de sauco como Rutina, Isoquercitina y cido Cafico; aunque se tiene una leve variacin en el Rf de la Rutina, cerca de 0.02, puede deberse a las caractersticas qumicas de la fase mvil, que por ser voltiles se pueden haber perdido pequeas cantidades durante el proceso de inmersin y esto influyo en los resultados, pero tambin cabe anotar que la rutina no estaba completamente sola o pura en la planta se encontraba en compaa de otras sustancias qumicas. Los dems Rf de Isoquercitrina y el cido Cafico si coincidieron con los valores registrados en el manual, por lo que se puede descartar una alteracin en la fase mvil e inclinarse ms por la combinacin de sustancias qumicas en el extracto que se estaba estudiando.

CONCLUSIONES Con el desarrollo de la practica se pudo determinar con que pureza se esta adquiriendo los productos fitoteraputicos en nuestro pas, al realizar pruebas sencillas como las de cromatografa en capa fina que permiten identificar que el producto que nos venden si sea el que estamos comprando, y no estemos poniendo en riesgo nuestra salud. Las posibles variaciones en los resultados comparadas con las planteadas en los manuales y dems documentos se puede deber a varias factores como por ejemplo la presencia de mas sustancias qumicas que acompaan el extracto, alguna modificacin gentica o factores ambientales que influyeran en la planta alterando las concentraciones de metabolitos secundarios al momento de su recoleccin.

BIBLIOGRAFIA: SORZA S. Luz Mariela. VALENCIA P. Gloria A. MORA A. Cristina L. Manual de prcticas de laboratorio de Farmacognosia. Universidad de Antioquia. 2009. Pg. 30 - 32.