Alteraciones histopatolgicas del tejido renal inducidas por veneno de serpientes (Bothrops neuwidii, Bothrops alternatus y Crotalus durissus

terrificus) en ratas
Koscinczuk, Patricia - Borda, Toribio - Maruak, Silvana - Acosta de Prez, Ofelia Ctedra de Patologa Mdica - Facultad de Cs. Veterinarias - UNNE. Sargento Cabral 2139 - (3400) Corrientes - Argentina. Tel./Fax: +54 (03783) 425753 / 420854 - E-mail: pkoscinczuk@vet.unne.edu.ar
ANTECEDENTES

Los accidentes ofdicos ocasionados por las serpientes Bothops neuwiedii y alternatus (yarar) se caracterizan por producir dao tisular local tanto en humanos como en los animales de experimentacin, tales como hemorragia, mionecrosis e inflamacin, sumado a su accin sobre la coagulacin de la sangre.Hasta el momento poco se sabe sobre sus efectos sobre el tejido renal, a diferencia de lo que sucede con Crotalus durissus terrificus, donde adems de los efectos de neurotoxicidad, el dao renal es tenido en cuenta desde el momento en que se realiza el diagnstico y se instaura el tratamiento Trabajos publicados sobre accidentes ofdicos en Brasil mencionan que en los casos de accidentes ofdicos letales producidos por Bothrops, las complicaciones ms frecuentes estn relacionadas con la insuficiencia renal aguda (IRA) (Ribeiro et al., 1998); este proceso puede tener lugar an despus de haber realizado el tratamiento especfico con el antiveneno. La patognesis del dao renal an no es muy bien entendida, algunas evidencias sugieren coagulacin vascular diseminada, la accin de sustancias proteolticas y vasoactivas que podran promover y potenciar los procesos de coagulacin en los sitios renales (Amaral et al., 1986). Otros investigadores proponen una posible accin nefrotxica directa (Sitprija &Chaiyabutr, 1999, Boer-Lima et al., 1999), recordemos que las toxinas componentes de los venenos son protenas de peso molecular, generalmente de menos de 30 Kda., que tienen receptores especficos que actan sobre las membranas celulares. La especificidad de las toxinas depender de la distribucin anatmica de los receptores conocidos y sus efectos farmacolgicos sern proporcionales a la cantidad de toxina introducida y a la cantidad de receptores disponibles (Chippaux & Gyffon, 1998) Si bien se puede considerar que estructuralmente cada nefrona esta compuesta por glomrulo, tbulo contorneado proximal y distal y asa de Henle, cuando se trata de su relacin con las sustancias txicas que llegan al rgano se comporta como una sola unidad (Hewitt et al., 1991), eso se debe al el tipo de circulacin renal que origina dos lechos capilares distintos: el lecho glomerular y el peritubular. Estas dos redes capilares se disponen en serie, de manera tal que todo el flujo renal atraviesa a ambos. Cuando la sangre abandona el glomrulo, los capilares convergen en la arteriola eferente, pero casi inmediatamente los vasos se dividen de nuevo para formar la red capilar peritubular. Esta segunda red de capilares es el punto donde el producto de la reabsorcin tubular vuelve a la circulacin. La presin en el primer lecho capilar, el glomerular, es bastante alta (en torno a 40 o 50 mm Hg), mientras que en los capilares peritubulares es similar a la de los lechos capilares del resto del organismo (de unos 5 a 10 mm Hg) (Brigs et al., 1999). Esta disposicin de la circulacin renal hace que no solo las toxinas alcancen una concentracin mayor en este rgano que las alcanzadas en plasma sino otros productos de deshecho orgnico como la hemoglobina o la mioglobina hagan lo mismo (Brigs et al., 1999). Dentro de los hallazgos clnicos de esta intoxicacin se encuentran los cambio de color de las orinas con una tonalidad rojizo durante las primeras 24 horas (Koscinczuk et al., 2001). Esto se puede relacionar con la presencia de cilindros pigmentarios liberados en los msculos daado (mioglobinuria) o estar relacionada con la hemoglobinuria (Koscinczuk, et al., 2001). Por otra parte, el carcter disperso de la necrosis tubular y el mantenimiento de la integridad de la membrana basal en muchos segmentos tubulares facilitan la reparacin de los focos necrticos y la recuperacin funcional cuando la causa precipitante desaparece o es eliminada. Esta recuperacin depender de que las clulas afectadas por lesioens reversibles conserven suficiente capacidad para proliferar y diferenciarse (Ramzi et al,, 1998). En este trabajo se compara la actividad que, tres venenos de la familia Crotalidae, tienen sobre el rin de rata, por ser este un mamfero de laboratorio que constituye un modelo aceptado para el estudio de la fisiopatologa renal.
MATERIALES Y METODOS

Veneno: se trabaj con veneno crudo obtenido por extraccin manual de ejemplares adultos de Bothrops neuwiedii, Bothrops alternatus y Crotalus durissus terrificus provenientes de la provincia de Corrientes, desecados bajo campana de vaco, homogeneizado y conservado a -20C hasta el momento de su uso. Inyeccin de veneno: para la experiencia se utilizaron cuatro grupos de 5 ratas machos de la cepa Wistar de 28020 g de peso, los que fueron inyectados por va i.m. en el gastronemio. Se trabaj con las siguientes dosis: Bothrops neuwiedii, 700 g; Bothrops alternatus, 700 g y Crotalus durissus terrificus, 120 g. vehiculizado en 0.1ml de solucin salina amortiguada a pH 7,2. El grupo control fue inoculado con 0.1 ml de solucin salina.

Histopatologa: 3 horas despus de la inyeccin del veneno los animales fueron anestesiados con hidrato de cloral a la dosis de 0,3 ml/200g de rata de una dilucin de 6 g de hidrato de cloral en 30 ml de agua destilada, aplicados por va s.c.; luego del sacrificio se tomaron muestras de ambos riones. Las muestras fueron fijadas en solucin de Bouin para su posterior corte y coloracin con Hematoxilina-Eosina y cido Peridico Schiff segn las tcnicas clsicas. Anlisis estadstico: debido a que los datos no se ajustaron a una distribucin normal (paramtrica) se aplic el test de Kruskal-Wallis utilizando como tratamiento los distintos venenos, siendo el control el tiempo 0. Los venenos fueron categorizados aplicando el siguiente esquema: 1, Bothrops neuwiedii; 2, Bothrops alternatus y 3, Crotalus durissus terrificus. Los hallazgos de histopatologa fueron rankeados segn lo siguiente: 0: sin alteraciones; 1 cilindros en luz tubular; 2, cilindros y degeneracin tubular con dilatacin de la luz tubular; 3 necrosis de clulas epiteliales tubulares; 4, necrosis focal en tbulos y glomrulos afectados.
RESULTADOS

Observaciones generales: Antes de la experiencia, todas las ratas eran activas y tenan una produccin de orina en cantidad y calidad normal, luego de la administracin de los diferentes venenos, todas las ratas dejaron de moverse y se aislaron en un rincn de la jaula. En el caso de B. neuwiedii y B. alternatus, presentaron edema de tren posterior, mientras que en aquellas a las cuales se le haba inyectado veneno de B. neuwiedii y Crotalus durissus terrificus se pudo recolectar escasa cantidad de orina coloreada de rojo. A las dosis elegidas, todas las ratas sobrevivieron hasta el momento de finalizar la experiencia. Histopatologa Las observaciones de las muestras correspondientes al tejido renal fueron las siguientes: Bothrops neuwiedii: degeneracin granulohialina de las clulas epiteliales de los tbulos proximales y distales, acompaadas de cilindros hialinos en la luz de tbulos contorneados proximales, distales y asa de Henle, asociados a dilatacin de la luz tubular. Congestin renal. Bothrops alternatus: degeneracin granulohialina de celulas epiteliales de los tubulos contorneados proximales alternando con tejido normal. No se pudo apreciar alteracin de la estructura glomerular. Crotalus durissus terrificus: Degeneracin granulohialina y necrosis del epitelio tubular con cilindros pigmentarios en los tbulos contorneados proximales y distales, asa de Henle, y tbulos colectores como un rea teida homogneamente que ocupa la luz tubular Estas lesiones estn acompaadas por necrosis glomerular y congestin. La coloracin con PAS permiti observar la integridad de la membrana basal del epitelio tubular. Estadstica El test de Kruskal-Wallis descart la hiptesis nula, donde al menos uno de los tiempos fue diferente (P<0.001). De la comparacin de medias con un nivel de corte de los ranks de P<0.001 surge lo siguiente: TRATAMIENTO 0 1 2 3
DISCUSION DE LOS RESULTADOS

X RANK 3.00 10.30 4.40 14.7

P<0.001 b ab b a

Los venenos de serpientes son mezclas complejas de enzimas, protenas y pptidos, aquellos pertenecientes a la familia Crotalidae se caracterizan por tener una alta concentracin de enzimas proteolticas. En nuestro pas esta familia est representada por los gneros Bothrops y Crotalus, cuyas intoxicaciones desarrollan sntomas caractersticos. As, Crotalus durissus terrificus es conocida por sus efectos neurotxicos, acompaados por dao renal agudo atribuido a la mioglobinuria asociada a rabdomilisis (Amaral et al., 1986) Por otra parte, Monteriro y col. (2001) en trabajos realizados con Crotalus durissus terrificus de Brasil, concluyen que el veneno y la crotoxina aislada de este veneno producen nefrotoxicidad directa en los riones de ratas aislados y mantenidos bajo perfusin (Monteriro, et al., 2001)Trabajos publicados en nuestro pas refieren la ocurrencia de cuadros de insuficiencia renal aguda fatales an despus de realizado el tratamiento (Estesso, 1985). En nuestro trabajo, el veneno de Crotalus durissus terrificus demostr tener efectos nefrotxicos. Tres horas despus de la inyeccin de veneno los riones presentaron necrosis tubular acompaada de reas con dilatacin de la luz y con presencia de cilindros de naturaleza proteica en tbulos contorneados, asa de Henle y tbulos colectores. La necrosis glomerular estuvo presente en algunas nefronas, coexistiendo con reas de tejido normal o con degeneracin granulohialina. La coloracin de PAS permiti

corroborar integridad e la membrana basal de los tbulos, estos hallazgos coinciden con lo descritos por otros autores brasileros (Amaral, et al., 1986). Aquellas ratas inyectadas con veneno de Bothrops neuwiedii presentaron degeneracin granulohialina y necrosis de las clulas epiteliales tubulares con dilatacin de la luz tubular y cilindros de naturaleza hialina; mientras que la necrosis glomerular se presento con menor frecuencia. Finalmente las inyectadas con Bothrops alternatus presentaron solo degeneracin granulohialina con escasos cilindros y no se hallo necrosis glomerular coincidiendo con lo presentado en publicaciones previas (Prez, et al., 1996).
CONCLUSIONES

De esta experiencia se puede concluir que ya a las 3 horas, los venenos evaluados afectan al tejido renal, siendo Crotalus durissus terrificus el que lo hace en mayor intensidad, seguido por Bothrops neuwiedii, y por ltimo Bothrops alternatus, La diferencia hallada entre ellos fue significativa, con un P<0.001. Si bien los hallazgos histopatolgicos pueden ser descritos bajo el termino de necrosis coagulativa, este termino no se refiere a las alteraciones que estos venenos ejercen sobre la coagulacin sangunea sino a las alteraciones morfolgicas observadas en el tejido renal. El mecanismo exacto por el cual se instala la necrosis cortical renal permanece aun desconocido. Se necesitan aun experimentos adicionales para determinar si estos daos se producen por efecto de trombos, una citotoxicidad directa alteraciones circulatorias, nefrotoxicidad por la presencia de hemo o mioglobina o sencillamente una combinacion de varios de estos mecanismos. Por el momento solo podemos sugerir considerar el dao renal agudo luego de la intoxicacin ofidica, dao que puede estar presente a las tres horas de la inyeccin del veneno.
BIBLIOGRAFIA

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